烷基化修复蛋白B同源物5调控果蝇Zeste基因增强子人类同源物2对K562/阿霉素细胞耐药的影响

目的探讨烷基化修复蛋白B同源物5(ALKBH5)对K562/阿霉素(ADM)细胞耐药的影响及其作用机制。方法以人白血病细胞系K562和ADM抗性细胞K562/ADM细胞为研究对象,利用Lipofectamine;2000将K562/ADM细胞分为对照组、si-NC组、si-ALKBH5-1组、si-ALKBH5-2组、空载体组(转染pcDNA3.1)、ALKBH5-WT组(转染pcDNA3.1-ALKBH5-WT)、ALKBH5-MUT组(转染pcDNA3.1-ALKBH5-MUT)、si-ALKBH5-2+空载体组、si-ALKBH5-2+pcDNA3.1-EZH2组。采用比色法检测细胞中N6-甲基腺苷(m6A)含量;采用CCK-8法检测细胞的半数抑制浓度(IC_(50));采用荧光光度计法检测ADM外排;采用Western blot检测细胞中ALKBH5、果蝇Zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)、P糖蛋白(P-gp)、多药耐药基因1(MDR1)的蛋白表达;采用RNA免疫共沉淀(RIP)实验验证ALKBH5与EZH2 mRNA的相互作用;采用甲基化RNA免疫共沉淀(MeRIP)检测EZH2 m6A水平。结果与K562细胞比较,K562/ADM细胞对ADM的耐药性及细胞中ALKBH5蛋白表达水平升高,m6A含量降低,差异有统计学意义(P<0.01);沉默ALKBH5可增加K562/ADM细胞中m6A含量,过表达野生型ALKBH5可减少m6A含量,而过表达突变型ALKBH5(H204A)对m6A含量无明显影响。与对照组、si-NC组比较,si-ALKBH5-1组、si-ALKBH5-2组细胞在450 nm处的光密度值(OD_(450nm)值)、P-gp、MDR1蛋白表达水平降低,细胞内荧光强度升高,差异有统计学意义(P<0.05)。在K562/ADM细胞中,ALKBH5蛋白能与EZH2 mRNA相互作用;沉默ALKBH5可上调K562/ADM细胞中EZH2 m6A水平,下调EZH2蛋白表达水平,过表达野生型ALKBH5则呈相反趋势;EZH2过表达逆转了沉默ALKBH5对K562/ADM细胞活力及耐药性的影响。结论沉默ALKBH5通过促进EZH2的甲基化来下调EZH2的表达,进而降低K562/ADM的耐药性。

前工业社会人类与人类使用物之间的设计关联

本文通过对前工业社会人类与其使用物之间的关系考察,阐释了人、物与自然之间的关系,进而揭示了三者之间的内在关联,其关系之中的有益因素可以帮助当今的人们思考人与使用物之间的恰当关系。此类对于关系的定位确定了人类对于自己未来的选择,并能体现人类的价值观和伦理观,决定人类自身的走向。

缺氧诱导因子-1和果蝇zeste基因增强子人类同源物蛋白在结直肠癌中的表达及临床意义

目的:研究缺氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor,HIF-1)和果蝇zeste基因增强子人类同源物(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)蛋白在结直肠癌组织及正常组织的表达,并探讨与临床病理因素的关系及两者表达的相关性。方法:应用免疫组织化学法分析检测HIF-1和EZH2蛋白的表达情况并同时分析两者表达的相关性。结果:HIF-1和EZH2蛋白在结直肠癌组织中高表达,在正常组织中低表达或无表达,差异有统计学意义(P<0.05)。两者的表达与性别、年龄、是否吸烟、分期及病理类型未见相关(P>0.05),与淋巴结转移及浸润密切相关(P<0.05)。两者间在组织中表达呈正相关(r=0.413,P=0.018)。结论:HIF-1和EZH2蛋白在结直肠癌的发生发展中发挥着重要作用,且有可能作为临床判断预后的标志物。

人类免疫缺陷病毒短转录诱导物连接因子1对浸润性乳腺癌患者新辅助化疗疗效预测的临床价值分析

目的探究人类免疫缺陷病毒短转录诱导物连接因子1(FBI-1)对浸润性乳腺癌患者新辅助化疗疗效预测的临床价值。方法收集70例浸润性乳腺癌患者的临床资料,并检测肿瘤组织标本中FBI-1表达情况,以临床疗效、病理学疗效显著与非显著进行分组,采用单因素及Logsitic回归模型分析相关指标与浸润性乳腺癌新辅助化疗疗效的关系。结果新辅助化疗前,70例浸润性乳腺癌患者中49例(70.00%)为FBI-1高表达、21例(30.00%)为FBI-1低表达,化疗后,18例(25.71%)为FBI-1高表达、52例(74.29%)为FBI-1低表达,FBI-1高表达患者显著减少(P﹤0.01)。不同临床分期、淋巴结转移及孕激素受体(PR)、Ki-67、FBI-1表达情况的浸润性乳腺癌临床疗效/病理学疗效比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。临床分期为Ⅲ期、淋巴结转移2~3个的浸润性乳腺癌患者肿瘤组织中FBI-1高表达率分别明显高于临床分期为Ⅱ期、淋巴结转移0~1个的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。Logistic回归分析结果显示,FBI-1及Ki-67均是浸润性乳腺癌患者临床疗效/病理学疗效的独立预测因子(P﹤0.05)。结论乳腺癌患者新辅助化疗疗效与FBI-1表达情况有关,且FBI-1为临床疗效/病理学疗效的独立预测因子,具有一定的预测价值。

人类组氨酰TRNA合成酶类似物的原核表达及其多克隆抗体的制备

目的:在原核系统中表达并纯化人类组氨酰TRNA合成酶类似物蛋白,制备多克隆抗体。方法:设计引物扩增其开放阅读框,重组入原核表达载体PQE30,并在大肠杆菌M15中诱导表达;应用纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔。结果:①成功构建人类组氨酰TRNA合成酶类似物的原核表达载体;②经NI亲和层析获得纯度较高的重组蛋白;③制备了高滴度的兔抗人类组氨酰TRNA合成酶类似物蛋白的多克隆抗体。结论:原核表达载体的构建、重组蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备为今后研究该蛋白的功能提供了良好的基础。

论“人类共有物”中经济财货的共有性

"人类共有物"应当作出自由财货和经济财货的分类。古典自然法学家论证的是自由财货的共有性,对"人类共有物"中经济财货的共有性缺乏有效论证是当今国际社会中人类共有物争端的关键原因。人类共有物中经济财货的共有性可以类比民法中的共同共有制度:人类共有物中经济财货的共有具有民法中共同共有成立的事实原因和法律原因;人类共有物中经济财货共有的实现需要全人类积极履行共有权利和承担共有义务。

鼠进行性强直蛋白人类同源物与骨、关节疾病

鼠进行性强直蛋白人类同源物是一种无机焦磷酸转运调节蛋白,通过调节无机焦磷酸水平调控组织矿化,因而在强直性脊柱炎、颅骨干骺端发育不全、关节软骨钙化等骨关节疾病的发病、进展机制中发挥重要作用。本文总结ANKH和上述骨关节疾病的研究进展。

果蝇zeste基因增强子的人类同源物2促进小细胞肺癌化疗耐药的作用及其分子机制

目的:观察果蝇zeste基因增强子的人类同源物2(Enhancer of zeste homologue 2,EZH2)对小细胞肺癌(Small cell lung cancer,SCLC)化疗耐药的影响并研究其潜在分子机制。方法:首先使用RT-PCR和蛋白印迹方法检测SCLC初治和耐药患者组织标本、敏感细胞株(H446)和耐药细胞株(H446DDP)的EZH2表达差异;再通过CCK8方法检测敲低EZH2后的耐药SCLC细胞株对化疗药物半抑制浓度(Half maximal inhibitory concentration,IC50)值变化;最后通过RNA测序和验证方法筛查EZH2的下游靶基因以及CHIP-qPCR方法检测EZH2敲低后其靶基因启动子区的EZH2表达变化。结果:SCLC化疗耐药患者EZH2阳性表达水平(80%)高于化疗敏感患者,耐药细胞株(H446DDP)的EZH2 mRNA和蛋白表达水平均高于敏感细胞株(H446)(P<0.01,P<0.001);敲低EZH2表达后,耐药SCLC细胞株对化疗药物IC50值降低;细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂-1A(Cyclin-Dependent Kinase Inhibitor 1A,CDKN1A)表达增加,且CDKN1A基因启动子EZH2蛋白沉积显著减少。结论:EZH2促进SCLC化疗耐药,其分子机制与EZH2靶向调控CDKN1A基因表达相关。

胶质瘤大鼠胶质瘤组织中果蝇zeste基因增强子的人类同源物2的表达及意义

目的探讨果蝇zeste基因增强子的人类同源物2(EZH2)在胶质瘤大鼠胶质瘤组织中的表达及意义。方法将48只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为对照组(n=24)和模型组(n=24)。模型组大鼠颅内注射10μL C6胶质瘤细胞悬液(1×10^(9) L^(-1))制备胶质瘤模型,对照组大鼠注射等量的磷酸盐缓冲液。造模后2周通过测量肿瘤体积、观察肿瘤细胞形态来判断造模是否成功。应用蛋白质印迹和免疫组织化学法检测对照组大鼠脑组织和模型组大鼠肿瘤组织中EZH2蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链反应技术检测对照组大鼠脑组织和模型组大鼠肿瘤组织中EZH2 mRNA表达。结果模型组22只大鼠造模成功。模型组大鼠肿瘤组织中EZH2 mRNA和蛋白表达量均显著高于对照组(P<0.05)。结论胶质瘤大鼠肿瘤组织中EZH2的表达增加,EZH2可能参与胶质瘤的发生、发展过程。

miR-32-5p通过靶向下调EZH2的表达抑制胰腺癌PANC-1细胞的恶性生物学行为与裸鼠移植瘤生长

目的:探究miR-32-5p通过靶向zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)对胰腺癌PANC-1细胞恶性生物学行为的影响及其分子机制。方法:利用GEPIA数据库分析胰腺癌组织中EZH2的表达水平及其与患者的预后生存期的关系,并分析miR-32-5p表达与患者临床病理因素的关系。qPCR法检测正常胰腺HPDE6-C7细胞和胰腺癌PANC-1、AsPC-1、SW1990细胞中miR-32-5p和EZH2 mRNA的表达,通过Lipofectamine^(TM)2000将miR-NC、miR-32-5p mimic、miR-32-5p inhibitor、pcDNA-NC、pcDNA EZH2质粒分别转染PANC-1细胞,其分为对照组(不转染)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-32-5p mimic组(转染miR-32-5p mimic)、Anti-miR-32-5p组(转染miR-32-5p inhibitor)、miR-NC+pcDNA-NC组(转染miR-NC+pcDNA-NC)、miR-NC+pcDNA EZH2组(转染miR-NC+pcDNA EZH2)、miR-32-5p mimic+pcDNA-NC组(转染miR-32-5p mimic+pcDNA-NC)、miR-32-5p mimic+pcDNA EZH2组(转染miR-32-5p mimic+pcDNA EZH2)。双荧光素酶报告基因实验验证miR-32-5p与EZH2的靶向关系;MTT法及克隆形成实验检测各组细胞的增殖能力,划痕愈合实验检测各组细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测各组细胞的侵袭能力,WB法检测各组细胞EZH2、E-cadherin、N-cadherin的表达;裸鼠成瘤实验检测转染后各组PANC-1细胞移植瘤的生长情况,免疫组化染色法观察移植瘤组织中Ki67和MMP-2的表达。结果:GEPIA数据库显示胰腺癌组织中EZH2的表达水平高于癌旁组织,患者预后生存期与EZH2的表达水平呈负相关(均P<0.05);miR-32-5p表达水平与胰腺癌神经浸润、肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移有明显的关联(均P<0.05);与HPDE6-C7细胞相比,PANC-1、AsPC-1、SW1990细胞中miR-32-5p呈高表达、EZH2 mRNA呈低表达、miR-32-5p表达水平与EZH2表达水平呈负相关(均P<0.05)。miR-32-5p靶向EZH2且抑制其表达(均P<0.05);过表达miR-32-5p能够下调Ki67、MMP-2、N-cadherin表达水平、上调E-cadherin表达水平,抑制PANC-1细胞的增殖、迁移和侵袭能力,抑制移植瘤质量增加(均P<0.05)。结论:miR-32-5p能够靶向调控EZH2从而影响胰腺癌PANC-1细胞的增殖、迁移、侵袭、EMT进程及裸鼠体内移植瘤的生长。

检测抗-HIV1标准物时样品针加样先后顺序的改变对S/CO值的影响

目的全自动酶免分析仪酶联免疫吸附试验法检测人类免疫缺陷病毒抗体1型(抗-HIV1)标准物。方法检测石景山医院患者血清样本带抗-HIV1标准物时,先加标准物后加患者血清与先加患者样本血清后加标准物这种加样针次序的改变分析对标准物血清S/CO值的影响。结果检测过程中,仪器样品针对抗-HIV1标准物与患者血清标本加样的先后顺序改变对最终S/CO值的测定是有影响的。结论后加标准物的设计模式所测值符合质控规则,而先加标准物的模式所测数值处于失控状态,提示存在系统误差。

哲学不是专业——重申捍卫形而上学

哲学包含一系列二级专业,但是,哲学不是专业,既不是某一专业,也不是诸专业的组合或叠加。哲学只有超越其专业,哲学才能保持为哲学。哲学与时代密切相关,它甚至是一个时代之为一个时代的标志,但是,哲学能成为一个时代的标识物恰恰在于它能超越其时代的时代病。所以,哲学总是以与其时代保持距离的方式属于它的时代。这种需要通过超越专业与时代来保持自身的哲学,在根本上就是一种朝向绝对与深渊这种“人类多余物”的形而上学。近代以来对哲学之为这种形而上学的批判与否定所带来的后果表明,今天到了需要通过捍卫形而上学来捍卫人类自身存在所应有的高度与强度的时候,而这在根本上意味着需要重新恢复本原、绝对、整体、空—无这些因人而多出来的非现场域在哲学中的地位。

肠道微生物代谢物功能筛选平台

人类肠道微生物代谢物(Gut Microbial Metabolites,GMM)与人体的生理功能有着密切的联系,对这些小分子功能的探究是研究人员不断进行的课题。随着宏基因组学、代谢组学的发展,体内、体外以及离体模型的不断建立和改进,小分子功能筛选的平台也越来越多。本文主要介绍了一些常用的GMM功能筛选平台,并展望了在不久的将来可能在该领域运用的新技术。

果蝇EZH2与乳腺癌分子分型及临床病理特征的关系

目的探讨果蝇Zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)与乳腺癌分子分型及临床病理参数的关系。方法根据新型乳腺癌分子分型标准,将乳腺癌进行分子分型;免疫组织化学方法检测乳腺癌组织石蜡切片中EZH2的表达;采用χ~2检验分析EZH2表达与乳腺癌新型分子分型,以及临床病理参数之间的关系;采用KaplanMeier法分析EZH2表达与乳腺癌患者无病生存率(DFS)的关系。结果 13例管腔上皮A型乳腺癌患者中,3例为EZH2高表达(23.08%);10例管腔上皮B型乳腺癌患者中,5例为EZH2高表达(50.00%);7例人表皮生长因子受体2过表达型乳腺癌患者中,3例为EZH2高表达(42.86%);12例三阴性型乳腺癌患者中,10例为EZH2高表达(83.33%)。乳腺癌各分子亚型间EZH2表达的比较,差异有统计学意义(P<0.05)。EZH2高表达与EZH2低表达患者DFS比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 EZH2可能是预测乳腺癌预后的指标之一。

EZH2、MMP-2及MMP-9在肝癌侵袭转移中的作用及关系

目的检测果蝇zeste基因增强子的人类同源物2(EZH2)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在原发性肝癌组织中的表达,分析三者表达的相关性,并明确三者表达与肝癌临床病理参数间的关系;探讨EZH2在肝癌细胞侵袭迁移中的作用以及对MMP-2和MMP-9表达的影响。方法qRT-PCR检测EZH2、MMP-2和MMP-9在肝癌组织中的表达;肝癌组织中三者表达的相关性采用Pearson相关分析;采用小干扰RNA转染构建EZH2表达下调的SMMC-7721肝癌细胞系;Transwell小室观察EZH2对SMMC-7721细胞侵袭、迁移的影响;qRT-PCR检测肝癌细胞中EZH2对MMP-2和MMP-9表达的影响。结果原发性肝癌组织中EZH2、MMP-2和MMP-9呈高表达,且其高表达与不良的临床病理因素相关;在肝癌组织中EZH2与MMP-9表达呈正相关;干扰EZH2表达抑制肝癌细胞侵袭、迁移和MMP-9表达。结论EZH2、MMP-2和MMP-9与肝癌的发生发展密切相关,可成为肝癌的潜在生物标记物和治疗靶点。

乳腺癌组织中EZH2、SOX4蛋白表达变化及其意义

目的探讨乳腺癌组织中果蝇zeste基因增强子的人类同源物2(EZH2)、Y染色体性别决定区相关高迁移率盒蛋白4(SOX4)蛋白表达变化及其临床意义。方法选择97例乳腺癌患者的乳腺癌组织标本为观察组,癌旁正常组织标本为对照组,采用免疫组化SP法检测两组标本中的EZH2、SOX4蛋白,分析乳腺癌组织EZH2、SOX4蛋白表达与乳腺癌患者临床病理参数的关系。用Kaplan-Meier法绘制患者生存曲线,比较EZH2蛋白阳性、阴性表达者及SOX4蛋白阳性、阴性表达者的累积生存率和总生存时间。结果观察组、对照组EZH2蛋白表达阳性率分别为80.41%(78/97)、48.45%(47/97),两组相比,P<0.05;SOX4蛋白阳性表达率分别为82.47%(80/97)、57.73%(56/97),两组相比,P<0.05。乳腺癌组织中EZH2蛋白表达与患者的年龄、肿瘤大小、TNM分期均无关(P均>0.05),与淋巴结转移和分化程度相关(P均<0.05);乳腺癌组织中SOX4蛋白表达与患者的年龄、肿瘤大小、TNM分期、分化程度均无关(P均>0.05),与淋巴结转移相关(P<0.05)。Spearman秩相关检验结果显示乳腺癌组织EZH2、SOX4蛋白表达呈显著正相关(γs=0.251,P=0.013)。患者随访13~71个月,中位随访时间44个月。EZH2蛋白表达阴性、阳性者累积生存率分别为89.47%(17/19)、65.38%(51/78),总生存时间分别为(67.14±2.62)、(54.30±2.30)个月,EZH2蛋白表达阴性、阳性者累积生存率和总生存时间相比,P均<0.05。SOX4蛋白表达阴性、阳性者累积生存率分别为94.41%(16/17)、65.00%(52/80),总生存时间分别为(68.75±2.15)、(54.35±2.27)个月,SOX4蛋白表达阴性、阳性者累积生存率和总生存时间相比,P均<0.05。结论乳腺癌组织EZH2、SOX4蛋白阳性表达率高于癌旁正常组织。检测乳腺癌组织EZH2、SOX4蛋白有助于判断患者病情和预后。

EZH2对先天性巨结肠结肠组织中GFRα1表达的影响

目的通过检测先天性巨结肠(HSCR)患儿结肠组织内胶质细胞源性神经营养因子受体α1(GFRα1)及果蝇Zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)的表达水平,探讨EZH2在调控GFRα1基因表达及HSCR发病过程中的作用。方法随机选取24例行巨结肠根治术的HSCR患儿,取痉挛段结肠组织为试验组。以同期18例因新生儿坏死性小肠结肠炎而接受手术治疗的患儿,取手术切除的坏死结肠组织作为对照组。利用实时荧光定量PCR及Western blot检测两组结肠组织内GFRα1、EZH2的表达水平。将人神经母细胞瘤细胞SHSY5Y分为EZH2过表达组和阴性对照组,EZH2过表达组转染pCMV6-EZH2质粒,阴性对照组转染pCMV6质粒,检测转染后细胞中GFRα1、EZH2的表达水平。结果与对照组相比,试验组GFRα1及EZH2 mRNA和蛋白的表达水平降低(P<0.05),且EZH2蛋白表达水平与GFRα1蛋白呈正相关(r=0.606,P=0.002)。与阴性对照组相比,EZH2过表达组EZH2及GFRα1表达水平明显上调(P<0.05)。结论HSCR患儿结肠组织中EZH2低表达可能是GFRα1表达不足,诱发HSCR的原因之一。

FOXM1、PLK1、HIF-1α及EZH2在乳腺癌中的表达及临床意义

目的探讨叉头框转录因子M1(FOXM1)、Polo样激酶1(PLK1)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)及果蝇Zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)在乳腺癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组化法检测Fox M1、PLK1、HIF-1α及EZH2蛋白在803例乳腺浸润性导管癌和癌旁乳腺组织中的表达情况及其与乳腺癌组织临床病理特征间的关系。结果 FOXM1、PLK1、HIF-1α及EZH2在乳腺浸润性导管癌组织中的阳性表达率分别为59.78%、27.90%、43.96%和60.40%,显著高于其在癌旁乳腺组织中的表达(29.89%、0%、3.86%、20.92%),差异具有统计学意义(P<0.05)。FOXM1、PLK1、HIF-1α及EZH2的表达与乳腺癌的组织学分级、淋巴结转移及临床分期相关,与患者年龄、是否绝经及肿瘤大小无关(P>0.05)。PLK1、HIF-1α和EZH2蛋白的表达均与ER呈负相关关系,FOXM1和EZH2蛋白的表达与HER-2呈正相关关系(P<0.01)。FOXM1、PLK1、HIF-1α和EZH2蛋白的表达均具有正相关关系(P<0.01)。结论 FOXM1、PLK1、HIF-1α及EZH2可能协同参与了乳腺癌的发生、发展,并可能成为乳腺癌预后评估的重要指标。

EZH2基因对人食管癌细胞增殖的影响

目的:探讨过表达或沉默果蝇Zeste基因增强子人类同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)基因对食管癌细胞增殖的影响。方法:选用人食管癌细胞株ECA109、TE1、KYSE30、KYSE170作为研究对象,采用实时荧光定量PCR(q PCR)、Western blotting法分别检测食管癌细胞EZH2 m RNA和蛋白的表达水平,然后采用q PCR检测过表达和沉默EZH2基因后对4株食管癌细胞EZH2 m RNA的表达变化;CCK-8增殖实验、克隆形成实验检测过表达和沉默EZH2基因及EZH2抑制剂DZNep(3-deazaneplanocin A)处理对食管癌细胞增殖能力和克隆形成率的影响。结果:食管癌ECA109、TE1细胞中EZH2 m RNA和蛋白水平明显高于KYSE30、KYSE170细胞(P<0.05)。食管癌TE1、ECA109细胞转染EZH2-Sh RNA后EZH2表达水平下调(均P<0.05)、细胞增殖能力降低(1.07±0.08 vs1.59±0.09,P<0.05;0.88±0.08 vs 1.05±0.11,P<0.05)、克隆形成数下调[(200.00±11.43)vs(480.00±13.10)个,P<0.05;(88.00±8.16)vs(220.00±14.69)个,P<0.05]。KYSE30、KYSE170细胞转染EZH2过表达质粒后EZH2表达水平升高(均P<0.05)、细胞增殖能力显著增强(1.06±0.07 vs 0.76±0.06,P<0.05;3.36±0.30 vs 1.50±0.08,P<0.05)、克隆形成数显著升高[(45.00±3.27)vs(18.00±1.63)个,P<0.05;(65.00±4.08)vs(23.00±2.45)个,P<0.05];DZNep处理后,ECA109和TE1细胞增殖能力降低(均P<0.05)、克隆形成数下降(均P<0.05)。结论:EZH2基因能有效促进食管癌细胞的增殖和克隆形成能力,为深入研究EZH2作为食管癌治疗的新靶点提供了实验研究基础。

RNA干扰抑制EZH2基因表达对人胶质瘤细胞凋亡及对卡莫司汀敏感性的影响

目的观察RNA干扰技术抑制EZH2基因表达对人胶质瘤U251细胞凋亡及其对卡莫司汀敏感性的影响。方法针对EZH2 mRNA序列设计合成小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,构建pRNAT-EZH2重组表达载体,并用其转染人胶质瘤U251细胞。用RT-PCR法检测pRNAT-EZH2转染前后U251细胞中内源性EZH2表达;激光共聚焦显微镜观察转染后及加入卡莫司汀后U251细胞凋亡情况;MTT法检测转染前后U251细胞对化疗药物卡莫司汀敏感性;用分光光度法检测转染前后以及加入卡莫司汀后U251细胞中Caspase-3活性。结果成功构建pRNAT-EZH2重组质粒,并成功转染U251细胞。pRNAT-EZH2重组质粒转染后U251细胞中EZH2 mRNA表达量降低(P<0.01);卡莫司汀组及卡莫司汀加pRNAT-EZH2组U251细胞凋亡明显;与卡莫司汀联合时,pRNAT-EZH2组U251细胞生长抑制率明显增高(P<0.01);Caspase-3活性明显高于空白对照组和阴性对照组(P均<0.01)。结论pRNAT-EZH2可抑制EZH2在人胶质瘤U251细胞中的表达,并增强U251细胞对卡莫司汀敏感性。