1例恙虫病合并人类疱疹病毒4型的治疗与药学监护

1病例资料(1)基本资料:患者男性,68岁,农民,体质量:67.5 kg,身高:170 cm,BMI 23.4 kg·m^(-2)。因发热4 d入院。患者4 d前无明显诱因下出现发热,最高体温39.3℃,伴畏寒寒战,有头晕、头痛,无腹痛腹泻,无恶心呕吐,双侧大腿远端肌肉痛。患者自行口服阿莫西林胶囊500 mg,每8 h 1次,治疗3 d后,体温未见好转。门诊拟“发热”收住感染性疾病科。(2)既往史:患者平素身体一般。2016年行胃癌根除术,胃大部切除。高血压病史3年,常规服用缬沙坦氨氯地平片(Ⅰ)85 mg,每日1次,口服,血压控制良好。其余无特殊。

人类疱疹病毒6型和人乳头瘤病毒在宫颈癌患者中的表达及临床检测意义

目的探讨人类疱疹病毒6型(HHV-6)和人乳头瘤病毒(HPV)在宫颈癌患者中的表达及临床检测意义。方法选择86例疑似宫颈癌患者,检测其HHV-6与HPV表达情况。以阴道镜病理活检结果为金标准,分析HPV-DNA与HHV-6DNA检测诊断宫颈癌的一致性。比较HPV-DNA与HHV-6 DNA检测对宫颈癌的诊断效能。结果86例疑似宫颈癌患者经阴道镜病理活检确诊71例。κ检验分析结果显示,HPV-DNA、HHV-6 DNA检测诊断宫颈癌与阴道镜病理活检结果存在高度一致性(P<0.05)。HPV-DNA、HHV-6 DNA检测诊断宫颈癌的灵敏度(91.55%vs.88.73%)、特异度(86.67%vs.80.00%)与准确度(90.70%vs.87.21%)比较均无统计学差异(P>0.05)。结论HHV-6与HPV在宫颈癌患者宫颈组织中多呈现阳性表达,对宫颈癌患者行HHV-6与HPV检测可提高疾病筛查准确率。

人类疱疹病毒4感染对宫颈癌影响的Meta分析和临床研究

目的探讨人类疱疹病毒4(Epstein-Barr virus,EBV)感染对宫颈癌变风险的影响。方法根据关键词从PubMed、Web of Science检索相关文献,提取信息,采用Stata和RevMan软件进行Meta分析。同时采集40例临床确诊病例的组织样本进行EB病毒编码的小RNA(Epstein-Barr encoded RNA,EBER)检测,采集30例确诊病例的血液样本进行衣壳抗原(VCA)-IgM等抗体检测,并统计不同病程患者的感染率。结果共16篇文献纳入Meta分析,包含2199个病例。正常人、低级别鳞状上皮内病变(low-grade squamous intraepithelial lesion,LSIL)、高级别鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesion,HSIL)、宫颈癌(squamous carcinoma of the cervix,SCC)患者中单纯EBV感染率分别为20.4%(95%CI:0.0580.402)、9.8%(95%CI:0.0290.193)、5.5%(95%CI:0.0060.133)、3.2%(95%CI:0.0060.071);EBV和HPV共感染率分别为2.3%(95%CI:0.0010.060)、14.9%(95%CI:0.0860.221)、33.4%(95%CI:0.2320.443)、42.0%(95%CI:0.2790.567)。LSIL、HSIL和SCC患者中合并感染的致病风险分别是HPV单纯感染的0.77倍(95%CI:0.630.94,P<0.05)、1.25倍(95%CI:0.851.85,P=0.25)和1.49倍(95%CI:0.942.35,P=0.09)。细胞刷法和宫颈拭子法采集的样本EBV检出率分别为36.9%(95%CI:0.2190.532)和23.8%(95%CI:0.0820.442)。40个临床患者病变组织的EBER检测结果显示无阳性,临床LSIL、HSIL和SCC患者血清VCA-IgM抗体阳性率分别为50%(1/2)、25%(6/24)和0(0/4)。结论EBV与HPV共感染会增加宫颈癌发生和发展的风险,但单纯EBV感染与疾病进展的相关性不明显;EBV可能并不直接攻击宫颈上皮细胞。研究结果提示在EBV检样采集时细胞刷法敏感性高于宫颈拭子。

成人人类疱疹病毒-6A相关脑膜脑炎一例

患者,女,57岁,因“被发现精神行为异常20小时,意识水平下降2小时”于2021年3月31日就诊于我院神经内科。2周前患者自觉全身不适,但无咳嗽、咳痰、发热、乏力、盗汗,自认为“上呼吸道感染”,口服“感冒清热颗粒、金银花颗粒”等中成药后症状缓解。发病前1日患者曾自述头痛、程度不重,无其他伴随症状,日间可正常活动。患者在入院前20小时被家属发现精神行为异常、强笑、问话答非所问、反应迟钝、不能交流。当地医院查头部CT结果示两侧底节区对称性改变,5小时后上级医院复查头部CT结果示双侧基底节对称稍低密度影并双侧额叶脑沟变浅(图1),15小时后查头部MRI结果示颅内广泛病变,双侧额叶、顶叶、侧脑室旁、基底节区、颞叶、枕叶多发片状纵向弛豫(T1序列)低信号,横向弛豫(T2序列)稍低信号,水抑制成像(FLAIR序列)高信号,弥散加权成像(DWI序列)略高信号;病灶对称,以额叶及基底节区病灶为著(图2)。

人类疱疹病毒6型U94基因克隆、表达、纯化及抗体制备

目的:制备人类疱疹病毒6型U94蛋白及其抗体。方法:PCR扩增U94基因,经测序后克隆到原核表达载体PGEX- 6p-1中。重组质粒转化大肠杆菌Rosetta,诱导蛋白表达。应用酶切鉴定、SDS-PAGE及Western blot等方法确保基因片段的正确性及表达蛋白的特异性。表达的蛋白经亲和层析纯化,纯化的蛋白免疫动物制备抗血清。结果:成功地获得了高纯度的U94融合蛋白,纯度可达90%以上。用其制备多克隆抗体滴度可达1:100 000。结论:获得高纯度的U9d融合蛋白及其高效价的抗体。

新疆地区482例肿瘤人群人类8型疱疹病毒血清流行病学调查及感染危险因素分析

目的对新疆地区肿瘤人群人类8型疱疹病毒流行状况做初步的分子流行病学调查并分析感染危险因素。方法对新疆2所三级甲等医院住院维吾尔族和汉族肿瘤患者进行随机采血和问卷调查及病历记录,采用本实验室建立的组合抗原ELISA方法对样本进行血清特异性抗体的流行病学调查,采用Logistic多元回归分析新疆地区KSHV感染的危险因素。结果482例肿瘤患者血清中,122例血清呈现阳性反应,阳性率25.3%。其中维吾尔族患者阳性率24.8%汉族患者阳性率26.4%。两民族间HHV-8感染率差异无显著性。年龄是KSHV感染的危险因素(P<0.05),民族、性别及输血史等因素与HHV-8感染无相关性。结论血清流行病学调查显示新疆地区为HHV-8高流行区。其流行分布无民族、性别差别,HHV-8感染率随年龄增加而增长。

人类8型疱疹病毒与胃肠型HIV卡波西肉瘤组织ORF42、mTORC1表达相关性研究

目的探究胃肠型HIV卡波西肉瘤组织中人类8型疱疹病毒(HHV8)感染与ORF42、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)表达的关系。方法选取2015年9月至2019年9月新疆维吾尔自治区人民医院收治的艾滋病合并胃肠型卡波西肉瘤患者36例作为研究对象。留取入组患者卡波西肉瘤组织及瘤旁组织,采用免疫组织化学染色检测胃肠型HIV卡波西肉瘤组织及瘤旁组织中HHV8表达情况,Western blotting法检测ORF42、mTORC1蛋白表达水平,qRT-PCR法检测ORF42、mTORC1、血管内皮生长因子(VEGF)、白介素-6(IL-6)mRNA表达水平,Pearson法分析胃肠型HIV卡波西肉瘤组织中ORF42、mTORC1与VEGF、IL-6相关性。结果胃肠型HIV卡波西肉瘤组织中HHV8阳性率明显高于瘤旁组织(P<0.05)。胃肠型HIV卡波西肉瘤组织中ORF42、mTORC1蛋白及mRNA,VEGF、IL-6 mRNA表达水平明显高于瘤旁组织(P<0.05)。感染亚组卡波西肉瘤组织中ORF42、mTORC1蛋白及mRNA,VEGF、IL-6 mRNA表达水平明显高于未感染亚组(P<0.05)。胃肠型HIV卡波西肉瘤组织中ORF42、mTORC1 mRNA与VEGF、IL-6 mRNA表达水平均呈正相关(P<0.05)。结论胃肠型HIV卡波西肉瘤组织中HHV8感染率增加,可能通过激活ORF42、mTORC1表达促进肿瘤发生发展。

蕈样肉芽肿皮损及外周血人类疱疹病毒1、2、4、5型DNA的检测

目的 探讨蕈样肉芽肿与人类疱疹病毒 1型 (单纯疱疹病毒 1型 )、2型 (单纯疱疹病毒 2型 )、4型 (ep stein barr病毒 )、5型 (人类巨细胞病毒 )间有无相关性。方法 酚 氯仿法提取皮肤组织 (蕈样肉芽肿 3 2份、正常皮肤 2 9份、慢性湿疹与慢性单纯性苔藓 2 4份 )及外周血白细胞 (蕈样肉芽肿 15份、健康献血员 40份、慢性湿疹与慢性单纯性苔藓 11份 )中基因组DNA。采用聚合酶链反应技术检测病毒DNA ,扩增产物回收后以限制性内切酶BamHⅠ、SmaⅠ酶切鉴定。结果 蕈样肉芽肿皮损及外周血中 ,各有 2份检测到人类疱疹病毒 1型DNA ;蕈样肉芽肿皮损中有 5份存在人类疱疹病毒 4型DNA ;健康献血员外周血以及正常皮肤、慢性湿疹与慢性单纯性苔藓患者皮损组织及外周血中未检测到此4种病毒DNA。结论 蕈样肉芽肿与人类疱疹病毒 1、2、4、5型间可能不具有相关性。

IL-10、IL-4及其受体启动子在人类单纯疱疹病毒1型激活卡波济肉瘤相关疱疹病毒复制过程中的启动活性分析

目的:分离和鉴定人类IL-10、IL-10受体(IL-10Rα)、IL-4及其受体IL-4Rα启动子序列,并分析IL-10、IL-4以及其受体的启动子在人类单纯疱疹病毒1型(HSV-1)激活卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)过程中的启动活性。方法:以人类基因组DNA为模板,PCR扩增IL-10、IL-10Rα、IL-4Rα启动子区序列,并分别克隆载入pGL-3基本载体中虫荧光素酶(Luciferase)报告基因的上游。进一步将上述构建的重组质粒与本室保存的含IL-4启动子重组质粒分别转染HSV-1感染的BCBL-1细胞,并作Luciferase活性检测。结果:分离了IL-10、IL-10Rα和IL-4Rα的启动子区域序列,并成功克隆了含启动子序列重组报告质粒;HSV-1感染的BCBL-1细胞在进一步转染了IL-10、IL-10Rα、IL-4和IL-4Rα启动子重组报告质粒后,其Luciferase值与相应的对照比较显著升高(P<0.05)。结论:在BCBL-1细胞中,HSV-1可通过直接激活IL-10、IL-4以及相应受体的启动子来上调它们的表达;在HSV-1感染的BCBL-1细胞中,IL-10和IL-4可能对KSHV的裂解复制起到促进作用。

人类疱疹病毒8型感染与卡波西肉瘤中TLR4、Notch1通路功能的相关性研究

目的分析人类疱疹病毒8型(HHV8)感染与卡波西肉瘤中Toll样受体4(TLR4)、Notch1通路功能的相关性。方法选择2015年8月—2017年10月新疆维吾尔自治区人民医院消化科内镜下获得并经病理学确诊的消化道卡波西肉瘤组织及瘤旁组织作为研究对象,测定组织中HHV8的感染情况以及TLR4通路分子、Notch1通路分子的表达量。结果卡波西肉瘤组织中HHV8阳性率以及Notch1、JAG1、HES1、PTEN、CyclinD 1的mRNA表达量与瘤旁组织比较显著升高(χ~2=14. 072,P=0. 000; t=15. 035、17. 998、16. 879、14. 241、19. 946,P均=0. 000),TLR4、ICAM1、TNF-α、IL-1β的mRNA表达量与瘤旁组织比较均明显降低(t=13. 240、20. 509、17. 393、14. 864,P均=0. 000); HHV8感染的卡波西肉瘤组织中TLR4、ICAM1、TNF-α、IL-1β的mRNA表达量与HHV8未感染的卡波西肉瘤组织比较均明显降低(t=17. 063、11. 671、14. 491、15. 048,P=0. 000),Notch1、JAG1、HES1、PTEN、CyclinD 1的mRNA表达量与HHV8未感染的卡波西肉瘤组织比较均明显升高(t=6. 173、7. 189、7. 306、15. 215、8. 284,P均=0. 000)。结论消化道卡波西肉瘤中HHV8感染率增加且与TLR4通路的抑制、Notch1通路的激活有关。

稳定表达人类疱疹病毒6型U94基因血管内皮细胞株的建立及U94对内皮细胞增殖和血管生成能力的影响

目的:构建人类疱疹病毒6型U94基因慢病毒载体,研究U94基因对血管内皮细胞增殖及血管生成的影响。方法:以质粒pSR2PH-U94为模板,PCR扩增U94-6×His片段,克隆至慢病毒载体pLenti6.3-MCS-IRES2-EGFP,经酶切和测序鉴定后,将重组质粒与慢病毒辅助包装元件质粒共转染293T细胞,获得含U94-6×His基因的重组慢病毒。重组慢病毒感染血管内皮细胞EA.hy926,经Blasticidin筛选,RT-PCR和Western blot鉴定,获得稳定表达细胞株。CCK-8和小管形成实验研究U94基因对血管内皮细胞的增殖及血管生成能力的影响。结果:成功构建含U94基因的慢病毒表达载体pLenti-U94-IRES2-EGFP,重组慢病毒经包装、纯化后测得滴度为2.35×107TU/ml。重组慢病毒感染血管内皮细胞EA.hy926,获得能稳定表达U94基因的细胞株EA.hy926-U94。CCK-8及小管形成实验结果显示EA.hy926-U94细胞与阴性对照细胞EA.hy926-NC、正常EA.hy926细胞相比,细胞增殖活性明显降低,小管形成能力变差。结论:成功建立了慢病毒介导的稳定表达U94基因的血管内皮细胞株,研究表明U94可以抑制内皮细胞的增殖及血管生成。

人类β-疱疹病毒感染的促癌作用

人类疱疹病毒(human herpesvirus,HHV)分为α、β和γ3大类,在人群中广泛传播,可以终生隐性感染,能够引起多种疾患。γ-HHV的致癌作用已经证实,与其进化关系密切的β-HHV的促癌性引起关注。其中研究时间最久、资料最多的是人类巨细胞病毒,它存在于多种肿瘤中,通过多种病毒产物和不同机制致癌,有些研究者认为它属于肿瘤病毒。人类疱疹病毒6型(HHV-6)包括HHV-6A和HHV-6B两种,并有遗传性染色体整合型HHV-6(iciHHV-6),与肿瘤的关系更为复杂,值得深入研究。揭示β-HHV与肿瘤的关系不仅为阐明内源性肿瘤病毒的起源提供新线索,而且为肿瘤防治提供新思路。本文综述其研究进展。

应用一步PCR法检测并鉴定马疱疹病毒1型和4型

聚合酶链反应 (PCR)可作为一种快速检测并鉴别马疱疹病毒 1型 (EHV 1)和马疱疹病毒 4型 (EHV 4)的诊断方法。PCR引物是根据编码EHV 1和EHV 4的糖蛋白B(gB)基因上的共有的核苷酸序列或型特有的核苷酸序列设计的。利用这两种病毒的型特异性混合引物 ,在一步PCR反应中检测并鉴别EHV 1和EHV 4,而同一疱疹病毒科的单纯疱疹病毒 1型 (HSV 1)、伪狂犬病毒 (PRV)、马立克氏病病毒 (MDV)均无特异性扩增。应用建立的PCR方法检测了普氏野马流产胎儿病料 ,实验结果表明 ,这种PCR方法是一种直接检测并鉴定EHV 1和EHV 4的快速、敏感的诊断方法 ,同时 ,它可在一步PCR反应中直接鉴别这两种病毒 ,可用于病料中EHV 1和EHV 4检测的初步筛选。

鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF4基因的克隆、表达与免疫学检测方法

根据鲤疱疹病毒II型(Cyprinid herpesvirus Ⅱ,Cy HV-2)ORF 4基因序列(Gen Bank:JQ815364.1)设计特异性引物,PCR扩增得到ORF 4基因编码框全长序列1 041 bp,将其克隆至原核表达载体p ET-32a(+)中,构建了重组原核表达载体p ET-32a-ORF 4。将p ET-32a-ORF 4重组载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导得到融合表达的重组蛋白,融合表达的重组蛋白主要以包涵体的形式存在,其分子质量约为57 ku,与预期大小一致。将纯化的重组蛋白免疫日本大耳兔,制备了多克隆抗体,ELISA检测抗体效价大于1∶50 000,Western blot检测显示该抗体可以特异性识别重组蛋白。间接免疫荧光检测结果表明:该多克隆抗体可与由Cy HV-2感染引起细胞病变的异育银鲫脑组织细胞(GICB)发生特异性的结合。

人类疱疹病毒6,7型与特发性血小板减少性紫癜发病关系的探讨

目的 了解人类疱疹病毒 (HHV) 6型、7型在特发性血小板减少性紫癜发生中的作用及其相互作用。方法 聚合酶链反应 (PCR)检测特发性血小板减少性紫癜 (ITP)患者外周血中的HHV6 -DNA和HHV7-DNA ,缺铁性贫血组和健康体检组为对照。结果 31例ITP患者、10例缺铁性贫血患者和 30例健康体检者外周血中 ,HHV6 -DNA的检出率分别为 :2 5 .8% (8/ 31) ,10 % (1/ 10 )和 3.33% (1/ 30 ) ;ITP组与健康体检组间 ,HHV6的感染率差异有显著意义 (P <0 .0 5 )。HHV7-DNA阳性的 6例中 ,有 5例与HHV6是合并阳性 ;健康体检组与缺铁性贫血组 ,HHV7与HHV6合并阳性分别为 0和 1例 ;两种病毒合并阳性 ,在ITP组与健康体检组间差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。ITP组与缺铁性贫血组间 ,HHV6阳性率、HHV7阳性率、HHV6与HHV7合并感染率前者均明显高于后者 ,但统计学差异无显著意义。结论 HHV6感染与ITP发生相关 ,HHV7可能通过激活HHV6引发ITP的发生。

弓形虫SAG1和GRA4基因的原核表达及其重组猫疱疹病毒Ⅰ型转移载体的构建

为构建表达弓形虫抗原的重组猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)转移载体,本研究以pBluesciptⅡ-SK(-)为骨架载体,分别插入FHV-1 TK基因的5'(2 000 bp)和3'(1 700 bp)同源臂、pCAGGs载体中含有启动子和终止信号的表达盒以及弓形虫RH株SAG1或GRA4基因,构建重组FHV-1的转移载体pBS-TK-SAG1和pBS-TK-GRA4。将其分别转染于293T细胞,通过原核细胞表达的截短SAG1和GRA4重组蛋白制备的鼠多克隆抗体进行western blot鉴定。结果显示,制备的弓形虫SAG1和GRA4多克隆抗体能够特异性识别重组表达和虫体表达的天然的SAG1和GRA4两种弓形虫蛋白,分子量一致,分别为35 ku和45 ku。本研究为表达弓形虫RH株SAG1和GRA4基因的猫重组疱疹病毒Ⅰ型载体疫苗的研制奠定了基础。

HIV-1 Tat蛋白对人类疱疹病毒8型复制的影响

用HindⅢ将HIV-1Tat101蛋白编码基因从pEV质粒中切出,BamHI、NotⅠ将绿色荧光蛋白(GFP)编码基因从表达质粒pcDNA3 1+/GFP中切出,分别插入到质粒LZRSpBMN-Z中,构建成重组反转录病毒表达质粒LZRS-Tat101和LZRS-GFP。采用磷酸钙转染法将两重组质粒转染到含反转录病毒env、gal和pol编码基因的包装细胞Phoenix(ΦNX)中,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞系。分别收集稳定细胞系分泌的病毒上清,并感染体外培养的原发性渗出性淋巴瘤(PEL)BCBL-1细胞。收集LZRS-GFP重组病毒感染的BCBL-1细胞进行流式细胞计数,检测GFP表达水平。收集LZRS-Tat101重组病毒感染的BCBL-1细胞,提取蛋白作Westernblot,检测Tat蛋白表达状况;取细胞总RNA作Northernblot和定量PCR,检查HHV-8次要衣壳蛋白ORF26mRNA转录水平。重组LZRS-Tat101病毒进一步感染HL3T1细胞(HeLa细胞包含HIV-1-LTR/CAT报告基因),收集感染细胞提取蛋白,检测CAT活性,评价Tat生物学功能。PCR扩增HHV-8复制和转录激活蛋白Rta启动子区上游序列,并克隆至pGL-3载体中,构建Rta启动子+虫荧光素酶(Luciferase)报告基因重组质粒。此重组质粒进一步电转染预先感染了LZRS-Tat101病毒的BC-3细胞,TPA刺激后收集细胞,检测Luciferase活性。结果显示:①重组反转录病毒感染BCBL-1细胞,一次感染?

人类疱疹病毒8型病毒干扰素调节因子编码基因的克隆及在真核细胞中的表达

目的:分离、克隆人类疱疹病毒8型(HHV-8)编码的病毒干扰素调节因子(virusinterferonregulatoryfactor,vIRF)基因K9,并将其导入真核细胞中进行表达。方法:根据GenBank登记的K9基因核苷酸序列设计一对PCR引物,其5′端分别引入HindⅢ和BamHⅠ酶切位点。以原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1细胞总DNA为模板,PCR扩增K9基因,经双酶切后克隆进真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒pK9。为了便于蛋白检测,再设计第二对引物,上游引物不变,在下游引物5′端引入了Flag序列。以质粒pK9为模板再次PCR,扩增K9-Flag基因,并把K9-Flag序列克隆入pcDNA3.1(+)中,得到重组质粒pK9F。重组质粒经酶切鉴定,核酸序列测定和分析后瞬时转染NIH3T3细胞,用RT-PCR、Westernblot分别从核酸和蛋白水平检测K9基因的表达情况。结果:PCR分离、克隆的K9-Flag序列全长1380bp,核酸序列分析显示克隆的K9基因与GenBank中己经登记的K9基因序列100%同源,引入的Flag序列完全正确;RT-PCR和Westernblot都在K9预期位置检测到特异性条带。结论:HHV-8K9基因在NIH3T3细胞中获得了正确表达。

实时荧光定量聚合酶链反应检测复发性阿弗他溃疡患者中人类疱疹病毒5型和8型的潜伏

目的采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测轻型复发性阿弗他溃疡(RAU)患者4种样本中人类疱疹病毒5型(HHV-5)和8型(HHV-8)的潜伏情况。方法选择18例轻型RAU患者为试验组,同时选择健康者23名为对照组进行临床采样,样本包括唾液、病变区脱落细胞、病变区组织块及外周血。然后用实时荧光定量PCR检测4种样本中HHV-5和HHV-8的DNA。结果HHV-5仅在试验组患者病损区组织块样本中能检测到,而在对照组的组织块样本中没有检测到。试验组和对照组的血液和唾液样本中均有HHV-5阳性检出,但两组比较其差异无统计学意义(P>0.05);试验组和对照组的脱落细胞样本中均无HHV-5阳性检出。试验组和对照组的4种样本中HHV-8均检出阴性。结论HHV-5在RAU患者的溃疡区可能有潜伏。