人类疱疹病毒6型和人乳头瘤病毒在宫颈癌患者中的表达及临床检测意义

目的探讨人类疱疹病毒6型(HHV-6)和人乳头瘤病毒(HPV)在宫颈癌患者中的表达及临床检测意义。方法选择86例疑似宫颈癌患者,检测其HHV-6与HPV表达情况。以阴道镜病理活检结果为金标准,分析HPV-DNA与HHV-6DNA检测诊断宫颈癌的一致性。比较HPV-DNA与HHV-6 DNA检测对宫颈癌的诊断效能。结果86例疑似宫颈癌患者经阴道镜病理活检确诊71例。κ检验分析结果显示,HPV-DNA、HHV-6 DNA检测诊断宫颈癌与阴道镜病理活检结果存在高度一致性(P<0.05)。HPV-DNA、HHV-6 DNA检测诊断宫颈癌的灵敏度(91.55%vs.88.73%)、特异度(86.67%vs.80.00%)与准确度(90.70%vs.87.21%)比较均无统计学差异(P>0.05)。结论HHV-6与HPV在宫颈癌患者宫颈组织中多呈现阳性表达,对宫颈癌患者行HHV-6与HPV检测可提高疾病筛查准确率。

人类疱疹病毒6型（HHV－6）研究新进展

人类疱疹病毒６型（ＨＨＶ－６）研究新进展孙劲综述方企圣审校人类疱疹病毒６型（ｈｗｍａｕｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓｔｙｐｅ６，ＨＨＶ－６）１９８６年首次从淋巴增生疾病患者的血液淋巴细胞中分离得到［１］，是人类疱疹病毒科中的一种新病毒。其形态结构与人类其它疱...

肝移植术后并发人类疱疹病毒6B脑炎1例附文献分析

人类疱疹病毒6(human herpesvirus-6,HHV-6)包含HHV-6A和HHV-6B两种病毒变异体[1]。HHV-6在实体器官移植的受体中感染率高,其中HHV-6B是导致移植术后感染的主要病毒类型,但只有1%的感染者会表现出相应的临床症状[2]。HHV-6脑炎更常见于干细胞移植术后患者,且预后较差,但发生于肝移植术后患者的报道目前不多,以个案报道为主,对其认识并不十分充分[3]。本文报道1例肝移植术后并发HHV-6B脑炎的病例以及文献回顾与分析,以提高对此疾病的认识与诊治。

人类疱疹病毒6,7型与特发性血小板减少性紫癜发病关系的探讨

目的 了解人类疱疹病毒 (HHV) 6型、7型在特发性血小板减少性紫癜发生中的作用及其相互作用。方法 聚合酶链反应 (PCR)检测特发性血小板减少性紫癜 (ITP)患者外周血中的HHV6 -DNA和HHV7-DNA ,缺铁性贫血组和健康体检组为对照。结果 31例ITP患者、10例缺铁性贫血患者和 30例健康体检者外周血中 ,HHV6 -DNA的检出率分别为 :2 5 .8% (8/ 31) ,10 % (1/ 10 )和 3.33% (1/ 30 ) ;ITP组与健康体检组间 ,HHV6的感染率差异有显著意义 (P <0 .0 5 )。HHV7-DNA阳性的 6例中 ,有 5例与HHV6是合并阳性 ;健康体检组与缺铁性贫血组 ,HHV7与HHV6合并阳性分别为 0和 1例 ;两种病毒合并阳性 ,在ITP组与健康体检组间差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。ITP组与缺铁性贫血组间 ,HHV6阳性率、HHV7阳性率、HHV6与HHV7合并感染率前者均明显高于后者 ,但统计学差异无显著意义。结论 HHV6感染与ITP发生相关 ,HHV7可能通过激活HHV6引发ITP的发生。

抗人类疱疹病毒6型南京分离株E5单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备并鉴定人疱疹病毒6型(HHV-6)单克隆抗体。方法:用纯化的HHV-6南京分离株E5免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,经间接ELISA法筛选,间接免疫荧光法、免疫印迹实验等方法鉴定单抗。并采用套式PCR法和ELISA法,在口腔癌中进行了初步的应用。结果:获得了一株分泌抗HHV-6单克隆抗体的杂交瘤细胞系,命名为JA9。单克隆抗体亚类鉴定表明:其为IgG1亚类,轻链为κ。用间接ELISA法检测细胞上清单抗效价为1∶500;单抗腹水滴度为1∶8.0×104。免疫印迹实验结果表明:JA9单抗腹水与约75kuHHV-6E5病毒蛋白结合。口腔癌患者唾液的HHV-6阳性检测率结果分别是:套式PCR法60%,ELISA法40%。结论:成功制备并鉴定一株抗HHV-6南京分离株E5单克隆抗体,为HHV-6进一步的基础研究及临床快速诊断提供可能。

人类疱疹病毒6型及人乳头瘤病毒16型感染与宫颈癌发生、发展关系的研究

目的 :研究人类疱疹病毒 6型 (hHV 6 )及人乳头瘤病毒 16型 (hPV 16 )感染与宫颈癌发生、发展的关系。方法 :应用巢式多聚酶链反应 (nested PCR)检测hHV 6及多聚酶链反应 (PCR)检测hPV 16在 16份正常宫颈、2 0份宫颈炎症、6份宫颈上皮内瘤样病变 (CIN)Ⅰ～Ⅱ级及 34份宫颈癌组织中的感染情况。结果 :宫颈癌组织中hHV 6DNA阳性率为 6 1.76 % (2 1/34) ,明显高于正常组、炎症组及CINⅠ～Ⅱ级组 (P <0 .0 1)。宫颈癌组织中hPV 16DNA阳性率为 76 .4 7% (2 6 /34) ,明显高于正常组的 12 .5 0 %和炎症组的15 .0 0 % (P <0 .0 1)。 2 1份hHV 6DNA阳性组织中的hPV 16DNA也全部阳性 ,二者在宫颈癌组织中呈高度一致性。随着宫颈癌临床期别的增加 ,hHV 6和hPV 16DNA阳性率均呈递减趋势 ,但差异不显著 (P >0 .0 5 )。结论 :hHV 6感染与宫颈癌的发生密切相关 ,可能是宫颈癌的致病因子 ,作为“促进子”(promoter)与hPV 16协同促使宫颈癌进展。

人类疱疹病毒6A亚型DR7基因对神经胶质瘤细胞U87增殖、迁移、侵袭能力的影响

目的:构建含人类疱疹病毒6A亚型DR7基因的慢病毒,研究DR7基因表达对神经胶质瘤细胞U87增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法:PCR扩增DR7基因,克隆至慢病毒载体pLenti6.3-MCS-IRES2-EGFP,构建pLenti6.3-DR7-IRES2-EGFP重组慢病毒载体,经293T细胞包装重组病毒转染至神经胶质瘤细胞U87,经blasticidin筛选建立稳定表达株,通过细胞增殖实验、细胞周期实验、细胞划痕及Transwell实验研究稳定表达DR7基因对U87细胞的增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果:成功构建了pLenti6.3-DR7-6×His-IRES2-EGFP慢病毒表达载体,筛选了稳定表达DR7基因的U87-DR7-EGFP细胞株,CCK-8细胞增殖实验显示,稳定表达DR7基因的U87-DR7-EGFP细胞与阴性对照细胞U87-NC-EGFP、U87细胞相比,细胞增殖活性明显增高,差异具有统计学意义(P<0.001)。细胞周期检测发现U87-DR7-EGFP细胞S、G2/M期细胞所占比例多于U87-NC-EGFP、U87细胞:S期的比例分别为(34.73±1.12)%、(24.89±0.93)%、(25.39±0.96)%,差异具有统计学意义(P<0.001);G2/M期分别为(17.35±1.61)%、(11.36±1.50)%、(13.17±1.95)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。细胞划痕实验表明,U87-DR7-EGFP细胞愈合能力明显强于U87-NC-EGFP、U87细胞,划痕6 h愈合率分别为:(33.55±2.83)%、(23.50±3.18)%、(22.03±1.47)%,差异具有统计学意义(P<0.01);划痕12 h愈合率分别为(70.50±5.39)%、(53.60±4.67)%、(55.09±2.83)%,差异具有统计学意义(P<0.001)。Transwell实验表明,U87-DR7-EGFP细胞的穿膜数量明显多于U87-NC-EGFP、U87细胞,分别为:(543.00±22.94)、(387.00±15.63)、(412.00±20.30)个,差异具有统计学意义(P<0.001)。结论:人类疱疹病毒6A亚型DR7基因表达能在体外促进人神经胶质瘤细胞U87增殖、迁移及侵袭,提示其在神经胶质瘤的发生和发展中可能起一定作用。

人类疱疹病毒6型U94基因克隆、表达、纯化及抗体制备

目的:制备人类疱疹病毒6型U94蛋白及其抗体。方法:PCR扩增U94基因,经测序后克隆到原核表达载体PGEX- 6p-1中。重组质粒转化大肠杆菌Rosetta,诱导蛋白表达。应用酶切鉴定、SDS-PAGE及Western blot等方法确保基因片段的正确性及表达蛋白的特异性。表达的蛋白经亲和层析纯化,纯化的蛋白免疫动物制备抗血清。结果:成功地获得了高纯度的U94融合蛋白,纯度可达90%以上。用其制备多克隆抗体滴度可达1:100 000。结论:获得高纯度的U9d融合蛋白及其高效价的抗体。

人类疱疹病毒6型感染U251细胞及其生物学功能的研究

目的:研究人类疱疹病毒6型(HHV-6)感染人星形胶质瘤细胞U251,及感染后对其生物学功能的影响。方法:HHV-6感染U251细胞建立HHV-6体外感染模型,倒置显微镜观察细胞病变。PCR法检测HHV-6u22基因。间接免疫荧光(IFA)检测HHV-6即刻早期蛋白(IE1)和晚期蛋白(gB)的表达。MTT法检测U251感染HHV-6后细胞增殖的改变。流式细胞术(FCM)检测U251细胞周期改变。结果:在感染3天后U251出现典型细胞病变,细胞肿胀增大数倍,透亮,呈多形性。PCR检测到HHV-6u22基因。IFA检测到HHV-6IE1蛋白和gB蛋白的表达。MTT法显示HHV-6能增强U251细胞的增殖能力。FCM检测表明,HHV-6感染后U251细胞周期发生改变,感染组和对照组相比,前者G1期的细胞减少,S期和G2期细胞增多。结论:HHV-6能感染U251细胞引起细胞病变,促进细胞的增殖,使细胞周期发生改变。本研究结果提示人类疱疹病毒6型可能参与人神经胶质瘤的发生、发展,对其机制尚不清楚。

人类6型疱疹病毒的血清流行病学调查

用间接免疫荧光法对沈阳等４市部分健康人群进行了人类６型疤疫病毒（ＨＨＶ－６）的血清流行病学调查。发现沈阳、大连两市部分健康人群中ＨＨＶ－６抗体阳性率和几何平均滴度（ＧＭＴ）为７４．６％和１５．８，保定市和北京市部分健康人群中为５５．３％和１０．０，且感染多发生在小年龄组人群。说明新发现的ＨＨＶ－６病毒在沈阳等４市曾流行过，在健康人群中亦存在ＨＨＶ－６感染．

人类疱疹病毒6型可诱生TNF－α

用生物活性法和双抗体夹心桥联酶免疫吸附（ＥＬＩＳＡ）法检测了人类疱疹病素６型（ＨＨＶ－６）ＧＳ株和南京地方株ＣＮ５，８，１０感染的淋巴细胞培养上清中的肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）的水平，发现培养２４ｈ即可检出高水平的ＴＮＦ，４８～７２ｈ述到峰值，此后逐渐下降，与未感染耐照组比较有及其显著的差异（Ｐ＜０．００１）。ＧＳ株与地方株同诱生ＴＮＦ水平无儿著性差异（Ｐ＞０．１），三株地方株诱生ＴＮＦ也无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。ＴＮＦ－α单抗可以完全中和培养上清中ＴＮＦ的活性，证实上清中有ＴＮＦ－α。与ＬＰＳ比较，ＨＨＶ－６诱生ＴＮＦ－α的能力要强得多。

淋系白血病中人类疱疹病毒6型的感染情况

目的 :了解淋巴系统白血病患者人类疱疹病毒 - 6型 (HHV - 6)的感染情况。方法 :患者 38例 ,包括急性淋巴细胞白血病 (ALL) 31例、慢性淋巴细胞白血病 (CLL) 4例、淋巴瘤白血病 (LL) 3例 ,正常对照 38例。取抗凝外周血 ,分离单个核细胞 ,提取DNA ,用巢式PCR方法检测目标DNA。结果 :HHV - 6DNA阳性检出率在全部患者中为 63% ,其中在ALL患者中为 68% ,均明显低于正常对照的阳性检出率 92 % (P <0 .0 5 ) ,另外 ,4例CLL患者有 1例阳性 ,3例LL患者中 2例阳性。结论 :在淋巴系统恶性疾病中HHV - 6的感染率低于正常人群 ,其临床意义有待进一步研究。

甲基-β-环湖精对人类疱疹病毒6型感染性的影响

目的了解甲基-β-环糊精对人类疱疹病毒6型包膜胆固醇含量及其病毒感染性的影响．方法用不同浓度的甲基环糊精作用于HHV-6AGS株，经20％蔗糖缓冲液梯度离心，去除甲基-β-环糊精并纯化病毒，分剐进行病毒胆固醇含量的测定及感染HSB-2细胞，然后采用IFA法和免疫蛋白杂交等方法检测病毒受甲基环湖精作用后，其对靶细胞的结合、融合、进入的影响以及包膜糖蛋白的表达、结果甲基-β-环糊精能去除HHV-6A包膜胆固醇，病毒的感染性遭到了破坏，但可以被外源性胆固醇所恢复、HHV-6A结合宿主细胞的能力稍微受到影响，但其感染性及诱导细胞融合的能力显著减弱，包膜糖蛋白的表达不受影响．结论HHV-6A包膜胆固醇在细胞融合过程中起着重要作用，同时也是病毒进入宿主细胞的关键因素．

口腔鳞状细胞癌与人类疱疹病毒6型感染的相关性研究

目的:研究人类疱疹病毒6型(HHV-6)感染与口腔鳞癌的相关性。方法:用PCR和间接免疫荧光方法分别检测口腔鳞癌患者和健康志愿者唾液HHV-6DNA和血清抗HHV-6IgG抗体。免疫组化法检测口腔鳞癌组织及癌旁组织标本中HHV-6糖蛋白B(glycoprotein B,gB)抗原。结果:118份口腔鳞癌唾液标本中PCR阳性率为65.3%,高于正常人群的40%(P<0.05)。HHV-6感染与患者病历资料无显著相关性。18份口腔鳞癌患者和20份健康人血清中HHV-6IgG抗体的几何平均滴度分别为1∶102.17和1∶101.50(P<0.05)。免疫组化法检测,11例口腔鳞癌标本中6例出现的阳性结果,胞质内出现弥散性的黄色颗粒,在癌巢内特异性浓集,而间质为阴性。8例相应癌旁组织中3例出现阳性染色结果,但阳性强度较癌组织弱且弥散。1例gB组化阳性肿瘤组织细胞经分离后接种裸鼠,移植瘤组织也检测到HHV-6抗原。结论:本研究说明HHV-6与口腔鳞癌的发生存在相关性,但不与患者临床资料分布相关。本研究亦提示荷瘤裸鼠作为HHV-6动物模型的可能性。

人类疱疹病毒6型与口腔鳞癌发生的相关性研究及临床意义

目的研究人类疱疹病毒6型(HHV-6)感染与口腔鳞癌发生的相关性及其临床意义。方法运用巢式PCR技术,检测82例口腔鳞癌、25例癌前病变及40例正常对照人群唾液、血液、组织中HHV-6感染情况。结果正常对照组、癌前病变组、鳞癌组HHV-6在唾液中的检出率分别为45.0%、56.0%、72.0%,在血液中的检出率分别为22.5%、48.0%、57.3%,总阳性率为47.5%、56.0%、80.5%,趋势差异均具统计学意义(P<0.05);3组HHV-6检出率唾液普遍高于血液,在正常组和鳞癌组中差异具统计学意义(P<0.05)。鳞癌组癌组织中HHV-6检出率(78.95%)显著大于癌旁正常组织(10.53%),具统计学意义(P<0.01);随着鳞癌分化程度的降低,HHV-6的阳性率有下降的趋势,但无统计学差异(P>0.05)。结论唾液腺是HHV-6长期潜伏和增殖的部位,唾液是其主要的传播媒介;HHV-6的激活/再感染发生在黏膜病变的早期,其感染与口腔鳞癌的发生存在相关性,可能直接参与了细胞癌变的过程。

人类疱疹病毒6A亚型潜伏感染人神经胶质瘤细胞系U251

目的 :采用人神经胶质瘤细胞系U251作为宿主建立HHV-6A亚型潜伏感染神经系统细胞的体外模型。方法:HHV-6A急性感染U251细胞后随细胞传代,通过观察细胞形态变化、病毒复制及检测病毒基因表达情况等确定其进入潜伏感染阶段。结果:HHV-6A在急性感染U251细胞后随传代数的增加,病毒基因拷贝量逐渐减低至稳定的低水平,而代表处于潜伏感染阶段的HHV-6A病毒U94基因的转录逐渐下降随后维持在稳定水平表达。结论:HHV-6A在体外感染U251后通过传代使病毒从急性感染期逐渐转入潜伏感染期。

人类疱疹病毒6型包膜胆固醇去除及糖蛋白表达

目的探讨人类疱疹病毒(HHV)-6型包膜胆固醇去除后,对其包膜糖蛋白表达水平的影响。方法用0,1,2,3,5,10 mmol/L不同浓度的甲基-β-环糊精作用于HHV-6A GS株,经20%蔗糖缓冲液梯度离心,去除甲基-β-环糊精,并纯化病毒,采用胆固醇含量检测试剂盒测定病毒胆固醇含量;纯化后的病毒感染HSB-2细胞后,用免疫蛋白杂交方法检测包膜糖蛋白的表达。结果不同浓度的甲基-β-环糊精作用HHV-6A后,其包膜胆固醇含量与甲基-β-环糊精的浓度呈负相关,从35μg/ml下降到10μg/ml以下;与未经处理的病毒比较,其包膜糖蛋白的表达水平未发生改变,糖蛋白gQ1和gL的表达均处在同一水平。结论甲基-β-环糊精可去除HHV-6A包膜胆固醇,且包膜胆固醇的缺失并未影响包膜糖蛋白的表达。

人类疱疹病毒6型感染与风湿性关节炎关系的研究

目的探讨人类疱疹病毒6型（HHV-6）与风湿性关节炎之间的关系．方法采用巢式PCR方法检测38例风湿性关节炎患者外周血单个核细胞和血清中的HHV-6-DNA．结果风湿性关节炎患者HHV-6-DNA阳性率为55．26％，而对照组为52％，两组比较无显著性差异（P〉0．05）．部分患者血清中存在HHV-6-DNA，提示这些患者可能存在HHV-6活动性感染．结论HHV-6感染与风湿性关节炎相关．

脂筏在人类疱疹病毒6型装配中的作用

为了探讨脂筏在人类疱疹病毒6型(HHV-6)装配中的作用,用HHV-6 GS株感染HSB2细胞,用非离子去污剂Triton X-100提取脂筏成分,利用Western blot分析HHV-6包膜糖蛋白与脂筏的相关性。并用免疫荧光双标记的方法,从分子共定位的角度研究HHV-6糖蛋白B(gB)与GPI(glycosyl-phosphatidyl inosital)锚固蛋白CD59分子以及神经节苷脂GM1(monosialotetrahexosyl ganglioside)分子之间的表达与分布关系。结果发现HHV-6包膜糖蛋白B、H、L、Q1和Q2(gB、gH、gL、gQ1和gQ2)分布在脂筏部位。激光共聚焦显微镜可观察到CD59分子及GM1均与HHV-6包膜糖蛋白B有着相同的分布,即脂筏提供HHV-6装配的平台。关于脂筏在人类疱疹病毒6型装配中的作用,这是第一次报道。