宫颈病变中抗原呈递元件成员蛋白和人类白细胞共同抗原Ⅰ类分子表达的关系

抗原呈递元件（APM）成员蛋白作为一组抗原呈递相关功能蛋白,在协助人类白细胞共同抗原（HLA）Ⅰ类分子组装、负载和提呈内源性抗原肽,介导抗病毒T细胞免疫中发挥着重要作用[1].其成员蛋白抗原处理相关转运体（TAP）负责将内源性抗原肽向内质网腔转运.TAP相关蛋白对HLA-Ⅰ类分子在内质网中的装配发挥关键作用[2].分子伴侣钙连接蛋白和钙网蛋白以及疏基二硫键氧化还原酶Erp57协助新合成的HLA-Ⅰ蛋白正确折叠和组装[3].人乳头状瘤病毒（HPV）是宫颈癌发生的始动因素,也可能通过协助肿瘤细胞影响HLA-Ⅰ基因表达调控.因此,探讨HPV感染引起宿主HLA-Ⅰ类分子表达缺失与APM成员表达情况有无关联,是揭示肿瘤的分子机制、疫苗治疗、建立肿瘤生物标志谱体系的关键.我们通过检测宫颈上皮内瘤变（CIN）和宫颈癌组织中APM成员蛋白及HLA-Ⅰ类分子的表达情况,分析其与HPV16感染的相关性,从而探讨宫颈病变中HLA-Ⅰ类分子表达下调的机制.

人类免疫缺陷病毒-1 nef诱导凋亡及下调人类白细胞抗原-I类分子

【目的】研究人类免疫缺陷病毒(HIV)-1 nef调节细胞表面的人类白细胞抗原(HLA)-I类分子及诱导细胞凋亡情况。【方法】将293T细胞分为两组,用脂质体法将含HIV-1 nef基因的质粒及空载体分别转染细胞,Western blot检测HIV-1 nef在转染细胞中的表达,荧光抗体染色结合流式细胞术检测细胞表面的HLA-I类分子表达及细胞凋亡情况。【结果】HIV-1 nef在转染细胞中有表达。转染HIV-1 nef的细胞与转染空载体的细胞经抗HLA-A,B,C-FITC染色后,平均荧光强度分别为205±22及269±15,两者相比有显著性差异(P<0.01);经Annexin V-APC/PI染色后,阳性细胞百分率分别为(60.82±8.32)%及(8.12±5.43)%,两者相比亦有显著性差异(P<0.01)。【结论】HIV-1 nef下调细胞表面的HLA-I类分子及诱导细胞凋亡。

人类白细胞抗原-Ⅰ类基因表达与高危型HPV感染及宫颈发病的关系

目的了解宫颈癌不同病变程度患者人类白细胞抗原-Ⅰ类基因表达和高危型人乳头瘤病毒感染情况,分析人类白细胞抗原-Ⅰ基因表达与高危型人乳头瘤病毒感染、宫颈癌发病的关系。方法将92例宫颈病变患者按病变严重程度分为宫颈炎37例、CINⅠ级组9例、CINⅡ级组12例、CINⅢ级组10例、宫颈癌组24例,将58名健康者设为健康组,比较各组人类白细胞抗原-I基因及蛋白表达情况。采用聚合酶链式反应检测各组人乳头瘤病毒感染情况,分析宫颈病变不同程度患者人类白细胞抗原-Ⅰ基因表达及人乳头瘤病毒分型,对人类白细胞抗原-Ⅰ基因表达与高危型人乳头瘤病毒感染及宫颈癌发病的关系采用Spearman相关性分析。结果两组首次性生活年龄、流产次数比较差异有统计学意义(P<0.05或0.01),年龄、受教育程度、体质量指数、吸烟史、饮酒史比较差异无统计学意义(P>0.05)。健康组、宫颈炎组、CINⅠ级组、CINⅡ级~Ⅲ级组及宫颈癌组宫颈上皮细胞人类白细胞抗原-Ⅰ基因、蛋白表达水平依次递减,组间两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈炎、CINⅠ级组、CINⅡ级~CINⅢ级组、宫颈癌组人乳头瘤病毒感染率分别为18.92%、55.56%、81.82%和87.5%,组间两两比较差异有统计学意义(P<0.05),各组感染分型中HPV16、HPV18感染率较高。高危型人乳头瘤病毒感染的宫颈病变患者人类白细胞抗原-Ⅰ基因整体表达显著低于低危型患者(P<0.05),但两者人类白细胞抗原-Ⅰ蛋白表达阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05);高危型人乳头瘤病毒感染患者中,宫颈癌组人类白细胞抗原-Ⅰ基因表达显著低于其他组(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,人类白细胞抗原-Ⅰ基因表达与高危型人乳头瘤病毒感染、宫颈癌发病均呈显著负相关(P<0.05)。结论人类白细胞抗原-Ⅰ基因表达减弱或缺失与宫颈癌发生关系密切,可能增加高危型人乳头瘤病毒感染风险,导致宫颈病变恶化。

人类主要组织相容抗原Ⅰ类分子在口腔白斑中表达的临床意义

目的通过检测人类主要组织相容抗原Ⅰ类分子(MHC-Ⅰ)在伴有不同异常增生程度的口腔白斑中的表达,以探讨MHC-Ⅰ类抗原表达改变后其局部免疫状态的变化,以及与口腔白斑发生的关系。方法应用MHC-Ⅰ特异性单抗通过免疫组织化学方法从蛋白表达水平检测28例正常口腔黏膜、55例口腔白斑、31例口腔鳞癌内MHC-Ⅰ类抗原的表达。结果伴有重度异常增生的口腔白斑与口腔鳞癌内MHC-Ⅰ类抗原的表达显著低于正常口腔黏膜组(P<0.05)。不伴异常增生及伴有轻、中度异常增生的口腔白斑内MHC-Ⅰ类抗原的表达和正常黏膜未见统计学差异(P>0.05)。结论 MHC-Ⅰ在口腔白斑中存在有表达降低的现象,特别在伴有重度异常增生时,其降低与异常增生的程度有关,对判断口腔白斑的预后有一定价值。

可溶性人类白细胞抗原G在肾移植术后肺部感染患者中的表达及临床意义

人类白细胞抗原G（HLA—G）属于非经典HLA-I类分子．与经典HLA—I类抗原不同，它组织分布局限，正常生理条件下HLA—G的表达与HLA其他抗原的普遍表达存在不同，仅限制性地表达在一些免疫赦免区．如母胎交界面、胸腺髓质间上皮细胞和眼球部分，病理状态下表达于感染、肿瘤细胞、自身免疫性疾病以及移植功能良好的情况下。HLA—G已经在无排斥的心脏移植、肾移植、肝移植和肝肾联合移植受者中检测到。

人类主要组织相容抗原Ⅰ类分子在涎腺腺样囊性癌中的表达

目的:探讨人类主要组织相容抗原(MHC)Ⅰ类分子(HLA-Ⅰ,HLA-G)在腺样囊性癌发生中的意义。方法:应用HLA-I、HLA-G特异性单抗,通过免疫组织化学的方法检测42例腺样囊性癌、30例正常涎腺组织内HLA-Ⅰ、HLA-G抗原的表达。结果:正常涎腺组织内HLA-Ⅰ抗原表达阳性,HLA-G抗原基本上不表达。腺样囊性癌内HLA-Ⅰ类抗原的表达显著低于正常涎腺组织(χ2=17.17,P<0.05),同时HLA-G抗原的表达显著高于正常涎腺组织组(χ2=13.18,P<0.05),但二者与腺样囊性癌的临床分型并无明确的关系。结论:HLA-Ⅰ抗原表达降低和HLA-G抗原表达上调可能参与了腺样囊性癌的发生过程。HLA-Ⅰ、HLA-G抗原可作为腺样囊性癌发生过程中的标志物,对判断腺样囊性癌的预后有一定价值。

酸洗脱血小板表面HLA-Ⅰ类抗原对血小板活化和凋亡的影响

目的探讨酸洗脱血小板表面HLA-Ⅰ类抗原对血小板活化和凋亡的影响。方法将10(人)份健康人机采血小板(0.5 ml/份)用pH3柠檬酸缓冲液处理(同时以PBS处理作对照组)后,利用多色流式细胞技术检测血小板表面HLA-Ⅰ类抗原及P-选择素(CD62p)的表达,Annexin V染色检测血小板的早期凋亡率。结果 pH3柠檬酸缓冲液及PBS处理后的血小板表面HLA-Ⅰ类抗原的表达为(23.83±9.93)%vs.(98.15±2.20)%(P<0.05),CD62p的表达为(45.94±10.13)%vs(20.29±4.24)%(P<0.05),血小板的早期凋亡率为(65.29±15.74)%vs(14.65±5.09)%(P<0.05)。结论 pH3柠檬酸缓冲液处理血小板可有效去除血小板表面HLA-Ⅰ类抗原,并同时诱导血小板的活化和凋亡。

HLA-Ⅰ类抗原DNA分型研究进展

ＨＬＡ－Ⅰ类抗原的ＤＮＡ分型研究近年已取得重要进展，从单个位点到整个Ⅰ类抗原分型均获得成功。分型方法包括ＤＮＡ测序、ＰＣＲ－ＳＳＣＰ、ＰＣＲ－ＲＦＬＰ、ＰＣＲ－ＳＳＯＰ和ＰＣＲ－ＳＳＰ五大类。本文综述近三年研究进展，阐述各种方法的特点。

阿司匹林对人外周血单个核细胞HLA-I类分子表达的影响

采用Ficoll密度梯度离心法获取人外周血单个核细胞(PBMNC),用含10%FBS的RPMI 1640培养基培养并添加2.5 mmol/L阿司匹林,以不加阿司匹林的培养液培养作为对照。24 h后用流式细胞术检测PBMNC表面人类白细胞抗原I(HLA-I)类分子表达。结果经阿司匹林干预24 h后的原代培养PBMNC表面HLA-I类分子的表达率、平均荧光强度明显低于未加药物对照组(P均<0.01)。提示阿司匹林可下调PBMNC细胞表面HLA-I类分子表达,可能与增加PBMNC中人类吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)表达有关;有望成为新的免疫调节候选药物。

动态监测HLA Ⅰ类分子与降钙素原用于鉴别肾移植术后急性排斥反应与感染的价值

目的探讨动态监测患者肾移植术后外周血淋巴细胞表面人类白细胞抗原Ⅰ类分子(humanleukocyteantigenⅠ,HLAⅠ)及降钙素原(procalcitonin,PCT)水平用于鉴别急性排斥反应(AR)及感染的价值。方法根据术后临床表现、肾功能检查、影像学及移植肾穿刺活检结果将99例(102例次)肾移植受者分为3组,AR组18例次,感染组14例次,移植后正常组70例次,并选取齐鲁医院20名健康献血者作为正常对照组。采用流式细胞术(flowcytometry,FCM)检测研究对象外周血淋巴细胞表面HLAⅠ类分子表达水平;采用免疫荧光分析法定量检测研究对象血清PCT水平。结果肾移植受者术后发生AR或严重细菌感染时,淋巴细胞表面HLAⅠ类分子水平均明显升高,两组比较差异无统计学意义(P>0.05),但感染组的PCT阳性率明显高于AR组(P<0.01)。结论与监测外周血淋巴细胞表面HLAⅠ类分子水平相比,监测血清PCT水平变化在鉴别诊断肾移植术后AR与严重细菌感染方面更加敏感。

维吾尔族患者宫颈病变中内质网分子伴侣和HLA-Ⅰ类分子表达与HPV16感染的关系研究

目的:探讨宫颈病变中内质网分子伴侣与HLA-Ⅰ和HPV16表达的关系。方法:通过免疫组化SP法检测内质网分子伴侣和HLA-Ⅰ类分子在慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌患者石蜡包埋组织中的表达水平;以PCR技术检测相应标本中HPV16感染的情况。结果:CIN中分子伴侣钙连接蛋白(CNX)、钙网蛋白(CRT)、TAP相关蛋白(Tapasin)、蛋白质二硫异构体Erp57和HLA-Ⅰ抗原的表达下调和缺失率分别为15.6%/21.9%、21.9%/15.6%、28.1%/15.6%、20.3%/21.9%和31.2%/29.7%。在宫颈癌组织中表达下调和缺失率分别为22.2%/30.0%、20.6%/34.9%、23.8%/28.6%、30.0%/28.6%和31.7%/47.6%,并且随着宫颈病变的加重,其表达下调和缺失率增加(P<0.05)。CRT和ERp57与宫颈癌分化程度密切相关,Tapasin、CNX、ERp57与淋巴结转移密切相关,Tapasin与FIGO临床分期密切相关,表达差异均有统计学意义(P<0.05)。在CIN中HLA-Ⅰ与CNX、CRT、ERp57表达下调呈正相关,HPV16感染与CRT、ERp57表达呈负相关。宫颈癌中HLA-Ⅰ与CRT、ERp57和Tapasin表达下调呈正相关,HPV16感染与Tapasin、CNX、CRT、ERp57表达呈负相关。结论:在CIN和宫颈癌组织中内质网分子伴侣表达下调,可能是影响HLA-Ⅰ类分子在细胞表面正常表达的重要原因之一。而HPV16也可能利用此途径逃避免疫监视,促进宫颈癌的发生和发展。

小分子干扰RNA对绒毛膜癌细胞人类白细胞抗原G基因表达的影响

目的探讨小分子干扰RNA(siRNA)对绒毛膜癌(绒癌)细胞中人类白细胞抗原G(HLA-G)基因表达的影响,了解HLA-G基因在绒癌发生、发展中的作用。方法设计并合成HLA-GsiRNA,分为两组。实验组以不同浓度(分别为1.0、2.5、5.0μg/L,下同)的HLA-GsiRNA转染HLA-G基因高表达的绒癌细胞系JEG-3细胞,对照组以等量阴性对照siRNA转染JEG-3细胞。实时荧光定量RT-PCR技术检测转染后JEG-3细胞中HLA-GmRNA的表达,HLA-GmRNA的表达以PCR循环数阈值(Ct值)表示;蛋白印迹法测定JEG-3细胞中HLA-G蛋白的表达;显微镜观察并计数转染后存活的JEG-3细胞数。结果HLA-GsiRNA转染JEG-3细胞后,明显下调JEG-3细胞中HLA-GmRNA及蛋白的表达水平。实验组不同浓度的HLA-GsiRNA转染后,JEG-3细胞的Ct值[分别为(20.67±0.02)、(21.37±0.03)、(21.43±0.02)个循环数],分别与对照组[分别为(20.33±0.01)、(20.37±0.02)、(20.40±0.03)个循环数]比较,差异有统计学意义(P<0.05)。上述浓度转染后,实验组JEG-3细胞的HLA-G蛋白表达水平[分别为0.42±0.03、0.37±0.02、0.12±0.04],分别与对照组[分别为1.69±0.23、1.62±0.31、1.36±0.22]比较,差异有统计学意义(P<0.01)。实验组JEG-3细胞生长较对照组明显受到抑制(P<0.05)。结论HLA-GsiRNA可以下调HLA-GmRNA及蛋白的表达水平,抑制细胞生长,表明HLA-G基因在绒癌的发生、发展中具有重要作用。

北方汉族弥漫性泛细支气管炎患者人类白细胞抗原Ⅰ类抗原的特点

弥漫性泛细支气管炎（diffuse panbronchiolitis, DPB）是一种以弥漫存在于两肺呼吸性细支气管区域的、以慢性炎症为特征的疾病，发病具有明显的种族差异，主要聚集于东亚国家，且84.8％的患者合并慢性鼻窦炎或鼻息肉，其中最引人注目的是有关人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）的研究。日本口剖和韩国学者分别对本国的DPB患者进行HIA检测，

人白细胞抗原Ⅰ类分子在妊娠期高血压和子痫前期患者中的表达分析

目的探讨人白细胞抗原Ⅰ类分子(HLA-Ⅰ)在妊娠期高血压和子痫前期患者中的表达及作用。方法选取2017年1月-2018年6月医院收治的妊娠期高血压患者162例,其中妊娠期高血压64例、子痫前期98例。另收集同期本院收治的健康孕产妇60例为对照组。酶联免疫吸附检测脐带血人可溶性白细胞抗原-Ⅰ(sHLA-Ⅰ)水平,免疫组化法检测胎盘组织中HLA-E、HLA-F、HLA-G表达水平。记录不良妊娠期结局发生情况。结果妊娠期高血压组、子痫前期组脐带血sHLA-Ⅰ水平明显低于对照组,子痫前期组脐带血sHLA-Ⅰ水平明显低于妊娠期高血压组,差异均有统计学意义(P<0.01)。子痫前期组HLA-E、HLA-F、HLA-G阳性细胞率明显低于妊娠期高血压组和对照组,妊娠期高血压组明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。子痫前期组HLA-E、HLA-F、HLA-G蛋白表达水平明显低于妊娠期高血压组和对照组,妊娠期高血压组明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。妊娠期高血压组、子痫前期组不良妊娠率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);其中妊娠期高血压组和子痫前期组早产、新生儿窒息、低出生体质量发生率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);子痫前期组早产、低出生体质量发生率明显高于妊娠期高血压组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论脐带血sHLA-Ⅰ水平和胎盘组织HLAE、HLA-F、HLA-G表达下降可能参与妊娠期高血压和子痫前期的发生与发展,与不良妊娠期结局明显相关。

存活素及人类白细胞抗原I类分子与肾透明细胞癌患者预后的关系

目的：探讨存活素和人类白细胞抗原I类分子（ HLA-Ⅰ）在肾透明细胞癌（ CCRCC）组织中的表达及其与CCRCC患者预后的关系。方法应用免疫组化方法检测2006年2月至2010年2月90例CCRCC组织及其中10例癌旁正常肾组织中存活素和HLA-Ⅰ的表达情况，应用单因素及多因素分析存活素和HLA-Ⅰ与CCRCC患者年龄、性别、分级、分期、淋巴结情况等临床特征以及与预后的关系。结果 CCRCC 组织中存活素的表达阳性率为82．2％（74/90），HLA-Ⅰ表达下调率为67．8％（61/90），存活素阳性率与肿瘤分级（P＝0．016）、分期（P＝0．000）及淋巴结转移（P＝0．001）相关，而HLA-Ⅰ的表达下调率与患者年龄、性别以及肿瘤分级、分期和淋巴结转移均无关（ P＞00．5）。存活素表达阴性者的无瘤生存率（25．0％，4/16）高于表达阳性者（52．7％，39/74），差异有统计学意义（P＝0．037）；HLA-Ⅰ表达正常者的无瘤生存率（27．6％，8/29）高于表达下调者（60．7％，37/61），差异有统计学意义（ P＝0．020）。单因素及多因素分析结果表明存活素（P ＝0．033）、HLA-Ⅰ（ P＝0．026）及两者结合（P＝0．014）可作为预测CCRCC患者预后的重要指标。结论存活素阳性表达及HLA-Ⅰ表达下调对预测CCRCC患者无瘤生存期及总生存期有重要意义。

中国傈僳族和怒族群体人类白细胞抗原Ⅰ类基因区Alu插入多态性研究

目的研究中国两个隔离群体（傈僳族和怒族）人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）Ⅰ类基因区域内5个HLA—Alu插入多态性（AluMICB、AluTF、AluHJ、AluHG和AluHF）的分布特征。方法应用聚合酶链反应技术对中国两个隔离群体傈僳族（107人）和怒族（104人）进行HLA-Alu多态性分型。结合HLA基因分型数据，分析这两个群体中HLA—Alu插入与HLA—A、HLA—B和HLA—C基因的关系。根据HLA-Alu频率计算各群体间遗传距离，构建系统进化树。结果AluTF和AluHF插入的频率在这两个群体间的差异有统计学意义（P〈0．05），其余位点差异无统计学意义。HLA-Alu插入与HLA的关联程度在两个群体中有差异，如AluTF＊2与HLA-B＊56：01均有关联，但在傈僳族中呈强关联（74．0％），在怒族中仅存在中等程度的关联（30．7％）。傈僳族和怒族群体中，HLA-Alu插入与HLA基因的不同亚型具有关联，如AluHG＊2与HLA—A＊02的不同亚型存在关联。系统进化树显示中国傈僳族和怒族与我国南方群体及泰国人群聚为一支。结论不同群体中HLA-Alu插入与HLA不同等位基因的关联程度存在差异，这种差异性为研究HLAⅠ类基因多样性的产生和进化、祖先单倍型的形成以及该区域内连锁不平衡和重组提供了新的线索。

恶性疟细胞毒性T淋巴细胞单表位疫苗抗原递呈细胞模型的建立

目的 构建恶性疟细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocyte，CTL）单表位疫苗及建立抗原递呈细胞模型。方法一采用中国人群常见的HLAⅠ类分子A11限制的恶性疟CTL抗原表位（VTCGNGIQVR），合成其DNA序列并克隆于真核表达载体，构建CTL单表位DNA疫苗。将上述克隆在HLA-A11表型细胞株中进行表达，流式细胞仪检测细胞表面HLAⅠ类分子表达水平。结果 上述CTL单表位DNA疫苗编码的短肽在细胞内的表达明显促进HLA-A11分子在细胞表面的表达，用流式细胞仪测定平均荧光强度可量化表达水平(P ＜ 0．05)。结论 成功构建CTL单表位短肽表达载体，模拟体内环境建立了抗原递呈细胞模型，提示CTL表位在该细胞模型内被内源性加工和递呈，以该表位为基础的疫苗可以为HLA-A11遗传背景的人群提供免疫防护。

原发性胆汁性肝硬化患者人类白细胞抗原等位基因多态性分析

目的探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者人群与人类白细胞抗原(HLA)Ⅰ类(A、B)、Ⅱ类(DRB1)等位基因的相关性,同时评估易感基因是否与一些临床及实验室特征存在联系。方法利用序列特异性聚合酶链反应(SSP-PCR)对65例确诊的PBC患者和431名健康人进行HLA—A、B和DRB1 等位基因以及有关基因亚型分析。结果PBC患者DRB1*07的频率增高到29.2%,与正常人13.9%的频率相比,差异具有统计学意义(Pc<0.05,OR=2.55,95%CI:1.4～4.6);所有DRB1*07阳性患者经亚型分析均为DRB1*0701。未发现DRB1*08与PBC有关联性。Ⅰ类抗原中以A*2在PBC患者组的频率最高(53.8%),稍高于对照组,但无统计学意义。其余HLA-A、B和DRB1的等位基因频率与正常人相比较,差异无统计学意义。DRB1*0701阳性患者与阴性患者在一些临床、实验室指标上差异并不明显。结论PBC与HLA-DRB1*0701基因相关,与南美、北美、北欧、日本等其他国家PBC患者的易感基因明显不同;HLA-DRβ1第78位上的缬氨酸残基可能与PBC发病相关。