人类白细胞抗原-DQA1、细胞色素P4503A5*3基因多态性与特发性膜性肾病遗传易感性关联性研究

目的:探讨分析人类白细胞抗原(HLA)-DQA1、细胞色素P450(CYP)3A5*3基因多态性与特发性膜性肾病(IMN)遗传易感性的关联性。方法:将IMN患者62例作为研究组,另将健康者62例作为对照组。采用聚合酶链反应(PCR)技术和基因测序技术检测入组患者的HLA-DQA1(rs2187668)、CYP3A5*3(rs776746)基因型,判断各基因型与IMN患者的关系。结果:研究组中HLA-DQA1 rs2187668基因型AA占比高于对照组(P<0.05),基因型GG、AG占比低于对照组(均P<0.05);研究组等位基因A占比高于对照组(P<0.05)。研究组与对照组CYP3A5*3 rs776746不同基因型占比及等位基因占比比较无统计学差异(均P>0.05)。HLA-DQA1 rs2187668AA基因型IMN患者24 h尿蛋白量和血肌酐水平显著高于AG和GG型,肾小球滤过率显著低于AG和GG型(均P<0.05)。结论:HLA-DQA1 rs2187668位点的基因多态性与IMN的发生有关,AA基因型和等位基因A可增加IMN易感性。

长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18通过微RNA-497-5p/细胞周期蛋白E1轴调节弥漫性大B细胞淋巴瘤的增殖、凋亡和侵袭

目的 探讨长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18(lncRNA HCG18)调控微RNA-497-5p(miR-497-5p)/细胞周期蛋白E1(CCNE1)轴对弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白质印迹法分别检测2018年5月至2021年5月收集的恩施土家族苗族自治州中心医院DLBCL病人淋巴组织、良性淋巴结增生病人的淋巴组织、人正常B细胞永生化细胞HMy2.CIR、DLBCL细胞系SU-DHL-1、OCI-LY8、U2932中HCG18、miR-497-5p表达及CCNE1蛋白表达,将OCI-LY8细胞分为Ct组(正常培养的OCI-LY8细胞)、pcDNA组(细胞转染过表达物阴性对照)、pcDNA-HCG18组(细胞转染HCG18过表达物)、si-NC组(细胞转染小干扰RNA阴性对照)、si-HCG18组(细胞转染HCG18小干扰RNA)、si-HCG18+inhibitorNC组(细胞转染HCG18小干扰RNA和抑制物阴性对照)、si-HCG18+miR-497-5p inhibitor组(细胞转染HCG18小干扰RNA和miR-497-5p抑制物),CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭,蛋白质印迹法检测CCNE1、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达,双萤光素酶验证HCG18与miR-497-5p、miR-497-5p与CCNE1的关系。结果 在DLBCL淋巴组织和细胞中,HCG18、CCNE1蛋白高表达,miR-497-5p低表达,且在OCI-LY8细胞中HCG18、CCNE1蛋白表达上调最高,miR-497-5p表达下调最多(P<0.05),因此,以OCI-LY8细胞进行后续研究,与si-NC组比较,si-HCG18组HCG18(0.26±0.03比1.01±0.01)、CCNE1蛋白(0.45±0.03比1.44±0.19)表达降低,miR-497-5p(1.95±0.14比1.03±0.02)表达升高(P<0.05),与pcDNA组比较,pcDNA-HCG18组HCG18(1.96±0.23比1.02±0.01)、CCNE1蛋白(2.33±0.21比1.42±0.18)表达升高,miR-497-5p(0.28±0.02比1.02±0.02)表达降低(P<0.05),与siHCG18组、si-HCG18+inhibitor NC组比较,miR-497-5p表达降低(1.21±0.09比1.95±0.14、1.94±0.13),CCNE1蛋白(0.87±0.08比0.45±0.03、0.44±0.04)表达上调(P<0.05),沉默HCG18可抑制OCI-LY8细胞增殖、侵袭行为及PCNA、MMP-9蛋白表达,诱导细胞凋亡及Bax蛋白表达,而上调HCG18则呈相反趋势,下调miR-497-5p逆转了沉默HCG18对OCI-LY8细胞增殖、侵袭、凋亡的影响,HCG18靶向调控miR-497-5p/CCNE1。结论 沉默HCG18可能通过调控miR-497-5p/CCNE1抑制OCI-LY8细胞增殖、侵袭,诱导细胞凋亡。

彩色多普勒超声检查联合血清妊娠相关血浆蛋白-A、抑制素A、可溶性人类白细胞抗原G检测在先兆流产诊断和预后评估中的价值

目的:探讨彩色多普勒超声联合血清妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)、抑制素A(INHA)、可溶性人类白细胞抗原G(sHLAG)在先兆流产诊断和预后中的价值。方法:选取108例先兆流产患者为研究对象,按治疗后妊娠结局分为继续妊娠组(65例)和流产组(43例),另选同期产检正常的健康孕妇为对照组(60例)。比较三组血清PAPP-A、sHLAG、INHA水平及子宫动脉搏动指数(PI)、阻力指数(RI)、收缩期最高流速与舒张最低流速比(S/D),受试者工作特征曲线(ROC)分析血清PAPP-A、sHLAG、INHA及子宫动脉PI、RI、S/D单独和联合对先兆流产的诊断和预测价值。结果:108例先兆流产患者经保胎治疗10d,保胎失败43例,保胎成功65例。子宫动脉PI、RI、S/D值比较,流产组高于继续妊娠组,继续妊娠组高于对照组,血清PAPP-A、sHLAG水平比较,对照组高于继续妊娠组,继续妊娠组高于流产组,INHA水平流产组高于继续妊娠组,继续妊娠组高于对照组(均P<0.05)。血清PAPP-A、sHLAG、INHA和超声指标联合对先兆流产的诊断AUC较各指标单独诊断AUC升高(均P<0.05)。结论:彩色多普勒超声及血清PAPP-A、sHLAG、INHA联合对先兆流产的诊断及预后评估价值较高。

CD_(14)^+单核细胞人类白细胞DR抗原及C反应蛋白评估脓毒症患者预后的临床价值

目的:评价外周血CD14+单核细胞人类白细胞DR抗原(HLA-DR/CD14+)和C-反应蛋白(CRP)对脓毒症患者预后的判断价值和临床意义。方法:选择入住ICU的脓毒症患者,治疗前测定其外周血HLA-DR/CD14+及CRP、进行APACHEⅡ评分和Marshall评分,观察追踪28天,根据其预后将患者分为存活组和死亡组,分析2组的参数差异,评估参数与患者预后的关系。结果:本研究共入选脓毒症患者21例,12例存活,9例死亡。存活组患者年龄为(65.67±17.15)岁明显低于死亡组的(71.78±8.87)岁(P<0.05);存活组患者HLA-DR/CD14+水平为(28.9±16.1)%明显高于死亡组的(18.7±12.7)%(P<0.05);存活组患者CRP水平为(56.1±18.7)mg/L明显低于死亡组的(91.1±26.3)mg/L(P<0.05)。结论:脓毒症患者的免疫状态与其预后有关,HLA-DR/CD14+和CRP水平对预后判定具有一定的临床价值。

山西汉族人类白细胞抗原-A B DRB1基因多态性与白血病关联性的研究

本研究采用流式聚合酶链反应-反向序列特异性寡核苷酸探针（PCR-RSSOP，简称流式反向SSO）的方法，对山西省汉族白血病患者的人类白细胞抗原（HLA）-A、B、DRB1 3个等位基因进行了基因分型，探讨这些基因的多态性与白血病的关系。

1型糖尿病与人类白细胞抗原-DRB1基因频率的关联研究

1型糖尿病（T1DM）是一种多因素疾病，是基因和环境因素综合作用引起，T淋巴细胞介导，遗传为基础，环境为诱因。胰岛炎为病理特征的自身免疫性疾病。已经发现的T1DM易感基因中人类自细胞抗原（HLA）基因复合体最为重要。

桥本甲状腺炎患者杀伤细胞免疫球蛋白样受体与人类白细胞抗原基因对频率的分析

目的:探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体(Kill cell immunoglobulin-like receptor,KIR)与人类白细胞抗原(Human leukocyte antigen,HLA)组成的受体-配体基因对与桥本甲状腺炎(Hashimoto’s thyroiditis,HT)的关联性。方法:选择散发HT患者44例和健康对照43例,提取全血基因组DNA,序列特异性引物聚合酶链反应检测4个KIR基因和8个HLA-C基因,根据受体-配体特异识别原则组成KIR2DL1+HLA-C2、KIR2DL2/2DL3+HLA-C1、KIR2DS1+HLA-C2和KIR2DS2+HLA-C1共4对KIR/HLA-C基因对,分析各基因对频率在两组人群中的差别。结果:活化性KIR2DS2+HLA-C1基因对在HT患者组与对照组频率差异有显著性(36.36%vs 16.28%,P<0.05)。其余基因对在两组间未见明显差异。结论:HT患者活化性KIR/HLA-C基因对频率升高,传递活化性信号活化NK细胞和T细胞,可能是HT发病的免疫遗传学因素之一。

人类白细胞抗原DRB1基因多态性与三氯乙烯药疹样皮炎易感性的关系

目的研究人类白细胞抗原DRB1(HLA-DRB1)基因多态性与三氯乙烯药疹样皮炎易感性的关系。方法应用聚合酶链反应产物直接测序方法,比较112例三氯乙烯药疹样皮炎病例和142例健康三氯乙烯接触工人HLA-DRB1基因第2外显子氨基酸密码子多态性及等位基因频率分布,并计算相对危险度(OR)及其95%可信区间(95%CI)。结果病例组与接触对照组HLA-DRB1等位基因频率差异有显著性,病例组DRB1*1501、*1202和*04等位基因频率显著高于对照组(分别为18.8%vs7.7%,OR=2.748,95%CI=1.587～4.761;12.5%vs6.0%,OR=2.244,95%CI=1.195～4.214;17.4%vs11.3%,OR=1.660,95%CI=1.002～2.750),而DRB1*0301、*0901、*13和*1502等位基因频率显著低于对照组(分别为0.4%vs4.6%,OR=0.093,95%CI0.012～0.720;7.6%vs13.7%,OR=0.516,95%CI=0.283～0.939;1.3%vs6.7%,OR=0.189,95%CI=0.055～0.648;2.7%vs8.5%,OR=0.298,95%CI=0.120～0.743);病例组与接触对照组间12个位点(密码子9、11、12、13、26、28、30、33、37、70、71、74)氨基酸密码子多态性分布频率差异有显著性。结论HLA-DRB1基因多态性可能是导致三氯乙烯药疹样皮炎个体易感性差异的原因之一。

人类白细胞抗原-DQB1等位基因多态性与我国南方汉族人群多发性硬化的相关性研究

目的探讨人类白细胞抗原(HLA)-DQB1基因多态性与我国南方汉族人群多发性硬化(MS)的相关性。方法采用基因测序的方法(SBT)对42例南方汉族MS患者及48名健康对照者进行HLA-DQB1等位基因的检测,并比较MS组与健康对照组之间等位基因型频率的差异。结果共检测到15种HLA-DQB1等位基因片段,其中DQB1*0502等位基因频率MS组(35.7%)显著高于健康对照组(8.9%)(P=0.0018,Pc=0.027,OR=4.29);DQB1*0303等位基因频率MS组(19.0%)低于健康对照组(39.6%)(P=0.04,OR=0.48),但差异经校正后无统计学意义。HLA-DQB1*0601和DQB1*0602等位基因频率在MS组患者与健康对照组之间差异无统计学意义。结论我国南方汉族人群MS与HLA-DQB1*0502等位基因有关,而与HLA-DQB1*0601和DQB1*0602等位基因无关。

人类白细胞抗原-G1蛋白纯化及其免疫耐受机制初探

目的原核体系诱导表达并纯化人类白细胞抗原-G1(human leukocyte antigen-G,HLA-G1)蛋白,研究HLA-G1分子对人B淋巴细胞内白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)表达水平的影响,进而探究HLA-G1在肾移植受者中B细胞介导的免疫耐受机制。方法通过原核表达体系,构建表达并纯化HLA-G1蛋白,经过蛋白免疫印迹试验(Western Blot)鉴定后,与人外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)共培养,利用流式细胞仪检测B淋巴细胞内IL-10的表达情况。结果十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electropheresis,SDS-PAGE)、Western Blot结果表明,纯化后的蛋白分子量大小约为38.2 kDa,符合HLA-G1蛋白的分子量;人PBMC与HLA-G1蛋白共培养后,随着HLA-G1蛋白浓度的升高(浓度梯度:0、50、100和200 ng/ml),B细胞内IL-10的表达水平明显增加,分别为0.1%、0.36%、0.57%、0.73%。结论通过原核表达系统获得HLA-G1蛋白,纯度达95%以上,HLA-G1蛋白与人PBMC共培养后,可诱导B淋巴细胞表达IL-10,并具有浓度依赖性,提示其对肾移植免疫耐受的建立具有重要作用。

2型糖尿病大血管病变患者人类白细胞抗原-DRB1*04等位基因多态性分析

目的分析2型糖尿病(DM)及其大血管病变患者人类白细胞抗原(HLA)-DRB1*04亚型的遗传多态性,探索糖尿病大血管病变的发病机制。方法应用聚合酶链反应-序列特异性引物(polymerasechainreaction-sequencespecificprimer,PCR-SSP)技术对合并/未合并大血管病变的北方汉族2型DM患者的HLA-DRB1*04亚型等位基因进行检测。结果东北地区汉族2型DM患者中共检出9种HLA-DRB1*04亚型。2型DM伴大血管病变组DRB1*0404等位基因频率较2型DM无并发症组显著增高;但DRB1*0403等位基因频率较无并发症组显著减少。结论1型DM与2型DM可能具有相似的HLA遗传背景。DRB1*0404单倍型可能是2型DM患者发生大血管病变的易患基因,DRB1*0403单倍型可能是2型DM患者发生大血管病变的保护性基因。HLA-DRB1*0404等位基因是患免疫相关性疾病患者发生血管内皮功能失调,尤其是大血管病变的预测因子。

汉族人群中新等位基因人类白细胞抗原-DPA1~＊01：11的鉴定

背景:在群体遗传学研究中,发现一个样本人类白细胞抗原-DPA1位点结果异常,而国际上与人类白细胞抗原-DPA1等位基因相关的报道较少。目的:鉴定一个人类白细胞抗原-DPA1*01相关的新变异等位基因。方法:在群体遗传学研究中,采用PCR产物直接测序分型方法,对人类白细胞抗原-DPA1基因第2外显子进行双向测序。对出现异常分型结果的样本,进行分子克隆和单倍体测序。结果与结论:发现一个样本的人类白细胞抗原-DPA1位点结果异常,经分子克隆和单倍体测序,检出了一个正常的人类白细胞抗原-DPA1*01:03和一个DPA1*01相关的新变异等位基因,该新等位基因的序列与DPA1*01:03的序列最接近,其差异是在第二外显子区域的242位碱基发生A>G的替换,并导致了相应的第50位密码子由CAA>CGA,编码的氨基酸残基由谷氨酰胺变成精氨酸。该等位基因为人类白细胞抗原新的等位基因,已被世界卫生组织人类白细胞抗原因子命名委员会正式命名为人类白细胞抗原-DPA1*01:11(提交序列号HWS10015443)。

人类白细胞抗原-DRB1基因启动子区序列多态性与肺结核的相关性分析

目的探讨中国北方地区人群人类白细胞抗原（HLA）-DRB1基因启动子区序列多态性与肺结核的相关性。方法北方汉族肺结核患者97例为肺结核组，北方汉族健康人62例为对照组，采用PCR-SSP法对2组的HLA-DRB1基因启动子区进行PCR扩增，启动子区扩增产物直接测序。结果肺结核组和对照组的HLA-DRB1基因启动子区序列完全一致；对照组启动子区序列与数据库检索的序列比较有3个突变点：-26位的T被C替代，-49位的C被G替代，-78位的C被G替代。结论中国北方地区人群HLA-DRB1基因启动子区序列具有多态性，但此多态性与肺结核的发病没有相关性。

亮氨酸的a-2-糖蛋白-1、可溶性白细胞分化抗原14亚型及降钙素原在细菌性脑膜炎及病毒性脑炎诊治中的作用

目的探讨细菌性脑膜炎(bacterial meningitis,BM)与病毒性脑炎(viral encephalitis,VE)患儿脑脊液及血清中富含亮氨酸的a-2-糖蛋白-1(leucine-rich a-glycoprotein-1,LRG1)、可溶性白细胞分化抗原14亚型(soluble leukocyte differentiation antigen subtype 14,sCD14-ST)及降钙素原(procalcitonin,PCT)水平的变化及临床意义。方法选取2019年9月至2021年2月郑州大学第一附属医院BM患儿和VE患儿为研究对象,将39例BM患儿设为BM组,将26例VE患儿设为VE组;同时选取同期住院13例非中枢系统感染患儿为对照组。采用酶联免疫吸附法检测脑脊液及血清中LRG1、sCD14-ST及PCT水平。比较不同时期BM与VM脑脊液及血清中LRG1、sCD14-ST及PCT水平,同时绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线。结果急性期BM组血清LRG1、sCD14-ST、PCT水平高于VE组和对照组,差异有显著性(P均<0.05)。急性期BM组脑脊液中LRG1、PCT水平显著高于VE组和对照组,VE组LRG1水平显著高于对照组,差异有显著性(P均<0.05)。治疗后BM组脑脊液中PCT显著高于VE组,差异有显著性(P<0.05)。急性期血清和脑脊液中的LRG1、sCD14-ST、PCT水平诊断BM效能显示,血清、脑脊液LRG1 ROC曲线下面积最高(0.876,0.822)。急性期血清及脑脊液中LRG1、脑脊液常规及生化指标评估BM效能显示,血清LRG1 ROC曲线下面积最高(0.876),最佳诊断阈值为9.945µg/ml,灵敏度为90%,特异度为65.4%。急性期血清与脑脊液中LRG1呈显著正相关(r=0.701,P<0.05);血清与脑脊液中PCT呈显著正相关(r=0.501,P<0.05);血清与脑脊液中sCD14-ST相关关系不显著(r=0.378,P>0.05)。结论LRG1、sCD14-ST、PCT参与了BM的发病机制;血清中LRG1、sCD14-ST、PCT及脑脊液中LRG1、PCT对BM及VE具有早期鉴别诊断价值,其中血清及脑脊液中LRG1效能优于sCD14-ST及PCT;急性期血清LRG1水平显著升高提示BM可能性大。

人类免疫缺陷病毒-1 nef诱导凋亡及下调人类白细胞抗原-I类分子

【目的】研究人类免疫缺陷病毒(HIV)-1 nef调节细胞表面的人类白细胞抗原(HLA)-I类分子及诱导细胞凋亡情况。【方法】将293T细胞分为两组,用脂质体法将含HIV-1 nef基因的质粒及空载体分别转染细胞,Western blot检测HIV-1 nef在转染细胞中的表达,荧光抗体染色结合流式细胞术检测细胞表面的HLA-I类分子表达及细胞凋亡情况。【结果】HIV-1 nef在转染细胞中有表达。转染HIV-1 nef的细胞与转染空载体的细胞经抗HLA-A,B,C-FITC染色后,平均荧光强度分别为205±22及269±15,两者相比有显著性差异(P<0.01);经Annexin V-APC/PI染色后,阳性细胞百分率分别为(60.82±8.32)%及(8.12±5.43)%,两者相比亦有显著性差异(P<0.01)。【结论】HIV-1 nef下调细胞表面的HLA-I类分子及诱导细胞凋亡。

采用核转染技术建立稳定表达可溶性人类白细胞抗原G_1的真核细胞系

目的建立稳定表达可溶性人类白细胞抗原G1(solublehumanleucocyteantigenG1,sHLA-G1)的真核细胞系。方法采用核转染技术将质粒pcDNA3-sHLA-G1转入不表达HLA-类分子的LCL721.221细胞,经G418筛选获得稳定转染细胞,通过RT-PCR及Dot-ELISA在基因和蛋白水平鉴定目的基因的表达。结果采用核转染法LCL721.221细胞转染效率可以达到约14%。RT-PCR检测发现了sHLA-G1基因特异性条带;采用Dot-ELISA方法利用sHLA-G1特异性抗体MEM-G/9检测,存在sHLA-G1蛋白。结论通过核转染方法成功建立了稳定表达sHLA-G1的真核细胞系。

自行构建人类白细胞抗原DQA1位点基因分型寡核苷酸芯片性能评价:100例样本与PCR-SSP法的比较

背景:人类白细胞抗原等位基因分型对器官移植和法医鉴定等有重要意义。目前的分型方法难以实现高通量和集成化,准确性和重复性也不理想。目的:比较自行构建的寡核苷酸芯片与序列特异性引物-聚合酶链反应(polymerase chain reaction with sequence-specific primers,PCR-SSP)两种方法用于人类白细胞抗原DQA1基因分型的结果,以评价寡核苷酸芯片的性能。方法:纳入2006-01/2009-03于中国医科大学附属第一医院血液科门诊就诊的患者100例。分别用等位基因特异的PCR-SSP和自行构建的寡核苷酸芯片对患者的人类白细胞抗原DQA1进行分型。寡核苷酸芯片分型采用荧光标记的组间特异性引物扩增基因组DNA,扩增后的产物与分型芯片的探针杂交,由杂交产生的荧光信号确定人类白细胞抗原DQA1位点基因型。比较两种方法分型所获得的结果,不吻合的样本经第三方测序验证。结果与结论:100例临床样本经寡核苷酸芯片和PCR-SSP分型全部成功。分型结果的吻合率为94%。不吻合样本6例,其中4例PCR-SSP定型为杂合子,芯片分型全部为纯合子。经第三方验证,证实芯片的分型全部正确。另外2例不吻合的样本经测序,证实SSP分型错误1例,芯片分型错误1例。芯片的重复率为95%。说明自行构建的寡核苷酸芯片的特异性和灵敏度都能满足基因分型的需要,且稳定性较好。

新疆维吾尔族妇女宫颈鳞癌与人类白细胞抗原DQB1基因多态性的相关性分析

目的 探讨新疆维吾尔族妇女宫颈鳞癌与人类白细胞抗原（HLA） DQB1基因多态性的相关性.方法 采用聚合酶链反应-直接测序分型法对80例于2009年8月至2010年4月在新疆维吾尔自治区人民医院就诊的新疆维吾尔族妇女宫颈鳞癌组织（观察组）及80例新疆维吾尔族妇女宫颈炎性组织（对照组）进行HLA-DQB1基因分型.比较2组HLA-DQB1等位基因及基因型频率,计算等位基因的比值比（OR）和95％置信区间（CI）,用以估计等位基因与疾病联系的程度.结果 检测的160个样本中共含296个等位基因,其中杂合的等位基因型136人份,纯合的等位基因型24人份.经过频率计算和统计学分析发现,观察组HLA-DQB1＊ 0325（OR：10.60,95％ CI：1.341～83.810）和HLA-DQB1＊ 0332（OR：12.59,95％ CI：2.909～ 54.526）等位基因频率明显高于对照组,而HLA-DQB1女0317（OR：0.49,95％ CI：0.304～0.798）和HLA-DQB1＊ 040302（OR：0.40,95％ CI：0.243 ～0.658）等位基因频率明显低于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.结论 新疆维吾尔族妇女宫颈鳞癌中HLA-DQB1基因型与我国其他地区报道有差异,等位基因HLA-DQB1＊0325和HLA-DQB1＊ 0332可能是新疆维吾尔族妇女宫颈鳞癌的易感基因,而HLA-DQB1 ＊ 0317和HLA-DQB1＊040302可能是新疆维吾尔族妇女宫颈鳞癌的保护基因.