中国深圳地区丙型肝炎病毒RNA阳性与人类白细胞抗原分型的关联研究

目的探讨深圳地区丙型肝炎病毒感染情况,病毒载量,基因分型与人类白细胞抗原分型的关联。方法收集2005年7月至2006年7月深圳市血液中心与深圳市肝病研究所的丙型肝炎病毒RNA阳性的献血者和病人血清152人份,采用特异性引物进行丙型肝炎病毒定量分析后,再设计特异性引物进行基因分型和采用序列特异性引物聚合酶链反应（sequencespecificprimerspolymerasechainreaction,PCR-SSP）技术进行人类白细胞抗原分型。结果丙型肝炎病毒RNA阳性者中,定量水平在4×106^6×10^6copies/ml左右,基因分型以2B为主,HLA-A3相对危险度（RR）为4.3,P〈0.05,HLA-B46（RR=5.2,P〈0.02）和HLA-DRB4（RR=1.61,P〈0.01）与丙型肝炎病毒持续感染有关,HLA-B58（RR=0.37,P〈0.01）,HLA-B＊60（RR=0.37,P〈0.01）,HLA-DRB13（RR=0.28,P〈0.01）和HLA-DRB15（RR=0.02,P〈0.01）似乎具有保护性意义。结论在深圳汉族人群中,HLA等位基因可能会影响丙型肝炎的持续感染与转归。

基于测序的人类白细胞抗原分型和PCR短串联重复序列技术在人胚胎干细胞鉴定中的应用

目的探讨基于测序的人类白细胞抗原分型（HLA—sequencing—basedtyping，HLA-SBT）和PCR短串联重复序列（short tandem repeat，STR）技术在人胚胎干细胞（human embryonic stem cell，hESC）应用前检测中的运用，建立人胚胎干细胞系的基因型档案。方法人胚胎干细胞系SYSU-1、SYSU-3，分别培养到20代、40代，应用PCR寡核苷酸特异测序探针（sequence specific olignucleotide probe，SSO）技术检测两株细胞系的HLA-A、-B、-DR位点的低分辨分型，再利用HLA—SBT技术检测两株细胞系的HLA-A、-B、-DR位点的高分辨分型。应用PCR—STR技术检测两株细胞系的基因遗传标记。结果获得两株hESC细胞系的HLA高分辨分型和STR基因型。结论可以运用HLA—SBT和PCR．STR技术建立人胚胎干细胞应用前的基因型档案。

肾移植人类白细胞抗原分型和抗体检测专家共识

抗体介导的排斥反应(AMR)是影响移植肾长期存活的关键因素,供者特异性抗体(DSA)是AMR的病因,而产生DSA的主要原因是供受者之间人类白细胞抗原(HLA)的错配。因此HLA分型和抗体的检测是目前肾移植临床关注的重点。本共识系统梳理了HLA分型和抗体检测的不同方法及各自的特点,介绍了如何应用上述检测结果评估肾移植受者同种异体免疫记忆和初始免疫反应风险,并给出了相关的专家推荐意见供同行参考。

供者HLA分型信息缺失移植受者DSA判定2例并文献复习

目的为供者人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)分型信息缺失并可疑抗体介导排斥反应(antibody-mediated rejection,AMR)的临床情景提供供者特异性抗体(donor-specific antibody,DSA)判读的方法,提高临床诊疗的准确性。方法获取2例可疑AMR患者的新鲜移植肾组织,一部分经消化、提取总DNA后进行供受者HLA分型,将总HLA分型信息与受者外周血HLA分型信息对比,获得供者HLA分型信息。另一部分移植肾组织制作石蜡块,行HE染色、C4d免疫组化等常规病理镜检。结合患者临床表现、病理镜检结果、受者外周血HLA抗体检测结果、供受者HLA分型信息,判断患者是否为DSA介导AMR。结果第1例患者拟诊为DSA介导的C4d(-)AMR,予移植肾切除后恢复透析;第2例患者不属于DSA介导的AMR,予甲泼尼龙冲击治疗3 d后病情好转,目前患者生存情况和移植肾功能良好。结论在供者HLA分型信息缺失情况下,利用移植肾活检组织对供者进行HLA分型从而判定DSA存在的方法为跨地域、跨医疗中心就医的移植肾受者随诊工作提供必要的技术支持。对于可疑AMR患者,应当结合供受者HLA分型、DSA判读与病理镜检结果,以作出准确的临床诊断,指导患者的精准治疗。

巢式聚合酶链反应-序列特异引物法用于单卵裂球HLA-A位点分型研究

目的评价巢式聚合酶链反应．序列特异引物法（polymerase chain reaction-sequence specific primer，PCR-SSP）用于人类种植前胚胎的单个卵裂球HLA-A位点分型的准确性和可靠性。方法通过扩增HLA-A第2外显子评价单卵裂球巢式第1轮扩增的成功率，用巢式PCR-SSP法进行单卵裂球HLA-A分型。结果从10个家系的体外受精剩余胚胎中获得120个卵裂球，巢式第1轮扩增平均成功率为86．7％，其中前期家系F1-F5为78．2％，后期家系F6-F10为93．8％；对80个卵裂球进一步做SSP分型，其中11个卵裂球HLA-A第2外显子扩增失败，无分型结果，而69个卵裂球HLA-A第2外显子扩增成功，都获得分型结果。除6个卵裂球因亲本纯合无法判断是否发生缺失外，剩下63个卵裂球中，基因型与根据亲本预测的结果相符的有59个，占93．6％；显示缺少部分亲本等位基因的有3个，占4．8％；显示部分亲本等位基因重复的1个，占1．6％。结论在第1轮扩增成功的基础上，巢式PCR-SSP法用于单卵裂球HLA-A分型准确可靠，可用于临床上筛选与需要造血干细胞移植的患儿HLA型等同的胚胎。

HLA-DQA1、-DRB1等位基因与子宫内膜异位症和子宫腺肌病的比较性研究

目的 从免疫遗传学角度比较子宫内膜异位症和子宫腺肌病的异同。方法 采用顺序特异引物聚合酶链反应技术检测 5 1例子宫内膜异位症和 45例子宫腺肌病患者的 HL A- DQA1和 HL A- DRB1等位基因频率 ,并与 44名正常人比较。结果 两患者组 HL A- DQA1* 0 30 1等位基因频率 (8.8% ,5 .6 % )均明显低于正常对照组 ,差异有显著性 (Pc=0 .0 0 ,Pc=0 .0 0 ) ,而两患者组的 HL A- DQA1* 0 40 1等位基因频率 (7.8% ,10 .0 % )均明显高于对照组 ,差异有显著性 (Pc=0 .0 3,Pc=0 .0 1) ;两患者组之间 HL A-DQA1、- DRB1各等位基因频率比较 ,差异无显著性。结论 子宫内膜异位症及子宫腺肌病均与 HL A-DQA1* 0 30 1、* 0 40 1相关联 ,从 HL A- DQA1、- DRB1角度分析 ,子宫内膜异位症与子宫腺肌病的发病机理可能有共同之处。

新等位基因HLA-B＊9526的确认和序列分析

目的鉴定中国人群中人类白细胞抗原（humanleukocyteantigen，HLA）新等位基因HLAB＊9526，并进行核苷酸序列分析。方法使用序列特异性寡核苷酸PCR技术进行HLA基因分型，发现1个反应格局异常的等位基因，应用分子克隆和DNA双向测序技术测定新等位基因的核苷酸序列，并与已知等位基因进行序列比对分析。结果检出反应格局异常的DNA样本，经过克隆测序得到两个等位基因，分型结果一个为B＊5403，另一个的核苷酸序列与已知的HI。A等位基因均不同，该基因序列与同源性最高的HLAB＊1507基因序列相比在第3外显子区域中425位碱基发生A→G突变，导致142位编码氨基酸由酪氨酸变成半胱氨酸。结论一个新的HLA—B等位基因被确认，并被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为HLAB＊9526。

DNA序列分析鉴定HLA新等位基因B＊4446

目的鉴定中国人群的HLA新等位基因。方法使用PCR-序列特异性引物及PCR-序列特异性寡核苷酸探针技术进行HLA分型。发现1个与HLA-B＊44相关的未知基因，使用DNA序列分析技术鉴定并分析该基因与同源性最高的B＊4409基因序列的差异。结果新基因第3外显子区域序列与所有已知的HLA-B等位基因序列均不相同，与同源性最高的HLA—B＊4409基因序列相比有3个碱基发生替代。第538位碱基由C→C，第539位碱基A→T以及第540位碱基C→G，使编码产物180位氨基酸由天冬氨酸变成亮氨酸。结论发现一个新的HLA-B等位基因，于2005年9月由WHOHLA因子命名委员会正式命名为HLA-B＊4446。