长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18通过微RNA-497-5p/细胞周期蛋白E1轴调节弥漫性大B细胞淋巴瘤的增殖、凋亡和侵袭

目的 探讨长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18(lncRNA HCG18)调控微RNA-497-5p(miR-497-5p)/细胞周期蛋白E1(CCNE1)轴对弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白质印迹法分别检测2018年5月至2021年5月收集的恩施土家族苗族自治州中心医院DLBCL病人淋巴组织、良性淋巴结增生病人的淋巴组织、人正常B细胞永生化细胞HMy2.CIR、DLBCL细胞系SU-DHL-1、OCI-LY8、U2932中HCG18、miR-497-5p表达及CCNE1蛋白表达,将OCI-LY8细胞分为Ct组(正常培养的OCI-LY8细胞)、pcDNA组(细胞转染过表达物阴性对照)、pcDNA-HCG18组(细胞转染HCG18过表达物)、si-NC组(细胞转染小干扰RNA阴性对照)、si-HCG18组(细胞转染HCG18小干扰RNA)、si-HCG18+inhibitorNC组(细胞转染HCG18小干扰RNA和抑制物阴性对照)、si-HCG18+miR-497-5p inhibitor组(细胞转染HCG18小干扰RNA和miR-497-5p抑制物),CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭,蛋白质印迹法检测CCNE1、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达,双萤光素酶验证HCG18与miR-497-5p、miR-497-5p与CCNE1的关系。结果 在DLBCL淋巴组织和细胞中,HCG18、CCNE1蛋白高表达,miR-497-5p低表达,且在OCI-LY8细胞中HCG18、CCNE1蛋白表达上调最高,miR-497-5p表达下调最多(P<0.05),因此,以OCI-LY8细胞进行后续研究,与si-NC组比较,si-HCG18组HCG18(0.26±0.03比1.01±0.01)、CCNE1蛋白(0.45±0.03比1.44±0.19)表达降低,miR-497-5p(1.95±0.14比1.03±0.02)表达升高(P<0.05),与pcDNA组比较,pcDNA-HCG18组HCG18(1.96±0.23比1.02±0.01)、CCNE1蛋白(2.33±0.21比1.42±0.18)表达升高,miR-497-5p(0.28±0.02比1.02±0.02)表达降低(P<0.05),与siHCG18组、si-HCG18+inhibitor NC组比较,miR-497-5p表达降低(1.21±0.09比1.95±0.14、1.94±0.13),CCNE1蛋白(0.87±0.08比0.45±0.03、0.44±0.04)表达上调(P<0.05),沉默HCG18可抑制OCI-LY8细胞增殖、侵袭行为及PCNA、MMP-9蛋白表达,诱导细胞凋亡及Bax蛋白表达,而上调HCG18则呈相反趋势,下调miR-497-5p逆转了沉默HCG18对OCI-LY8细胞增殖、侵袭、凋亡的影响,HCG18靶向调控miR-497-5p/CCNE1。结论 沉默HCG18可能通过调控miR-497-5p/CCNE1抑制OCI-LY8细胞增殖、侵袭,诱导细胞凋亡。

循环长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18、微小RNA-185-5p水平与糖尿病肾脏疾病患者血管钙化的相关性分析

目的分析血清循环长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18(long non-coding RNA human leucocyte antigen complex group 18,LncRNA HCG18)、微小RNA-185-5p(microRNA-185-5p,miR-185-5p)水平与糖尿病肾脏疾病(diabetic kidney disease,DKD)患者血管钙化的相关性。方法选取2018年10月至2021年9月于上海健康医学院附属崇明医院就诊的DKD患者145例,男性73例,女性72例,依据患者血管钙化情况分为钙化组70例,其中男性38例,女性32例,年龄范围46~78岁,年龄(57.14±14.27)岁;未钙化组75例,其中男性35例,女性40例,年龄范围44~77岁,年龄(59.47±15.06)岁。另选同期健康体检者70名为对照组。荧光定量PCR法检测血清LncRNA HCG18、miR-185-5p水平;采用全自动生化分析仪测定血钙、血磷、血肌酐(serum creatinine,Scr)水平;采用酶标仪测定碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、超敏C反应蛋白(high-sensitivity c-reactive protein,hs-CRP)及甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)水平;Pearson法分析DKD合并血管钙化患者血清LncRNA HCG18、miR-185-5p水平与血管钙化相关指标的相关性及血清LncRNA HCG18与miR-185-5p的相关性;受试者工作特征曲线分析血清LncRNA HCG18、miR-185-5p水平对DKD合并血管钙化的诊断价值。结果钙化组、未钙化组血清LncRNA HCG18、血钙、血磷、Scr、ALP、hs-CRP及PTH均高于对照组(P<0.05),血清miR-185-5p水平低于对照组(P<0.05);钙化组血清LncRNA HCG18、血钙、血磷、Scr、ALP、hs-CRP及PTH均高于未钙化组(P<0.05),血清miR-185-5p水平低于未钙化组(P<0.05)。DKD合并血管钙化患者血清LncRNA HCG18与miR-185-5p呈负相关(P<0.05),血清LncRNA HCG18与血钙、血磷、Scr、ALP、hs-CRP及PTH均呈正相关(P<0.05),血清miR-185-5p与血钙、血磷、Scr、ALP、hs-CRP及PTH均呈负相关(P<0.05)。血清LncRNA HCG18、miR-185-5p水平及二者联合诊断DKD合并血管钙化的曲线下面积分别为0.820、0.758、0.880。结论DKD血管钙化患者血清LncRNA HCG18呈高表达、miR-185-5p呈低表达,二者均对DKD患者血管钙化有一定的诊断价值,联合检测诊断价值更高。

人类白细胞抗原-G5慢病毒表达载体构建与病毒包装

目的:构建人类白细胞抗原G5(HLA-G5)的表达载体,并进行慢病毒包装,为进一步研究HLA-G5功能提供基础工具。方法:人工合成HLA-G5全长序列经测序正确后,定向接入真核表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP,转化入大肠杆菌,酶切鉴定并测序正确后进行慢病毒包装和滴度测定。结果:经琼脂糖凝胶电泳鉴定、PCR鉴定及测序,HLA-G5表达质粒质量合格,序列比对与设计序列符合率100%,HLA-G5慢病毒滴度测定为7.06×108。结论:成功地构建了HLA-G5表达载体并完成了慢病毒包装,为今后的研究工作提供了基础工具。

2型糖尿病大血管病变患者人类白细胞抗原-DRB1*04等位基因多态性分析

目的分析2型糖尿病(DM)及其大血管病变患者人类白细胞抗原(HLA)-DRB1*04亚型的遗传多态性,探索糖尿病大血管病变的发病机制。方法应用聚合酶链反应-序列特异性引物(polymerasechainreaction-sequencespecificprimer,PCR-SSP)技术对合并/未合并大血管病变的北方汉族2型DM患者的HLA-DRB1*04亚型等位基因进行检测。结果东北地区汉族2型DM患者中共检出9种HLA-DRB1*04亚型。2型DM伴大血管病变组DRB1*0404等位基因频率较2型DM无并发症组显著增高;但DRB1*0403等位基因频率较无并发症组显著减少。结论1型DM与2型DM可能具有相似的HLA遗传背景。DRB1*0404单倍型可能是2型DM患者发生大血管病变的易患基因,DRB1*0403单倍型可能是2型DM患者发生大血管病变的保护性基因。HLA-DRB1*0404等位基因是患免疫相关性疾病患者发生血管内皮功能失调,尤其是大血管病变的预测因子。

人类白细胞抗原-DRB1基因启动子区序列多态性与肺结核的相关性分析

目的探讨中国北方地区人群人类白细胞抗原（HLA）-DRB1基因启动子区序列多态性与肺结核的相关性。方法北方汉族肺结核患者97例为肺结核组，北方汉族健康人62例为对照组，采用PCR-SSP法对2组的HLA-DRB1基因启动子区进行PCR扩增，启动子区扩增产物直接测序。结果肺结核组和对照组的HLA-DRB1基因启动子区序列完全一致；对照组启动子区序列与数据库检索的序列比较有3个突变点：-26位的T被C替代，-49位的C被G替代，-78位的C被G替代。结论中国北方地区人群HLA-DRB1基因启动子区序列具有多态性，但此多态性与肺结核的发病没有相关性。

人类白细胞抗原-G5对移植肾功能延迟恢复的影响

目的观察和比较人类白细胞抗原-G5(human leukocyte antigen G5,HLA-G5)不同表达水平对肾移植术后移植肾功能延迟恢复(delayed graft function,DGF)的影响。方法应用酶联免疫方法 (ELISA)检测HLA-G5在肾移植受者体内表达情况,分析对比HLA-G5不同表达组移植肾功能延迟恢复的发生率。结果肾移植术后HLA-G5高表达组无1例发生DGF,而低表达组发生率为57%(P<0.05)。结论 DGF的发生与HLA-G5表达水平密切相关,HLA-G5可能通过减少排斥反应减少DGF的发生。

1型糖尿病与人类白细胞抗原-DRB1基因频率的关联研究

1型糖尿病（T1DM）是一种多因素疾病，是基因和环境因素综合作用引起，T淋巴细胞介导，遗传为基础，环境为诱因。胰岛炎为病理特征的自身免疫性疾病。已经发现的T1DM易感基因中人类自细胞抗原（HLA）基因复合体最为重要。

CD_(14)^+单核细胞人类白细胞抗原-DR预测脓毒症预后及指导免疫调理治疗的初步临床研究

目的 :验证 CD+ 1 4 单核细胞人类白细胞抗原 DR( HL A DR)对于评估严重脓毒症患者免疫功能的作用 ;探讨胸腺 5肽 ( TP 5 )治疗免疫抑制的有效性。方法 :符合严重脓毒症标准 ,CD+ 1 4 单核细胞 HL A DR<30 %的患者被定义为脓毒症免疫抑制和代偿性抗炎症反应综合征 ( CARS)者纳入本研究 ,并接受 1m g TP 5肌肉注射 ,1次 / d,直至 CD+ 1 4 单核细胞 HL A DR>5 0 %或死亡。在 TP 5治疗前及结束治疗时分别测量 CD+ 1 4单核细胞 HL A DR和肿瘤坏死因子α( TNFα)、白介素 6 ( IL 6 )、IL 10和 IL 13。结果 :15例患者存活 ,5例死亡。经 TP 5治疗后所有患者的 CD+ 1 4 单核细胞 HL A DR均有不同程度提高 ,但仅存活者有显著差异。所有患者细胞因子均高于健康对照 ,治疗后存活患者的 TNFα、IL 6明显下降 ;死亡者各种细胞因子变化不明显。结论 :用 CD+ 1 4 单核细胞 HL A DR鉴别脓毒症免疫抑制并指导免疫刺激治疗是安全可靠的 ,且对评估预后有重要价值 ;TP 5可能对逆转免疫抑制有效 ,但需要严格的对照治疗研究确认 ;脓毒症的免疫抑制发生和逆转与促炎 /抗炎细胞因子平衡无关 ,确切机制有待深入探讨。

类风湿性关节炎患者滑膜组织lncRNA HCP5表达上调并与免疫细胞浸润相关

目的通过机器学习筛选类风湿性关节炎(RA)滑膜中潜在发病相关长链非编码RNA(lncRNA)及与各种免疫细胞浸润的相关性。方法通过基因表达数据集(GEO)数据库获取多个RA滑膜的基因芯片数据,归一化后通过多种机器学习方法筛选并取交集得到关键的lncRNA。使用估计已知RNA转录本的相对子集识别细胞类型(CIBER⁃SORT)算法计算滑膜中22种免疫细胞浸润情况,计算关键lncRNA与免疫细胞的相关性,最后通过实时定量PCR验证关键lncRNA在RA滑膜细胞中表达情况。结果筛选出RA关键lncRNA人类白细胞抗原复合物P5(lncRNA HCP5)。免疫浸润分析显示,在RA滑膜组织中,CD8+T细胞、γδT细胞、M1型巨噬细胞比例升高而M2型巨噬细胞的比例减少。lncRNA HCP5的表达与CD8+T细胞、γδT细胞、M1型巨噬细胞呈正相关。实时定量PCR结果显示在RA滑膜细胞lncRNA HCP5表达上调。结论lncRNA HCP5在RA滑膜细胞表达上调,可能与滑膜免疫细胞的浸润有关。

lncRNA HCG18靶向miR-34b-5p/FOXP1轴促进骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)人类白细胞抗原复合体18(HCG18)对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法:收集47例骨肉瘤组织及对应瘤旁组织,RT-qPCR法检测组织中HCG18和miR-34b-5p表达,Pearson相关分析评价骨肉瘤组织中HCG18和miR-34b-5p表达的相关性。体外培养骨肉瘤U2OS细胞,分别转染si-HCG18、miR-34b-5p mimics、共转染si-HCG18与anti-miR-34b-5p或miR-34b-5p mimics与pcDNA-FOXP1后,采用CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖,划痕实验和Transwell分别检测细胞迁移和侵袭,蛋白印迹法检测细胞中FOXP1蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证HCG18和miR-34b-5p及miR-34b-5p和FOXP1调控关系。结果:骨肉瘤组织中HCG18表达量高于瘤旁组织(P<0.01),而miR-34b-5p表达量低于瘤旁组织(P<0.01)。Pearson相关分析结果显示,骨肉瘤组织中HCG18与miR-34b-5p的表达呈负相关关系(r=-0.812,P<0.05)。下调HCG18或上调miR-34b-5p后,U2OS细胞吸光度值和克隆形成数降低(P<0.05),划痕愈合率和细胞侵袭数降低(P<0.05)。HCG18靶向负调控miR-34b-5p,而FOXP1是miR-34b-5p靶基因。下调miR-34b-5p逆转下调HCG18对骨肉瘤U2OS细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。上调FOXP1可逆转上调miR-34b-5p对骨肉瘤U2OS细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:HCG18在骨肉瘤组织中表达升高,其可能通过靶向miR-34b-5p/FOXP1轴促进骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭。

lncRNA HCG18调控miR-324-5p/GLI1轴在急性髓系白血病细胞增殖和侵袭中的作用机制

目的长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18(lncRNA HCG18)调对急性髓系白血病(AML)的作用机制尚不清楚。探讨lncRNA HCG18控微小RNA-324-5p(miR-324-5p)/胶质瘤相关基因同源蛋白1(GLI1)轴对AML细胞增殖、迁移与侵袭的影响。方法选择2017年1月-2021年3月在本院血液科住院治疗的AML患者35例作为研究对象(AML组),另选取同期在本院治疗并进行骨髓穿刺检查的非血液系统肿瘤性疾病患者30例作为对照组,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测所有入选人员骨髓单个核细胞中lncRNA HCG18与miR-324-5p的表达。体外培养AML细胞HL-60,将细胞分为对照组、si-NC组、lncRNA HCG18 siRNA组、miR-NC组、miR-324-5p mimics组、miR-324-5p mimics+GLI1 NC组、miR-324-5p mimics+GLI1组、lncRNA HCG18 siRNA+NC inhibitor组、lncRNA HCG18 siRNA+miR-324-5p inhibitor组,分别检测检测HL-60细胞中lncRNA HCG18、miR-324-5p表达、HL-60细胞增殖、迁移与侵袭及GLI1、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达。双荧光素酶报告系统分析miR-324-5p与lncRNA HCG18、GLI1的靶向关系。结果与对照组比较,AML组患者骨髓单个核细胞中lncRNA HCG18表达水平(2.85±0.32)较对照组(1.03±0.11)显著升高(P<0.01),而miR-324-5p表达水平(0.47±0.05)较对照组(1.05±0.09)显著降低(P<0.01);沉默lncRNA HCG18表达或过表达miR-324-5p后HL-60细胞增殖、细胞迁移与侵袭数、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达显著降低(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验显示,miR-324-5p与lncRNA HCG18、GLI1均有靶向关系;抑制miR-324-5p表达可逆转沉默lncRNA HCG18表达对HL-60细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用;GLI1过表达可逆转过表达miR-324-5p对HL-60细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用。结论lncRNA HCG18在AML细胞中高表达,抑制lncRNA HCG18表达可通过调控miR-324-5p/GLI1轴抑制AML细胞增殖、迁移与侵袭。

变应性鼻炎中lncRNA-miRNA-mRNA网络构建与相关程序性细胞死亡基因的分析

目的 本研究旨在探讨lncRNA介导的ceRNA网络在变应性鼻炎(AR)病理生理过程中的作用及其在程序性细胞死亡(PCD)中的潜在调控功能。方法 纳入AR患者与正常人,取全血进行RNA测序分析,筛选差异表达的lncRNA、miRNA和mRNA用于构建基于ceRNA理论的lncRNA-miRNA-mRNA调控网络。采用基因本体(GO)和KEGG富集分析来预测ceRNA网络中mRNA的潜在生物学功能。随后,将差异表达的mRNA与PCD相关基因相互取交集,并依据交集mRNA构建新的ceRNA网络,同时对ceRNA网络中mRNA进行靶器官定位网络分析。结果 基于生物信息学分析,共提取5个lncRNA、4个miRNA和46个mRNA,构建AR中lncRNA介导的上调及下调的ceRNA网络。功能富集分析显示其在“钙信号通路”、“PI3K/AKT信号通路”及“ERK1和ERK2级联”等中显著富集。并对AC008394.1及人类组织相容性白细胞抗原复合物P5(HCP5)2个lncRNA构建PCD相关ceRNA调控网络。在对ceRNA网络中mRNA进行靶器官定位分析中发现,它们多在神经免疫相关器官中表达。结论 本研究构建了AR中新的ceRNA网络,初步探索了HCP5介导的ceRNA网络可能通过影响细胞凋亡对AR发挥作用。为AR发病机制的研究提供了新的见解和潜在的研究方案。

矽肺与人类白细胞抗原-DRB1*和-DQB1*基因相关性的研究

目的 探讨我国北方汉族人矽肺的易感性与人类白细胞抗原 (HLA) DRB1 、DQB1 位点等位基因多态的相关性。方法 用序列特异性引物的聚合酶链式反应 (PCR SSP)方法 ,分析 48名汉族矽肺患者及 10 0名汉族无血缘关系对照者 (均为有过 14年以上接尘史的井下凿岩工 )HLA DRB1 、DQB1 位点的基因频率分布 ,以相对危险度 (RR)代表相关程度。结果 在矽肺患者组中 ,DRB1 140 1、DQB1 0 5的等位基因频率明显高于对照组 ,经统计学处理 ,两组间差异具有显著性 (χ2 =5 .6 1,P =0 .0 0 6 6 ,RR =17.40 ;χ2 =10 .70 ,P =0 .0 0 11,RR =3.81) ;而DRB1 0 9的等位基因频率则明显低于对照组 ,差异有显著性 (χ2 =5 .70 ,P =0 .0 187,RR =0 .2 1) ;其他等位基因频率的分布差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 HLA DRB1 140 1、DQB1 0 5可能与矽肺的易感性有关 ,而DRB1 0 9则可能与机体抗矽肺的保护性有关。HLA DR位点与机体易感及保护的双重作用有关 ,等位基因之间的共同作用可能是影响矽肺发生的原因之一。

乙型肝炎患者人类白细胞抗原-DRB1、-DQA1、-DQB1等位基因多态性分析

目的探讨人类白细胞抗原(HLA)-DRB1、-DQA1和-DQB1等位基因多态性与乙型肝炎(乙肝)之间的关系.方法采用聚合酶链反应/序列特异性引物(PCR/SSP)技术对52例慢性乙肝患者、30例急性乙肝患者和106名正常人的HLA-DRB1、-DQA1和-DQB1等位基因多态性进行了分析.结果 HLA-DRB1*0301、-DQA1*0501和-DQB1*0301在慢性乙肝患者组的等位基因频率( 17.31%、 25.96%、 35.58%)明显高于正常对照组( 5.67%、 13.36%、 18.87%),两者相比差异有显著性( χ21= 12.3068, Pc1= 0.0074; χ22= 9.2002, Pc2= 0.0157; χ23= 15.5938, Pc3= 0.0075).HLA- DRB1*1101/1104 和-DQA1*0301在慢性乙肝患者组的等位基因频率( 0.96%、 14.42%)明显低于急性乙肝患者组( 13.33%、30%),两者相比差异有显著性( χ21= 11.9206, Pc1= 0.0145; χ22= 8.7396, Pc2= 0.0167).结论 HLA-DRB1*0301、-DQA1*0501和-DQB1*0301与慢性乙肝患者的易感性密切相关,HLA-DRB1*1101/1104和-DQA1*0301与慢性乙肝的抗性密切相关,说明宿主的HLA-Ⅱ类基因是决定乙肝病毒感染转归的重要因素.

人类白细胞抗原-DRB1第3外显子单链测序方法的建立及其多态性分析

目的 建立人类白细胞抗原（human leukocyte antigen,HLA）-DRB1第3外显子单链测序方法,并分析其多态性.方法 采用组特异性引物扩增HLA-DRB1第2和3外显子序列,扩增产物经双酶切后进行双向测序分析,采用Assign 3.5 SBT分析软件指定等位基因型.结果 PCR产物经直接测序后得到清晰的序列冬,并向IMGT/HLA数据库提交了HLA-DRB1＊08：09和DRB1＊12：02：01第3外显子全部序列.在检测的25个等位基因中,HLA-DRB1第3外显子全长序列中存在27个单核苷酸多态性位点,占第3外显子序列碱基总数的9.56%.建立的方法可有效区分HLA-DRB1＊14∶01∶01/14∶54歧义标本,证实中国人群中存在HLA-DRB1＊14∶01∶01.结论 本实验建立的HLA-DRB1第3外显子测序方法是可行的,HLA-DRB1第3外显子存在多态性.

新疆维吾尔族和汉族溃疡性结肠炎与人类白细胞抗原-DRB1基因多态性的关联研究

溃疡性结肠炎（ulcerativecolitis，UC）是一种病因不明的慢性非特异性结肠炎性反应。HLA是调控人类免疫应答的一个关键因素，其中HLAⅡ类抗原在抗原识别和免疫反应中起重要作用。研究表明，新疆维吾尔族及汉族的结肠镜UC检出率均高于国内外水平，且维吾尔族中、重型UC患者多于汉族。分析维吾尔族及汉族UC患者HLA-DRB1基因多态性的差异，

下调人类白细胞抗原复合体18靶向微小RNA-146b-5p对胶质瘤SHG44细胞迁移和侵袭的影响

目的研究下调长链非编码RNA (lncRNA)人类白细胞抗原复合体18(HCG18)靶向微小RNA-146b-5p(miR-146b-5p)对胶质瘤SHG44细胞迁移和侵袭的影响。方法以实时定量-PCR法检测胶质瘤SHG44、CHG-5和BT325细胞与正常胶质HEB细胞中HCG18基因表达,用SHG44细胞做后续实验。将SHG44细胞分成7组:空白对照组、第1转染组(转染shRNA control)、第2转染组(转染HCG18 shRNA)、第3转染组(共转染HCG18 shRNA、inhibitor control)、第4转染组(共转染HCG18 shRNA、miR-146b-5p inhibitor),第5转染组(转染mimics control)和第6转染组(转染miR-146b-5p mimics),均为100 pmol。Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力变化。荧光素酶报告系统鉴定HCG18和miR-146b-5p靶向关系。结果 HCG18基因在胶质瘤SHG44、CHG-5、BT325细胞中表达水平分别为3.68±0.24,2.73±0.22和1.95±0.13,均高于正常胶质HEB细胞的1.00±0.11,差异均有统计学意义(均P<0.05),且胶质瘤SHG44细胞中HCG18表达水平最高。空白对照组、第1转染组、第2转染组、第3转染组和第4转染组细胞侵袭数目分别为156.32±12.58,155.80±13.97,99.76±8.52,100.20±9.63和146.16±10.58;迁移数目分别为196.74±15.52,199.86±16.39,148.13±13.28,150.89±10.76和181.72±12.39。第2转染组的上述指标与第1转染组相比,或第4转染组的上述指标与第3转染组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。经wt处理的第6转染组和第5转染组细胞荧光素活性分别为1.00±0.11和0.41±0.04,第6转染组与第5转染组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论下调长链非编码RNA HCG18靶向miR-146b-5p可抑制胶质瘤SHG44细胞侵袭和迁移。

慢性乙型肝炎患者人类白细胞抗原-DRB1基因多态性及其临床意义

宿主感染HBV的临床发展过程除与病毒本身有关外，还与不同个体对HBV所发生的免疫反应有关。人类白细胞抗原（HLA）复合体作为调节机体免疫应答的重要基因群，与抗HBV免疫反应有着密切的关系，机体抗病毒免疫功能及病毒逃避免疫攻击的能力决定着HBV感染的发生、发展和转归。许多研究表明，某些HLAⅡ类分子或等位基因与HBV感染的预后有密切关系。本研究分析慢性乙型肝炎患者HLA—DRB1基因多态化、了解其临床意义。

人类白细胞抗原-DRB1与抗瓜氨酸化蛋白抗体在类风湿关节炎发病中的意义

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种常见的系统性自身免疫病，到目前为止，其发病原因仍不十分清楚。研究发现，遗传因素可能发挥了重要作用．其中尤以人类白细胞抗原（HLA）最为重要，约占所有致RA发病因素的35％。同时．RA患者体内存在多种对于RA的诊断具有很高敏感性和特异性的抗瓜氨酸化蛋白抗体（ACPA），此类抗体与RA的发病、病情程度及预后密切相关。近期的研究证实HLA—DRBI亚型与ACPA这两种RA强相关分子通过相互作用在RA发病中发挥了重要作用。本文对此方面的最新进展做一综述，以利于对RA发病机制的认识。

人类白细胞抗原-G5过表达慢病毒载体的构建以及JAR-HLA-G5稳转细胞株的建立

目的构建过表达人类白细胞抗原G5(HLA-G5)慢病毒载体,筛选建立稳定表达HLA-G5的JAR稳转细胞株。方法根据HLA-G5基因序列设计合成引物并使用聚合酶链反应(PCR)扩增目的基因片段。将目的基因定向接入经BamHI/AgeI酶切的载体质粒GV492中构建重组慢病毒质粒GV492-HLA-G5。筛选阳性克隆和测序鉴定后,使用三质粒包装系统将含有目的基因的重组质粒GV492-HLA-G5和辅助包装质粒共转染至293T细胞进行病毒包装及纯化并测定病毒滴度。设置过表达实验(OE)组和阴性对照(NC)组,在感染复数为20的条件下感染JAR细胞。用荧光显微镜观察各组绿色荧光蛋白的表达情况。用浓度为2μg·mL^(-1)嘌呤霉素筛选出稳定表达HLA-G5的JAR细胞株。用qRT-PCR和Western blot法检测JAR细胞中HLA-G5的mRNA和蛋白表达水平。结果经PCR及测序鉴定证明,序列与设计序列一致,成功构建重组慢病毒载体。病毒滴度结果显示,OE组的滴度为2×108TU·mL^(-1),NC组的滴度为4×108TU·mL^(-1)。qRT-PCR显示OE组JAR细胞中HLA-G5的mRNA(108.69±4.25)表达水平较NC组(1.00±0.76)明显增高(P<0.01)。Western blot显示OE组JAR细胞中HLA-G5的蛋白(65.84±14.11)表达水平较NC组(1.35±0.37)明显升高(P<0.01)。结论成功构建HLA-G5慢病毒载体并筛选建立JAR-HLA-G5稳转细胞株。