人类白细胞抗原-G和干扰素γ与复发性流产相关性的初步探讨

目的分析人类白细胞抗原-G(HLA-G)和干扰素γ(IFN-γ)与复发性流产(RPL)的相关性。方法选取2016年4月至2019年7月在本院生殖医学中心和妇产科诊治的70例流产患者为研究对象,根据流产发生的起因分组,分为RPL不孕症患者的RPL组(n=29)和正常终止妊娠的早孕女性的对照组(n=41)。采用酶联免疫反应测定两组患者血清HLA-G和IFN-γ水平,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定两组患者外周血和流产绒毛组织中HLA-G和IFN-γ的mRNA相对表达量。结果两组患者的年龄、体质量指数(BMI)、基础卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和雌二醇(E2)水平等一般资料比较均无显著性差异(P>0.05),而RPL组患者在胎停7~8周的血清HCG和孕酮水平均显著低于对照组(P<0.05);酶联免疫反应结果显示,RPL组血清HLA-G水平显著低于对照组,而IFN-γ水平显著高于对照组(P<0.05);qRT-PCR结果显示,两组患者外周血和流产绒毛中均有HLA-G mRNA和IFN-γmRNA表达,RPL组患者外周血和流产绒毛中的HLA-G mRNA表达水平均显著低于对照组,而IFN-γmRNA表达均水平显著高于对照组(P<0.01)。结论妊娠初期HLA-G和IFN-γ的表达失衡与RPL的发生存在一定相关性。

人类白细胞抗原-G突变体cDNA克隆及在K562细胞上的表达

目的 克隆人类白细胞抗原 G(Humanleukocyteantligen G ,HLA G)突变体cDNA ,并使其在HLA Ⅰ类阴性的K5 6 2细胞上获得稳定表达 ,为研究配 受体之间的识别机制奠定基础。方法 用RT PCR方法从人子宫蜕膜组织扩增出HLA GcDNA ,得到全长HLA GPCR产物后 ,用桥式PCR方法进行定点点突变 ,将突变的目的基因亚克隆于逆转录 ,将突变的目的基因亚克隆于逆转录mG pLNCX表达载体 ,采用感染的方法将重组质粒转入K5 6 2细胞 ,最后经G4 18筛选及有限稀释 ,利用单克隆抗体W6 32进行FACS及mRNA检测 ,观察HLA G突变体在靶细胞表面的表达。结果 HLA G突变体分子在经mG pLNCX转染的靶细胞表面获得稳定高表达。结论 成功构建了mG pLNCX表达载体 ,并使HLA G突变体分子在HLA Ⅰ类阴性的靶细胞K5 6 2细胞上获得稳定表达。

人类白细胞抗原-G和人类白细胞抗原-E在妊娠免疫耐受中的作用

人类白细胞抗原(HLA)-G、-E同属非经典主要组织相容性复合物(MHC)Ⅰ类分子,于母胎界面滋养层细胞高表达,在妊娠免疫耐受中发挥重要作用。HLA-G和HLA-E主要通过和自然杀伤(NK)细胞、T淋巴细胞表面抑制性CD94/NKG2C受体或激活性CD94/NKG2A受体结合,抑制或激活免疫细胞效应,维持正常妊娠免疫耐受。HLA-G和HLA-E基因结构及表达异常可能与妊娠并发症相关,可作为判定正常妊娠和妊娠相关疾病指标。本文综述HLA-G和HLA-E结构和分布、与免疫细胞可能的作用机制以及相关临床应用,讨论其在维持母胎免疫耐受中的作用。

人类白细胞抗原-G与早期胚胎生长发育和着床

人类白细胞抗原-G(HLA-G)是人类组织相容性抗原复合物,在母胎免疫耐受中起作用。近年的研究发现,HLA-G在着床前胚胎表达。我们和国际上其他的临床研究显示,分泌可溶性HLA-G的胚胎在体外受精和胚胎移植中的临床妊娠率和种植率较高。进一步的研究发现,HLA-G与胚胎的免疫耐受、生长、着床相关的粘附和浸润相关,并通过MEK1/2信号传导通路促进人绒毛膜促性腺激素的分泌。我们还发现,子宫内膜细胞与可溶性HLA-G结合,并表达其受体;可溶性HLA-G还促进子宫内膜细胞与滋养细胞的粘附;白血病抑制因子和miR-152参与HLA-G在滋养细胞表达的调控。HLA-G表达和功能相关的分子机制研究显示,HLA-G在胚胎生长和着床上起重要作用,可能是胚胎发育潜能的标志分子。

人类白细胞抗原-G与移植免疫

人类白细胞抗原-G（human leucocyte antigen G,HLA-G）属于非经典的主要组织相容性复合物Ⅰ类分子（major histocompatibility complex,MHC-Ⅰ）,在妊娠期作为免疫耐受分子表达于胎盘滋养层细胞,促进母胎免疫耐受。近年来研究表明HLA-G在移植免疫中发挥重要作用,HLA-G通过多种途径参与免疫调控,诱导移植免疫耐受。笔者就HLA-G抑制移植免疫排斥的机制、功能及临床意义做一综述。HLA-G位于人体第6号染色体MHC I类基因6p21.3,由8个外显子、7个内含子组成。

人类白细胞抗原-G cDNA的克隆及序列分析

目的:构建表达人类白细胞抗原-G(HLA-G)蛋白的真核表达载体pcDNA3-HLA-G。方法:从孕妇绒毛组织中提取总RNA,借助RT-PCR技术扩增HLA-G的cDNA并把其插入真核表达载体pcDNA3,然后经酶切和测序法鉴定。结果:经酶切鉴定及测序分析,证实已构建表达HLA-G蛋白的真核表达载体pcDNA3-HLA-G。结论:应用RT-PCR扩增及DNA连接技术成功构建HLA-G的真核表达载体。

人类白细胞抗原-G5对移植肾功能延迟恢复的影响

目的观察和比较人类白细胞抗原-G5(human leukocyte antigen G5,HLA-G5)不同表达水平对肾移植术后移植肾功能延迟恢复(delayed graft function,DGF)的影响。方法应用酶联免疫方法 (ELISA)检测HLA-G5在肾移植受者体内表达情况,分析对比HLA-G5不同表达组移植肾功能延迟恢复的发生率。结果肾移植术后HLA-G5高表达组无1例发生DGF,而低表达组发生率为57%(P<0.05)。结论 DGF的发生与HLA-G5表达水平密切相关,HLA-G5可能通过减少排斥反应减少DGF的发生。

人类白细胞抗原-G在皮肤恶性黑素瘤中表达的研究

目的:检测人类白细胞抗原-G(HLA-G)在原发性皮肤恶性黑素瘤(CMM)中的表达情况。方法:以免疫组化法检测35例原发性CMM、22例痣细胞痣HLA-G及Bcl-2的表达,并结合临床及组织病理学进行分析。结果:在CMM中HLA-G蛋白的阳性表达率显著高于痣细胞痣(P=0.029)。HLA-G蛋白表达与CMM炎细胞浸润、Bcl-2蛋白表达显著相关(P值分别为0.032,0.008)。CMM中HLA-G表达与临床分期、肿瘤厚度、溃疡及生长模式等预后变量无显著相关性。结论:CMM中HLA-G表达上调,可能参与肿瘤的发生及发展。

人类白细胞抗原-G与肝炎病毒感染的相关性研究进展

人类白细胞抗原-G(human leukocyte antigen G,HLA-G)属于非经典主要组织相容性复合体Ⅰ类分子,选择性表达在母胎交界面的细胞滋养层细胞使得妊娠期间形成母体对胎儿的免疫耐受。但是,HLA-G的有限多态性和异常表达与多种病理改变有关,例如肿瘤、自身免疫病和感染性疾病等。近来有研究表明,乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒感染过程中HLA-G的表达均会发生改变,而且HLA-G的表型与病毒的易感性相关。但是,至于HLA-G分子在乙型肝炎和丙型肝炎疾病发展中的作用目前仍不完全清楚。HLA-G与病毒性肝炎的相关性仍需深入研究。

重组腺病毒介导人类白细胞抗原-G基因转染恒河猴树突状细胞对T细胞的增殖作用

目的人类白细胞抗原-G(HLA-G)通过与树突状细胞(DC)表面的免疫球蛋白样转录体(ILT2)和ILT4(CD85d)结合,广泛参与机体的免疫耐受的过程。探讨经HLA-G重组腺病毒载体感染后的恒河猴未成熟树突状细胞刺激T细胞的增殖作用。方法麻醉恒河猴获取新鲜骨髓血,采用密度梯度离心法,分离获得的单个核细胞行免疫磁珠法获得CD34+细胞。添加小剂量细胞因子联合诱导分化CD34+细胞,从而获得树突状细胞。介导HLA-G的重组腺病毒经过转染未成熟树突状细胞后,检测病毒感染效率,Western blot检测HLA-G在未成熟树突状细胞中的表达。以恒河猴T细胞作为反应细胞,将介导HLA-G的重组腺病毒转染的不同状态下的DC为刺激细胞,进行混合淋巴细胞实验。设置5组:即成熟树突状细胞组(mDC组);未成熟树突状细胞组(imDC组);imDC(L)组:在第7天成功获得imDC后加入脂多糖100 ng/m L;imDC(V)组:重组腺病毒介导HLA-G感染的imDC,方法同前;imDC(L+V)组:重组腺病毒同样转染imDC,同时在培养过程中添加100ng/m L的脂多糖。根据DC与T细胞不同比例(1∶5、1∶10、1∶20、1∶40)计算各组刺激指数(SI)。结果成功培养获得恒河猴未成熟树突状细胞,HLA-G在该细胞中表达。流式细胞术检测结果发现DC的纯度高达92.3%,imDC组则高达72.39%,CD4+T细胞阳性率纯度>80%。混合淋巴细胞实验分析DC刺激T细胞增殖结果表明,不同DC与T细胞比例(1∶5、1∶10、1∶20、1∶40)下,imDC组SI为1.63±0.03、1.52±0.04、1.39±0.03和1.21±0.01;mDC组SI为2.23±0.05、2.01±0.03、1.65±0.02和1.54±0.05;imDC(L)组SI为2.25±0.04、1.96±0.02、1.62±0.03和1.48±0.01;imDC(V)组SI为1.46±0.04、1.33±0.02、1.20±0.04和1.04±0.02;imDC(L+V)组SI为1.67±0.03、1.59±0.04、1.38±0.03和1.24±0.03。与imDC组比较,mDC组、imDC(L)组SI明显增高(P<0.01);与imDC(V)组比较,imDC组、mDC组、imDC(L)组、imDC(L+V)组SI明显增高(P<0.01);与imDC(L+V)组比较,mDC组、imDC(L)组SI明显增高(P<0.01)。结论重组腺病毒介导HLA-G转染的恒河猴未成熟树突状细胞能够有效抑制恒河猴T细胞的增殖。

可溶性人类白细胞抗原-G在重度子痫前期患者胎盘组织培养液中的表达

为了检测妊娠晚期重度子痫前期患者和正常妊娠妇女胎盘组织培养液中可溶性人类白细胞抗-G(soluble human leu-kocyte antigen-G,sHLA-G)的表达水平,探讨sHLA-G在子痫前期发病中的作用,选择了2008年10月至2009年4月第四军医大学唐都医院重度子痫前期患者20例(重度子痫前期组),正常足月妊娠者20例(正常足月妊娠组),用酶联免疫吸附法(ELISA)检测胎盘组织培养液中sHLA-G的表达水平。经检测重度子痫前期组胎盘组织培养液中sHLA-G的表达水平(26.78±5.17U/ml)明显低于正常妊娠组(53.64±28.85U/ml)(P<0.05)。实验表明,sHLA-G在重度子痫前期患者胎盘组织培养液中表达水平均明显降低,可能与子痫前期发病有关。

人类白细胞抗原-G与母胎免疫耐受的关系

人类的主要组织相容性抗原复合体分子称为人类白细胞抗原(HLA)。人类白细胞抗原-G(HLA-G)是目前发现与妊娠关系最密切的非经典HLA-Ib类分子。HLA-G低多态性及限制性分布于母胎界面的绒毛外滋养细胞等少数免疫豁免组织。HLA-G免疫耐受中作用可能主要与子宫内膜自然杀伤细胞(NK)活性变化相关。HLA-G表达水平变化与胚胎的着床、生长发育、体外授精妊娠结局、正常妊娠维持,及病理妊娠(如不明原因复发性流产、子痫前期、胎儿生长受限、胎膜早破、羊水过少)的发生发展密切相关。研究HLA-G在母胎免疫中的作用对于病理妊娠的预测、预防和治疗可能具有极高的临床价值。

血清可溶性人类白细胞抗原-G、白介素-17对先兆流产保胎治疗孕妇妊娠结局的预测价值

目的分析血清可溶性人类白细胞抗原-G(sHLA-G)、白介素-17(IL-17)预测先兆流产(TA)保胎治疗孕妇妊娠结局不良的临床价值。方法选取2019年4月至2020年7月海南医学院第二附属医院收治的94例采用保胎治疗的TA孕妇作为研究对象。治疗前检测血清sHLA-G、IL-17水平,根据是否流产分为妊娠结局良好组(n=75)与妊娠结局不良组(n=19),分析并比较两组基线资料,分析治疗前血清sHLA-G、IL-17预测TA保胎治疗孕妇妊娠结局不良的临床价值。结果94例TA孕妇经保胎治疗后有19例妊娠结局不良,妊娠结局不良率为20.21%;经双变量Spearman直线相关检验发现,TA孕妇血清sHLA-G水平与孕酮、β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)水平均呈正相关(r>0,P<0.05),血清IL-17水平与孕酮、β-HCG水平呈负相关(r<0,P<0.05);Logistic回归分析结果显示,血清孕酮、β-HCG、sHLA-G水平升高可能是TA保胎治疗孕妇妊娠结局不良的保护因素(OR<1,P<0.05);IL-17水平升高可能是TA保胎治疗孕妇妊娠结局不良的的风险因素(OR>1,P<0.05);绘制受试者工作特征曲线发现,血清sHLA-G、IL-17单一及联合预测TA保胎治疗孕妇妊娠结局不良的曲线下面积均>0.80,均具有一定预测价值。结论血清sHLA-G、IL-17预测TA保胎治疗孕妇妊娠结局不良具有一定的临床价值。

人类白细胞抗原-G在临床医学中的研究进展

人类白细胞抗原(HLA)-G是一类非经典HLAⅠb类分子,早期的研究主要集中在妊娠免疫,HLA-G可保护胎儿免受母体免疫系统的攻击。近几年越来越多的研究发现HLA-G在诱导器官移植物免疫耐受、协助肿瘤细胞以及病毒的免疫逃逸中发挥着重要作用。因此将HLA-G作为器官移植、恶性肿瘤和病毒感染等疾病诊断和治疗的靶点已逐渐成为学者关注的热点。本文就HLA-G的基因多态性与分子结构、HLA-G在临床医学中应用的最新进展做一总结。

人类白细胞抗原-G在急性白血病患者的表达及意义

目的检测急性白血病患者膜结合型人类白细胞抗原-G(mHLA-G)和分泌型HLA-G(sHLA-G)的表达,探讨HLA-G表达水平的变化对急性白血病发生和发展的影响。方法采用酶联免疫吸附法和流式细胞术分别检测40例初发、10例难治复发、30例化疗前后患者及10例正常人sHLA-G和mHLA-G的表达情况。结果正常人血清中sHLA-G的平均水平为5.87±2.07ng/ml,初发患者为10.05±6.5ng/ml、难治复发患者为12.32±5.85ng/ml;正常人mHLA-G的平均水平为(0.29±0.20)%,初发患者(0.60±0.44)%、难治复发患者(0.77±0.41)%。白血病初发患者sHLA-G和mHLA-G水平均显著高于正常人组(P<0.05),初发与难治复发患者比较无统计学差异(P>0.05)。15例1疗程化疗后获得完全缓解患者sHLA-G和mHLA-G水平显著低于化疗前(P<0.05),而15例未缓解患者其sHLA-G和mHLA-G水平较治疗前无明显差异(P>0.05)。结论 HLA-G表达水平变化可能与急性白血病的病情发展、疗效以及预后有关。

吲哚胺2,3-双加氧酶上调人肝癌细胞人类白细胞抗原-G的表达

目的:探讨人类吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)对肝癌细胞人类白细胞抗原-G(humanleucocyte antigen-G,HLA-G)表达的影响。方法:用脂质体lipofectamine^(TM)2000将pcDNA3.1-IDO重组质粒稳定转染入肝癌SMMC-7721细胞作为实验组(pcDNA3.1-IDO质粒转染组),同时设置空载体对照组(pcDNA3.1转染组)和空白对照组(未转染组),用RT-PCR和Western blot鉴定实验组和2个对照组细胞IDO mRNA和蛋白的表达,然后分别给予实验组细胞IDO的抑制剂(2.5 mmol/L 1-D-MD和底物(200μmol/L L-色氨酸)干预48 h,进一步用实时荧光定量PCR和Westernblot检测上述5组细胞中HLA-G mRNA和蛋白的表达水平。结果:RT-PCR和Western blot显示空载体对照组和空白对照组未见IDO表达,而实验组细胞高表达IDO。实时荧光定量PCR和Western blot结果显示,实验组HLA-G mRNA和蛋白表达水平较空载体对照组和空白对照组均明显上调(P均<0.05),给予1-D-MT和L-色氨酸干预后此效应可逆转。结论:在肝癌SMMC-7721细胞,IDO可以上调HLA-G的表达,色氨酸降解途径参与了此调节过程。

血清中期因子、可溶性人类白细胞抗原-G在甲状腺癌中的诊断价值

目的探讨甲状腺癌患者的血清中期因子(MK)、可溶性人类白细胞抗原-G(sHLA-G)水平及其对甲状腺癌的诊断价值。方法选取89例甲状腺癌患者、70例甲状腺良性病变患者和50例同期健康体检者,将其分别作为甲状腺癌组、甲状腺良性病变组和健康对照组。检测3组研究对象的血清MK、sHLA-G水平,并分析其对甲状腺癌的诊断价值。结果甲状腺癌组患者的血清MK、sHLA-G水平均高于甲状腺良性病变组和健康对照组(P<0.05)。TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移的甲状腺癌患者的血清MK、sHLA-G水平均高于TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移的甲状腺癌患者(P<0.05);肿瘤直径≥2 c m的甲状腺癌患者的血清sHL A-G水平明显高于肿瘤直径<2 cm的甲状腺癌患者(P<0.01)。血清MK、sHLA-G水平诊断甲状腺癌的受试者工作特征(ROC)曲线下面积分别为0.701(95%CI:0.596~0.806)和0.804(95%CI:0.720~0.889),灵敏度分别为62.0%和56.0%,特异度分别为76.0%和99.4%。结论甲状腺癌患者的血清MK、sHLA-G水平较高,与患者的TNM分期、淋巴结转移情况和肿瘤直径有一定关系,且血清MK、sHLA-G在甲状腺良恶性病变的鉴别诊断中有一定的应用价值。

人类白细胞抗原-G基因外显子8中14bp多态性与信使核糖核酸表达关系研究

目的:分析正常妊娠妇女人类白细胞抗原-G(human leucocyte antingen-G,HLA-G)基因外显子8中14bp插入或缺失多态性分布频率,探讨14bp多态性与HLA-G异构体信使核糖核酸(messenger RNA,mRNA)表达的关系。方法:从144例正常妊娠妇女蜕膜组织中提取基因组DNA及总RNA。PCR扩增产物经SDS-PAGE后,分析外显子8中14bp多态性的分布频率;RT-PCR分析14bp+/+、14bp-/-基因型与HLA-G异构体mRNA表达的关系。结果:144例正常妊娠妇女中14bp基因型分布频率,分别为14bp-/-(占12.5%),14bp+/-(占56.3%),14bp+/+(占31.2%)。其中基因型为14bp+/+,14bp-/-多态性影响HLA-G异构体mRNA的表达。结果显示,基因型14bp+/+能稳定HLA-G3异构体mRNA的表达,但对HLA-G1无影响。结论:HLA-G基因外显子8中14bp多态性能影响HLA-G mRNA的表达。

可溶性人类白细胞抗原-G 在鼻咽癌中的诊断价值

目的分析可溶性人类白细胞抗原-G(sHLA-G)在鼻咽癌(NPC)中的诊断价值。方法选取80例NPC患者作为NPC组,另选取同期80例非NPC人群作为非NPC组。所有研究对象均应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清EB病毒(EBV)抗体与血浆sHLA-G水平,根据EBV抗体检测结果将非NPC组分为EBV(-)组(48例)和EBV(+)组(32例)。比较NPC组与非NPC组EBV相关指标[EB病毒核抗原1免疫球蛋白A(NA1-IgA)、EB病毒壳抗原免疫球蛋白A(VCA-IgA)、Zta蛋白抗体免疫球蛋白A(Zta-IgA)]阳性率以及NPC组、EBV(-)组、EBV(+)组的sHLA-G水平。结果NPC组EBNA1-IgA、VCA-IgA、Zta-IgA阳性率分别为78.8%(63/80)、43.8%(35/80)、60.0%(48/80),非NPC组NA1-IgA、VCAIgA、Zta-IgA阳性率分别为3.8%(3/80)、8.8%(7/80)、5.0%(4/80);NPC组NA1-IgA、VCA-IgA、Zta-IgA阳性率均高于非NPC组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。NPC组总sHLA-G水平(102.5±11.6)U/ml均高于EBV(-)组的(32.8±9.1)U/ml和EBV(+)组的(84.7±12.3)U/ml,且EBV(+)组sHLA-G水平高于EBV(-)组,差异均具有统计学意义(P<0.05);NPC组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期sHLA-G水平比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论sHLA-G在NPC诊断中的应用效果显著,可作为临床对NPC诊断与分期的辅助指标,对提高诊断结果的准确率具有重要意义。

人类白细胞抗原-G1蛋白纯化及其免疫耐受机制初探

目的原核体系诱导表达并纯化人类白细胞抗原-G1(human leukocyte antigen-G,HLA-G1)蛋白,研究HLA-G1分子对人B淋巴细胞内白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)表达水平的影响,进而探究HLA-G1在肾移植受者中B细胞介导的免疫耐受机制。方法通过原核表达体系,构建表达并纯化HLA-G1蛋白,经过蛋白免疫印迹试验(Western Blot)鉴定后,与人外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)共培养,利用流式细胞仪检测B淋巴细胞内IL-10的表达情况。结果十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electropheresis,SDS-PAGE)、Western Blot结果表明,纯化后的蛋白分子量大小约为38.2 kDa,符合HLA-G1蛋白的分子量;人PBMC与HLA-G1蛋白共培养后,随着HLA-G1蛋白浓度的升高(浓度梯度:0、50、100和200 ng/ml),B细胞内IL-10的表达水平明显增加,分别为0.1%、0.36%、0.57%、0.73%。结论通过原核表达系统获得HLA-G1蛋白,纯度达95%以上,HLA-G1蛋白与人PBMC共培养后,可诱导B淋巴细胞表达IL-10,并具有浓度依赖性,提示其对肾移植免疫耐受的建立具有重要作用。