人类白细胞抗原HLA-A基因多态性与HBV携带的相关性研究

目的探讨人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)基因多态性与乙型肝炎病毒(HBV)感染的相关性。方法收集云南省昆明市延安医院健康体检者静脉血样本501例,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBV二对半,根据HBV二对半检测结果分为HBV携带组和既往感染组以及健康对照组3组,用序列特异性引物聚合酶链反应(polymerase chain reaction with sequence specific primers,PCR-SSP)基因分型技术检测HLA-A抗原的基因型,将HBV携带组和健康对照组以及HBV既往感染组和健康对照组的HLA-A基因多态性的分布频率进行比较。采用SPSS17.0软件进行数据统计分析。结果健康对照组HLA-A2阳性数占比47.49%,等位基因频率数占比31.29%;健康对照组基因分布频率总体与中华骨髓库发布的中国常见及确认的HLA-A等位基因表一致。HBV携带组HLA-A2阳性数占比63.04%,等位基因频率数占比42.23%,携带者的HLA-A2阳性率和等位基因频率差异有统计学意义(P<0.05);HBV既往感染组HLA-A2阳性数占比56.14%,等位基因频率数占比35.97%,既往感染组的HLA-A2阳性率和等位基因频率差异无统计学意义(P>0.05)。结论HLA-A2基因可能是慢性乙型肝炎HBV携带者的易感基因。

人类白细胞抗原HLA-A/C和HLA-B/DR座位基因重组家系分析

目的探讨2个家系人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)A/C和B/DR座位的重组情况。方法采集2个家系成员外周血标本,抽提DNA,对其HLA-A,-C,-B,-DRB1,-DQB1位点进行PCR-SSP基因分型和SBT分析,然后通过家系遗传分析确定HLA基因重组相关位点,检测短串联重复序列位点确定其家系成员亲权关系。结果家系1:父亲的1条HLA单体型A*24∶02-C*04∶01-B*15∶27-DRB1*04∶06-DQB1*03∶02保持连锁特性遗传给子女。而母亲的1条HLA单体型遗传给子女时,当母源单体型为A*11∶01-C*14∶02-B*51∶01-DRB1*04∶05-DQB1*04∶01,则遗传给女儿的单体型存在HLA-A和HLA-C座位重组;

中国汉族人群人类白细胞抗原新等位基因A^＊1155的确认

背景:在国内发现的新等位基因中,大部分都是先采用人类白细胞抗原分型低分辨方法进行分型,如发现反应格局异常后,再进一步用基因测序或基因克隆方法进行确认,这样有可能导致一些新等位基因未被发现。基因测序分型方法被认为是人类白细胞抗原分型的金标准,它可得出精确的核苷酸序列。目的:直接采用基因测序分型方法对中华骨髓库标本进行检测,识别和确认中国汉族人群中新发现的等位基因。方法:应用中国造血干细胞捐献者测序结果可疑为新等位基因的重采血样5mL,采用基因测序分型技术,发现一样本HLA-A位点的杂合结果HLA-A*030101/A*110101在外显子上有1个位置与数据库不符,为了区别哪一个为新等位基因,采用基因克隆(TOPOTACloning)技术对两个等位基因1-8外显子进行DNA双向测序,发现1个与HLA-A*110101序列相近的新等位基因,分析两者核苷酸序列的差异。并将测序结果与已知人类白细胞抗原等位基因序列比较分析。结果与结论:通过克隆分离杂合等位基因,再进行测序确认发现新的序列与A*110101相比,在第2外显子第330碱基位置上C→G,密码子86AAC→AAG,发生了氨基酸的改变,由天冬酰氨变为赖氨酸。提示该等位基因为新的HLA-A等位基因,2009-10-31被世界卫生组织人类白细胞抗原因子命名委员会正式命名为HLA-A*1155。

人血痕的HLA-A,-B抗原的测定

前言HLA(人类白细胞抗原)是迄今所知最复杂的一种人类遗传标记系统,至1980年确定的抗原已达92种,在法医学亲权鉴定中已广泛应用HLA分型,并成为最有效的工具之一。但在血痕检验方面,尚处于探索阶段。C·H·Rittner等(1974)首先采用淋巴细胞毒抑制试验测定血痕的HLA抗原。

HLA新等位基因HLA-A^＊ 33：39的序列分析及鉴定

目的人类白细胞抗原(HLA)新等位基因HLA-A*33∶39的序列分析及鉴定。方法利用多聚酶链反应—基于测序的分型(PCR-SBT)技术鉴定HLA新等位基因。结果发现1个与A*33∶03∶01序列相近的未知等位基因,实验结果表明其在A*33∶03∶01第4外显子649位G>A,其突变造成A*33∶03∶01氨基酸序列中192位的丙氨酸(A)>苏氨酸(T)。结论此为HLA-A位点的1个新等位基因,2010年10月被世界卫生组织HLA命名委员会命名为HLA-A*33∶0339。

中国山东省威海、莱芜地区健康人群HLA-A、B、DRB1等位基因频率多态性调查

目的:分析人类白细胞抗原基因频率在山东省威海、莱芜地区健康人群中的遗传特征及其人群间分布的差异。方法:采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法对300名健康献血者进行HLA-A、B、DRB1分型。结果:共检出14个HLA-A等位基因,34个B等位基因,13个DRB1等位基因。比较威海和莱芜地区HLA人群基因频率差异为威海地区A*32基因频率显著高于莱芜地区(P<0.05),莱芜地区HLA-B*27基因频率显著高于威海地区(P<0.05)。结论:威海、莱芜地区人群很好的体现了中国北方人群的HLA基因型分布特点,同时也具有其自身的特殊性。这些比较数据为寻找HLA相合的无亲缘关系造血干细胞供者提供了重要的遗传学信息。

假肥大型肌营养不良症患者HLA-A、B、DR基因表达研究

目的 研究南方假肥大型肌营养不良症 ( duchenne muscular dustrophy,DMD)患者 HLA-A、B、DR基因多态性 ,探讨免疫遗传因素在 DMD发病中的作用 ,并为临床骨髓移植提供基础性资料。方法 采用 PCR反向序列特异性寡核苷酸杂交技术与美国骨髓库编码软件 ( National marrow donorprogram,NMDP) ,对 2 9例 DMD患者 HLA-A、B、DR等位基因多态性进行研究。结果 DMD组 HLA-A2 4等位基因频率 9.0 3 % ,与对照组2 2 .1 6%相比有所降低 ( P =0 .0 1 7) ;DMD组 HLA-B1 3等位基因频率 1 6.95 % ,与对照组 6.75 %相比显著增高( P=0 .0 0 7)。但校正后 P值差异均无显著性 ( P值分别为 0 .2 5 5和 0 .2 3 1 )。结论 DMD患者 HLA-A、B、DR基因表达与正常对照组差异无显著性 ,HLA遗传易感性与 DMD发病无明显相关 ,但尚需要扩大样本量或进行高分辨加深研究。

1例8个月胎儿HLA-A,-B位点分型成功的报告

HLA(Human Lenkocyte Antigens,人类白细胞抗原)是人类各种遗传标记系统中最复杂的一种。HLA在人出生时已发育成熟。按目前所发现的抗原计算,HLA-A,-B的单倍体型有255种,基因型可能有65,052种;如果把-A,-B-C,-DR位点都算进去,则可能有1,105,650种基因型。

新等位基因HLA-A~＊11：97与HLA-B~＊44：127的确认

背景:近几年来,随着分子生物学的发展及人类白细胞抗原分型技术的提高,人类白细胞抗原新等位基因不断被发现。目的:识别并确认两个新的人类白细胞抗原等位基因。方法:应用PCR-SBT、GSSP及单链测序基因分型技术对两份中华骨髓库供者样本进行人类白细胞抗原A,B,DRB1位点进行基因分型,对新等位基因进行DNA测序并与已知同源性最高的等位基因型进行序列比对。结果与结论:两个样本各有一个位点与目前已知的相应人类白细胞抗原A、B等位基因序列均不一致,样本1与其同源性最高的A*11:01:01的差异表现在第2外显子区域中的193G>T,194C>T,导致第41位密码子由丙氨酸变为亮氨酸,样本2与其同源性最高的B*44:02比较差异表现在第2外显子区域中第320位碱基由G>A,导致编码的第83位密码子由精氨酸变为组氨酸。说明两个样本分别为人类白细胞抗原A和B位点的新等位基因,并已被WHO人类白细胞抗原因子命名委员会正式命名为人类白细胞抗原A*11:97和B*44:127。

江西汉族Stevens-Johnson综合征和中毒性表皮坏死松解症眼部受累与HLA-A~* 0206相关性分析

目的探讨江西汉族Stevens-Johnson综合征(SJS)和中毒性表皮坏死松解症(TEN)眼部受累与HLA-A~* 0206是否存在相关性。方法在具有江西汉族遗传背景人群中,收集眼部受累的SJS 11例、SJS/TEN 5例、TEN 14例及60例健康对照者,采用PCR对目标基因扩增后进行测序,观察江西汉族Stevens-Johnson综合征和中毒性表皮坏死松解症眼部受累与HLA-A~* 0206是否存在相关性。结果黏膜受累组HLA-A~* 0206阳性率为30.00%,较健康对照组的阳性率(18.33%)高,但差异无统计学意义(P=0.126)。结论具有江西汉族遗传背景人群中,HLA-A~* 0206与Stevens-Johnson综合征和中毒性表皮坏死松解症伴发黏膜受累没有明显相关性。

地高辛标记PCR—SSOP法进行HLA—A^＊02等位基因检测

目的 :建立聚合酶链反应 -序列特异性寡核苷酸探针 (PCR- SSOP)分型方法 ,并分析其实用价值。方法 :采用一对引物扩增所有 HL A- A2特异性抗原 ,用 2 3个探针和扩增产物杂交 ,探针用地高辛系统标记和检测 ,可鉴定 A2的 2 5个等位基因 ,并在中国人群 HL A- A*0 2等位基因的检测中进行应用 ,用 B淋巴母细胞株作阳性对照 ,同时与聚合酶链反应 -序列特异性引物 (PCR- SSP)检测方法作比较。结果 :采用本方法检测 HL A - A 2等位基因的结果与用 PCR- SSP方法检测的结果一致。结论 :实验证明本分型技术具有质控好、特异性强、敏感性高、费用低廉。

淋巴瘤相关抗原肽刺激所获细胞毒性T细胞克隆的特征

目的研究抗肿瘤细胞毒性T淋巴细胞(CTL)克隆识别靶细胞的肽特异性和人类白细胞抗原(HLA)限制性,以及其赖以识别抗原肽的T细胞受体(TCR)基因表达序列的分子特征。方法利用体外CTL刺激扩增体系,应用免疫球蛋白重链可变区(IgHV)框架区上的B淋巴瘤相关抗原九肽(IgHV1QLVQSGAEV和IgHV3SLYLQMNSL)负荷的抗原递呈细胞(APC),刺激正常HLAA0201供者的外周血单个核细胞(PBMC),每周1次共4次,用流式细胞仪检测体外培养细胞的免疫表型的变化,并用肽/主要组织相容性基因复合体(MHC)四聚体方法检测肽特异性的CTL增殖情况。应用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测CTL与不同的靶细胞共同孵育时释放干扰素γ(IFNγ)的能力。应用逆转录多聚酶链反应(RTPCR)和T细胞受体(TCR)基因指纹谱型图方法检测培养前后的淋巴细胞的克隆变化,并用直接测序的方法得到CTL克隆的TCR基因序列。结果B淋巴瘤相关抗原肽4次刺激体外培养的PBMC后CD8+CTL大量增殖,CD4/CD8明显下降(0.10vs1.43,P<0.05)。IgHV1QLVQSGAEV/HLAA0201四聚体和CD8双阳性的肽特异性CTL数量(49.38%)比刺激前(0.04%)明显上升。ELISA检测IFNγ的分泌表明其识别靶细胞是肽特异性和HLA限制性的。TCR基因指纹谱型图显示抗原肽反复刺激获得的CTL的TCR表达集中于个别基因家族,呈克隆性增殖。结论应用IgHV基因框架区来源的B淋巴瘤相关抗原九肽可以使特异性CTL克隆增殖,这些克隆以肽特异性和HLA限制性的方式识别靶细胞。了解这些CTL的作用和TCR识别相关抗原肽的分子结构,将有助于确定体内T细胞和B细胞相互调节的机制。

HLA-Ⅰ、Ⅱ类基因多态性与原因不明复发性自然流产的关系

目的探讨HLA-Ⅰ类(A、B、C)、Ⅱ类(DRB1、DQB1)基因多态性与原因不明复发性自然流产(unexplained recurrent spontaneous abortion,URSA)的关联。方法选取解放军总医院第五医学中心免疫学实验室2014-2017年收治的25例URSA夫妇和同期50例正常妊娠夫妇进行HLA-A、B、C、DRB1及DQB1位点的基因分型,并分析HLA各基因频率及夫妇间HLA抗原相容性在病例组与对照组中的分布。结果URSA夫妇HLA-DQB1*05基因频率显著低于对照组(6%vs15%,OR=0.4,P=0.024);URSA妻子组HLA-A*11、B*48、DQB1*06基因分布频率明显高于对照组(30%vs15%、10%vs0、38%vs19%;OR=2.4、24.6、2.6;P均<0.05);A*02基因分布频率显著低于对照组(16%vs31%,OR=0.4,P=0.048);URSA丈夫组HLA-C*03、DRB1*12、DQB1*03基因分布频率明显高于对照组(36%vs19%、22%vs8%、50%vs33%;OR为2.4、3.2、2.0;P均<0.05);HLA-C*01、C*06基因分布频率显著低于对照组(6%vs19%、4%vs18%;OR=0.3、0.2;P均<0.05)。URSA夫妇间各位点HLA抗原相容性与对照组比较均无统计学差异。结论HLA*11、B*48、DQB1*06是URSA妻子易感基因,A*02是URSA妻子保护基因。C*03、DRB1*12、DQB1*03是URSA丈夫易感基因,C*01、C*06是URSA丈夫保护基因。DQB1*05是URSA夫妇的共同保护基因。

HLA-A新等位基因HLA-A＊2468的核苷酸序列分析

人类白细胞抗原（HLA）系统是目前所知最为复杂的人类遗传多态性系统，其复合体定位于6号染色体的短臂上，包括多个基因座位，每一个座位上有多个等位基因，目前发现的HLA等位基因已超过2799个^[1]。随着HLA分型技术的不断发展以及HLA研究的深入，新的等位基因被陆续发现^[2]。

HLA-A无效等位基因A＊2486N的全基因组序列分析

人类白细胞抗原（human leukocyte antigen,HLA）在造血干细胞移植和实体器官移植中发挥重要的作用.现已知HLA复合体是多位点的共显性复等位基因系统,包括多个基因座位,且每一个座位上有多个等位基因.随着HLA基因分型技术的不断完善和对HLA的深入认识,陆续发现新的等位基因。

HLA-A,-B和-Cw测序分型结果的再分析：现有的测序分型结果将来有多少不确定？

分子分型方法能够在基因组水平上检测人类白细胞抗原（HLA）基因多样性,其分型能力远远超过血清学方法.分子分型法的出现带动了被确认的HLA等位基因数的大量增长.这些等位基因的命名及其序列信息存储在免疫遗传学（IMGT）/HLA的数据库中,该数据库能够提供有关HLA等位基因最新的信息[http：//www.ebi.ac.uk/imgt/hla].尽管目前有多种不同的基于DNA的方法可用于HLA分型,例如序列特异性引物（SSP）扩增法和序列特异性寡核苷酸（SSO）杂交法,但测序分型技术（SBT）因为能够直接检测核苷酸序列,被证明是最有效的分型技术.