组织激肽释放酶基因多态性A1789G对高血压患者血浆肌酐水平的影响(英文)

目的:探讨组织激肽释放酶基因多态性对高血压患者血浆肌酐水平的影响。方法:用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(PCRRFLP)方法对733例高血压患者的组织激肽释放酶基因A1789G多态位点进行基因分型,用线性回归模型分析基因型与血浆肌酐水平之间的关系,用方差分析分析基因型和血压对血浆肌酐水平的交互影响。结果:携带突变型等位基因1789G(基因型AG或GG)高血压患者较携带野生型等位基因A1789(基因型AA)患者的血浆肌酐水平明显升高,且血浆肌酐水平随着血压的升高而升高。结论:组织激肽释放酶基因多态性对高血压患者的血浆肌酐水平产生明显影响,A1789G多态位点是高血压患者血浆肌酐清除率下降的一个危险因素。

高表达重组人组织激肽释放酶7基因的前列腺癌单克隆细胞株的构建

目的建立稳定高表达重组人组织激肽释放酶7基因(KLK7)的前列腺癌细胞株DU145,为前列腺癌发生机制的研究奠定基础。方法 PCR法扩增KLK7 cDNA,并克隆到真核表达载体pcDNA3.1上;经过限制性内切酶酶切、DNA测序验证正确后,以脂质体法转染人前列腺癌DU145细胞;通过G418筛选,每个单克隆细胞扩大培养,建立稳定转染KLK7的DU145单克隆细胞株。采用Western blot法检测DU145细胞株KLK7表达。结果酶切鉴定及DNA测序分析显示pcDNA3.1-KLK7真核表达载体成功构建;转染后,成功获得稳定高表达KLK7的DU145单克隆细胞株。Western blot结果显示,pcDNA3.1-KLK7转染的DU145细胞KLK7表达量明显高于转染空载体组细胞(P<0.01)。结论 pcDNA3.1-KLK7真核表达载体的建立及稳定高表达KLK7的前列腺癌单克隆细胞株的建立,为研究KLK7在前列腺癌发生发展中的作用提供了条件。

导入人组织激肽释放酶基因治疗肾血管性高血压实验研究

目的构建重组人组织激肽释放酶基因真核表达载体并研究其骨骼肌注射对高血压大鼠的降压效应。方法以pBluescripeⅡKSKLK(+)为模板用PCR扩增人组织激肽释放酶基因,将其定向克隆至pcDNA3载体上,形成重组质粒pcDNA3/KLK,并经酶切和测序鉴定。给“两肾一夹”肾性高血压大鼠的股四头肌注入1000μgpcDNA3/KLK,,随后给予100V、1Hz、40ms电刺激6次,并用RT PCR、Western杂交检测人KLKcDNA在体内的表达。尾套法测血压每周2次。结果一次肌肉注射人组织激肽释放酶cDNA可明显延缓“两肾一夹”肾性高血压大鼠的血压升高;能降低血压达8～21mmHg。局部肌肉组织的信使核糖核酸(mRNA)和KLK表达阳性。结论成功构建了pcD NA3/KLK真核表达载体,肌肉注射人组织激肽释放酶基因可引起“两肾一夹”肾性高血压大鼠血压的持续性下降,显示了人KLK基因对高血压患者降压治疗的可能性。

前列腺增生间质对上皮细胞组织激肽释放酶7表达的影响

目的:研究前列腺增生间质细胞对上皮细胞组织激肽释放酶7(KLK7)表达的影响。方法:分离良性前列腺增生(BPH)组织的间质细胞与上皮细胞,经细胞形态学及化学发光微粒子免疫分析(CM IA)方法证实后,构建上皮/间质细胞共培养模型;分别提取单独、共培养条件下上皮细胞的mRNA与蛋白;RT-PCR检测KLK7mRNA表达变化,W estern印迹检测KLK7基因编码蛋白(hK7)表达的改变。结果:细胞形态学、CM IA结果显示成功分离上皮与间质细胞,并构建前列腺间质/上皮细胞共培养模型;RT-PCR检测发现,KLK7基因mRNA的表达在有间质细胞共培养的上皮细胞中均高于单独培养的上皮细胞。KLK7/GAPDH的灰度比值分别为1.41±0.04、1.78±0.10,具有显著差异(P<0.01);W estern印迹与RT-PCR结果一致。结论:前列腺增生间质细胞抑制上皮细胞KLK7基因表达,KLK7可能是前列腺上皮细胞应对间质细胞调控的一种效应物质。

人组织激肽释放酶基因的克隆及测序分析

目的克隆中国人组织激肽释放酶基因 ,为开展基因治疗高血压研究奠定基础。方法提取人胰腺组织总RNA ,逆转录后进行PCR扩增。将PCR产物回收、插入质粒KS ,酶切鉴定后双向测序分析。结果本实验克隆的激肽释放酶基因与GenBank报告的激肽释放酶基因相比 ,有一个碱基不同 ,同源性为 99.8%。结论克隆的中国人组织激肽释放酶基因可用于基因治疗等深入研究工作。

人组织激肽释放酶基因重组腺病毒转染对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨重组腺病毒介导的人组织激肽释放酶(hKLK1)基因转移对血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导下的自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMCSHR)增殖和迁移的影响。方法:自行构建双顺反子重组腺病毒载体,携带强绿色荧光蛋白(EGFP)标志基因和目的基因hKLK1;用细胞计数法和四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞生长周期;蛋白免疫印迹法(Western blotting)测定细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白p27Kip1、p21Cip1的表达。采用改良Boyden微孔膜双槽法测定VSMCSHR迁移。结果:(1)hKLK1基因转移呈感染复数依赖性(20-100MOI)抑制PDGF-BB诱导的VSMCSHR生长,100MOI时抑制率为39.3%;呈时间依赖性抑制VSMCSHR生长,第5d时达高峰,抑制率为35.2%。(2)hKLK1基因转移可显著抑制PDGF-BB诱导的VSMCSHR增殖,峰值抑制率为30.2%(P<0.01);细胞周期阻滞于G0/G1期的VSMCSHR明显增多,最大阻滞率为36.4%(P<0.01),而缓激肽B2受体特异性阻断剂Hoe140逆转了hKLK的抑制作用。(3)hKLK1基因转移明显上调PDGF-BB诱导VSMCSHR的p27Kip1、p21Cip1表达,Hoe140明显降低p27Kip1、p21Cip1表达。(4)hKLK1基因转移可明显抑制PDGF-BB诱导的VSMCSHR细胞迁移,抑制率为34.6%,且Hoe140不影响该抑制作用。结论:hKLK1基因转移可抑制PDGF-BB诱导的VSMCSHR增殖,主要由缓激肽B2受体介导的,通过上调细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白p27Kip1、p21Cip1表达的途径。而hKLK1基因转移抑制VSMCSHR迁移效应可能不通过B2受体。

人组织激肽释放酶基因转移对血管平滑肌细胞迁移的影响

目的探讨重组腺病毒介导的人激肽释放酶(hKLK1)基因转移对血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导下的自发性高血压大鼠(SHR)的血管平滑肌细胞(VSMCSHR)迁移的影响。方法自行构建携带目的基因hKLK1和强绿色荧光蛋白(EGFP)基因的双顺反子重组腺病毒载体。采用组织贴块法培养SHR胸主动脉血管平滑肌细胞,接种第3～6代VSMCSHR于6孔板,分别加入含hKLK1重组腺病毒和对照病毒干预,3d后加入PDGF-BB诱导24h,采用改良Boyden微孔膜双槽法测定VSMCSHR迁移,并加入缓激肽受体B2特异性阻断剂Hoe140。RT-PCR法测定缓激肽B1受体、B2受体的mRNA表达。结果hKLK1基因转移可明显抑制PDGF-BB诱导的VSMCSHR细胞迁移,抑制率为34.6%,且Hoe140干预不产生影响。PDGF-BB诱导的VSMCSHR缓激肽B2受体mRNA表达明显增加(P<0.001),而Hoe140可明显降低其表达(P<0.01)。结论重组腺病毒介导的hKLK1基因转移可抑制PDGF-BB诱导的VSMCSHR迁移,这一效应可能不通过B2受体途径介导。

重组人组织激肽释放酶基因转染人脐静脉内皮细胞

目的 探讨重组人组织型激肽释放酶 (HK)基因腺相关病毒载体 (rAVV/HK)对体外培养的人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)作用。方法 将HK基因定向克隆入腺相关病毒质粒 pAAV MCS中 ,形成重组腺相关病毒 (rAAV HK)质粒 ,经聚合酶链反应 (PCR)检测和DNA测序后 ,将rAAV HK、pAAV Helper和 pAAV RC 3种质粒通过脂质体共转染 2 93细胞 ,包装成带有HK目的基因的重组rAVV/HK ,采用 β半乳糖苷酶原位染色法测定报告基因rAVV/LacZ在HT10 80中的表达 ,间接计算病毒滴度 ,并观察转染基因在传代细胞中的表达。在相同的条件下体外分别培养HUVECs(对照组 )和rAVV/HK转染的HUVEC(HK转染组 ) 4 8h ,采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测两组HUVECsHKmRAN的表达 ,并利用硝酸还原酶法和分光光度法分别检测两组HUVECs一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶 (NOS)活性。结果 rAVV/HK病毒滴度为 6 .2× 10 7个 /mL ,LacZ基因能够在第一传代和第六代HT10 80细胞内稳定持续表达。与对照组比 ,HK转染组HUVECsHKmRNA表达增加 (P <0 0 0 1) ;而且HK转染组HUVECs细胞培养液中NO的含量和NOS活性明显增高 ,P值分别 <0 0 1和 <0 0 5。结论 HK基因通过重组腺相关病毒载体可成功转染体外培养的HU VECs ,使其HKmRNA表达增加 。

卵巢上皮性癌组织中人组织激肽释放酶基因14的表达

目的:检测卵巢上皮性癌组织中人组织激肽释放酶基因14(KLK14)mRNA和蛋白的表达。方法:应用RT-PCR和免疫组化SP法检测正常卵巢、良性卵巢肿瘤、交界性卵巢肿瘤和卵巢上皮性癌组织中KLK14mRNA和蛋白的表达,分析其表达与卵巢上皮性癌患者临床病理特征的关系。结果:卵巢上皮性癌组织中KLK14mRNA的相对表达量(1.36±0.24)高于正常卵巢组织(0.63±0.19)(t=8.432,P<0.001);卵巢上皮性癌组织中KLK14蛋白的阳性表达率为61.4%,与正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤和交界性卵巢肿瘤相比,差异有统计学意义(χ2=21.648,P<0.001)。KLK14蛋白的表达与卵巢上皮性癌的FIGO分期(χ2=5.759,P=0.016)、组织学分级(χ2=4.671,P=0.031)和淋巴结转移(χ2=8.254,P=0.004)相关。结论:KLK14可能参与了卵巢上皮性癌的侵袭和转移。

组织激肽释放酶7高表达前列腺癌PC-3单克隆细胞株的构建及其侵袭性研究

目的:构建重组人组织激肽释放酶7(KLK7)表达载体,建立稳定过表达KLK7的前列腺癌细胞株PC-3,并研究其细胞侵袭性。方法:将扩增后的KLK7cDNA克隆到表达载体pcDNA3.1上;使用限制性内切酶酶切后,DNA测序验证。然后,通过脂质体法转染人前列腺癌细胞株PC-3;选用G418进行筛选,并扩大培养每个单克隆细胞,进而建立稳定转染后的KLK7单克隆细胞株PC-3;Western blot检测目的蛋白的表达。通过细胞侵袭性试验了解其细胞侵袭性。结果:①通过酶切鉴定、DNA测序分析并证明,成功构建pcDNA3.1-KLK7表达载体;②成功获得稳定过表达KLK7的前列腺癌单克隆细胞株PC-3;③Western blot结果显示:经过pcDNA3.1-KLK7转染后的细胞与未转染的细胞表达量比较有统计学差异(P<0.01);④细胞侵袭性试验结果显示:转染后的细胞侵袭性高于未转染的细胞。结论:成功的建立pcDNA3.1-KLK7表达载体及稳定过表达KLK7的前列腺癌PC-3单克隆细胞株,同时证明其细胞侵袭性,为研究KLK7在前列腺癌发生、发展中的作用奠定了基础。

汉族人群组织激肽释放酶基因调控序列多态性分析

目的 分析组织激肽释放酶基因 5’端启动子区域多态性在四川地区汉族人群中的分布。方法 应同PCR技术结合等位基因特异寡核苷酸片段分析的方法 (ASO)对 13 2例四川地区健康汉族人的组织激肽释放酶基因用十种探针进行检测 ,分析等位基因频率的分布。结果 组织激肽释放酶基因的A、B、C、D、E、H、K、P的频率分别为 2 2 .7%、9.8%、9.8%、3 .0 %、9.1%、2 3 .1%、16.3 %、6.1%。结论 在我国四川地区的健康汉族人群中 ,该位点确实存在多态性。

组织激肽释放酶基因调控序列多态性与高血压关系的初步分析

目的 初步探讨组织激肽释放酶基因调控序列启动子多态性与中国人原发性高血压 (EH)的相关性。方法 应用PCR技术结合等位基因特异寡核苷酸片段分析 (ASO)方法 ,对 40例EH患者和正常人的组织激肽释放酶基因用A、B两种探针检测 ,比较两组间的等位基因分布频率差异 ,初步分析该SNP位点与高血压的关系。结果 组织激肽释放酶基因A、B型在对照组中频率为 65 %、10 % ,在高血压组中频率为 60 %、10 % ,两组比较有差异 ,但无统计学意义。结论 在中国汉族人群中 ,该基因位点确实有多态性 ;A、B两型均有分布 。

血清发育内皮细胞基因-1、组织激肽释放酶结合蛋白对脓毒症患者病情严重程度及预后评估研究

目的探讨血清发育内皮细胞基因-1(Del-1)、组织激肽释放酶结合蛋白(KS)对脓毒症患者病情严重程度及预后的评估价值。方法选取2017年5月至2019年5月东台市人民医院重症医学科收治的120例脓毒症患者为研究对象,根据病情严重程度分为脓毒症组(n=77)和脓毒症休克组(n=43)。另选健康体检者60例为健康组。比较各组血清Del-1、KS差异。采用Pearson相关法分析血清Del-1、KS与序贯器官衰竭评分(SOFA)、急性生理与慢性健康评分(APACHEⅡ)的相关性;应用logistic回归分析脓毒症患者28 d死亡的危险因素;采用受试者工作特征曲线(ROC)分析Del-1、KS对脓毒症患者28 d死亡的预测价值。结果脓毒症休克组及脓毒症组患者的血清Del-1水平均高于健康组,且脓毒症休克组高于脓毒症组患者;脓毒症休克组及脓毒症组患者血清KS水平均低于健康组,且脓毒症休克组低于脓毒症组患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。死亡组患者的血清Del-1水平高于存活组,KS水平低于存活组,差异有统计学意义(P<0.05)。脓毒症患者血清Del-1与SOFA评分、APACHEⅡ评分呈正相关,血清KS与SOFA评分、APACHEⅡ评分呈负相关。ROC曲线显示,血清Del-1及KS联合检测预测脓毒症患者死亡的曲线下面积、敏感度和特异度分别为0.912、0.909和0.771。结论脓毒症患者的血清Del-1、KS是评估脓毒症病情严重程度及不良预后的重要指标,两项联合检测有助于监测、评估脓毒症患者的病情变化及预后,对及时治疗脓毒症患者有指导意义。

人组织激肽释放酶基因应用于高血压治疗的研究进展

人组织激肽释放酶通过缓激肽 B_1、B_2受体引发机体合成前列腺素、NO 和血管舒张因子等增多而引起血压降低。因此组织激肽释放酶及其基因可以应用于高血压治疗。目前应用人组织激肽释放酶基因进行高血压治疗主要从两方面人手:一是应用组织激肽释放酶基因进行高血压基因治疗,存在用药安全及降压效果问题;二是利用组织激肽释放酶基因进行生物工程制药,存在如何量化生产问题。

人类组织激肽释放酶家族研究进展

人类组织激肽释放酶家族由 15个成员组成 ,它们位于同一染色体 (19q13.4 )上 ,在核苷酸及蛋白水平上具有很大的同源性 .研究发现它们与多种疾病的发病有关 ,尤其是前列腺癌等恶性肿瘤。

人组织激肽释放酶基因家族与胃肠道肿瘤检测

激肽释放酶是人体激肽释放酶一激肽系统（kallikreinkinin system）的主要成分，是一种丝氨酸蛋白酶，能够使激肽原释放出激肽，它具有很高的生理学活性．在人体组织中起着十分重要的生理作用。激肽释放酶分为组织激肽释放酶（TK）和血浆激肽释放酶（PK）两大类，这两种酶在分子量、底物特异性、免疫学特征、基因结构和释放出的激肽种类等方面均有显著的不同。

人类激肽释放酶基因家族及其在卵巢癌中的研究进展

人类激肽释放酶基因家族是新近发现的一组具有丝氨酸蛋白酶活性的物质,定位于人类染色体19q13.3～13.4上,受类固醇激素的调节,目前其生物学作用尚未完全明确。但有研究表明其在卵巢癌中可能具有成为肿瘤标志物的潜能,对卵巢癌的早期诊断、疗效评价及预后判断具有一定的价值。