滇南小耳猪正常胆道和胆道瘢痕来源成纤维细胞核转录因子κB和凋亡调控蛋白FLICE样抑制蛋白的表达

背景:胆道瘢痕形成存在细胞的增殖和凋亡的平衡被破坏,尤其是成纤维细胞大量增殖并过度分泌胶原等基质成分。目的:对比核转录因子κB及其下游抗凋亡caspase-8同源结构FLICE抑制蛋白在胆道瘢痕及正常胆道来源的成纤维细胞系中的表达情况。方法:8只滇南小耳猪随机等分为胆道损伤修复组和正常对照组,分别通过建立胆道损伤修复模型和不损伤胆道方法培养胆道瘢痕及正常胆道来源的成纤维细胞。结果与结论:与正常胆道来源的成纤维细胞相比,胆道瘢痕来源的成纤维细胞中核转录因子κB及凋亡调控蛋白FLICE样抑制蛋白表达的范围更广,表达更强。提示胆道损伤后核转录因子κB激活增加,并导致caspase-8同源结构FLICE抑制蛋白过表达,从而导致胆道成纤维细胞凋亡减少致胆道瘢痕的形成。

细胞型FLICE样抑制蛋白、T-box转录因子在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及意义

目的探讨口腔鳞状细胞癌(OSCC)中细胞型FLICE样抑制蛋白(c FLIP)及T-box转录因子(TBX2)的表达及其临床意义。方法采用免疫组化检测OSCC 57例、口腔黏膜上皮异常增生组织(DOM)38例及正常黏膜组织(NOM)30例中c FLIP、TBX2蛋白表达情况。运用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术检测OSCC、DOM和NOM中的c FLIP m RNA和TBX2 m RNA表达水平。结果在OSCC、DOM及NOM中,c FLIP的阳性表达率分别为91.23%、84.21%和10.00%;TBX2的阳性表达率分别为87.72%、81.85%和26.67%。c FLIP及TBX2的表达水平与患者的年龄、性别无关,差异无统计学意义(P>0.05),而肿瘤TNM分期以及有无淋巴结转移间差异有统计学意义(P<0.05)。OSCC中c FLIP m RNA及TBX2 m RNA的表达水平明显高于DOM及NOM。c FLIP m RNA及TBX2m RNA的表达水平与患者的年龄、性别无关,差异无统计学意义(P>0.05),而肿瘤TNM分期以及有无淋巴结转移间差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关性分析显示c FLIP及TBX2的表达呈正相关(r=0.768,P<0.05)。结论 c FLIP及TBX2在OSCC中呈高表达,两者可能在OSCC的发生、发展中发挥重要的作用。

老年前列腺癌患者组织B淋巴细胞瘤-2蛋白、细胞FLICE样抑制蛋白表达水平与临床病理特征及预后的关系

目的研究老年前列腺癌患者组织B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、细胞FLICE样抑制蛋白(cFLIP)表达水平与临床病理特征及预后的关系。方法选取2016年6月至2019年6月庐江县人民医院收治的93例行前列腺癌根治术的老年患者作为研究对象。分别留取其的肿瘤组织、癌旁组织及正常前列腺组织标本,采用免疫组织化学法检测3种组织中Bcl-2、cFLIP蛋白表达水平,结合患者临床病理特征进行分析,采用Kaplan-Meier生存曲线对患者24个月的生存情况进行比较。结果肿瘤组织中Bcl-2、cFLIP阳性表达率分别为73.12%和68.82%,与癌旁组织和正常前列腺组织比较,差异具有统计学意义(P<0.05);肿瘤组织Bcl-2、cFLIP阳性率与患者年龄、术前前列腺特异抗原水平无相关性(P>0.05),但与患者Gleason评分、肿瘤TNM分期,以及淋巴结转移、骨转移相关(P<0.05);前列腺癌组织Bcl-2及cFLIP蛋白阳性表达患者24个月生存率明显低于阴性表达患者(P<0.05)。结论Bcl-2、cFLIP蛋白在老年前列腺癌患者组织中高表达,且与患者临床病理特征和预后相关,可能作为老年前列腺癌的治疗靶点。

果蝇zeste基因增强子的人类同源物2促进小细胞肺癌化疗耐药的作用及其分子机制

目的:观察果蝇zeste基因增强子的人类同源物2(Enhancer of zeste homologue 2,EZH2)对小细胞肺癌(Small cell lung cancer,SCLC)化疗耐药的影响并研究其潜在分子机制。方法:首先使用RT-PCR和蛋白印迹方法检测SCLC初治和耐药患者组织标本、敏感细胞株(H446)和耐药细胞株(H446DDP)的EZH2表达差异;再通过CCK8方法检测敲低EZH2后的耐药SCLC细胞株对化疗药物半抑制浓度(Half maximal inhibitory concentration,IC50)值变化;最后通过RNA测序和验证方法筛查EZH2的下游靶基因以及CHIP-qPCR方法检测EZH2敲低后其靶基因启动子区的EZH2表达变化。结果:SCLC化疗耐药患者EZH2阳性表达水平(80%)高于化疗敏感患者,耐药细胞株(H446DDP)的EZH2 mRNA和蛋白表达水平均高于敏感细胞株(H446)(P<0.01,P<0.001);敲低EZH2表达后,耐药SCLC细胞株对化疗药物IC50值降低;细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂-1A(Cyclin-Dependent Kinase Inhibitor 1A,CDKN1A)表达增加,且CDKN1A基因启动子EZH2蛋白沉积显著减少。结论:EZH2促进SCLC化疗耐药,其分子机制与EZH2靶向调控CDKN1A基因表达相关。

人类嗜T淋巴细胞病毒1型Tax1蛋白在头颈部腺样囊性癌中的表达与预后分析及机制探索

目的探讨人类嗜T淋巴细胞病毒1型(human T-lymphotropic virus 1,HTLV-1)与头颈部腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)发病及其远处转移的相关性。方法采用免疫组织化学及Western blot分析伴或不伴有远处转移ACC患者样品、ACC低侵袭力细胞系(SACC-83)、高侵袭力细胞(SACC-LM)及人单核细胞白血病细胞系(THP-1)中HTLV-1 Tax1蛋白、Myb、Notch同源蛋白1(neurogenic locus notch homolog protein 1,Notch1)和维甲酸信号通路蛋白RARA的表达,Pearson分析Tax1蛋白与肺转移及以上信号分子的相关性。结果11例ACC患者Tax1蛋白细胞核阳性表达,4例患者Myb细胞核阳性表达,6例患者Notch1细胞膜和细胞浆阳性表达,8例患者RARA细胞核阳性表达。选取2例ACC和细胞样本进行Western blot验证,1例与免疫组织化学结果不一致。Pearson分析Tax1与RARA蛋白呈正相关,与远处转移呈相关趋势,但与Myb和Notch1表达无显著相关性。结论HTLV-1感染可能影响体内维生素A代谢通路,与ACC患者发生远处转移相关。

一个新磷酸酶张力蛋白样同源物亚型的研究

目的鉴定新发现磷酸酶张力蛋白样同源物(phosphatase and tensin homolog,PTEN)亚型的生物活性及潜在的肿瘤抑制作用。方法蛋白印迹法、免疫共沉淀法检测各细胞株PTEN、PTEN亚型(upper PTEN,UPP)的表达;细胞转染法转染PTEN、UPP、空载体于Hep G2和PC3细胞,细胞增殖法检测PTEN、UPP对各株癌细胞生长情况的影响。结果 UPP是一种紧密依赖于PTEN而存在的蛋白。UPP不是PTEN蛋白翻译后修饰产物,可能是PTEN蛋白选择性剪接体。与转染空载体相比,转染UPP和PTEN于Hep G2和PC3细胞,细胞增殖明显抑制,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 UPP可能是PTEN蛋白选择性剪接产物,可能是一个新的肿瘤抑制因子。

抑制EZH2表达对宫颈癌细胞凋亡的影响及机制

目的观察抑制人类Zest同源增强子(EZH2)表达对宫颈癌细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响。方法选择人宫颈癌细胞系Siha和C33A细胞,采用MTT法确定EZH2抑制剂3-去氮腺嘌呤(DZNep)在两种细胞中的半数抑制浓度(IC_(50))。将两种细胞分为DMSO组、1/2 IC_(50)组和IC_(50)组,分别以DZNep终浓度0、3、6μmol/L处理Siha细胞各组,以0、2、4μmol/L处理C33A细胞各组。培养48 h后收集各组细胞,采用流式细胞仪检测细胞早期凋亡情况,采用Western blotting法检测EZH2蛋白、抗凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-X基因长片段(Bcl-xL)、促凋亡蛋白Bcl-2家族细胞凋亡相互作用因子(Bim)、半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达。结果在Siha、C33A细胞中,1/2 IC_(50)组、IC_(50)组早期凋亡率均高于DMSO组,IC_(50)组早期凋亡率均高于1/2 IC_(50)组(P均<0. 05)。IC_(50)组EZH2蛋白表达均低于1/2 IC_(50)组、DMSO组(P均<0. 05); IC_(50)组Bcl-xL蛋白表达均低于1/2 IC_(50)组、DMSO组,Bim和Caspase-3蛋白表达均高于1/2 IC_(50)组、DMSO组(P均<0. 05)。结论利用DZNep抑制宫颈癌细胞EZH2的表达后,能够诱导宫颈癌细胞早期凋亡,其机制可能与下调Bcl-xL蛋白表达并上调Bim和Caspase-3蛋白表达有关。

mTOR抑制剂AZD2014对肝癌细胞的增殖抑制作用及其机制研究

目的:初步探讨mTOR抑制剂AZD2014对肝癌细胞的增殖抑制作用及其机制。方法:先采用CCK-8法检测不同浓度的AZD2014(10、100、500、1000 nmol/L)对肝癌细胞增殖的作用,再分别采用荧光定量PCR和Western blot法检测肝癌细胞中含植物同源结构和环指域泛素样蛋白1(UHRF1)mRNA和蛋白的表达水平。结果:细胞增殖实验结果显示,10、100、500、1000 nmol/L的AZD2014均可显著抑制肝癌细胞的增殖能力,抑制程度与其浓度呈正相关(P<0.05);荧光定量PCR和Western blot检测结果显示,500和1000 nmol/L的AZD2014可显著降低肝癌细胞内UHRF1 mRNA及蛋白的表达水平。结论:AZD2014可能通过抑制肝癌细胞内UHRF1的表达水平来抑制肝癌细胞的增殖能力。

毛蕊异黄酮抑制肺腺癌细胞增殖和迁移的miR-21/PTEN信号通路机制研究

目的:探讨毛蕊异黄酮(CA)通过调控微RNA-21(miR-21)/人类第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)信号通路对肺腺癌细胞增殖和迁移的抑制作用机制。方法:以人肺腺癌SPC-A1细胞为对象,采用MTT法检测不同剂量CA(5、15、25、50、75、100μg/mL)作用12、24、48、72 h后的细胞增殖情况,并计算细胞存活率、30%细胞生长抑制浓度(IC30)和半数抑制浓度(IC50);采用Transwell迁移试验检测低、中、高剂量CA(50、75、100μg/mL)作用24 h后的细胞迁移情况,记录染色细胞数并计算细胞迁移抑制率;采用蛋白质印迹法和实时聚合酶链反应法检测低、中、高剂量CA(50、75、100μg/mL)作用24 h后细胞miR-21以及PTEN、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白及其mRNA的表达情况;检测细胞在分别转染miR-21模拟物(mimic)和抑制物(inhibitor)后,CA(75μg/mL)对其miR-21及PETN、VEGF、MMP-9蛋白表达的影响。结果:经50、75、100μg/mLCA作用12、24、48 h,25、50、75、100μg/mL CA作用72 h后,细胞存活率均显著降低(P<0.05或P<0.01);12~72 h各时间点CA的IC30值分别为82.24、50.45、46.34、31.81μg/mL,IC50值分别为108.06、73.35、70.08、49.89μg/mL。与正常对照组比较,CA各剂量组染色细胞数,低剂量组细胞中VEGF蛋白以及中、高剂量组细胞中miR-21,VEGF、MMP-9蛋白及其mRNA的相对表达量均显著减少或降低,且中、高剂量组显著少于或低于低剂量组,高剂量组显著少于或低于中剂量组(P<0.05或P<0.01);CA各剂量组细胞迁移率以及中、高剂量组细胞中PTEN蛋白及其mRNA的相对表达量均显著升高,且中、高剂量组显著高于低剂量组,高剂量组显著高于中剂量组(P<0.05或P<0.01)。转染miR-21mimic后,miR-21mimic组细胞miR-21及VEGF、MMP-9蛋白的相对表达量均较正常对照组显著升高,PTEN蛋白的相对表达量显著降低(P<0.01);加入CA干预后,细胞中miR-21及VEGF、MMP-9蛋白的相对表达量均较miR-21mimic组显著降低,PTEN蛋白的相对表达量均显著升高(P<0.05或P<0.01)。转染miR-21 inhibitor后,miR-21 inhibitor组细胞中miR-21及VEGF、MMP-9蛋白的相对表达量均较正常对照组显著降低,PTEN蛋白的相对表达量显著升高(P<0.05或P<0.01);加入CA干预后,细胞中miR-21及上述蛋白的表达较miR-21 inhibitor组均未见明显变化(P>0.05)。结论:CA可剂量依赖性地抑制肺腺癌SPC-A1细胞的增殖和迁移,且这种作用可能与调控miR-21/PTEN信号通路有关。

抑癌基因磷酸酶与张力蛋白同源物、巨噬细胞移动抑制因子在高分化子宫内膜样腺癌及癌前病变中表达意义的探讨

目的探讨抑癌基因磷酸酶与张力蛋白同源物（PTEN）、巨噬细胞移动抑制因子（MIF）在高分化子宫内膜样腺癌及癌前病变中表达的意义。方法 126例高分化子宫内膜样腺癌及癌前病变、10例正常的增生期子宫内膜,应用RT-PCR方法测定中PTEN mRNA,应用免疫组织化学检测PTEN、MIF蛋白的表达情况。结果高分化宫内膜样腺癌组、子宫内膜不典型增生组PTEN mRNA表达率明显低于增生期子宫内膜组,差异有统计学意义（t值分别为23.39、24.06,均P〈0.01）;高分化宫内膜样腺癌PTEN mRNA表达率低于子宫内膜不典型增生组,但差异无统计学意义（t=1.70,P〉0.05）。在增生期子宫内膜组、子宫内膜轻/中度不典型增生组、子宫内膜重度不典型增生组及高分化宫内膜样腺癌组,PTEN蛋白表达率逐渐降低,MIF蛋白表达率依次升高,两者表达呈显著负相关（rs=-0.172 7,P〈0.05）。PTEN蛋白在病变组表达率与增生期子宫内膜组比较差异均有统计学意义（χ^2值分别为7.07、12.07、17.07,P〈0.01）,但在病变组之间比较差异无统计学意义（χ^2值分别为0.73、1.85和0.21,均P〉0.05）;MIF蛋白在子宫内膜重度不典型增生组和高分化宫内膜样腺癌组阳性率显著高于子宫内膜轻/中度不典型增生组和增生期子宫内膜组,差异有统计学意义（χ^2值分别为4.01、6.35、5.91、7.90,P〈0.05）,但在子宫内膜重度不典型增生组和高分化宫内膜样腺癌组比较差异无统计学意义（χ^2值分别为1.29、0.08,均P〉0.05）。结论 PTEN与MIF蛋白异常表达共同参与子宫内膜癌的发生、发展,是子宫内膜样腺癌发生的早期事件。联合检测PTEN与MIF蛋白表达情况对子宫内膜样腺癌的发生、发展具有一定的预测作用,但对子宫内膜重度不典型增生和宫内膜样腺癌鉴别诊断帮助不大。

细胞FLICE样抑制蛋白通过抑制程序性坏死减轻心肌缺血-再灌注损伤

目的基于RIPK1/RIPK3/MLKL介导的程序性坏死途径,探讨细胞FLICE样抑制蛋白(cellular FLICE-like inhibitory protein,cFLIP)对心肌缺血再灌注损伤的调节作用。方法通过缺氧4 h/复氧12 h构建心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)模型,通过结扎左前降支30 min/再灌注3 h构建大鼠心肌缺血-再灌注(ischemia reperfusion,I/R)模型,使用CCK-8检测各组心肌细胞活力,使用DAPI/PI双染色检测各组心肌细胞坏死率变化,使用STRING数据库预测cFLIP的蛋白互相作用网络,使用TTC染色检测各组大鼠心肌梗死面积,使用Western Blot检测cFLIPL、cFLIPS、p-RIPK1、p-RIPK3以及p-MLKL的蛋白表达或活化水平。结果在心肌细胞H/R损伤和心肌组织I/R损伤过程中,cFLIPL和cFLIPS的蛋白表达均被显著下调,而程序性坏死的相关蛋白RIPK1、RIPK3以及MLKL的磷酸化水平均显著上升。上调cFLIP的蛋白表达可明显地减轻心肌细胞H/R损伤、降低H/R诱导的细胞坏死率并缩小I/R导致的心肌梗死面积。STRING数据库结果显示cFLIP与RIPK1和RIPK3存在直接蛋白相互作用,在心肌细胞H/R损伤模型和心肌组织I/R模型中过表达cFLIP均可显著抑制了RIPK1、RIPK3以及MLKL的磷酸化水平。结论过表达cFLIP可显著抑制RIPK1/RIPK3/MLKL介导程序性坏死发生,从而减轻心肌细胞损伤并缩小心肌梗死面积。

HIV感染者外周血PD-1、TIGIT基因表达水平与T细胞分化、凋亡分子分泌的相关性

目的分析人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者外周血程序性死亡分子1(PD-1)、T细胞免疫球蛋白及免疫酪氨酸样抑制基序(TIGIT)表达水平与T细胞分化、凋亡分子分泌的相关性。方法 选择2013年6月—2018年8月四川省甘孜藏族自治州人民医院传染病科确诊为HIV感染的患者80例作为HIV组,同期于医院体检的健康者60例作为健康对照组。采集2组外周血后测定PD-1、TIGIT基因表达水平、T细胞亚群的的数目、凋亡分子的含量。结果 与健康对照组比较,HIV组外周血中PD-L1及TIGITmRNA表达水平、Th2、Th9、Treg细胞的数目以及血清Fas、FasL、TNF-α、TRAIL的含量均明显升高(t/P=22.399/0.000、17.504/0.000、19.838/0.000、34.614/0.000、18.963/0.000、26.822/0.000、14.005/0.000、21.289/0.000、21.987/0.000),外周血Th1、Th17细胞的数目以及血清Bcl-2的含量均明显降低(t/P=27.206/0.000、16.579/0.000、23.095/0.000);HIV组外周血PD-L1及TIGITmRNA表达水平与Th1、Th17细胞的数目以及Bcl-2的含量呈负相关(r=-0.623、-0.591、-0.657及-0.452、-0.524、-0.612,P均<0.05),与Th2、Th9、Treg细胞的数目以及FasL、Fas、TNF-α、TRAIL的含量呈正相关(r=0.475、0.563、0.608、0.498、0.632、0.574、0.538及0.475、0.551、0.561、0.494、0.601、0.526、0.583,P均<0.05)。结论 HIV感染者外周血PD-1、TIGIT的高表达能够影响CD4+T细胞亚群的分化以及凋亡分子的分泌。

组蛋白甲基转移酶在纤维化疾病中的作用机制及其中药干预研究进展

纤维化是介于良恶之间的类肿瘤病变,纤维化多发生于肝脏、肾脏、心脏、肺脏、骨髓等器官组织中,几乎可以影响每一个器官,并最终诱发多器官衰竭,引起癌变,严重危害生命健康。如能在纤维化阶段及时将病情阻断,防止癌变,具有重要意义。器官纤维化发病机制目前仍未完全明确,研究纤维化的发生发展与作用机制及治疗靶点的筛选具有重要的临床意义。组蛋白甲基转移酶主要定位于细胞核中参与构成多梳抑制复合物,使组蛋白H3的第27位赖氨酸发生三甲基化修饰(H3K27me3),并通过经典和非经典作用诱导基因沉默,发挥转录抑制或转录激活作用。他在细胞生长、增殖、分化及凋亡方面发挥重要作用,其作用与不同靶点和信号通路的调控有关。Zeste人类同源物2(EZH2)调节肌成纤维细胞的转化并参与多个组织的纤维化,近年来的研究显示EZH2在纤维化相关的上皮间质转化、氧化应激、炎症反应等病理生理过程中扮演重要角色。以EZH2为靶点各器官纤维化的研究、特异性EZH2抑制剂及EZH2相关中药活性成分与中药复方的研究逐渐成为热门研究方向,EZH2可能是器官纤维化的潜在有力靶点。探究EZH2的结构功能分布、在纤维化疾病的作用机制、其抑制剂的开发及挖掘靶向EZH2的中药及其活性成分,具有重要意义。综述EZH2在纤维化疾病中的研究进展,可以为纤维化的诊断,治疗及药物开发提供新的思路。

KIR/HLA受配体模式及抑制性KIR的表达对单倍体造血干细胞移植的影响

目的探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体/人类白细胞抗原(KIR/HLA)受配体模式及移植后抑制性杀伤免疫球蛋白类受体(iKIR)的表达对单倍体造血干细胞移植预后的影响。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应(SSP-PCR)方法,对14对HLA半相合供/受者移植前进行KIR与HLA分型,同时分析KIR/HLA的受配体模式,用四色流式细胞技术对其中8例患者在移植后检测CD158a(KIR2DL1)、CD158b(KIR2DL2)、CD158e(KIR3DL1)的表达。结果 3例受者表达供者所有iKIR相应配体HLA-C2、C1、Bw4,此3对供受者即为KIR配体相合组;另外11对存在KIR配体缺失的供受者则为KIR配体迷失组。KIR配体迷失组患者移植后中性粒细胞及血小板重建时间较KIR配体相合组均较晚,但差异无统计学意义(P>0.05)。KIR配体迷失组患者移植后2年持续缓解率和2年总生存率高于KIR配体相合组,但差异无统计学意义(P>0.05)。移植后监测iKIR发现受者均表达供者型iKIR,4例患者复发时监测NK细胞及iKIR表达明显降低。结论在HLA半相合造血干细胞移植中,移植后动态监测iKIR的表达可预示复发,KIR/HLA受配体错配可能有助于提高移植后缓解率和总生存率。

BUB1表达对结直肠癌细胞增殖、凋亡及PLK1/PTEN信号通路的影响

目的探讨苯并咪唑出芽抑制解除同源物蛋白1(BUB1)表达对结直肠癌细胞增殖、凋亡及Polo样激酶1(PLK1)/10号染色体上缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)信号通路的影响,以期为结直肠癌的临床治疗提供理论依据。方法以2018年8月至2020年8月在该院收集的125对结直肠癌患者癌组织及邻近癌旁组织,以及人结直肠癌细胞系SW1116、SW480、HCT116、HT-29与人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460为研究对象;利用Lipofectamine^(TM)2000转染试剂盒对SW480细胞进行转染,并分组为空白组(细胞未转染)、si-NC组(细胞转染si-NC)、si-BUB1-1组(细胞转染si-BUB1)、si-BUB1-2组(细胞转染si-BUB1-2)。Western blot检测各组细胞中BUB1、促凋亡蛋白Bax、抗凋亡蛋白Bcl-2及PLK1/PTEN信号通路相关蛋白表达;CCK-8法检测各组细胞在0、24、48、72 h的增殖情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果BUB1在结直肠癌组织的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05);与人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460比较,人结直肠癌细胞SW1116、SW480、HCT116、HT-29中BUB1表达水平均显著升高(P<0.05),且BUB1表达水平在SW480细胞中最高,因此,选择SW480细胞进行后续研究;与空白组和si-NC组比较,si-BUB1-1组、si-BUB1-2组SW480细胞中细胞凋亡率、Bax及PTEN蛋白表达水平显著升高,细胞增殖能力及BUB1、Bcl-2、PLK1表达水平显著降低(P<0.05),空白组与si-NC组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论抑制BUB1表达可抑制癌细胞增殖,促进细胞凋亡,该机制可能与PLK1/PTEN信号通路中PLK1表达水平下调,PTEN蛋白表达水平上调有关。

抗凋亡蛋白cFLIP在山羊妊娠黄体中的表达

为研究山羊妊娠黄体中抗凋亡蛋白,即细胞FLICE样抑制蛋白(cellular FLICE-Like inhibitory protein,cFLIP)的表达,分析探讨cFLIP在维持山羊正常妊娠黄体中的作用。试验收集山羊不同妊娠阶段(19,31,92,142 d)的黄体组织,分别采用RT-PCR、Western blot及免疫组织化学分析等方法,以确定cFLIP免疫定位,检测cFLIP mRNA及其蛋白在山羊不同妊娠阶段黄体中的表达水平;分别以3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)mRNA和β-肌动蛋白(β-actin)作为内在对照。结果显示,cFLIP短链(cFLIP_S)和cFLIP长链(cFLIP_L)的mRNA及cFLIP_S蛋白在妊娠期各阶段的表达水平无显著性差异(P>0.05),而妊娠31d的cFLIP_L蛋白的表达水平却显著低于其他妊娠组(P<0.05);免疫染色结果显示,cFLIP蛋白的阳性反应在山羊妊娠不同阶段的黄体中均有高度表达;在妊娠19,92,142 d的黄体中均有观察到PCNA阳性,在妊娠31 d发现PCNA阳性较微弱;并且在所有妊娠组黄体中,几乎观察不到细胞凋亡(TUNEL阳性)。因此,推测cFLIP作为一种生存因子,参与维持山羊正常妊娠,其在妊娠黄体组织中的高水平表达可能在维持山羊正常妊娠中发挥抗凋亡作用。

HIV感染合并肺部感染患者 CD3+CD4+-T细胞表达的研究

目的探讨α干扰素(Interferon-α,IFN-α)、干扰素诱导基因56(Interferon-stimulated gene 56,ISG56)、粘病毒抵抗蛋白A(Myxovirus resistance protein A,MxA)、免疫调控受体程序性死亡分子1(Programmed death-1,PD-1)和T细胞免疫球蛋白及免疫酪氨酸样抑制基序(T cell immunoglobulin and ITIM domain,TIGIT)对人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)合并肺部感染患者CD3^+CD4^+-T细胞表达的影响。方法选取2016年12月-2017年12月于余姚市市人民医院就诊的52例HIV合并肺部感染患者作为研究组进行研究,另选择同期48例HIV未合并肺部感染患者作为对照组,检测患者外周血CD3^+CD4^+-T细胞表面的IFN-α、ISG56、MxA、PD-1和TIGIT指标水平情况。结果研究组CD3^+CD4^+-T细胞比例高于对照组(P<0.05);研究组IFN-α、ISG56、MxA分别为(15.82±5.31)、(0.74±0.22)、(0.83±0.14)pg/ml低于对照组(P<0.001);研究组TIGIT和PD-1的CD3^+CD4^+-T细胞分别为(23.61±12.83)%、(51.32±13.74)%高于对照组(P<0.05);研究组TIGIT CD3^+CD4^+-T细胞表面百分数与CD4+-T细胞绝对数呈负相关(P=0.027);与病毒载量呈正相关(P=0.001);研究组PD-1CD3^+CD4^+-T细胞表面百分数与CD4+-T细胞绝对数呈负相关(P=0.026);与病毒载量无相关性(P=0.711)。结论HIV合并肺部感染患者,CD3^+CD4^+-T细胞占比上升,IFN-α、ISG56、MxA降低,TIGIT和PD-1升高,相关指标变化证明当受到感染时机体免疫功能会发生紊乱,且与HIV疾病进展具有一定程度的相关性,具有一定的临床价值。

HPV感染孕妇MCP-1和NOB1与TLR3及其诊断价值

目的 探讨人乳头状瘤病毒(HPV)感染孕妇单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、酵母基因Noblp人类同源基因(NOB1)、Toll样受体3(TLR3)表达及其诊断价值。方法 选择2019年3月-2021年3月湖北省妇幼保健院孕期HPV感染的孕妇53例为研究组,另选同时期于医院孕检的53名健康孕妇为对照组。比较两组MCP-1、NOB1、TLR3表达情况,不同临床特征下MCP-1、NOB1、TLR3在孕期HPV感染中的表达情况。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析MCP-1、NOB1、TLR3对孕期HPV感染的诊断价值。结果 感染组患者MCP-1、NOB1、TLR3水平高于对照组(P<0.05);孕晚期、妊娠次数>2次、血糖受损、吸烟的孕期HPV感染患者MCP-1、NOB1、TLR3水平较高(P<0.05);与MCP-1、NOB1、TLR3单项诊断相比,三项联合对孕期HPV感染的诊断价值较高(P<0.05)。结论 在孕期HPV感染患者中,MCP-1、NOB1、TLR3表达升高,联合预测孕期HPV感染的价值较高。

胆管损伤后良性狭窄形成过程中c-FLIP的表达及意义

目的观察凋亡抑制因子人类细胞同源FLICE样抑制蛋白(cellular homolog FLICE-like inhibitoryprotein,c-FLIP)在胆管良性狭窄形成过程中的表达和定位情况,并探讨其意义。方法利用原位杂交法分别对15只犬(实验组)胆管损伤后2、3、4、5、6个月及其配对的15只假手术组犬的吻合口组织中c-FLIP表达和定位情况进行分析,计算每张切片的平均积分光密度值,分别比较c-FLIP在实验组及其配对的假手术组的胆道吻合口间质组织与腺体组织中表达的差异。结果实验组各时相的间质组织中c-FLIP均呈强阳性表达,以纤维细胞胞浆表达为主,而腺体组织很少表达或几乎无表达;在相应时相的间质组织中的表达明显强于在腺体组织中的表达(P<0.05);间质组织或腺体组织中c-FLIP表达在不同时相之间差异均无统计学意义(P>0.05)。假手术组各时相的间质组织和腺体组织中c-FLIP均呈弱阳性表达;在相应时相的间质组织和腺体组织中c-FLIP表达差异无统计学意义(P>0.05);间质组织或腺体组织中c-FLIP表达在不同时相之间差异均无统计学意义(P>0.05)。c-FLIP在实验组间质组织中的表达明显强于相应时相的假手术组(P<0.05);而c-FLIP在腺体组织中的表达2组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论胆管损伤后,吻合口间质组织内的c-FLIP呈持续表达状态,由此所造成的细胞凋亡持续受阻效应可能与胆管良性狭窄的形成关系密切。

Rho-ROCK信号通路研究进展

Ras同源基因-Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(Ras homolog gene/a Rho-associated coiled coil-forming proteinkinase,Rho-ROCK)信号途径是中枢神经系统中普遍存在的一条通路,是介导抑制性信号阻断中枢神经细胞再生的重要途径。中枢神经损伤后再生困难的重要原因是其周围环境中存在强烈抑制再生的物质,并通过该途径介导神经再生障碍。熟悉Rho-ROCK信号通路及这些抑制性介质的作用,对研究神经损伤后再生与修复等具有重要意义。