山东省人类肠道致细胞病变孤儿病毒13型分离株的基因特征分析

目的阐明山东省从急性弛缓性麻痹病例粪便标本中分离到人类肠道致细胞病变孤儿病毒13型(Entric Cytopathic Human Orphanviruses Type13,ECHO13)的VP1基因特征。方法通过逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)扩增ECHO13VP1基因序列,进行PCR产物序列测定和分析,将获得的基因序列与基因库中已有的39株ECHO13 VP1基因序列进行同源性分析,并共同构建基因进化关系树。结果6株ECHO13山东省分离株与之前从福建省分离的ECHO13存在明显的基因差异,最高达20%,并构成了独立的进化分支B组;同时与其他国家分离到的ECHO13也存在明显的基因差异,在进化树上分属不同的分支,说明中国存在不同基因特征的ECHO13传播。结论根据VP1基因的差异,ECHO13可被划分为A、B、C三个组。应加强对肠道病毒的监测和分子流行病学研究,防止国外ECHO13的输入。

随机引物聚合酶链反应法鉴定2例无菌性脑炎的未知病毒

目的建立一种可应用于准确检测未知病毒的分子生物学方法。方法2例无菌性脑炎患者的脑脊液,接种人横纹肌肉瘤细胞,收集感染细胞液,将细胞液离心去除细胞碎片,超速离心沉淀病毒颗粒后,用脱氧核糖核酸酶处理,提取核酸后,用随机引物进行聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)扩增,将扩增产物克隆至pGEM-TEsay载体中测序,序列通过BLAST(Basic Local Alignment Search Tool)最终确定未知病毒。结果经BLAST比对证明,该病毒是人类肠道致细胞病变孤儿病毒4型。结论成功建立了一种基于随机引物PCR的未知病毒鉴定方法,为快速检测不明原因疾病和新发传染病病原提供了新的技术方法。