人类甲状腺癌中肿瘤抑制基因p^(16)、E-钙粘素癌基因蛋白的表达及其临床相关性研究

[目的 ]研究人类甲状腺癌中肿瘤抑制基因 p16、E 钙粘素癌基因蛋白的表达及其临床相关性 .[方法 ]应用S P免疫组织化学方法研究 4 8例甲状腺癌及 12例甲状腺腺瘤标本中 p16、E 钙粘素 2种癌基因蛋白的表达 .[结果 ]在E 钙粘素检测中淋巴结转移组的E 钙粘素阳性表达率为 2 3%,非淋巴结转移组中E 钙粘素的阳性率为 77%,两者之间存在显著性差异 .说明E 钙粘素的缺失与甲状腺癌淋巴结转移有密切的关系 .在肿瘤抑制基因 p16检测中甲状腺癌组中 p16阳性率为 31%,对照组甲状腺腺瘤组中阳性率为 83%,两者之间存在着显著性差异 .说明p16的缺失与甲状腺癌的发生有密切的关系 .[结论 ]p16在甲状腺癌的发生过程中起抑制作用 ,而E 钙粘素则在甲状腺癌淋巴结转移过程中起抑制作用 .

胃癌和大肠癌中肿瘤相关基因NGX6的表达

目的:研究肿瘤相关基因NGX6在胃癌与大肠癌组织以及其配对癌旁正常组织中的表达,探讨此基因在胃癌、大肠癌发生发展中的作用.方法:采用RT-PCR方法、点杂交、Northern-blot方法分别检测34例胃癌、34例大肠癌患者癌瘤组织、癌旁(手术切缘,距肿瘤5cm以上)正常组织NGX6基因表达.结果:RT-PCR显示:NGX6基因在73.5%的大肠癌组织(25/34)和93.8%的有淋巴结或远处转移的大肠癌组织(15/16)中存在表达减弱或不表达,其表达下调率明显高于相应的癌旁组织和无淋巴结或远处转移大肠癌(26.5%、55.6%,P<0.05)。但此基因表达与大肠癌病理类型无显著相关性。点杂交和Northern-blot证实了RT-PCR结果。而胃癌与配对癌旁正常组织中未发现NGX6表达水平改变(表达下调率:29.4%vs41.2%,P>0.05).结论:NGX6基因在大肠癌中表达下调,此基因的低表达在大肠癌的发生和转移中起着一定的作用,但可能与胃癌的发生无关.

应用基因芯片技术观察硝酸甘油对肿瘤细胞血管生成相关基因表达的调控

目的:为进一步研究一氧化氮对肿瘤生长和基因表达的影响,利用基因芯片技术观察硝酸甘油作为一氧化氮供体对人宫颈癌细胞Hela增殖()以及有关血管生成基因表达的调控作用。方法:细胞形态学方法观察Hela细胞的生长增殖情况;根据基因芯片法抽提细胞mRNA进行反转录制备cDNA探针,与SuperArrayQ系列血管发生基因检测芯片进行杂交,并对结果进行分析。结果:培养液中硝酸甘油浓度为40mg/L时可造成细胞生长情况改变,形态出现分离、皱缩,并密度下降;芯片试验显示23%22/96)的检测(基因出现明显表达差异,其中下调基因68%(15/22),并且幅度较上调大,而且差异显著P<0.05),多为促进血管生成和肿瘤转移基因,而(上调基因中促进和抑制肿瘤生长的基因并存。结论:硝酸甘油在一定浓度能够抑制肿瘤细胞的生长并且对有关血管生成基因进行调控。提示硝酸甘油代谢后产生的一氧化氮造成肿瘤细胞生命活动下降及抑制促血管生成基因的表达,可能会造成肿瘤侵袭力降低。

脑胶质瘤细胞体外促进人骨髓间充质干细胞肿瘤相关基因表达

目的观察与人脑胶质瘤细胞共培养后的人骨髓间充质干细胞(human bone marrow-derived mesenchymal stromal cells,h MSCs)中肿瘤相关基因表达的变化,初步评估h MSCs在人脑胶质瘤环境中的生物安全性在致瘤性方面的风险。方法将h MSCs与人脑胶质瘤细胞U251于体外共同培养5d后,通过肿瘤基因芯片、实时定量RT-PCR及Western-blot实验检测h MSCs中肿瘤相关基因表达水平的变化。结果基因芯片结果显示,与单独培养的h MSCs对比,与人脑胶质瘤细胞U251共同培养后的h MSCs中存在SPINT2、TK1、STC1、MMP1、CCND1、SORT1、SEPT6、CDC20、SHB、CDK5、RELA、XRCC4、KIT、CTPS、CAPNS1及ETV6等16个肿瘤相关基因的表达明显上调(3倍以上),而无一基因表达下调;实时定量RT-PCR结果显示癌基因KIT、CAPNS1、TK1、MMP1、CCND1、CDC20、RELA以及STC1在共培养组h MSCs中呈表达上调;Western-blot结果显示癌基因KIT、MMP1、CCND1以及RELA的蛋白水平在共培养组h MSCs中呈表达上调。结论 h MSCs在脑胶质瘤细胞的影响下可出现部分癌基因的高度表达,提示了对于h MSCs应用于对脑胶质瘤进行基因治疗的生物安全性在致瘤性方面的风险需引起关注及深入研究。

肿瘤转移相关基因的表达谱研究(英文)

目的 :运用基因表达谱芯片技术对肿瘤转移相关基因的表达谱进行研究。方法 :对临床切除的肝癌和胰腺癌组织及相应的对照正常组织进行总 RNA抽提 ,纯化后的 m RNA进行逆转录制备杂交探针 ,应用 Bio Door40 96和 Bio Door12 80 0的全长基因 DNA芯片筛选与肝癌和胰腺癌转移相关的基因。杂交后的信号用 Scan Array30 0 0扫描 ,结果用 Ima Gene3.0软件分析。结果 :对肝癌和胰腺癌基因表达谱进行分析 ,发现两种肿瘤中存在相同的差异表达基因 ,其中有 15条基因与肝癌、胰腺癌转移密切相关。 结论 :通过对肝癌、胰腺癌的肿瘤表达谱芯片研究 ,尤其是与转移相关基因的分析 ,对了解肿瘤的发病机制和转移发生情况及其肿瘤的预后有重要意义。

肿瘤相关基因表达检测寡核苷酸芯片的制备及其初步应用

为研制肿瘤相关寡核苷酸芯片 ,并实现其在抗肿瘤反义核酸“癌泰得”作用机理研究方面的初步应用 ,制备了包含近 450种肿瘤相关基因特异寡核苷酸探针的寡核苷酸芯片 ,建立了相应的质控标准 .“癌泰得”用脂质体转染HepG2肿瘤细胞 ,提取细胞总RNA反转录并荧光标记cDNA ,用制备的寡核苷酸芯片检测肝癌细胞HepG2的肿瘤相关基因表达水平 ,用软件分析获得其差异基因表达谱 .0 4μmol/L的反义核酸“癌泰得”作用于HepG2细胞 15h后 ,MDNCF、DHS等基因mRNA表达下调 ,MUC2、MPP11、LAT、HRIF B、JNK3A1等mRNA基因表达上调 ,初步检测到了“癌泰得”的抗肿瘤作用可能的相关基因 ,为进一步的分子作用机理的探讨奠定基础 .结果表明 ,制备的肿瘤相关芯片敏感度高、特异性高、重复性均较好 ,可用于检测肿瘤相关基因的表达谱 。

子宫内膜腺癌组织中人类RUNT相关转录因子3与果蝇zeste基因增强子同源物2的表达

目的:检测子宫内膜腺癌组织中人类RUNT相关转录因子3(RUNX3)和果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)的表达。方法:采用免疫组化SP法检测60例子宫内膜腺癌、40例子宫内膜增殖症和20例正常增生期子宫内膜组织中RUNX3与EZH2蛋白的表达。结果:子宫内膜腺癌、子宫内膜增殖症与正常增生期子宫内膜组织RUNX3蛋白的阳性表达率分别为43.3%(26/60)、67.5%(27/40)与95.0%(19/20),3组间相比,差异有统计学意义(χ2=18.090,P<0.001);上述3种组织中EZH2蛋白的阳性表达率分别为75.0%(45/60)、42.5%(17/40)与15.0%(3/20),3组间相比,差异有统计学意义(χ2=25.041,P<0.001)。RUNX3蛋白的表达与子宫内膜腺癌的组织分化程度、TNM分期及浸润深度有关(χ2=-3.561,-2.367,5.370,P均<0.05),EZH2蛋白的表达与子宫内膜腺癌的组织分化程度及浸润深度有关(χ2=-3.084,5.568,P均<0.05)。子宫内膜腺癌组织中RUNX3和EZH2蛋白的表达相关(rP=0.330,P=0.007)。结论:RUNX3蛋白表达缺失和EZH2蛋白过度表达在子宫内膜腺癌的发生与发展中起重要作用,高表达的EZH2可能在一定程度上参与调控RUNX3基因的表达下调。

肿瘤转移相关基因MTA1在大肠癌中的表达及其临床意义

目的:探讨MTA1的表达与大肠癌浸润转移及临床病理指标之间的关系。方法:采用免疫组织化学SP法,检测84例大肠癌组织和22例癌旁黏膜组织中MTA1的表达。结果:大肠癌中MTA1的表达显著高于癌旁黏膜(P=0.000),MTA1在大肠癌组织中的表达与患者年龄、肿瘤浸润深度无关(P>0.05),而与大肠癌分化程度、临床分期以及淋巴结转移显著相关(P<0.05)。结论:MTA1的表达与促进大肠癌的转移相关,检测MTA1表达可作为预测大肠癌生物学行为、判断大肠癌患者预后的一个参考指标。

人类疱疹病毒8型肿瘤转化基因K12的分离及在昆虫细胞中的表达

目的:分离人类疱疹病毒8型(HHV-8)肿瘤转化基因 K12,克隆至杆状病毒载体并在昆虫细胞中作尝试性表达。方法:设计一对引物,在引物的5′端分别引入BamHI、EcoRI酶切位点,以佛波脂刺激的原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1细胞总DNA为模板,PCR扩增HHV-8肿瘤转化基因K12。将经序列测定后的PCR产物克隆进杆状病毒转移载体pVL1393中,构建成重K12杆状病毒转移载体pVL-K12,并与线性BaculoGold病毒 DNA共转染昆虫细胞Sf9,获得重组病毒。RT-PCR检测K12 mRNA转录水平;间接免疫荧光染色(IFA)检测K12编码蛋白在Sf9细胞中的表达状况。结果:含 HHV-8 K12基因重组杆状病毒在昆虫细胞Sf9中获得表达,经IFA证实该重组蛋白为HHV-8特异性蛋白。结论:杆状病毒载体能够介导HHV-8肿瘤转化基因K12编码的蛋白在昆虫细胞中表达。

复方木防己汤对AA大鼠滑膜细胞类肿瘤样增生及相关基因表达影响的研究

类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种常见的系统性自身免疫性疾病,以多发性关节炎为主要特征,关节滑膜炎性细胞浸润,成纤维细胞与毛细血管内皮细胞过度增生,形成血管翳,最终导致关节软骨破坏和骨侵蚀[1].

ODC反义RNA转染细胞的肿瘤相关基因表达及其致瘤性

鸟氨酸脱羧酶(ODC)是多胺生物合成途径中的限速酶，其活性的异常升高和继之引起的多胺堆积与肿瘤的发生、发展及转移密切相关。我们曾自行构建人ODC反义RNA真核表达质粒，并转染人肺鳞癌细胞，观察到稳定转染细胞株的生长速度减慢；大分子生物合成受到抑制；ODC mRNA表达减少和ODC活性降低等。

亚砷酸钠对几个肿瘤相关基因表达水平影响的研究

为探讨砷作用的分子遗传机制 ,采用寡核苷酸芯片和 c DNA芯片两种方法来研究砷对已知基因 (c- myc和 p5 3)和未知基因表达水平的影响 ,结果表明亚砷酸钠造成肝细胞中 p5 3抑癌基因、人肿瘤抑制基因表达增强 ,c- myc癌基因和解偶联蛋白基因表达减弱 ,说明亚砷酸钠在正常人肝细胞中表现出抗癌效应并能促进能量储存。

人胃癌细胞肿瘤相关基因的表达与甲基化调控

目的:旨在阐明胃癌的发生中多种抑癌基因和癌基因的甲基化情况,以期为进一步深入探索通过改变抑癌基因的甲基化而为胃癌治疗提供新方法. 方法:培养人胃癌细胞株MKN-45和HGC-27两种细胞,在MTT确定去甲基化制剂5-氮脱氧胞苷(5-aza- 2’-deoxycytidine,5-aza-dC)浓度和时间对细胞生长活力没有影响后,分别以2,5,和10μmol/L,浓度分别干预24和72 h,然后提取其DNA和RNA,用RT-PCR的方法检测p16INK4A,p21WAF1,p53,c-Ha-ras和c- myc等多种基因的表达情况;同时以流式细胞仪分析药物干预后的MKN-45和HGC-27的细胞周期变化; DNA分析则通过亚硫酸氢盐修饰和测序和甲基化特异性PCR(MSP)的方法检测p16INK4A基因及c-myc启动子区甲基化的情况. 结果:我们所采用的5-aza-dC的浓度和时间对细胞的生长无显著性影响.5-aza-dC干预前,MKN-45和HGC-27两种胃癌细胞系中均有p16INK4A表达,5-aza- dC干预后在MKN-45和HGC-27两种胃癌细胞系中p16INK4A的表达增强,且不同的胃癌细胞株表达增强最明显时的时间与浓度不同.-p53,p21WAF1,c-myc,c-Ha-ras 等多种基因在干预前后均有表达,且在干预前后无明显变化.在5-aza-dC干预后,HGC-27细胞周期阻滞在G1期,而MKN-45细胞的周期无明显改变.p16INK4A启动子区存在甲基化使得该基因的表达减少,在去甲基化试剂处理后使其表达增强. 结论:人胃癌细胞系MKN-45和HGC-27中,p16INK4A 启动子甲基化是其在表达减弱的主要原因,其去甲基化程度取决于5-aza-dC干预的时间和浓度.

针灸调控结肠炎相关性结肠癌大鼠结肠肿瘤增殖相关的circRNA表达谱的研究

目的探索针灸对结肠炎相关性结肠癌(colitis-associated colorectal cancer,CAC)大鼠结肠环状RNA(circular RNA,circRNA)表达谱的影响,阐释针灸调控CAC肿瘤细胞增殖相关的circRNA的可能机制。方法将SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、隔药灸组和电针组,采用氧化偶氮甲烷和葡聚糖硫酸钠溶液诱导CAC大鼠模型,造模成功后,隔药灸组和电针组在天枢和气海穴分别进行相应干预,每连续6次治疗间隔1次,持续4周。观察大鼠结肠肿瘤负荷情况,采用HE染色法观察大鼠结肠组织病理学变化并评分,采用circRNA-seq高通量测序检测大鼠结肠组织circRNA表达谱,筛选出针灸调控与CAC肿瘤增殖相关的circRNAs并采用qRT-PCR法进行验证,通过生物信息学分析,对CAC肿瘤增殖相关性circRNAs进行功能分析。结果与正常组比较,模型组大鼠肿瘤数量、肿瘤直径、肿瘤负荷量显著增加(P<0.01),结肠组织损伤严重,可见不同程度的异型增生且组织病理学评分升高(P<0.01);与模型组比较,隔药灸组、电针组大鼠肿瘤数量、肿瘤直径、肿瘤负荷量显著降低(P<0.01),大鼠结肠黏膜可见炎症性改变,组织结构基本清晰,组织病理学评分显著降低(P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠结肠组织有158个可能与肿瘤增殖相关的差异表达circRNAs,隔药灸干预CAC肿瘤增殖相关的关键circRNAs有23个,电针干预CAC肿瘤增殖相关的关键circRNAs有30个,隔药灸与电针共同干预的CAC肿瘤增殖相关circRNAs有10个,其中rno_circ:chr10:3301041-3304937和rno_circ:chr6:93404013-93407172的表达经验证符合测序结果(P<0.05)。结论CAC大鼠结肠组织circRNA表达谱异常,隔药灸和电针均能抑制AOM-DSS诱导的CAC大鼠结肠肿瘤增殖,影响与CAC大鼠肿瘤增殖相关性circRNA表达谱,而上调rno_circ:chr10:3301041-3304937并下调rno_circ:chr6:93404013-93407172可能是抑制CAC大鼠结肠肿瘤增殖的关键机制之一。

肿瘤相关新基因HC90的表达差异及初步功能研究

目的 对新基因克隆HC90进行蛋白表达、各种肿瘤组织和细胞系中表达差异检测和体内外功能研究。方法 用pET 32a融合表达载体在大肠杆菌BL2 1(DE3)中对该基因进行表达 ,免疫小鼠制备小鼠源性多克隆抗体 ;从体外细胞集落形成试验 ,裸鼠体内成瘤实验 ,原位杂交 ,免疫细胞化学及免疫组化检测HC90基因的表达差异和对体内外细胞生长影响的生物学功能进行研究。结果 SMMC 772 1细胞系的体外集落形成试验表明 ,HC90转染组与空载体组和p5 3对照组相比集落形成数显著增加 (P <0 0 5和P <0 0 1) ;转染细胞系的裸鼠体内成瘤实验结果表明该基因对L92 9细胞系的成瘤有明显促进作用 (P <0 0 5 ) ;免疫组化结果显示HC90在人多种肿瘤组织 ,癌旁和正常组织中均有不同程度的表达 ,总体上表现为癌组织 >癌旁组织 >正常组织。结论 HC90是个新的肿瘤相关基因。

重组人类抗砷相关基因在大肠埃希菌的表达

目的 构建含重组人类抗砷相关基因 (humanarsenicresistencerelatedgene ,hARRG)的表达载体 ,诱导其在转化菌表达 ,分离纯化表达蛋白 ,研究该蛋白质的理化性质、抗砷功能和免疫活性 ,深入研究人类对砷化物的抵抗作用。方法 将hARRGcDNA开放阅读框亚克隆到原核表达载体Pet11C中 ,用异丙基 - β -D -硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导表达蛋白质 ,利用阴离子交换柱Sepharose纯化蛋白质 ,SDS -PAGE胶电泳观察结果。 结果 将hARRGcDNA成功亚克隆到原核表达载体Pet11C中 ,并成功在大肠杆菌中表达 ,表达的hARRG蛋白占菌体蛋白的 5 %左右 ,该蛋白质被分离纯化。结论 原核表达载体Pet11C可以在大肠杆菌中表达hARRGcDNA 。

腺病毒提高腺相关病毒在耐药与非耐药肿瘤细胞中的基因表达及其机制

目的:研究利用低剂量腺病毒提高重组腺相关病毒2型(recombined adeno-associated virus,rAAV2)在耐药与非耐药肿瘤细胞中基因表达水平的新方法,并初步探讨其可能的作用机制。方法:rAAV2-GFP单独或联合复制缺陷型腺病毒(Ad5-RFP)或条件复制型腺病毒(Ad5-TERT-RFP)感染人非小细胞肺癌细胞系(NCI-H446)、人肺腺癌细胞系(A549)、人胃癌细胞系(SGC7901)、人口腔黏膜上皮癌细胞系(KB)和人口腔黏膜上皮癌耐长春新碱细胞系(KB/VCR)。荧光显微镜观察和流式细胞仪分析肿瘤细胞感染后GFP的表达;Western blotting检测感染后肿瘤细胞GFP蛋白表达及ERK和AKT磷酸化水平;Real-time PCR检测肿瘤细胞内GFP的mRNA表达量、DNA拷贝数,以及细胞表面受体HSPG、α_v integrin和FGFR-1的mRNA表达。结果:流式细胞结果显示,rAAV2-GFP联合Ad5-RFP或Ad-TERT-RFP感染肿瘤细胞24h后,GFP阳性细胞率和GFP平均荧光亮度分别提高了约0.3～3倍和4～8倍。Western blotting证实联合应用Ad5-RFP感染肿瘤细胞后24h,GFP蛋白表达增加约4～6倍,肿瘤细胞内ERK和AKT磷酸化水平升高。联合感染后细胞内GFP的mRNA表达量提高了3.83～7.33倍,DNA拷贝数未见明显改变,HSPG、α_v integrin和FGFR-1的mRNA表达轻微提高。结论:低剂量腺病毒显著提高rAAV2在耐药与非耐药肿瘤细胞中的基因表达水平,可能与激活信号传导通路、增加细胞内转录有关。

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因原核表达载体的构建、表达与抗体制备

目的 获取抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRARAIL)抗体。方法 利用PCR技术和基因重组技术将TRAIL基因构建于原核表达载体pPre-TMHTb中,经酶切、测序鉴定证实构建完全正确后,通过IPTG诱导其在大肠杆菌DH-5α中获得表达,并将TRAIL蛋白免疫家兔,通过DotBlot及 Western Blot检测抗 TRAIL抗体的产生。结果 成功构建TRAIL基因原核表达载体,并在大肠杆菌DH-5α中获得表达,TRAIL蛋白表达量占菌体蛋白质总量的11.8％,经Dot Blot及 WesternBlot捡测证实获得了抗TRAIL抗体。结论 成功制备抗TRAIL抗体,从而为TRAIL在真核细胞水平的深入研究奠定了实验基础。