用于人类脂肪干细胞的纯化和体外长期培养的聚合物涂层

采用紫外固化法制备了基于丙烯酸酯类水凝胶的聚合物涂层(PC),并用X射线光电子能谱(XPS)、水接触角(WCA)和原子力显微镜(AFM)分别对PC进行了化学组成和表面性能的表征.在PC表面进行了人类脂肪干细胞(h ASC)的体外长期培养扩增,得到的第3代细胞的生物学表征结果表明,干细胞在PC表面能正常黏附生长,流式细胞仪检测发现干细胞对特征标记物CD49d,CD73,CD105的阳性显性比例较高,对HLA-DR和CD31几乎不显性,说明扩增的干细胞具有h ASC特征.对PC上扩增的干细胞进行诱导分化,并用油红O、茜素红和阿利新蓝分别进行染色分析,结果表明,该干细胞保留了h ASC的多能特性:能分化为成脂、成骨和成软骨细胞.含有单体甲基丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵(DMC)、甲基丙烯酸环己酯(CHMA)和甲基丙烯酸-2-(二乙氨基)乙酯(DEAEMA)的PC2(质量比为3∶1∶2)在用于h ASC体外长期培养时,比其它PC和TCP更有利于细胞的黏附和增殖,纯化细胞,保持其多能性.实时荧光定量PCR(RT-q PCR)的分析表明PC2上得到的细胞更容易向成骨和成软骨细胞分化.

肿瘤环境下人类脂肪间充质干细胞的旁分泌特征变化与肿瘤细胞侵袭的关系分析

目的分析肿瘤环境下人类脂肪间充质干细胞(AMSCs)的旁分泌特征变化与肿瘤细胞侵袭的关系。方法体外培养AMSCs,收集其上清液制备培养基培养HCT116细胞。利用Transwell培养板共培养AMSCs与HCT116细胞。通过检测穿透人工基底胶的能力对比两种培养条件下HCT116细胞侵袭能力的差异,同时采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测共培养后AMSCs旁分泌因子表达变化情况。结果根据检测穿透人工基底胶的能力结果显示,共培养的HCT116细胞侵袭能力明显强于AMSCs培养液培养的HCT116细胞。共培养条件下肿瘤环境影响了AMSCs旁分泌因子的表达,共培养条件下AMSCs细胞血管内皮生长因子C(VEGFC)、成纤维细胞生长因子10(FGF10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及白细胞介素-10(IL-10)分泌量明显高于细胞培养,差异均具有统计学意义(t=8.692、7.593、7.298、8.356,P<0.05)。结论肿瘤环境下会影响AMSCs旁分泌因子的表达,增加HCT116细胞侵袭能力。

人类脂肪来源成体干细胞体外培养的生物学特征研究及供体年龄对其增殖的影响

通过研究人类脂肪组织来源成体干细胞(human adipose tissue derived adult stem cells,hADAS细胞)体外培养的生物学特征及供体年龄对其生长增殖的影响,为其作为组织工程学研究和应用的种子细胞提供实验室研究基础.取不同年龄组志愿者(<20岁、21～40岁、41～60岁和>61岁),手术中切除少量皮下脂肪组织,酶消化法分离细胞,体外培养,传至20代.取培养第3代细胞,流式细胞仪检测细胞表面抗原标记物(CD29,CD34,CD44,CD45,CD49d,HLA-DR,CD106)和细胞周期.细胞培养传20代后进行细胞染色体组分析.MTT法分别检测各年龄组不同时间点吸光值,绘制生长曲线,根据公式TD=t(lg2/lgNt-lgN_0)换算人类脂肪来源干细胞倍增时间(timedoubling,TD).结果显示:酶消化法自皮下脂肪组织分离细胞,体外培养hADAS细胞,流式细胞仪检测示CD29+,CD34-,CD44+,CD45-,CD49d±,HLA-DR-,CD106-;G_1期占90%(P10代);P20细胞染色体组分析显示为正常染色体,未见异常染色体,保持遗传稳定.绘制细胞生长曲线,<20年龄组TD为(11.22±0.73)h,21～40年龄组TD为(11.14±0.76)h,两组之间P>0.05,无显著性差异;41～60年龄组TD为(13.18±1.58)h,>61年龄组TD为(13.11±0.83)h,两组之间P>0.05,无显著性差异.<20年龄组TD与>61年龄组TD显著性差异,P<0.05.说明hADAS细胞可方便地取材于皮下脂肪组织,体外培养遗传特性稳定,生长活跃,青年组生长活性强于老年组,可以作为组织工程学种子细胞的新来源.