人类防御素在眼科的研究进展

人类防御素是一类阳离子抗微生物肽大家族,分子量为4～5kDa,分子内含有6个二硫键相连的半胱氨酸残基。近年来,随着防御素的发现和研究,其广泛的抗微生物特性受到人们的关注,有可能成为一条新的抗感染途径。防御素已成为医学生物学和分子生物学研究的热点。本研究主要就防御素的结构特点、眼组织分布、眼表上皮表达与调控、生物学活性等相关研究进展进行综述。

人类β-防御素2在口腔扁平苔藓病损中表达的研究

目的探讨口腔扁平苔藓(OLP)患者病损中的人类β-防御素2(hBD-2)的表达,以分析hBD-2在OLP发病机制与上皮抗感染免疫中的作用。方法采用免疫组织化学技术(IHC)和反转录聚合酶链式技术(RT-PCR),检测25例OLP病损组织、7例对照组织中hBD-2多肽的表达,并进行分析。结果 hBD-2在所有样本中均出现了阳性胞浆染色,健康口腔黏膜组中hBD-2蛋白为弱阳性染色,与呈强阳性染色的OLP组差异有统计学意义(P<0.05);RT-PCR检测结果显示,所有样本均出现了hBD-2的cDNA电泳条带,在健康口腔黏膜组中呈微弱表达,在OLP组织中表达明显增强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论健康口腔黏膜组织也有少量hBD-2表达,提示其作为机体先天性免疫的组成部分,在维持口腔黏膜健康上具有一定作用。在OLP的病理过程中hBD-2可能呈炎性诱导上调表达而参与了OLP的免疫发病过程。

肿瘤坏死因子-α、人类β-防御素-1基因多态性与慢性阻塞性肺病相关性的研究

目的:探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)、人类β-防御素-1(hBD-1)基因多态性与慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pul-monary disease,COPD)之间的关系及两基因之间的交互作用。方法:采用病例对照研究和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,检测COPD患者TNF-α、hBD-1基因型频率分布。结果:COPD组和健康对照组TNF-α-308突变型基因频率在两组对象中的频率分别为16.41%和8.04%,两组比较有统计学差异(P=0.006);hBD-1exon-2突变型基因频率在两组中的频率分别为15.23%和6.70%,两者差异有统计学意义(P=0.003);有TNF-α-308SNP而无hBD-1exon-2SNP时的相对危险度为1.786,无TNF-α-308SNP而有hBD-1exon-2SNP时的相对危险度值为7.082,TNF-α-308SNP、hBD-1ex-on-2SNP均存在时的相对危险度为7.836。结论:TNF-α、hBD-1基因多态性与COPD发生相关,TNF-α-308SNP、hBD-1ex-on-2SNP在COPD的发病过程中无交互作用。

非标记液晶生物传感器检测人类β防御素-2

基于液晶取向变化构建液晶生物传感器用以检测人类β防御素-2(HBD-2)。传感器基底经过3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)与N,N-二甲基十八烷基(3-(三甲氧基硅丙基))氯化铵(DMOAP)混合溶液组装氨基化膜,再利用戊二醛(GA)对组装膜进行醛基化修饰用以固定HBD-2抗体。当基底表面固定的HBD-2抗体与一定浓度范围内的HBD-2特异性结合后,改变了传感器基底形貌,扰乱了液晶分子的有序排列,从而引起光学信号的改变,可用于检测HBD-2。当HBD-2的含量高于5.0ng/mL时,可观测到明显的光学图像变化。本方法易操作,无需标记,灵敏度较高,特异性好,响应速度快。

人类β-防御素-1基因多态性与慢性阻塞性肺疾病关系的研究

目的探讨人类β-防御素-1(hBD-1)基因多态性与慢性阻塞性肺病(chronic obstuctive pulmonary disease,COPD)之间的关系。方法采用病例对照研究和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,检测COPD患者hBD-1基因型频率分布。结果 COPD组C、G等位基因频数分别是85.25%和14.75%,对照组C、G等位基因频数分别是73.33%和26.67%,C等位基因在COPD组的频数明显高于健康对照组(χ2=5.237,P<0.05,OR:2.101,95%CI:1.104～3.998)。结论 hBD-1基因668C/G位点基因多态性与中国北方汉族人群COPD易感性有相关性,C等位基因可能是COPD的高危险基因。

白芍总苷联合曲安奈德治疗口腔扁平苔藓患者的疗效及对血清IL-17、人类β-防御素-2水平的影响

目的观察白芍总苷胶囊治疗口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)患者的疗效及对血清白介素-17(IL-17)、人类β-防御素-2(human beta-defensin-2,HBD-2)水平的影响。方法将60例符合纳入标准的口腔扁平苔藓患者随机分为治疗组和对照组各30例,对照组局部注射曲安奈德,治疗组在此基础上口服白芍总苷胶囊,同时纳入30例健康对照组。治疗1个月后评价其临床疗效及受检者血清IL-17、HBD-2水平。结果两组临床疗效比较,治疗组总有效率(93%)高于对照组(76%)(P<0.05)。OLP患者组血清IL-17、HBD-2水平较健康对照组升高(P<0.05)。治疗组和对照组患者治疗后血清IL-17、HBD-2水平均低于同组治疗前(P<0.05);治疗后,治疗组患者血清IL-17水平低于对照组(P<0.05),HBP-2水平两组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论白芍总苷胶囊联合曲安奈德治疗口腔扁平苔藓有较好的疗效,其作用与下调血清IL-17、HBD-2有关。

人类β-防御素在眼表组织中的表达(英文)

背景:人类β-防御素主要定位于多种组织的表皮或上皮。在眼表中也存在防御素,但其在眼表中的分布及眼表疾病中的作用尚不十分清楚。目的:观察人类β-防御素在眼表组织中的分布,分析其在眼表疾病中的潜在作用。设计、时间及地点:以眼表组织为观察对象体外对照实验,于2006-10/2007-12在上海交通大学医学院附属新华医院中心实验室和中国科学院上海分院细胞生化所完成。材料:18个炎性结膜样本中包括6个胬肉表面球结膜、4个球结膜囊肿、4个酸烧伤结膜组织、2个热烧伤结膜组织和2个结膜肉芽肿组织;15个炎性角膜样本中包括6个病毒性角膜炎、4个霉菌性角膜炎、3个细菌性角膜炎和2个角膜穿孔伤后摘除眼球;9个尸体眼正常球结膜样本,8个尸体眼正常角膜样本。方法:RT-PCR法及免疫组织化学法检测50份样本人类β-防御素表达。主要观察指标:人类β-防御素1～3三种蛋白因子在正常及炎症眼表组织的表达和定位。结果:RT-PCR检测发现,人类β-防御素1,3在所有被检角结膜组织中均显示阳性;人类β-防御素2在大部分炎症眼表组织中显示阳性,在正常眼表组织几乎不表达。免疫组织化学结果显示,大多数炎性眼表组织中均同时表达人类β-防御素1,2,分布于上皮细胞层,以基底层为主,偶见基质细胞的浸润,仅少数无人类β-防御素2表达;正常角膜和球结膜样本中均有人类β-防御素1表达,分布于上皮细胞层,以基底层为主,仅极少数同时存在人类β-防御素2表达。结论:人类β-防御素1,3呈组成式表达于正常及炎性眼表组织上皮细胞表皮与基底上皮细胞表层和基底层,人类β-防御素2则呈诱导式表达于大多数炎性眼表组织上皮细胞表皮与基底上皮细胞表层和基底层,均以基底层居多;3种人类β-防御素在对抗眼表感染和促进眼表损伤修复中可能起重要作用。

人类β防御素-2在舍格伦综合征患者中的表达及其意义

目的研究人类β防御素(hBD)-2及其mRNA在舍格伦综合征(SS)患者涎腺组织中的表达情况,探讨hBD-2在SS临床以及病理过程中的作用。方法采用免疫组织化学染色SP法及原位杂交(ISH)技术检测30例SS患者涎腺组织和10例正常涎腺组织中hBD-2的表达情况,并统计分析了其表达、临床病理特征之间的关系。结果 SP法和ISH的结果均提示,SS患者较正常的涎腺组织中hBD-2的表达水平增高(P<0.05);伴有全身结缔组织疾病的SS患者较未伴有的hBD-2阳性表达率升高;病理分级4级的SS患者较3级SS患者的hBD-2阳性表达率高(P<0.05)。结论 hBD-2可能参与了SS的特异性免疫病理过程,为利用唾液进行早期诊断涎腺疾病的易感性或风险因子提供了新的思路。

人类β防御素在角膜组织中的表达

目的观察人类β防御素(humanβdefensins,HBD)在角膜组织中的分布,分析其在眼表疾病中的潜在作用。方法 选取正常供体眼角膜组织15眼,炎症性角膜组织15眼。炎症性样本包含病毒性角膜炎6眼、真菌性角膜炎4眼和细菌性角膜炎5眼。采用免疫组织化学法检测HBD-1和HBD-2,以及逆转录聚合酶链反应检测HBD-1、HBD-2、HBD-3在正常及炎症性角膜组织中的表达。结果 逆转录聚合酶链反应发现HBD-1和HBD-3在所有被检的16眼角膜组织中均显示阳性,HBD-2仅在7眼炎症性角膜被检组织中表达阳性,其余9眼样本均为阴性表达。炎症性角膜组织和正常角膜组织之间存在明显的表达差异(χ2=12.444,P=0.0014),免疫组织化学法也显示了相似的结果(χ2=7.143,P=0.029)。HBD-1表达于所有14眼角膜样本中,HBD-2则仅在6眼炎症性角膜和1眼正常角膜样本中显示阳性,其余7眼均显示阴性。结论 HBD-1和HBD-3表达于角膜组织。HBD-2在正常角膜组织几乎不表达,而是呈诱导式表达于炎性角膜。

人类β-防御素在正常、深龋和炎症牙髓中的表达

目的:研究人类β-防御素(human beta-defensins,HBD)在正常、深龋和炎症牙髓中的表达及其意义。方法:采用免疫组化SP法分别对正常、深龋及炎症牙髓中β-防御素HBD-1、HBD-4的表达进行组织学定位,并通过Image pro-plus 5.1图像分析软件对HBD-1/HBD-4染色进行平均光密度值的测定。所得数据用SPSS 13.0统计软件进行相应的统计学分析。结果:在人牙髓中,β-防御素主要表达在成牙本质细胞的细胞核及细胞突起中。HBD-1在3组内表达无显著差异(P>0.05);HBD-4在深龋和牙髓炎组中的表达与正常组相比均显著增强(P<0.05),且炎症组亦强于深龋组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HBD-1参与牙髓天然免疫系统;HBD-4参与龋病发展过程中牙髓组织的免疫防御反应。

人类β防御素3及富组蛋白5对念珠菌黏附牙龈上皮细胞的抑制作用

目的探讨人类β防御素3(HBD3)及富组蛋白5(Hst5)对白色念珠菌的抗菌活性,及其对白色念珠菌黏附牙龈上皮细胞的抑制作用与机制。方法利用抗菌活性试验及牙龈上皮细胞体外模型,比较不同浓度HBD3、Hst5对白色念珠菌杀菌率及其对牙龈上皮细胞黏附率的影响。以未受干预的白色念珠菌黏附牙龈上皮细胞作对照。透射电镜观察白色念珠菌被抑制后的形态改变。结果相同浓度下,HBD3比Hst5对白色念珠菌具有更强大的抗菌活性(t=3.27,P<0.05);与阳性对照组相比,HBD3、Hst5均能减少白色念珠菌对牙龈上皮细胞的黏附(均P<0.001)。电镜下可见白色念珠菌胞体形态不完整,胞壁破裂。结论在体外培养的牙龈上皮细胞的模型中,HBD3、Hst5均对白色念珠菌表现出较强的抗菌活性,对白色念珠菌在牙龈上皮细胞的黏附具有抑制作用。

人类生物防御素与肺部炎症性疾病

防御素与肺部炎症性疾病关系密切,在肺部炎症、损伤修复和某些特异性免疫反应中发挥重要作用;由于迄今尚未发现有致病菌株对其产生耐药性,应用防御素解决微生物耐药问题是一诱人的前景。本文对防御素与肺部炎症性疾病的有关研究作一综述。

人类β-防御素-1(hBD-1)基因多态性与COPD的相关性研究

目的探讨中国北方汉族人人类β-防御素-1(humanβ-defensin-1,hBD-1)基因多态性与慢性阻塞性肺疾病(COPD)易感性的关系。方法应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性法(PCR-RFLP)检测hBD-1基因外显子2(exon2 Val38Ile)基因型在84例中国北方汉族人COPD患者和90例健康对照者中的分布特点。结果 hBd-1基因exon2 Ile38等位基因在COPD及健康对照组中突变频率分别为14.28%、5.00%,2组比较差异有统计学意义(P=0.017)。结论 hBD-1 exon2 Val38Ile基因多态性是中国汉族人群COPD发病的危险因素(OR=2.776),hBd-1 exon 2基因Ile38突变与吸烟对COPD的发生存在正协同作用。

牙周基础治疗前后慢性牙周炎患者龈沟液中β-防御素2及白细胞介素-1β表达水平的变化研究

目的:探讨慢性牙周炎患者牙周基础治疗前、后龈沟液(GCF)中β-防御素2(HBD-2)及其与白细胞介素-1β(IL-1β)表达水平的关系。方法:选择慢性牙周炎患者10例为慢性牙周炎组,按纳入标准选取20位点分别在牙周基础治疗前及治疗后1个月分别收集GCF并记录临床指标。以牙周健康者12例的24位点GCF为健康对照组。GCF采集后记录采集点出血指数(BI)和探诊深度(PD)。采用酶联免疫吸附法测定GCF中HBD-2及IL-1β含量。结果:健康对照组GCF中HBD-2表达水平高于慢性牙周炎组(P<0.05);慢性牙周炎组牙周基础治疗前、后HBD-2表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。牙周基础治疗前,慢性牙周炎组IL-1β的表达水平高于健康对照组(P<0.001),慢性牙周炎组牙周基础治疗后IL-1β表达水平低于治疗前。牙周基础治疗后,BI、PD均较治疗前小(P<0.001)。与HBD-2、IL-1β表达水平无关(P>0.05)。结论:慢性牙周炎患者牙周基础治疗后GCF中IL-1β的表达水平较治疗前低,GCF中HBD-2在牙周基础治疗前、后表达水平无差异;与GCF中的HBD-2、IL-1β表达水平无关。

重组人β-防御素-2基因在昆虫细胞的转染表达

目的 探索杆状病毒表达系统 (BEVS)高效表达人 β-防御素 - 2 (h BD- 2 )的可行性及其技术路线。方法 利用特异性引物经 PCR扩增 ,从重组质粒 rpc DNA3.1/h BD- 2 /myc- His中扩增出完整重组 h BD- 2 /His基因片段。将此片段插入转移质粒 p Ac GHL T- A的多克隆位点中 ,构建成重组转移载体 rp Ac GHL T- A/h BD- 2 /His。用该重组转移载体和多角体病毒 Ac NPV DNA共转染草地夜蛾细胞 (Sf2 1) ,二者在细胞内经过同源重组形成重组病毒 r Ac NPV/h BD- 2 /His。用终点稀释分析法检测感染上清重组病毒的感染效率。采用 Western印迹法通过特异性抗 - His抗体检测细胞及上清 h BD- 2 /His的表达。结果 目的基因 h BD- 2 /His正确地插入 BEVS系统的转移载体。经 rp Ac GHL T- A/h BD- 2 /His和 Ac NPV DNA共转染的 Sf2 1细胞有较高滴度的重组病毒 r Ac NPVh BD- 2 /his存在。被共转染的 Sf2 1细胞的可溶性蛋白 ,在相对分子质量约 4 7.5× 10 3处有强反应条带显示 ,其大小与根据测序结果所推测的 h BD- 2融合肽相对分子质量接近。培养上清分别在相对分子质量约 4 0× 10 3和 30× 10 3处有强反应条带显示。结论 可利用 BEVS系统作为高效表达重组 h BD- 2的生物反应器。

β-防御素3调节人牙龈成纤维细胞分泌MMP-1及PGE_2的信号通路研究

目的:研究β-防御素3(HBD3)调节人牙龈成纤维细胞(HGFs)分泌MMP-1和PGE2的信号通路。方法:取P5代HGFs接种于96孔板,并随机分为1个对照组(HBD3)和7个实验组(HBD3+antiTLR2、HBD3+anti-TLR4、HBD3+SB203580、HBD3+PD98059、HBD3+SP600125、HBD3+LY294002、HBD3+SC3060)。各实验组分别以相应的信号通路抑制剂anti-TLR2、anti-TLR4预处理30 min,SB203580、PD98059、SP600125、LY294002、SC3060预处理60min,然后各组再加入100μL浓度为1μg/mL的HBD3进行培养,12h后收集各组培养上清液,ELISA法检测MMP-1及PGE2浓度。结果:信号通路抑制剂SB203580、PD98059、SC3060、anti-TLR2各组MMP-1的浓度(ng/mL)分别为3.660±0.286、3.410±0.554、4.435±0.235、3.995±0.612,低于对照组(5.128±0.256)ng/mL(P<0.05);信号通路抑制剂SP600125、SC3060两组PGE2浓度(pg/mL)分别为146.518±15.800和180.349±5.490,低于对照组(209.213±7.284)pg/mL(P<0.05)。结论:HBD3调节HGFs分泌MMP-1涉及TLR2、P38、ERK、NF-κB信号途径;调节PGE2分泌涉及JNK和NF-κB信号途径。

β防御素-2表达和树突状细胞浸润与肺癌免疫的关系

目的研究β防御素2（HBD-2）在不同病理类型、不同临床阶段肺癌组织细胞中的表达以及树突状细胞（DC）在肺癌组织的浸润程度，分析两者的相关性，探讨HBD-2表达和树突状细胞浸润与肺癌免疫的关系。方法（1）免疫组化法（Envision法）测定肺癌组织、癌旁组织及正常组织中HBD-2表达，同时对其在不同病理类型及不同分期肺癌组织表达的阳性率进行比较分析；（2）以S100蛋白作为DC特异性标记蛋白，采用Envision法测定S100阳性细胞在肺癌组织、癌旁组织及正常组织浸润密度，同时分析HBD-2与DC在肺癌组织中表达的相关性。结果（1）HBD-2在肺癌组织及癌旁组织的表达均较正常组织高（P〈005）；（2）HBD-2在鳞癌组织内表达较其他非鳞癌组织高（P〈O．05）；（3）HBD-2在不同的临床阶段的肺癌组织中表达相似（P〉0.05）；（4）DC在肺癌组织及癌旁组织的表达高于正常组织（P〈005）；（5）采用Spearman等级相关分析HBD-2与DC在肺癌组织的分布，二者呈显著正相关（P〈0．05），提示HBD-2在肺癌组织的表达含量与DC的浸润有关。结论在肺癌组织内存在高水平的HBD-2蛋白表达，其表达程度与癌组织DC的浸润有关，提示HBD-2可能通过趋化未成熟的DC而参与机体抗肿瘤免疫反应。

人类β防御素2在中耳胆脂瘤上皮中的表达及意义

目的:研究中耳胆脂瘤上皮中人类β防御素2(hBD2)的表达及与上皮内朗汉斯巨细胞(LC)密度的相关性,探讨hBD2在胆脂瘤病理过程中的作用。方法:采用免疫组织化学计算机图像分析方法观察21例中耳胆脂瘤上皮和10例外耳道正常皮肤表皮中hBD2的表达及LC密度。结果:胆脂瘤上皮中hBD2的表达水平及LC密度较外耳道皮肤表皮增高,差异具有统计学意义(均P<0.01)。胆脂瘤上皮中hBD2表达与上皮内LC的密度存在正相关(P<0.05)。结论:胆脂瘤上皮中hBD2表达较外耳道表皮显著增高,表明其与胆脂瘤的慢性炎症病理状态关系密切。胆脂瘤上皮中hBD2可能是LC重要的趋化因子,在连结特异与非特异性免疫中扮演一定角色。

白色假丝酵母菌感染对口腔上皮细胞人类β-防御素2的表达

目的探讨白色假丝酵母菌对人类β-防御素2(HBD-2)在口腔上皮细胞中表达的影响,为口腔白色假丝酵母菌感染的治疗提供参考依据。方法试验分成3组,分别为孢子、菌丝及灭活的白色假丝酵母菌组;将KB细胞与孢子相、菌丝相及灭活的白色假丝酵母菌培养3、6、12、24h后,采用ELISA试验检测各组KB细胞培养液中HBD-2的表达,重复检测3次,采用SPSS18.0软件进行分析。结果随着时间的延长,黏附KB细胞的白色假丝酵母菌的总数由(1.83±0.64)CFU/cm2下降至(0.18±0.09)CFU/cm2,但活力未发生改变,菌丝转换率由(28.16±5.14)%增高至(80.18±10.14)%;感染24h后孢子相、菌丝相及灭活的白色假丝酵母菌组HBD-2分别为(60.08±6.47)pg/ml、(81.52±8.20)pg/ml、(64.81±7.35)pg/ml,均高于对照组(P<0.05)。结论白色假丝酵母菌在特定时间内可使口腔上皮细胞上调HBD-2表达,菌丝进一步侵袭后,HBD-2的表达降低。

人类-β防御素-1、-2、-3mRNA在女性非淋病奈瑟菌性宫颈炎中的表达及其临床意义

目的探讨人类-β防御素-1、-2、-3mRNA(HBD-1,HBD-2,HBD-3)在非淋病奈瑟菌性宫颈炎中的表达及临床意义。方法 2010年4月至2011年5月在新疆医科大学第一附属医院选择非淋病奈瑟菌性宫颈炎72例,正常对照组64例,采用逆转录PCR(RT-PCR)技术检测宫颈组织中HBD-1、-2、-3mRNA的表达水平。结果对照组中均能检测到HBD-1、-2、-3mRNA的表达(1.12±0.41,1.08±0.31,1.04±0.30),3种防御素表达水平两两比较差异无统计学意义(P>0.05)。观察组中HBD-2,HBD-3(1.25±0.38,1.26±0.35)的表达水平明显高于对照组,分别比较差异有统计学意义(t=2.651,-3.705,P<0.009,0.000),而HBD-1在观察组表达水平(1.22±0.45)与对照组(1.12±0.41)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组及对照组宫颈组织中HBD-2mRNA的表达水平与HBD-3mRNA的表达水平均呈正相关关系(r=0.527,0.304,P=0.000,0.016),HBD-1mRNA表达水平与HBD-2、-3mRNA表达水平均无相关性(观察组r=0.253,0.267,P=0.056,0.051;对照组r=-0.018,-0.093,P=0.892,0.473)。结论人类-β防御素-2、-3mRNA在炎症发生时表达增强,两者相互促进对女性宫颈感染局部免疫防御发挥了重要作用,为今后感染治疗提供了新思路。