miR-218-5p靶向PDE7A调节人非小细胞肺癌A549细胞的糖酵解

目的:探究miR-218-5p靶向磷酸二酯酶7A(PDE7A)调节人非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞糖酵解过程的机制。方法:常规培养A549细胞,用Lipo3000将miR-218-5pmimic、mimic-NC、PDE7A过表达质粒(PDE7A-oe)和PDE7A对照质粒(PDE7A-NC)转染A549细胞,记为miR-218-5pmimic组、mimic-NC组、PDE7A-oe组和PDE7A-NC组。qPCR法验证转染效率,WB法检测糖酵解关键酶蛋白的表达,葡萄糖测定法和乳酸生成测定法检测各转染组A549细胞中2脱氧葡萄糖和乳酸含量,双萤光素酶报告基因实验验证miR-218-5p与PDE7A靶向结合关系,用TCGA数据库数据分析PDE7AmRNA在肺癌组织中的表达水平。结果:在A549细胞中成功地过表达了miR-218-5p(P<0.01)。过表达miR-218-5p均能显著抑制A549细胞中PDE7A、HK2、PKM2蛋白的表达(均P<0.01)、葡萄糖摄取量和乳酸生成量(均P<0.01)。过表达PDE7A均可显著促进A549细胞中PDE7A、HK2、PKM2蛋白的表达(均P<0.01),以及葡萄糖摄取量和乳酸生成量(均P<0.01)。A549细胞中miR-218-5p可与PDE7AmRNA的3´-UTR直接结合。数据库数据分析结果显示,PDE7AmRNA在肺鳞状细胞癌组织中呈高表达(P<0.01)。结论:miR-218-5p靶向PDE7A调控A549细胞中HK2和PKM2的表达水平,进而抑制糖酵解过程,miR-218-5p/PDE7A可能是NSCLC临床诊断和治疗的潜在靶点。

MRPL21调控YAP1/TAZ通路对非小细胞肺癌A549细胞活性的影响

目的探究MRPL21与YAP1/TAZ通路对非小细胞肺癌A549细胞活性的影响,以期为非小细胞肺癌的治疗提供新思路。方法非小细胞肺癌组织及癌旁的组织取自2021年6月~2023年9月于安徽医科大学第一附属医院接受手术治疗的9例非小细胞肺癌患者,通过免疫组化实验方法分析非小细胞肺癌组织中MRPL21的表达水平。将非小细胞肺癌A549细胞分为随机分为3组:siNC组、siMRPL21组以及BPDMA组。CCK-8实验与Hoechst染色检测A549细胞增殖情况;Transwell实验分析A549细胞的侵袭能力;TUNEL染色实验检测A549细胞的凋亡情况;蛋白质印迹实验检测A549细胞中MRPL21、YAP1、TAZ蛋白的表达水平。结果免疫组化实验结果显示,与癌旁的组织比较,非小细胞肺癌组织中的MRPL21表达上调(P<0.05)。与siNC组的A549细胞比较,CCK-8实验与Hoechst染色实验结果显示,siMRPL21组以及BPD-MA组的A549细胞增殖能力减弱(P<0.05)。Transwell实验结果显示,siMRPL21组以及BPD-MA组的A549细胞侵袭能力减弱(P<0.05)。TUNEL染色实验结果显示,siMRPL21组以及BPD-MA组的A549细胞凋亡率增加(P<0.05)。蛋白质印迹实验结果显示,siMRPL21组以及BPD-MA组的A549细胞的YAP1、TAZ蛋白水平表达均明显降低(P<0.05)。结论MRPL21在非小细胞肺癌组织中高表达;抑制MRPL21的表达后,A549细胞的增殖活性、侵袭能力减弱,细胞凋亡率增加,并且这一结果与调控YAP1/TAZ信号通路相关,MRPL21有望成为治疗非小细胞肺癌的新靶点。

苍术素通过激活RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路诱导非小细胞肺癌A549细胞程序性坏死并抑制裸鼠移植瘤生长

目的:探讨苍术素(ATR)通过调节受体相互作用蛋白激酶(RIPK)1/RIPK3/混合谱系激酶结构域样(MLKL)信号通路对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞程序性死亡及裸鼠移植瘤生长的影响。方法:使用0~160μmol/L的ATR处理A549细胞,MTT法检测细胞存活率以确定后续实验给药浓度。使用ATR和/或RIPK1抑制剂Nec-1(necrostatin-1)、caspase抑制剂Z-VADFMK处理A549细胞,验证ATR是否诱导A549细胞发生程序性坏死。将A549细胞分为对照组、ATR-L组、ATR-M组、ATR-H组(分别用0、10、20、40μmol/L ATR处理)、ATR+Nec-1组(40μmol/L ATR+50μmol/L Nec-1处理),处理24 h后,采用PI单染及Hoechst33342/PI双染法检测细胞死亡情况、透射电镜观察细胞死亡形态、DCFH-DA荧光探针法检测细胞内ROS水平、JC-1染色法检测线粒体膜电位、WB法检测细胞中RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路相关蛋白质的表达水平。构建A549细胞裸鼠移植瘤模型,用10 mg/kg ATR(溶于玉米油中)对裸鼠灌胃给药5周,观察ATR对移植瘤生长的影响,WB法检测移植瘤组织中RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路相关蛋白质的表达水平。结果:10~160μmol/L的ATR可显著抑制A549细胞增殖,选择10、20、40μmol/L的ATR进行后续实验。ATR组A549细胞存活率显著低于对照组(P<0.01)和ATR+Nec-1组(P<0.01),而ATR+z-VAD组细胞存活率显著低于z-VAD组(P<0.01),说明ATR可诱导A549细胞发生程序性坏死而非凋亡。与对照组比较,ATR处理组A549细胞发生肿胀,线粒体内脊消失呈空泡化,细胞内容物向外泄漏,细胞核聚集,表现为坏死特征,ATR-L组、ATR-M组、ATR-H组A549细胞死亡率、ROS水平及p-RIPK1、p-RIPK3、p-MLKL表达水平均显著升高,线粒体膜电位显著降低(均P<0.01),且呈药物浓度依赖性;与ATR-H组比较,ATR+Nec-1组细胞死亡率、ROS及p-RIPK1、p-RIPK3、p-MLKL表达水平降低,线粒体膜电位显著升高(均P<0.01)。裸鼠移植瘤实验结果显示,与对照组比较,ATR组裸鼠移植瘤体积、移植瘤质量均降低(P<0.05,或P<0.01),而与瘤组织中p-RIPK1、p-RIPK3、p-MLKL蛋白表达水平均显著升高(均P<0.01)。结论:ATR可能通过激活RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路诱导A549细胞发生程序性坏死,抑制A549细胞及其裸鼠移植瘤的生长。

基于mTOR/STAT3信号轴探讨桑色素诱导非小细胞肺癌A549细胞自噬的机制

目的基于mTOR/STAT3信号轴探讨桑色素诱导非小细胞肺癌A549细胞自噬的机制。方法将A549细胞分为空白组及30、60、90、120、150μg·m L^(-1)桑色素组,培养24、48、72 h后采用CCK-8法检测细胞增殖活性,计算细胞抑制率。将A549细胞分为空白组及30、90、150μg·m L^(-1)桑色素组,培养细胞14 d后通过克隆形成实验检测细胞增殖情况;培养细胞24 h后,采用Beyo ClickTMEd U-488检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;吖啶橙染色检测细胞自噬情况;透射电镜观察细胞自噬体形成情况;Western Blot法检测细胞中凋亡、自噬及m TOR/STAT3信号轴相关蛋白的表达水平。将A549细胞分为空白组、空白+氯喹(10μg·m L^(-1))组、桑色素(30、150μg·m L^(-1))组、桑色素(30、150μg·m L^(-1))+氯喹(10μg·m L^(-1))组,干预48 h后采用CCK-8法检测细胞活性,计算细胞存活率。结果与空白组比较,干预24 h后60、90、120、150μg·m L^(-1)桑色素组的A549细胞抑制率显著升高(P<0.05,P<0.001);干预48、72 h后桑色素30、60、90、120、150μg·m L^(-1)组的A549细胞抑制率显著升高(P<0.001);30、90、150μg·m L^(-1)桑色素组的A549细胞集落数及绿色荧光的增殖阳性细胞数均显著减少(P<0.01,P<0.001),细胞凋亡率均显著升高(P<0.01,P<0.001),cleaved-PARP蛋白表达水平显著升高(P<0.001);90、150μg·m L^(-1)桑色素组A549细胞的p-P38/P38MAPK蛋白表达水平显著升高(P<0.01,P<0.001);30、90、150μg·m L^(-1)桑色素组A549细胞中出现不同程度的橙黄色荧光,以90、150μg·m L^(-1)桑色素组的橙黄色荧光显著;150μg·m L^(-1)桑色素组A549细胞胞浆中分别出现了自噬体和自噬溶酶体;150μg·m L^(-1)桑色素组A549细胞的LC3-Ⅱ蛋白表达明显上调(P<0.05),90、150μg·m L^(-1)桑色素组A549细胞的Atg16L1-Ⅱ蛋白表达显著上调(P<0.001),p-m TOR/m TOR及p-STAT3/STAT3蛋白表达显著下调(P<0.001)。与桑色素(150μg·m L^(-1))组比较,桑色素(150μg·m L^(-1))+氯喹(10μg·m L^(-1))组的A549细胞存活率明显升高(P<0.05)。结论桑色素能够抑制肺癌A549细胞的增殖,促进其凋亡,并诱导自噬,其作用机制可能与m TOR/STAT3信号轴有关。

人类白细胞抗原G(HLA-G)与非小细胞肺癌的研究进展

人类白细胞抗原G(HLA-G)属于非经典主要组织相容性复合体Ⅰb(MHCⅠb)类分子,包括膜结合型和可溶性HLA-G两种形式,通过相应受体调节多种免疫细胞的功能,是形成母胎耐受、肿瘤免疫逃逸的重要免疫学机制之一。非小细胞肺癌(NSCLC)在肺癌中占比最高且预后差,研究发现HLA-G的基因多态性及表达水平与NSCLC发生发展密切相关,提示HLA-G可作为NSCLC早期诊断、亚型区分、治疗及预后等潜在的生物标志物,具有辅助诊断依据的临床价值,对其机制的深入研究更可能提供NSCLC诊疗的新策略。

苦藏花素协同吉非替尼抑制非小细胞肺癌细胞增殖的作用研究

在我国,约35%~40%的非小细胞肺癌患者由表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)编码基因突变所致[1],吉非替尼作为第一代表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs),是EGFR突变的晚期非小细胞肺癌的标准一线治疗方案,但其获得性耐药是疗效限制的主要问题[2-3]。苦藏花素是藏红花最重要的生物活性成分之一,含量仅次于藏红花苷,药效研究表明,苦藏花素具有显著的抑菌作用和抗肿瘤药理活性[4-6]。为深入研究苦藏花素的抗肿瘤作用,本课题组进行了苦藏花素对人非小细胞肺癌细胞株A549、H1650和PC9的增殖作用研究,发现苦藏花素对A549细胞增殖抑制作用最明显,故本研究选择以人肺癌A549细胞为受试细胞,研究苦藏花素与吉非替尼对人肺癌细胞增殖的协同作用,为在临床中联合应用藏红花治疗非小细胞肺癌提供理论依据。

E3泛素连接酶三结构域蛋白59对非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨三结构域蛋白59(TRIM59)对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法将非小细胞肺癌细胞系A549分为siControl组、siTRIM59组、Flag-Vector组和Flag-TRIM59组,用CCK-8实验检测细胞增殖活力;用TUNEL染色实验检测细胞凋亡率;用划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;用蛋白质免疫印记实验检测AKT表达水平和磷酸化水平。结果与siControl组相比,siTRIM59组细胞增殖活力下降(P<0.05),凋亡比例升高(P<0.05),细胞迁移率降低(P<0.05),侵袭到Transwell下层小室的细胞数减少(P<0.05),AKT磷酸化水平下降。与Flag-Vector组相比,Flag-TRIM59组细胞增殖活力增强(P<0.05),凋亡比例降低(P<0.05),细胞迁移率升高(P<0.05),侵袭到Transwell下层小室的细胞数增加(P<0.05),AKT磷酸化水平上升。结论TRIM59促进非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,以及AKT的磷酸化。

姜黄素联合花姜酮对非小细胞肺癌细胞生物学行为的协同作用及机制研究

目的研究姜黄素(CUR)联合花姜酮(ZER)对人非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞生物学行为的协同作用及机制。方法采用CCK-8法和金氏公式筛选CUR和ZER联用后协同作用最佳的浓度组合。后续实验分为空白组、CUR组、ZER组和CUR+ZER组,采用流式细胞术评价细胞凋亡情况,克隆形成实验评价细胞增殖能力,划痕实验、Transwell迁移实验评价细胞迁移能力,Transwell侵袭实验评价细胞侵袭能力,Western blot法检测磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、血管内皮生长因子A(VEGF-A)蛋白的相对表达水平。结果CUR、ZER对A549细胞的半数抑制浓度约为16、12μmol/L;CUR 8μmol/L+ZER 6μmol/L组合的药物联用增效指数最大,其细胞增殖抑制率为(77.41±4.16)%,协同作用最明显。与CUR组、ZER组比较,CUR+ZER组细胞凋亡率显著升高(P<0.01),细胞克隆形成率、细胞迁移率、迁移细胞数、侵袭细胞数,以及细胞中p-PI3K、p-Akt、VEGF-A蛋白的相对表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论CUR和ZER联用后起到协同作用,能显著促进NSCLC细胞凋亡,抑制细胞增殖、迁移和侵袭,其潜在机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路,进而下调VEGF-A的蛋白表达密切相关。

过表达及敲减LncRNA RP11-521C20.3的非小细胞肺癌A549稳转细胞株的构建

目的构建过表达及敲减LncRNA RP11-521C20.3的非小细胞肺癌A549稳转细胞株。方法根据lncRNA RP11-521C20.3基因序列,设计合成引物并进行扩增。将目的基因与Sbf I和EcoRI酶切的载体连接,构建pcSLenti-pA-RP11-521C20.3-CMV-SFH-EGFP-P2A-Puro-WPRE重组质粒,转染293T细胞,包装含lncRNA RP11-521C20.3质粒重组体的慢病毒。构建shRNA(RP11-521C20.3),连接到AgeI和EcoRI双酶切后的pSLenti-U6-shRNA-CMV-EGFP-F2A-Puro-WPRE载体上,经鉴定后转染293T细胞。再利用慢病毒介导,构建重组质粒pcSLenti-pA-RP11-521C20.3-CMV-SFH-EGFP-P2A-Puro-WPRE和pSLenti-U6-shRNA(RP11-521C20.3)-CMV-EGFP-F2A-Puro-WPRE,导入A549细胞。最后采用RT-qPCR技术在基因水平检测lncRNA RP11-521C20.3的表达。结果OV-lncRNA RP11-521C20.3组(过表达组)的lncRNA RP11-521C20.3 mRNA表达量高于NC-lncRNA RP11-521C20.3组(过表达对照组)(P<0.001),差异倍数为(20.43±0.69)。sh-lncRNA RP11-521C20.3组(敲减组)的lncRNA RP11-521C20.3mRNA表达量低于sh-NC组(敲减对照组)(P<0.001),差异倍数为(0.21±0.08)。结论成功构建了lncRNA RP11-521C20.3过表达及敲减稳转细胞株。为后续研究lncRNA RP11-521C20.3在慢性阻塞性肺疾病(COPD)发病机制中的作用奠定重要基础。

miR-152-3p对非小细胞肺癌A549细胞顺铂敏感性的作用及分子机制研究

目的:探究miR-152-3p对非小细胞肺癌A549细胞顺铂敏感性的作用及其分子机制。方法:采用顺铂处理体外培养的A549细胞,检测细胞内miR-152-3p、SOS1表达水平的变化;采用荧光素酶活性检测法分析miR-152-3p与SOS1的调控关系。A549细胞转染miR-152-3p慢病毒过表达载体、SOS1慢病毒过表达载体或慢病毒空载体,采用顺铂处理转染的细胞,比较miR-152-3p过表达或SOS1过表达对A549细胞增殖、细胞周期、凋亡及迁移的影响。结果:与正常培养的A549细胞相比,顺铂处理的A549细胞内miR-152-3p表达水平显著降低,而SOS1表达水平显著升高(P<0.05);生物信息学分析显示SOS1是miR-152-3p的一个潜在靶基因,而荧光素酶活性检测法分析显示miR-152-3p具有负调控SOS1的作用。与转染空载体的A549细胞相比,miR-152-3p过表达显著抑制A549细胞增殖及迁移、阻滞细胞周期、促进细胞凋亡(P<0.05)。miR-152-3p过表达的A549细胞内SOS1表达水平显著低于转染空载体的细胞(P<0.05);与单独转染miR-152-3p过表达载体的细胞相比,同时转染miR-152-3p过表达载体和SOS1慢病毒过表达载体的A549细胞增殖、迁移增强,且细胞凋亡受到显著抑制(P<0.05)。结论:miR-152-3p通过抑制SOS1表达增强A549细胞对顺铂的敏感性,继而抑制A549细胞增殖、迁移,阻滞细胞周期以及促进A549细胞凋亡。

PARP抑制剂Olaparib对非小细胞肺癌细胞的放疗增敏作用及其机制

目的探讨聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)抑制剂Olaparib对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞的放疗增敏作用及其可能的发生机制。方法以人NSCLC细胞A549细胞系为研究对象,采用CCK-8实验检测不同药物浓度梯度对细胞的增殖抑制作用。选择对细胞10%抑制浓度(IC10)作为后续实验的药物浓度,实验分为对照组、Olaparib组、单纯放疗组(RT组)、Olaparib联合放疗组(Olaparib+RT组)。通过克隆形成实验和EDU细胞增殖实验检测Olaparib联合放疗后的增敏效果,流式细胞术检测各组细胞周期分布,Western blot实验检测各组DNA损伤标志蛋白γ-H2AX的表达。结果Olaparib对A549细胞具有抑制作用且呈剂量依赖性;在处理A549细胞24 h后IC10为2.593μmol·L^(-1);Olaparib放疗增敏比为1.966。Olaparib+RT组A549细胞的增殖能力下降(P<0.01);Olaparib+RT组的G2/M期细胞占比高于对照组(46.0%vs 10.8%,P<0.05);且Olaparib+RT组细胞中γ-H2AX明显高于RT组(P<0.01)。结论Olaparib对人NSCLC细胞A549细胞系有着放疗增敏效果,其机制可能与影响细胞周期、增加放疗后细胞DNA双链断裂形成相关。

马钱苷抑制NF-κB通路对A549肺癌细胞增殖、凋亡、侵袭的影响

目的 探讨马钱苷对人非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及其作用机制。方法 不同浓度马钱苷处理A549细胞后,CCK-8实验检测细胞增殖抑制作用及半数抑制率(IC50);将A549细胞分为对照组、马钱苷低剂量组、马钱苷中剂量组、马钱苷高剂量组和Diprovocim组,显微镜下观察A549细胞形态,细胞划痕实验检测迁移能力,Transwell实验测定细胞的侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western Blot技术验证环氧合酶(COX)-2、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、磷酸化(p)-p65、p65蛋白表达。结果 马钱苷抑制A549细胞的增殖(P<0.05);与对照组相比,马钱苷低、中、高剂量组可见悬浮细胞、大部分细胞脱落、细胞皱缩变圆且丝状伪足减少,细胞迁移和侵袭能力以及COX-2、MMP-2、MMP-9、p-p65/p65蛋白表达水平显著下降,凋亡率显著提高(P<0.05);与马钱苷高剂量组相比,Diprovocim组细胞生长状态良好,细胞迁移和侵袭能力以及COX-2、MMP-2、MMP-9、p-p65/p65蛋白表达水平显著提高,凋亡率显著降低(P<0.05)。结论 马钱苷通过抑制核因子-κB通路抑制A549细胞的增殖和侵袭能力,促进细胞凋亡。

纤维蛋白胶凝素-3在非小细胞肺癌中的表达及其生物学功能研究

目的探讨纤维蛋白胶凝素-3(FCN3)调控非小细胞肺癌细胞A549的潜在机制。方法通过在线软件预测对FCN3进行生物信息学分析,并构建其过表达载体和siRNA干扰体系。采用CCK8法和流式细胞仪检测过表达、敲低FCN3对A549细胞增殖和凋亡的影响。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测FCN3对肺腺癌相关基因[染色体盒同源物5(CBX3)、细胞周期依赖激酶抑制剂3(CDKN3)和含杆状病毒凋亡抑制蛋白重复序列蛋白5(BIRC5)]表达的影响。结果过表达FCN3后,A549细胞的凋亡水平升高,增殖水平下降,差异有统计学意义(P<0.05)。敲低FCN3后,A549细胞的凋亡水平下降,增殖水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。过表达FCN3可抑制CBX3、CDKN3和BIRC5 mRNA表达,促进FABP4 mRNA表达;敲低FCN3可促进CBX3、CDKN3和BIRC5 mRNA表达,抑制FABP4 mRNA表达。结论FCN3可以抑制A549细胞增殖,并促进其凋亡。FCN3或可作为非小细胞肺癌的潜在治疗靶点。

HER-2改变在非小细胞肺癌靶向治疗中的研究进展

肺癌是恶性程度和死亡率最高的恶性肿瘤之一,非小细胞肺癌(NSCLC)约占85%。靶向治疗是NSCLC的首选治疗方案。靶向治疗显著改善了ALK、ROS1、BRAF、NTRK、MET和大多数EGFR突变的NSCLC患者的临床结果。但自从发现异常激活的人类表皮生长因子受体2(HER-2)对EGFR抑制剂有耐药性并且其对化疗并不敏感以来,便促进了对HER-2改变的NSCLC患者靶向治疗的深入研究。HER-2改变包括基因突变、扩增和蛋白过表达。HER-2改变的不同类型针对不同的靶向治疗药物,其中HER-2第20外显子突变是NSCLC中具有功能意义的最为重要的驱动突变。本文针对HER-2改变的NSCLC患者的靶向治疗药物:阿法替尼、波齐替尼、吡咯替尼、曲妥珠单抗-美坦新偶联物、溴他替尼等的研究进展进行了详细综述。

非小细胞肺癌合并HIV感染/AIDS手术患者病理和临床特征及术后并发症影响因素分析

目的分析非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)合并HIV感染/AIDS手术病理及临床特征和术后并发症的影响因素,为临床治疗决策提供依据。方法本研究回顾性分析2018年9月至2022年12月在成都市公共卫生临床医疗中心胸外科接受手术的NSCLC合并HIV感染/AIDS患者的病理及临床资料,探究病理及临床特征和术后并发症的危险因素。结果本研究共纳入50例患者,平均年龄(56.86±8.89)岁,其中男性占74.00%,女性占26.00%。腺癌占72.00%,鳞癌占28.00%。29例患者行基因检测及细胞程序性死亡配体1(programmed cell death ligand 1,PD-L1)蛋白检测,EGFR突变率62.06%、KRAS突变率17.24%、BRAF突变率6.90%、ALK突变率3.45%;PD-L1蛋白检测阳性率20.69%(6/29)。术后并发症发生率38.00%(19/50),其中肺部感染14例、肺不张2例、脓气胸1例、乳糜胸2例。通过多因素Logistic回归分析提示术前抗病毒治疗时间≤4周、HIV载量≥40×10^(3)copy/L、CD4^(+)T淋巴细胞计数<200×10^(6)/L为术后并发症的独立危险因素(P<0.05)。结论通过有效抗病毒治疗,保持较高的CD4^(+)T淋巴细胞计数和较低的HIV载量,能有效减少NSCLC合并HIV感染/AIDS患者手术治疗的术后并发症。

臭椿酮对非小细胞肺癌顺铂耐药细胞A549/DDP的增敏作用

目的探讨臭椿酮(AIL)对非小细胞肺癌顺铂耐药细胞系A549/DDP的增敏作用。方法采用MTT检测AIL对A549和A549/DDP细胞活力的影响;Chou-Talalay中效法分析臭椿酮与顺铂的联合用药指数(CI);流式细胞术检测细胞周期及凋亡,Western blotting法检测凋亡相关蛋白表达水平。结果AIL(0.6μmol/L)与DDP(50μg/mL)联合用药有协同作用;细胞周期阻滞在G1期,同时细胞凋亡率升高;Caspase-3和Bcl-2蛋白表达下降,Cleaved Caspase3、Bax、CDK4和CyclinD1的蛋白表达升高。结论AIL可增强A549/DDP细胞对DDP的敏感性,协同DDP抑制A549/DDP细胞的生长,促进其凋亡。

miR-424对非小细胞肺癌细胞株A549迁移及侵袭的影响

目的探讨miR-424对非小细胞肺癌细胞株A549迁移及侵袭的影响。方法 RT-PCR法检测肺癌细胞NCI-H460、NCI-H1975、NCI-H446、A549、NCI-H1299、NCI-H157及人胚肺成纤维细胞MRC-5中miR-424表达,脂质体LipofectamineTM2000将miR-424 inhibitor和miR-424 NC转入A549细胞中,48 h后,RT-PCR法检测miR-424表达,CCK-8法检测细胞活力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,western blot检测基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9、转化生长因子-β1(TGF-β1)及p-Smad3的表达。结果 miR-424在肺癌细胞NCIH460、NCI-H1975、NCI-H446、A549、NCI-H1299、NCI-H157中的[(1.78±0.13),(1.69±0.10),(1.89±0.18),(2.88±0.27),(2.52±0.20),(2.49±0.23)]表达量显著高于miR-424在人胚肺成纤维细胞MRC-5中的(0.58±0.05)表达量(P<0.01)。与miR-424 NC组比较,miR-424 inhibitor组miR-424表达量显著降低(P<0.01),细胞活力下降(P<0.01),细胞迁移及侵袭能力降低(P<0.01),MMP2,MMP9,TGF-β1及p-Smad3表达量均显著下调(P<0.01)。结论 miR-424表达量下调后能通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路进而抑制A549细胞的迁移及侵袭。

维库溴铵对人非小细胞肺癌A549细胞株增殖和转移能力影响分析

目的探讨维库溴铵对非小细胞肺癌A549细胞株增殖能力和转移能力的影响作用。方法2017年1月—2019年2月,将该院44例非小细胞肺癌患者随机等分为两组,每组各22例,分离获取全部入选患者的非小细胞肺癌A549细胞株样本,在体外环境中实施细胞培养处理,为参照组样本运用标准化杜氏高糖培养基实施培养,为研究组运用标准化杜氏高糖培养基联合20.00μg/mL维库溴铵溶液实施培养,对比两组的PI3K/AKT通路相关蛋白表达量指标测算值、A549细胞增殖倍数指标测算值,以及A549细胞凋亡率指标测算值。结果研究组的PI3K表达量指标测算值(0.77±0.04)μg/mL低于参照组(0.90±0.05)μg/mL,差异有统计学意义(t=9.523,P<0.05)。研究组的p-AKT/AKT表达量指标测算值(0.72±0.10)μg/mL低于参照组(0.86±0.08)μg/mL,差异有统计学意义(t=5.128,P<0.05)。研究组的p-mTOR/mTOR表达量指标测算值(0.74±0.09)μg/mL低于参照组(0.80±0.12)μg/mL,差异有统计学意义(t=1.876,P<0.05)。研究组的HIF-1α表达量指标测算值(0.73±0.05)μg/mL低于参照组(0.84±0.08)μg/mL,差异有统计学意义(t=5.469,P<0.05)。研究组的A549细胞增殖倍数指标测算值(3.31±0.37)倍低于参照组(5.50±0.41)倍,差异有统计学意义(t=18.600,P<0.05)。研究组的A549细胞凋亡率指标测算值(19.5±2.2)%高于参照组(4.8±1.0)%,差异有统计学意义(t=28.531,P<0.05)。结论维库溴铵对非小细胞肺癌A549细胞株的增殖能力与转移能力有影响。

基于Hedgehog通路探讨理肺消积丸对NSCLC A549细胞周期、增殖和迁移的影响

目的探讨理肺消积丸对A549细胞的影响作用及对Hedgehog通路的调控作用。方法采用MTT实验筛选理肺消积丸含药血清对A549细胞最佳干预浓度后,将细胞分为6组:对照组、理肺消积含药血清组、Hedgehog通路抑制剂组(Vismodegib组)、顺铂组、理肺消积含药血清+Vismodegib组、理肺消积含药血清+顺铂组。不同干预后,分别采用CCK-8实验检测细胞增殖能力,采用克隆形成实验观察细胞克隆形成能力,采用Transwell实验观察A549细胞迁移能力,采用流式细胞术观察细胞周期比例的变化,采用qRT-PCR和Western blot技术检测Hedgehog通路中Gli1、Ptch1、Smo和CyclinD1 mRNA和蛋白表达的变化。结果浓度为10%的理肺消积丸含药血清能显著抑制A549细胞增殖(P<0.05),降低细胞克隆形成和迁移能力(P<0.05),阻滞细胞周期从G1期到S期转变,同时抑制Gli1、Ptch1、Smo和CyclinD1 mRNA和蛋白表达(P<0.05),且与Vismodegib有良好的协同作用。结论理肺消积丸可显著抑制A549增殖和迁移能力,作用机制可能与其调控Hedgehog通路阻滞细胞周期有关。

华蟾素对非小细胞肺癌细胞株A549细胞增殖及PTEN/AKT/mTOR信号通路表达的影响

目的:观察华蟾素对肺癌细胞A549及PTEN/AKT/mTOR信号通路蛋白表达的影响。方法:在培养肺癌细胞株NCI-A549中分别加入不同浓度的华蟾素,应用细胞计数试剂盒-8检测24、48、72 h后细胞增殖活力,Ki67及EdU检测72 h细胞增殖活力,免疫印迹法检测磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白以及磷酸化第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白的同源基因(phosphorylated-phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,p-PTEN)蛋白表达。结果:0.2μg/mL华蟾素作用于A549细胞株48 h后显示明显抑制增殖作用(P<0.01),0.8μg/mL华蟾素处理12 h后均具有不同程度抑制增殖作用(P<0.05~P<0.01)。不同浓度华蟾素作用于细胞72 h后,p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、p-S6、p-PTEN表达量均较对照组下降(P<0.05~P<0.01),而PI3K、AKT、mTOR、S6及PTEN表达量与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:华蟾素可能通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路蛋白磷酸化,抑制肺癌细胞A549的增殖。