苗药黑骨藤中咖啡酰基奎宁酸类部位对人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞MH7A增殖及炎症因子分泌的影响

目的:研究苗药黑骨藤中咖啡酰基奎宁酸类部位(CADF)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人类风湿性关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞MH7A增殖及炎症因子分泌的影响,探讨CADF抗RA的作用机制。方法:将MH7A细胞分为空白组、TNF-α模型组、甲氨蝶呤组(阳性对照,20 mg/L)和CADF不同质量浓度组(50、100、200、400 mg/L),除空白组外,其余各组均以50μg/L TNF-α刺激活化MH7A细胞。以TNF-α与相应药物的混合液共同作用24 h后,检测细胞的增殖情况和培养液中一氧化氮(NO)、前列腺素E_2(PGE_2)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)的含量。结果:与空白组比较,TNF-α模型组细胞增殖活性显著增强(P<0.01),培养液中NO、PGE2、IL-1β、IL-6含量显著增加(P<0.01);与TNF-α模型组比较,各给药组细胞的增殖均受到显著抑制(P<0.05或P<0.01),培养液中NO、PGE2、IL-1β、IL-6含量均显著减少(P<0.01),且与CADF具有一定的量效关系。结论:CADF可通过抑制TNF-α诱导的MH7A细胞增殖,减少炎症因子NO、PGE2、IL-1β、IL-6的分泌,从而发挥其抗RA的作用。

蕲蛇煮散剂的最佳粉碎粒度优选及其对人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡的影响

目的:优选蕲蛇煮散剂的最佳粉碎粒度,并研究其对人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡的影响。方法:采用柱前衍生化反相高效液相色谱法,以煎煮1次后4种主要氨基酸(天冬氨酸、谷氨酸、L-羟脯氨酸和甘氨酸)的总煎出量为指标,对蕲蛇饮片及过1~8号筛部分进行筛选,优选蕲蛇煮散剂的最佳粉碎粒度。将人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞分为阴性对照组、阳性对照组(1μmol/L甲氨蝶呤)和最佳粉碎粒度蕲蛇煮散剂组(2.0 mg/mL),分别作用48 h后,采用流式细胞术测定细胞凋亡率。结果:蕲蛇煮散剂的最佳粉碎粒度为过6号筛,此时4种主要氨基酸总煎出量为(61.27±0.02)mg/g(n=3)。与阴性对照组比较,最佳粉碎粒度蕲蛇煮散剂组细胞凋亡率显著升高(P<0.05),且略高于阳性对照组。结论:蕲蛇煮散剂的最佳粉碎粒度为过6号筛;蕲蛇煮散剂具有诱导人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡的作用。

马钱子生物碱组分对类风湿性关节炎滑膜细胞增殖作用的比较研究

[目的]比较观察马钱子总生物碱不同组分对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜细胞增殖的影响。[方法]体外培养人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA),加入不同浓度的马钱子总生物碱、马钱子碱和士的宁,采用溴脱氧尿苷(bromodeoxyuridine,BRDU)比色法观察马钱子不同生物碱组分对细胞增殖的影响。[结果]不同浓度的马钱子总生物碱对HFLS-RA细胞增殖表现出良好的抑制作用。同浓度水平组比较,仅在浓度水平为0.22mg.mL-1时,马钱子碱组对细胞增殖的抑制率明显低于士的宁组(P<0.05),其余各浓度水平时均高于士的宁组。以马钱子总生物碱对细胞增殖的抑制率减去士的宁的抑制率,间接反应非士的宁生物碱对该细胞增殖的抑制率,在士的宁和马钱子碱浓度水平均为0.22mg.mL-1或0.11mg.mL-1时,明显低于士的宁组(P<0.01,P<0.05)与马钱子碱组(P<0.01,P<0.01),其余浓度水平时,均高于士的宁组的抑制率(P<0.01),低于马钱子碱组的抑制率但无显著性差异。[结论]马钱子总生物碱、士的宁、马钱子碱对类风湿性关节炎滑膜细胞的增殖均有良好的抑制作用;随着浓度的降低,马钱子碱对滑膜细胞增殖的抑制作用优于士的宁;在马钱子总生物碱中存在的非马钱子碱、非士的宁的生物碱组分未表现出对HFLS-RA细胞增殖的抑制作用。

TAK1基因在类风湿性关节炎滑膜组织的表达与活化研究

目的研究转化生长因子β激活激酶(TAK1,MEKK7)基因在类风湿性关节炎滑膜组织的表达与活性变化,探讨其与类风湿性关节炎的关系。方法本实验采用病例对照研究分别利用RT-PCR和Western-blot方法检测类风湿性关节炎(RA)、骨性关节炎(OA)及非关节炎病人膝关节滑膜中TAK1基因mRNA和蛋白质的表达,并利用磷酸化抗体比较其活性差异,以验证TAK1与类风湿性关节炎发病的相关性。结果 TAK1 mRNA和蛋白在RA病人膝关节滑膜的表达水平明显高于OA和行膝关节镜探查术未见异常的病人,其TAK1酶活性亦高于OA和行膝关节镜探查术未见异常的病人。结论 TAK1基因与类风湿性关节炎发病发生、发展有一定的相关性。