宫颈癌组织中人类黑色素瘤相关抗原A3表达变化及其意义

目的观察宫颈癌组织中人类黑色素瘤相关抗原A3(MAGE-A3)的表达变化,分析其与肿瘤临床病理参数及预后的关系。方法收集宫颈癌组织76例、宫颈上皮内瘤变(CIN)组织40例、正常宫颈组织标本25例,采用免疫组化SP法检测MAGE-A3,分析MAGE-A3表达与患者年龄、FIGO分期、组织病理学分级、淋巴结转移及阴道残端癌累及的关系。收集70例宫颈癌患者的术后随访资料,采用Kaplan-Meier生存曲线分析MAGE-A3表达与患者预后的关系。结果宫颈癌组织、CIN组织、正常宫颈组织中MAGE-A3阳性表达率分别为53.94%、7.50%、0,组间两两相比,P均<0.05。FIGO分期Ⅱa1期宫颈癌组织中MAGE-A3阳性表达率高于Ⅰ期者(P<0.05)。病理分级为G1、G2、G3的宫颈癌组织中MAGE-A3阳性表达率逐渐增高(P均<0.05)。有淋巴结转移的宫颈癌组织中MAGE-A3阳性表达率高于无淋巴结转移者(P<0.05)。MAGE-A3低表达组患者5年生存率为78.1%(25/32),高表达组患者5年生存率为44.7%(17/38),两者相比,P<0.05。结论宫颈癌组织中MAGE-A3阳性表达率高于CIN组织和正常宫颈组织;MAGE-A3高表达可能与宫颈癌的发生发展及不良预后密切相关。

黑色素瘤相关抗原3、zeste 2多梳抑制复合物2亚基增强子在宫颈癌组织中的表达及与患者预后的关系

目的 探讨黑色素瘤相关抗原3(MAGEA3)、zeste 2多梳抑制复合物2亚基增强子(EZH2)在宫颈癌组织中的表达及与患者预后的关系。方法 选取45例宫颈癌患者的宫颈癌组织、18例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者的CIN组织和17例健康体检者的正常宫颈组织,采用免疫组化法检测MAGEA3、EZH2的表达情况。MAGEA3、EZH2表达的相关性采用Spearman相关分析;宫颈癌患者预后的影响因素采用多因素Logistic回归分析。结果 宫颈癌组织中MAGEA3、EZH2的阳性表达率均高于正常宫颈组织和CIN组织,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。淋巴结转移、肌层浸润深度﹥1/2、临床分期为ⅡA期、组织学分级为G3级宫颈癌患者宫颈癌组织中MAGEA3、EZH2的阳性表达率分别高于无淋巴结转移、肌层浸润深度≤1/2、临床分期为Ⅰ期、组织学分级为G1~2级的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。宫颈癌组织中MAGEA3的表达与EZH2的表达呈正相关(r=0.337,P﹤0.05)。MAGEA3、EZH2阳性表达宫颈癌患者的3年生存率均高于阴性表达患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,淋巴结转移、肌层浸润深度﹥1/2、临床分期为ⅡA期、组织学分级为G3级均是宫颈癌患者预后的独立危险因素(P﹤0.05)。结论 MAGEA3、EZH2在宫颈癌组织中表达上调,且阳性表达患者预后较差,淋巴结转移、肌层浸润深度﹥1/2、临床分期为ⅡA期、组织学分级为G3级均是宫颈癌患者预后的独立危险因素。

脑胶质瘤患者血清黑色素瘤相关抗原-A3特异性细胞毒性T淋巴细胞免疫反应水平及临床意义

目的探讨脑胶质瘤组织中黑色素瘤相关抗原-A3(MAGE-A3)蛋白表达和甲基化状态,血清中特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)免疫应答及临床意义。方法采用蛋白质印迹(Western blot)法和甲基化特异性聚合酶链反应(MSP-PCR)技术检测56例脑胶质瘤组织和15例正常脑组织中MAGE-A3蛋白表达和基因甲基化状态,采用Gultured酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测患者外周血单个核细胞(PBMC)中MAGE-A3特异性CTL免疫反应,并明确二者之间的关系,以及与患者临床特征的关系。结果56例脑胶质瘤组织中MAGE-A3蛋白的表达量为(2.26±1.09),明显高于15例正常脑组织中的(0.44±0.18)(P﹤0.01)。脑胶质瘤组织中MAGE-A3基因启动子甲基化率为55.36%(31/56),明显低于正常脑组织的100%(15/15)(P﹤0.01)。脑胶质瘤患者血清MAGE-A3特异性CTL免疫应答阳性率为33.93%(19/56),平均反应强度为(2301.70±560.33)SFC/106 PBMC。同一患者脑胶质瘤组织中MAGE-A3基因启动子甲基化状态与MAGE-A3蛋白高表达结果一致性一般(Kappa=0.679,P﹤0.01)。同一患者血清MAGE-A3特异性CTL免疫应答阳性与组织中MAGE-A3蛋白高表达结果一致性一般(Kappa=0.464,P﹤0.01)。脑胶质瘤患者血清中MAGE-A3特异性CTL免疫反应强度与组织中MAGE-A3蛋白表达量呈正相关(r=0.788,P﹤0.01)。不同肿瘤大小及临床分期的脑胶质瘤患者血清MAGE-A3特异性CTL免疫反应频率比较,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。结论脑胶质瘤组织中MAGE-A3基因启动子区DNA去甲基化导致MAGE-A3蛋白表达量升高,进而刺激机体产生MAGE-A3特异性CTL免疫应答反应,参与肿瘤生长和恶性进展。

表达黑色素瘤抗原-A3重组质粒的免疫原性研究

目的对新型肺癌基因疫苗的免疫原性进行评价。方法利用Furin 2A将黑色素瘤抗原A3(MAGE-A3)基因与GM-CSF基因进行连接,克隆入真核表达载体p VAX1,构建基因疫苗p VAX1-MAGE-A3-F2A-GM-CSF。将该疫苗体外转染293T细胞,利用免疫印迹和ELISA的方法对其表达情况进行检测。然后,将疫苗及对照组分别免疫接种小鼠,通过ELISA和ELISPOT法初步检测其诱导的体液免疫和细胞免疫反应。结果成功克隆并构建了肺癌基因疫苗p VAX1-MAGE-A3-F2A-GM-CSF,并证实了其在真核细胞中表达。疫苗免疫接种小鼠模型后的检测结果显示,与空载体对照组以及单独抗原组相比,p VAX1-MAGE-A3-F2A-GM-CSF能够诱导产生更强的体液免疫反应和细胞免疫反应。结论 p VAX1-MAGE-A3-F2A-GMCSF能够同时诱导较强的体液免疫和细胞免疫反应,其抗肿瘤效应将通过进一步实验深入研究。

负载乙肝核心抗原-黑色素瘤抗原-A3融合蛋白的外周血单个核细胞对人非小细胞肺癌细胞体外杀伤作用的实验

目的研究经负载乙肝核心抗原(hepatitis B core antigen,HBVc)-黑色素瘤抗原-A3(melanoma antigen gene-A3,MAGE-A3)融合蛋白的外周血单个核细胞(peripheral blood monocyte cell,PBMC)激活的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)对MAGE-A3高表达人非小细胞肺癌细胞的特异性体外杀伤作用。方法从健康人外周血中分离出单个核细胞(peripheral blood monocyte cell,PBMC),使用白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)刺激PBMC,将负载HBVc-MAGEA3融合蛋白的PBMC与正常PBMC共培养,诱导出特异性细胞毒性T淋巴细胞,以该共培养后的PBMC作为效应细胞,以高表达MAGE-A3抗原的人非小细胞肺癌细胞株NCI-H358为靶细胞,低表达MAGE-A3抗原的细胞系HEK-293T作为对照,进行肿瘤细胞杀伤试验。结果负载HBVc-MAGE-A3融合蛋白抗原的外周血单个核细胞能够成功诱导出特异性的细胞毒性T淋巴细胞,并且对非小细胞肺癌细胞有显著的杀伤作用,其杀伤率显著高于对照组(P<0.05)。当使用MAGEA3高表达的NCI-H358细胞作为靶细胞,效靶比(E∶T)=10∶1时,HBVc-MAGE-A3组的杀伤率约为60%,HBVc组和空白对照(no template control,NTC)组的杀伤率约为35%;E∶T=20∶1时,HBVc-MAGE-A3组的杀伤率约为90%,HBVc组和NTC组的杀伤率约为45%。当使用MAGE-A3低表达的HEK-293T作为靶细胞时,三组间杀伤率差异无统计学意义。结论 MAGE-A3融合蛋白抗原负载的外周血单个核细胞可以在体外成功诱导出特异性针对非小细胞肺癌细胞的细胞毒性T淋巴细胞,并具有特异性免疫杀伤作用。

黑色素瘤相关抗原MAGEA1的定位及其相互作用蛋白质的鉴定

黑色素瘤相关抗原家族A1蛋白(melanoma associated antigen family A1,MAGEA1)在生殖细胞和多种组织学来源的肿瘤中有表达,但其作用机制尚不清楚。本研究通过构建带Flag和GFP标签的MAGEA1真核表达重组质粒,将其转染至HeLa、HEK293T细胞内。利用Western印迹、免疫细胞荧光法、免疫共沉淀、细胞核蛋白质与细胞质蛋白质分离和线粒体提取等技术,检测其在细胞内的表达与定位以及与其他蛋白质的相互作用情况。免疫细胞化学和蛋白质印迹结果显示,过表达的MAGEA1主要定位于细胞质,并部分与线粒体共定位。通过免疫共沉淀验证了MAGEA1与TRIM31、SNW1、HDAC1之间存在相互作用,并且发现MAGEA1可能主要与位于细胞质中的HDAC1相互作用。以上研究表明,MAGEA1可能参与不同的细胞内调节途径,部分与线粒体共定位;与TRIM31、SNW1、HDAC1相互作用,且可能主要与位于细胞质中的HDAC1蛋白相互作用,推测其可能参与到蛋白质泛素化和Notch信号通路。本研究的结果为后续深入研究MAGEA1的作用机制奠定了实验基础。

黑色素瘤相关抗原A3 E-钙黏蛋白及P53在宫颈癌组织中的表达与意义

目的研究黑色素瘤相关抗原A3(MAGE-A3)、E-钙黏蛋白(E-cad)及P53在宫颈癌组织中的表达与意义,为宫颈癌基因方面的病情检测提供新的思路。方法选取2019年3月—2021年3月义乌市中心医院收治的86例宫颈癌患者为研究对象,应用免疫组织化学法检测患者癌组织及相应的癌旁组织中MAGE-A3、E-cad、P53的表达水平,采用Pearson相关性分析法分析MAGE-A3、E-cad、P53之间的相关性。结果宫颈癌组织中MAGE-A3、E-cad、P53阳性表达率分别为45.35%(39例)、40.70%(35例)、26.74%(23例);癌旁组织中MAGE-A3、E-cad、P53阳性表达率分别为8.14%(7例)、88.37%(76例)、2.33%(2例)。与癌旁组织比较,癌组织中MAGE-A3、P53阳性表达率均升高,E-cad阳性表达率降低,两组比较差异均具有统计学意义(MAGE-A3:χ^(2)=30.388,P<0.05;E-cad:χ^(2)=42.702,P<0.05;P53:χ^(2)=18.721,P<0.05)。不同TNM分期、分化程度、淋巴结转移情况的患者宫颈癌组织中MAGE-A3、E-cad、P53阳性表达率比较,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。宫颈癌组织中,MAGE-A3与E-cad表达呈负相关(r=-0.261,P<0.05),MAGE-A3与P53表达呈正相关(r=0.871,P<0.05),E-cad与P53表达呈负相关(r=-0.486,P<0.05)。结论宫颈癌组织中MAGE-A3、P53阳性表达呈上调状态,E-cad阳性表达呈下调状态,三者之间紧密相关,并且其表达水平的高低变化与TNM分期、分化程度、淋巴结转移等临床病理特征有关,可能共同参与了宫颈癌的发生、发展。

负载MAGE-A3抗原的树突状细胞与细胞因子诱导杀伤细胞共培养对子宫内膜癌肿瘤干细胞及恶性进展的影响

目的:探究负载黑色素瘤相关抗原基因A3(MAGE-A3)的树突状细胞(DC)与细胞因子诱导杀伤细胞(CIK)对子宫内膜癌肿瘤干细胞及恶性进展的影响。方法:采集人外周血分离单个核细胞,利用细胞因子分别诱导生成DC和CIK;MAGE-A3孵育DC后与CIK共培养,流式细胞仪检测DC-CIK、MAGE-A3-DC-CIK的表型;流式细胞仪分选子宫内膜癌细胞系Ishikawa的CD133^(+)干细胞,以子宫内膜癌干细胞作为靶细胞,分别以CIK、DC-CIK及MAGE-A3-DC-CIK作为效应细胞,MTT法检测效靶比为10∶1、20∶1、40∶1的细胞杀伤活性,ELISA法检测联合培养细胞上清液中IFN-γ、IL-2、IL-12、IL-17水平,Annexin V-FITC/PI双染法检测子宫内膜癌干细胞凋亡;建立子宫内膜癌干细胞移植瘤裸鼠模型,尾静脉注射DC-CIK或MAGE-A3-DC-CIK,观察裸鼠肿瘤生长情况,每隔2 d测量瘤体大小,21 d后取肿瘤组织,电子天平称重,HE染色观察肿瘤组织病理形态学变化,免疫组织化学染色检测肿瘤组织内Ki-67表达。结果:分离获得细胞表面CD80、CD86、HLA-DR表达分别达到88%、86%和90%的DC;MAGE-A3-DC-CIK组细胞表面CD8^(+)CD3^(+)、CD56^(+)CD3^(+)比例均高于DC-CIK组(P<0.01);经磁珠分选后获得CD133^(+)细胞比例高达90.23%的子宫内膜癌干细胞;与CIK组和DC-CIK组比较,MAGE-A3-DC-CIK组在不同效靶比下对子宫内膜癌干细胞的杀伤能力升高,细胞上清中IFN-γ、IL-2、IL-12及IL-17的分泌水平升高,培养液上清处理的子宫内膜癌干细胞凋亡率增加,差异均具有统计学意义(P<0.01);同时,与对照组和DC-CIK组比较,MAGE-A3-DC-CIK组移植瘤裸鼠的肿瘤体积小,肿瘤重量轻,肿瘤组织内细胞稀疏,Ki-67阳性细胞率减小,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论:负载MAGE-A3的DC与CIK联合培养能促进CIK成熟,提高对子宫内膜癌干细胞的杀伤性,并抑制移植瘤裸鼠的恶性进展。

介导重度TRALI的人类中性粒细胞抗原3(HNA-3)在不同种族人群中基因频率分布的研究

目的探讨编码人类中性粒细胞抗原-3(Human neutrophil antigens-3,HNA-3)的SLC44A2基因在江苏省汉族人群、美国白种人及美国黑人中的多态性及频率分布。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应(Polymerase chain reaction-sequence specific priming,PCR-SSP)方法,分别对随机无亲缘关系的3个种族献血者的SLC44A2基因进行检测,其中包括江苏省的203名汉族、美国的102名白种人和245名黑人;同时采用PCR方法扩增相关外显子及侧翼内含子并进行测序分析,进一步验证PCR-SSP结果的准确性。结果汉族人群中HNA-3a/3a有91例,HNA-3a/3b 86例,HNA-3b/3b 26例;美国白种人中HNA-3a/3a有73例,HNA-3a/3b有26例,HNA-3b/3b有3例;美国黑人中HNA-3a/3a有212例,HNA-3a/3b有31例,HNA-3b/3b有2例。HNA-3a在江苏汉族人群,美国白种人及黑人中的基因频率分别为0.66,0.84和0.93;HNA-3b在江苏汉族人群,美国白种人及黑人中的基因频率分别为0.34,0.16和0.07。HNA-3b/3b纯合子在江苏省汉族人群的频率明显高于美国白种人及美国黑人,具有统计学意义(P<0.01)。结论编码HNA-3抗原的等位基因频率在3种不同种族中的分布存在多态性;该抗原的多态性及可能造成的TRALI需要引起临床上更多的关注。

宫颈癌癌组织及外周血单个核细胞中MAGE-A3的表达及其临床意义

目的探究宫颈癌癌组织及外周血单个核细胞(PBMC)中黑色素瘤相关抗原-A3(MAGE-A3)表达及临床意义。方法通过方便抽样选取2020-05至2022-05保定市妇幼保健院及河北大学附属医院收治的因宫颈病变拟行宫颈锥切术或广泛性子宫切除术患者96例,根据术后病理结果分为宫颈癌组和子宫颈鳞状上皮内病变(SIL)组,采用免疫组化法检测病变组织MAGE-A3蛋白表达情况。采用实时荧光定量PCR法检测宫颈病变组织及PBMC中MAGE-A3 mRNA表达水平,分析宫颈癌患者癌组织及PBMC中MAGE-A3mRNA表达与血清肿瘤标志物相关性以及癌组织MAGE-A3蛋白表达与临床病理特征关系。结果宫颈癌癌组织MAGE-A3蛋白表达阳性率与FIGO分期、肿瘤的直径大小、分化程度、淋巴结转移、感染高危型HPV有关(P<0.05),与年龄、病理类型无关(P>0.05)。宫颈癌组癌组织和PBMC中MAGE-A3 mRNA表达水平分别为(1.33±0.46)、(1.70±0.49),均显著高于SIL组(0.59±0.20、0.92±0.33)(P<0.05),血清SCC-Ag[(3.87±1.69)ng/ml]、CA-125[(48.62±15.10)U/ml]均显著高于SIL组[(0.70±0.32)ng/ml、(25.36±8.33)U/ml](P<0.05);宫颈癌组癌组织MAGE-A3蛋白表达阳性率(66.07%)显著高于SIL组(30.00%)(P<0.05);宫颈癌患者癌组织、PBMC中MAGE-A3 mRNA表达水平与血清SCC-Ag、CA-125均呈正相关(P<0.05)。结论宫颈癌患者癌组织及PBMC中MAGE-A3表达均上调,且与患者血清肿瘤标志物水平及病情进展有关,MAGE-A3有望成为早期宫颈癌诊断的重要标志物。

黑色素瘤相关抗原-A3蛋白激活树突状细胞诱导CD8＋细胞毒性T淋巴细胞免疫治疗肝细胞癌

目的探讨黑色素瘤相关抗原-A3（MAGE-A3）蛋白激活树突状细胞（DC），然后诱导产生CD8＋细胞毒T淋巴细胞（CTL）进行免疫治疗肝细胞癌（简称肝癌）的效果。 方法利用MAGE-A3蛋白诱导DC成熟并检测DC表面标志物及白细胞介素（IL）-10、IL-12表达，然后利用成熟的MAGE-A3-DC诱导MAGE-A3特异性CD8＋CTL，并检测MAGE-A3-DC-CD8＋CTL对正常肝细胞L02和肝癌细胞HepG2的杀伤作用。建立BALB/c-nu/nu肝癌模型，检测MAGE-A3-DC-CD8＋CTL对小鼠肿瘤的抑制作用，并通过病理学切片观察肿瘤组织变化。 结果MAGE-A3蛋白刺激能够显著上调DC表面标志物DC80、DC83、DC86和人类白细胞抗原DR基因（HLA-DR）水平（97.45±2.58比48.33±1.68，92.81±2.36比52.92±1.90，94.00±3.01比53.97±2.05，92.16±1.87比34.13±1.32；t＝35.680，P＝0.013；t＝29.440，P＝0.021；t＝24.580，P＝0.012；t＝56.690，P＝0.009）；与磷酸盐缓冲液（PBS）刺激的DC比较，MAGE-A3蛋白能够显著促进DC释放IL-12[（338.44±18.15） pg/ml比（243.23±16.56） pg/ml；t＝8.670，P＝0.005]和显著抑制IL-10的释放[（207.21±10.89） pg/ml比（327.58±14.36） pg/ml；t＝14.930，P＝0.009]。MAGE-A3-DC-CD8＋CTL和DC-CD8＋CTL展示了相近的L02细胞杀伤效果[（9.10±1.40）%比（9.71±1.58）%；t＝0.650，P＝0.120]，与DC-CD8＋CTL比较，MAGE-A3-DC-CD8＋CTL展示了显著的HepG2细胞杀伤效果[（58.84±5.27）%比（9.63±1.61）%；t＝19.970，P＝0.008]。BALB/c-nu/nu肝癌小鼠经过MAGE-A3-DC-CD8＋CTL治疗后，肿瘤体积比显著低于PBS组和DC-CD8＋CTL组（5.43±1.22比21.81±2.01比22.85±2.40；t＝22.030，P＝0.010；t＝20.460，P＝0.012）。苏木素-伊红（HE）染色结果显示，经过MAGE-A3-DC-CD8＋CTL处理的肿瘤组织细胞核固缩，细胞间隙增大，出现空泡和水肿现象，而PBS组和DC-CD8＋CTL组肿瘤组织无病理学改变。结论MAGE-A3蛋白能够刺激DC细胞成熟并诱导产生MAGE-A3蛋白特异性CD8＋CTL，MAGE-A3-DC-CD8＋CTL具有特异性的肿瘤杀伤能力。

黑色素瘤相关抗原-A3基因重组慢病毒载体的构建与鉴定及其在肺癌细胞株中的表达

目的构建重组慢病毒载体PLV—MAGE-A3-GFP，并检测其在人肺癌细胞系A549的表达情况。方法利用DNA重组技术将MAGE-A3基因克隆到带GFP的慢病毒表达载体质粒PLV中，经限制性酶切和测序鉴定重组载体。将重组慢病毒载体PLV-MAGE-A3-GFP与包装质粒pCMV-dR8．91及pCMV—VSVG共转染人胚肾上皮细胞株293TAB，包装重组慢病毒PLV-MAGE—A3-GFP，并感染人肺癌细胞株A549，用Westernblot法检测MAGE—A3蛋白的表达情况。结果限制性内切酶酶切和DNA测序分析证实，构建了重组慢病毒载体PLV—MAGE-A3-GFP，免疫荧光显微镜下观察显示慢病毒感染A549细胞后，MAGE-A3基因能够在细胞内正确地转录、翻译并稳定表达MAGE—A3基因。结论成功构建了慢病毒载体PLV—MAGEA3-GFP，包装的病毒能够成功感染人肺癌细胞系A549，并使MAGE—A3基因得以稳定表达，为进一步对非小细胞肺癌进行免疫治疗提供了适合的稳定转染的载体。

人类黑色素瘤相关抗原A9在人食管鳞状细胞癌中的表达及其与预后的关系

目的探讨人食管鳞状细胞癌中人类黑色素瘤相关抗原A9（MAGE—A9）的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学检测53例食管鳞癌和30例正常食管组织中MAGE—A9蛋白表达水平，实时定量反转录聚合酶链反应（RT—qPCR）检测食管鳞癌癌组织和正常食管黏膜组织叶JMACE—A9基因表达水平。结果MAGE—A9在正常食管黏膜中微弱表达，而在食管鳞癌组织中显著离表达；癌组织中MACE—A9蛋白相对表达量（3．620±2．009）明显高于正常食管黏膜组织（0．300±0．652），差异有统计学意义（P〈0．05）。MAGE—A9mRNA表达水平（0．722±0．352）显著高于正常食管组织（0．223±0．292），差异有统计学意义（P〈0．05）。结论MAGE．A9在食管鳞癌中高表达，且与临床病理因素及预后相关。

MAGE-A3抗原肽负载树突状细胞治疗小鼠乳腺癌移植瘤

目的研究黑色素瘤相关抗原基因A3(MAGE-A3)抗原肽负载树突状细胞(DCs),在乳腺癌动物模型免疫治疗中的作用。方法采用MAGE-A3抗原肽负载树突状细胞,过继免疫治疗乳腺癌的小鼠模型,观察其治疗效果。结果抗原负载的DCs治疗组的生存率(100%)、抑瘤率(76·3%)明显高于对照组(P<0·05);肿瘤转移率(22·2%)低于对照组(P<0·05)。同时,治疗组的小鼠生存质量高于对照组。结论MAGE-A3抗原肽负载DCs疫苗是一种比较安全有效的治疗方法。

人类黑色素瘤相关抗原A9检测对早期宫颈癌的诊断价值

目的探讨早期宫颈癌患者癌变组织中人类黑色素瘤相关抗原A9(MAGE-A9)检测对疾病诊断的价值。方法选取2017年1月至2018年9月间武汉市江夏区中医院病理科的30例正常宫颈组织标本、30例宫颈上皮内瘤变组织标本和50例宫颈癌组织标本,检测各组织中MAGEA9表达情况,分析宫颈癌组织标本中MAGE-A9表达阳性和患者年龄、临床分期、病理分级、病理类型及淋巴结转移的关系。结果宫颈癌组织标本中MAGE-A9检测阳性率为80. 0%(40/50),高于正常宫颈组织的30. 0%(9/30例)和宫颈上皮内瘤变组织的36. 7%(11/30),差异均有统计学意义(均P <0. 05)。宫颈癌患者组织标本中临床分期ⅡA期、病理分级G3级和淋巴结转移的MAGE-A9阳性表达率高,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。结论 MAGE-A9在早期宫颈癌患者组织中检测阳性率高,且与宫颈癌组织病理类型及转移情况有关。

免疫浸润相关基因mRNA在宫颈癌与宫颈癌前病变中的表达及其与预后的关系

目的探讨免疫浸润相关基因mRNA在宫颈癌与宫颈癌前病变中的表达水平及其与预后的关系。方法选取延安大学附属医院2017年1月至2019年1月宫颈癌患者74例作为宫颈癌变组,宫颈癌前病变患者74例作为宫颈癌前病变组,另选取同期因子宫肌瘤行子宫切除术患者74例作为宫颈正常组,比较3组免疫浸润相关基因[人类白细胞抗原G(HLA-G)、叉状头螺旋转录因子3(FOXP3)、T细胞免疫球蛋白粘连蛋白-3(TIM-3)]、恶性生物学行为相关基因[侵袭基因p21-活化的激酶6(PAK-6)、zeste 2多梳抑制复合物2亚基增强子(EZH2)、增殖基因血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)、同源盒基因B7(HOXB7)]的mRNA相对表达量,分析免疫浸润相关基因与宫颈癌发生及宫颈癌恶性生物学行为的关系,并统计对比不同免疫浸润相关基因表达水平患者3年生存率。结果HLA-G、FOXP3、TIM-3 mRNA相对表达量为宫颈癌变组>宫颈癌前病变组>宫颈正常组(P<0.05);不同临床分期、分化程度,以及有无淋巴结转移、有无脉管浸润患者的HLA-G、FOXP3、TIM-3、PAK-6、EZH2、ANGPTL4、HOXB7 mRNA相对表达量差异有统计学意义(P<0.05);HLA-G、FOXP3、TIM-3的mRNA高表达患者宫颈癌前病变进展至宫颈癌的风险分别是低表达患者的3.005倍、4.654倍、3.343倍;宫颈癌患者HLA-G、FOXP3、TIM-3 mRNA与侵袭相关基因PAK-6、EZH2 mRNA、增殖相关基因ANGPTL4、HOXB7的mRNA表达呈正相关(P<0.05);随访3年,失访2例,72例宫颈癌患者3年生存率为68.06%(49/72),HLA-G、FOXP3、TIM-3的mRNA高表达患者3年生存率均低于低表达患者(P<0.05)。结论免疫浸润相关基因HLA-G、FOXP3、TIM-3的mRNA在宫颈癌与宫颈癌前病变中呈上调表达,会显著增加宫颈癌发病风险,且与宫颈癌恶性生物学行为密切相关,还可能对生存预后产生重要影响。

胃癌中CAGE、MAGE-A1和MAGE-A3的去甲基化

目的:探讨肿瘤相关抗原基因(cancer associated antigen gene,CAGE)、黑色素瘤抗原基因-A1(melanoma antigen gene A1,MAGE-A1)、黑色素瘤抗原基因-A3(melanoma antigen gene A3,MAGE-A3)启动子区去甲基化与胃癌临床特点的关系和意义.方法:应用甲基化特异性PCR(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)的方法检测30例胃癌和25例正常胃黏膜标本中CAGE、MAGE-A1和MAGE-A3基因启动子区的去甲基化状态,并分析其与胃癌临床病例参数间的关系.结果:胃癌组CAGE、MAGE-A1和MAGE-A3基因启动子去甲基化阳性率(80.0%、60.0%、46.7%)均明显高于正常胃黏膜组(4.0%、0.0%、8.0%,P<0.05).胃癌组中,CAGE基因启动子区去甲基化与淋巴转移和临床分期有关(P=0.016;P=0.026);MAGE-A1基因启动子区去甲基化与组织分化程度和临床分期有关(P=0.042;P=0.002);MAGE-A3基因启动子区去甲基化与淋巴转移和组织分化程度有关(P=0.034;P=0.026).结论:CAGE、MAGE-A1和MAGE-A3基因启动子区去甲基化的检测可能有助于判断胃癌的组织分化程度、淋巴结转移和临床分期,有可能成为胃癌治疗及判断预后的分子标志物.

RNA干扰MAGEA3对人肝癌细胞凋亡的影响

目的:探讨小发夹RNA(shRNA)载体介导抑制人肝癌细胞中黑色素瘤相关抗原A3(MAGEA3)的表达和对肝癌细胞凋亡的影响。方法:构建pS ilencer-MAGEA3短发夹状siRNA真核基因表达载体,采用脂质体介导的方法将其转染到人肝癌细胞(m el-ed1)中,用W estern印迹法、RT-PCR检测MAGEA3基因在肝癌细胞中的表达;通过原位末端标记TUNEL法、DNA片段化及Annexin V/PI双标记法检测,观察其对肝癌细胞凋亡的影响。结果:成功构建pS ilencer-MAGEA3短发夹状siRNA真核基因表达载体,转染特异性小发夹RNA质粒表达载体的MEL-ED1细胞中MAGEA3基因表达显著抑制(90%)。与对照组比较,pS ilencer-MAGEA3转染组肝癌细胞培养48 h后,DNA片段化检测出“DNA ladder”、TUNEL法显示细胞典型凋亡特征,Annexin V/PI双标检测转染组细胞凋亡率为21.41%±1.98%,明显高于pS ilencer-neo空载体转染组和未转染组(P<0.01)。结论:MAGEA3小发夹RNA质粒载体可显著抑制MEL-ED1细胞中的MAGEA3基因的表达,促进肝癌细胞的凋亡,MAGEA3基因具有抑制凋亡的作用。该研究为应用RNA i进行肿瘤的基因治疗提供了实验依据。

鼻颅底肿瘤SALL4,MAGE-A3特异性CTL免疫反应水平及其临床意义

目的:探讨鼻颅底肿瘤人类婆罗双树样基因-4(SALL4)和黑色素瘤抗原-A3(MAGE-A3)特异性CTL免疫反应水平及其临床意义。方法:收集2016年5月至2017年12月期间在南阳市中心医院经病理学确诊的鼻颅底肿瘤患者62例作为研究对象。统计所有入选对象血清SALL4,MAGE-A3特异性CTL免疫反应水平数据,分析血清SALL4,MAGE-A3特异性CTL免疫反应频率及强度与患者临床病理参数的关系。以患者4~18个月的随访结果进行分组,将随访期间出现肿瘤复发、转移或死亡等任意一项的患者纳入不良组,其余纳入良好组。绘制ROC曲线分析血清SALL4,MAGE-A3特异性CTL免疫反应水平预测患者预后的效能。结果:鼻颅底肿瘤患者血清中SALL4,MAGE-A3特异性CTL免疫反应频率分别为58.06%(36/62),54.84%(34/62),反应强度分别为4 089.26±263.76 SFC/106 PBMC,2 389.17±167.53 SFC/106 PBMC。血清SALL4,MAGE-A3特异性CTL免疫反应频率及强度在患者的分化程度、肿瘤大小、肿瘤侵袭性之间比较,差异无统计学意义(P>0.05),在TNM分期I^II期与III^IV期的对比,差异有统计学意义(P<0.05)。为期4~18个随访统计,预后不良者30例(48.39%),预后良好者32例(51.61%)。通过ROC曲线分析及最大约登指数计算出血清SALL4,MAGE-A3特异性CTL免疫反应频率及强度的AUC面积为SALL4(0.853),MAGE-A3(0.765)。以最大约登指数计算得出SALL4,MAGE-A3指标的最大AUC面积相应参数截止值,其中SALL4截止值为3 789.178 SFC/10~6 PBMC(灵敏度=81.70%,特异性=92.60%),MAGE-A3截止值为2 342.275 SFC/10~6 PBMC(灵敏度=77.40%,特异性=81.30%)。结论:鼻颅底肿瘤SALL4,MAGE-A3特异性CTL免疫反应频率及强度与患者TNM分期密切相关,在预测患者预后方面具有较强的特异性和灵敏度。鼻颅底肿瘤患者血清SALL4,MAGE-A3免疫反应水平对预后诊断具有指导价值。

舌鳞癌细胞中肿瘤特异性MAGE-A3基因的克隆

目的从人舌鳞癌细胞株Tca8113中扩增出编码MAGE-A3全长抗原蛋白的基因序列，并对其进行测序及鉴定。方法采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）从人舌鳞癌细胞株Tca8113中获取MAGE-A3蛋白编码基因，通过TA克隆后的酶切鉴定以及基因测序鉴定MAGE-A3的正确性。结果（1）RT-PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果示，GeneRuler 100bp DNA Ladder的1031bp和900bp之间出现一条明显的目的条带，大小与附加了酶切位点的MAGE-A3目的片段大小相符。（2）双酶切可见大小约3000bp和1000bp的目的条带；单酶切可见大小约4000bp的目的条带，结果与预期相符。（3）经DNA SIS MAX分析软件比对分析，测序结果与Pubmed基因库中查询获得的人MAGE-A3序列一致，MAGE-A3提取成功。结论MAGE-A3的成功提取为进一步研究MAGE-A3抗原蛋白的表达及表达产物诱导特异性抗肿瘤免疫应答提供了实验基础，为抗肿瘤疫苗的研究提供了实验依据。