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烟粉虱MED隐种14-3-3基因克隆及时空表达谱分析
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作者 韦焕文 王培 +4 位作者 陈建斌 杜娇 张德咏 刘勇 史晓斌 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期595-602,共8页
【目的】真核生物中,14-3-3蛋白是一类可与多种蛋白互作的调节蛋白,能够参与信号转导、免疫反应、生长发育和胁迫响应等。本研究旨在克隆烟粉虱Bemisia tabaci MED隐种的14-3-3基因的全长cDNA序列,了解该基因编码的蛋白特征和该基因的... 【目的】真核生物中,14-3-3蛋白是一类可与多种蛋白互作的调节蛋白,能够参与信号转导、免疫反应、生长发育和胁迫响应等。本研究旨在克隆烟粉虱Bemisia tabaci MED隐种的14-3-3基因的全长cDNA序列,了解该基因编码的蛋白特征和该基因的时空表达模式。【方法】使用RT-PCR技术克隆烟粉虱MED隐种的14-3-3基因全长cDNA序列,通过生物信息学软件和在线网站分析14-3-3基因的生物学特性;使用RT-qPCR测定14-3-3基因在烟粉虱MED隐种不同发育阶段(卵、1-4龄若虫和成虫)、雌雄成虫以及雌成虫头、胸和腹中的表达量。【结果】克隆并鉴定了烟粉虱MED隐种14-3-3基因的两个亚型:Bt14-3-3 epsilon(GenBank登录号:XM_019046102.1)和Bt14-3-3 zeta(GenBank登录号:XM_019057395.1),开放阅读框(ORFs)分别长771和744 bp,分别编码256和247个氨基酸,编码的蛋白是无跨膜螺旋区和信号肽的亲水性蛋白,其二级结构主要由α旋螺旋组成。系统发育树分析表明,Bt14-3-3 epsilon与褐飞虱Nilaparvata lugens、温带臭虫Cimex lectularius和茶翅蝽Halyomorpha halys的14-3-3 epsilon聚为一支,同源性较高;Bt14-3-3 zeta与褐飞虱的14-3-3 zeta的亲缘关系更近。RT-qPCR结果表明,Bt14-3-3 epsilon和Bt14-3-3 zeta在烟粉虱MED隐种的卵、雌成虫和雌成虫腹部中的表达量较高。【结论】明确了烟粉虱MED隐种14-3-3基因的两个亚型的全长序列、编码蛋白特征及时空表达特点,为后续研究14-3-3蛋白的分子功能奠定了基础。 展开更多
关键词 烟粉虱 基因克隆 14-3-3蛋白 生物信息学 时空表达
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菊芋14-3-3基因家族的鉴定及其对非生物胁迫响应的分析
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作者 任文才 岳杨 +2 位作者 丁柏水 高秀美 周兆胜 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期477-488,共12页
[目的]本文旨在鉴定菊芋14-3-3基因家族成员并分析它们对高温、低温、盐和干旱胁迫响应的表达模式,为研究14-3-3蛋白功能及菊芋育种提供依据。[方法]采用克隆和生物信息学研究基因性质,采用RNA-seq数据分析和RT-qPCR研究基因对非生物胁... [目的]本文旨在鉴定菊芋14-3-3基因家族成员并分析它们对高温、低温、盐和干旱胁迫响应的表达模式,为研究14-3-3蛋白功能及菊芋育种提供依据。[方法]采用克隆和生物信息学研究基因性质,采用RNA-seq数据分析和RT-qPCR研究基因对非生物胁迫的响应模式。[结果]从菊芋中克隆到14-3-3基因家族的10个成员HtGRF1—HtGRF10,GenBank登录号为OP132618—OP132627。根据进化关系将其分为2个亚家族:HtGRF1—HtGRF7属于非ε组,HtGRF8—HtGRF10属于ε组,通常形成同源或异源二聚体。组织表达分析表明,HtGRF2/3/6/9在芽、根、茎、叶中的表达丰度较高,HtGRF3/5/9在块茎发育过程中前高后低。综合分析根和叶中HtGRF对非生物胁迫响应时发现,HtGRF6表达水平在高温、盐和干旱胁迫下下降;HtGRF2/3/7/8/9表达水平在盐胁迫下下降,而在干旱胁迫下上升;HtGRF1表达水平在低温胁迫下上升;HtGRF4/5表达水平在干旱胁迫下下降;而HtGRF10表达水平变化不显著。[结论]菊芋14-3-3蛋白是一个高度保守的多基因编码家族,在菊芋的生长发育和适应复杂环境中起着重要作用。 展开更多
关键词 菊芋 14-3-3蛋白 基因克隆 组织表达 非生物胁迫
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国人Creutzfeldt-Jakob病临床、病理、免疫组化、PrP基因、14-3-3蛋白及动物传递的研究 被引量:7
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作者 宋晓南 林世和 +6 位作者 赵节绪 江新梅 王为民 陶玉倩 方莹莹 徐惠琴 陈秀芸 《临床神经病学杂志》 CAS 2000年第5期259-262,共4页
目的探讨国人Creutzfeldt-Jakob病(CJD)的临床、病理及免疫组化、PrP基因、14-3-3蛋白及实验鼠传递结果。方法 统计24例CJD患者的临床资料,进行脑组织病理检查。其中10例脑切片作PrP免疫组... 目的探讨国人Creutzfeldt-Jakob病(CJD)的临床、病理及免疫组化、PrP基因、14-3-3蛋白及实验鼠传递结果。方法 统计24例CJD患者的临床资料,进行脑组织病理检查。其中10例脑切片作PrP免疫组化染色,10例进行PrP基因表达,5例脑脊液行14-3-3蛋白检测,7例进行实验鼠传递。结果(1)24例CJD中散发19例,可能为医源性3例,家族性1例,与Alzheimer病并存1例;(2)国人CJD急性、亚急性发病高达96%,急性发病者病程短,脑萎缩不明显;(3)脑组织石蜡切片以PrP抗血清为第一抗体免疫组化染色,均呈突触型阳性;(4)14-3-3蛋白表达对CJD的临床诊断有特异性;(5)活检脑组织对实验鼠传递成功。结论 国人CJD发病过程和临床表现有若干特殊性,通过14-3-3蛋白表达,可早期确诊CJD,其对早期发现CJD、减少医源性传播有重要意义。 展开更多
关键词 CREuTZFELDT-JAKOB病 PrP基因 14-3-3蛋白
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lncRNA MIR17HG调节miR-214-3p/RNF38信号轴对肝癌细胞恶性生物学行为的影响
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作者 孙伟涛 石彦科 +2 位作者 封俊连 陈志飞 张存岭 《现代消化及介入诊疗》 2024年第5期565-571,共7页
目的探究长链非编码RNA(lncRNA)人类微小RNA17簇宿主基因(MIR17HG)调节微小RNA(miR)-214-3p/环指蛋白38(RNF38)信号轴对肝癌细胞恶性生物学行为的影响。方法收集2022年5月至2023年10月于本院行手术切除的46例肝癌患者的癌组织及癌旁组织... 目的探究长链非编码RNA(lncRNA)人类微小RNA17簇宿主基因(MIR17HG)调节微小RNA(miR)-214-3p/环指蛋白38(RNF38)信号轴对肝癌细胞恶性生物学行为的影响。方法收集2022年5月至2023年10月于本院行手术切除的46例肝癌患者的癌组织及癌旁组织,检测lncRNA MIR17HG、miR-214-3p和RNF38的表达。体外培养HepG2、Bel-7402、SMMC-7721、HL-7702细胞,并比较lncRNA MIR17HG、miR-214-3p和RNF38的表达,选择Bel-7402细胞继续研究,随机分为sh-NC组、sh-MIR17HG组、anti-NC组、anti-miR-214-3p组和Bel-7402组。探究各组Bel-7402细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移情况,蛋白质印迹法分析RNF38、半胱天冬酶-3(caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、基质金属蛋白酶-2(MMP2)、基质金属蛋白酶-9(MMP9)蛋白表达,双荧光素酶验证lncRNA MIR17HG与miR-214-3p以及miR-214-3p与RNF38的关系。结果肝癌组织中lncRNA MIR17HG、RNF38的mRNA表达较高,miR-214-3p的mRNA表达较低,RNF38的蛋白阳性表达率较高(P<0.05)。细胞SMMC-7721、HepG2、Bel-7402中lncRNA MIR17HG mRNA、RNF38 mRNA和RNF38蛋白表达高于HL-7702细胞,miR-214-3p mRNA表达低于HL-7702细胞(P<0.05)。与Bel-7402组、sh-NC组比较,sh-MIR17HG组OD 450nm值、克隆细胞数、侵袭细胞数、迁移细胞数和RNF38、MMP2、Bcl-2、MMP9表达减少,凋亡率和caspase-3表达增加(P<0.05);与sh-MIR17HG组、anti-NC组比较,anti-miR-214-3p组OD 450nm值、克隆细胞数、侵袭细胞数、迁移细胞数和RNF38、MMP2、Bcl-2、MMP9表达增加,凋亡率和caspase-3表达减少(P<0.05)。lncRNA MIR17HG与miR-214-3p以及miR-214-3p与RNF38分别存在靶向关系。miR-214-3p+WT-MIR17HG组荧光素酶活性低于miR-NC+WT-MIR17HG组(P<0.05),miR-214-3p+WT-RNF38组荧光素酶活性低于miR-NC+WT-RNF38组(P<0.05)。结论lncRNA MIR17HG可能通过调控miR-214-3p/RNF38轴促进肝癌细胞的恶性生物学行为。 展开更多
关键词 长链非编码RNA 人类微小RNA17簇宿主基因 miR-214-3p/环指蛋白38 肝癌 恶性生物学
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茶树花蕾14-3-3蛋白基因的分子克隆及差异表达分析 被引量:12
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作者 余梅 江昌俊 +4 位作者 房婉萍 叶爱华 王朝霞 李叶云 朱林 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期2983-2991,共9页
【目的】从分子水平研究茶树花蕾发育阶段的相关基因表达,了解茶树花蕾的发育机理,利用分子生物学技术抑制茶树的生殖生长、促进营养生长。【方法】利用cDNA-AFLP技术对茶树花蕾发育早期和晚期的差异表达进行分析。采用RACE技术克隆到... 【目的】从分子水平研究茶树花蕾发育阶段的相关基因表达,了解茶树花蕾的发育机理,利用分子生物学技术抑制茶树的生殖生长、促进营养生长。【方法】利用cDNA-AFLP技术对茶树花蕾发育早期和晚期的差异表达进行分析。采用RACE技术克隆到花蕾发育晚期阶段特异表达的、在花蕾发育中可能起重要作用的14-3-3基因,通过RT-PCR和Western-blot方法研究该基因转录水平和蛋白质表达水平的特点。【结果】在测定的大约1110个茶树花蕾cDNA片段中,122个(10.9%)是差异性表达的,其中87个在发育晚期特异表达,包括茶树14-3-3蛋白基因(GenBank登录号:DQ444463),其全长为1072bp,包含1个由783个核苷酸组成的ORF,编码260个氨基酸,5′非翻译区和3′非翻译区分别有67和222个核苷酸,该基因与其它植物的14-3-3蛋白基因在核苷酸序列和推导的氨基酸序列方面均有着比较高的相似性。RT-PCR和Western-blot分析表明该基因在茶树的晚期发育花蕾中特异表达。【结论】14-3-3蛋白仅存在于茶树发育晚期的花蕾中。cDNA-AFLP技术能用于茶树花蕾不同发育时期的基因分离研究。 展开更多
关键词 茶树 差异表达基因 14-3-3蛋白 CDNA-AFLP WESTERN-BLOT
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梭梭14-3-3蛋白基因HaFT-1和HaFT-2克隆及表达分析 被引量:5
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作者 李亚婕 张桦 +5 位作者 蒋圆圆 麻浩 姚正培 任燕萍 王泽 马林 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期455-462,共8页
根据前期梭梭干旱转录组测序得到的Unigene序列,成功克隆2个梭梭14-3-3蛋白基因,分别命名为HaFT-1和HaFT-2,并对其进行基因表达分析。结果表明:HaFT-1基因在梭梭的根、种子中均可表达,且根中表达最强;HaFT-2基因在梭梭同化枝中表达最强... 根据前期梭梭干旱转录组测序得到的Unigene序列,成功克隆2个梭梭14-3-3蛋白基因,分别命名为HaFT-1和HaFT-2,并对其进行基因表达分析。结果表明:HaFT-1基因在梭梭的根、种子中均可表达,且根中表达最强;HaFT-2基因在梭梭同化枝中表达最强,根的表达量次之。干旱胁迫后HaFT-1和HaFT-2基因的表达量均下调。本研究初步分析HaFT-1、HaFT-2基因的表达模式,为进一步研究该基因功能奠定基础。 展开更多
关键词 梭梭 14-3-3蛋白 基因克隆 表达
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弓形虫信号转导蛋白14-3-3基因的克隆与表达 被引量:5
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作者 都建 沈继龙 +1 位作者 汪学龙 王维 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期279-281,共3页
目的 体外扩增弓形虫RH株信号转导蛋白 14 3 3 (Toxo 14 3 3 )基因编码序列 ,构建原核表达质粒 ,并表达Toxo 14 3 3。 方法 收集、纯化弓形虫RH株速殖子 ,提取RNA ,在设计合成的引物中引入EcoRI和XhoI酶切位点。应用RT PCR扩增... 目的 体外扩增弓形虫RH株信号转导蛋白 14 3 3 (Toxo 14 3 3 )基因编码序列 ,构建原核表达质粒 ,并表达Toxo 14 3 3。 方法 收集、纯化弓形虫RH株速殖子 ,提取RNA ,在设计合成的引物中引入EcoRI和XhoI酶切位点。应用RT PCR扩增Toxo 14 3 3基因片段 ,插入原核表达质粒 pET2 8a中 ,重组子双酶切、PCR和测序鉴定 ,转化大肠杆菌BL2 1并以异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导表达。  结果 从弓形虫RH株RNA中扩增出 80 3bp的Toxo14 3 3基因片段 ,构建重组质粒 pET2 8a/14 3 3 ;IPTG诱导 ,SDS PAGE显示表达产物的大小约 3 0 .7kDa ,Western印迹鉴定为Toxo 14 3 3。 结论 成功地从弓形虫RH株基因组DNA中获取了 14 3 3基因 ,构建了 pET2 8a/Toxo 14 3 3重组质粒 ,并获得高效表达。 展开更多
关键词 弓形虫 信号转导蛋白 14-3-3基因 克隆 表达
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小麦胚乳14-3-3基因的克隆及其重组蛋白的原核表达 被引量:2
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作者 戴双 李豪圣 +4 位作者 程敦公 刘爱峰 曹新有 刘建军 宋健民 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期2076-2084,共9页
【目的】克隆小麦籽粒胚乳14-3-3基因,并进行体外表达,为进一步研究其对籽粒生长发育的调控作用奠定基础。【方法】根据已有同源基因保守序列,设计插入限制性酶切位点的特异性扩增引物,采用RT-PCR方法扩增发育的小麦胚乳14-3-3基因,克... 【目的】克隆小麦籽粒胚乳14-3-3基因,并进行体外表达,为进一步研究其对籽粒生长发育的调控作用奠定基础。【方法】根据已有同源基因保守序列,设计插入限制性酶切位点的特异性扩增引物,采用RT-PCR方法扩增发育的小麦胚乳14-3-3基因,克隆测序后转入表达载体,在大肠杆菌中进行表达,并进行纯化。【结果】从开花后灌浆13—15 d的小麦品种济麦22籽粒胚乳中克隆到1个14-3-3基因,序列分析表明为非ε型,含1个777 bp的开放阅读框,编码蛋白259 aa,分子量约29 kD。核苷酸序列分析表明与小麦、水稻、玉米、大麦、大豆等主要农作物和模式植物拟南芥的14-3-3基因有较高的同源性,最高达98%,编码蛋白氨基酸长度也一致(260aa左右);在大肠杆菌中高效表达的重组蛋白约为30 kD,分子量大小与根据核苷酸序列推导的编码蛋白一致。从基因序列的同源性、编码蛋白的氨基酸长度、表达蛋白的分子量大小分析都说明克隆到的基因为14-3-3基因,并准确插入表达载体,得到了高效正确表达。将克隆的基因插入pET29c载体,热激转化大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RP,得到了高效表达,但主要以包涵体形式(80%)存在。对重组蛋白进行了纯化,可溶性重组蛋白利用S-蛋白琼脂糖树脂得到纯化的蛋白,包涵体重组蛋白经变性溶解、复性后,也利用S-蛋白琼脂糖树脂得到了高度纯化的重组蛋白。【结论】利用RT-PCR技术从发育的小麦胚乳中克隆到1个14-3-3基因,并在大肠杆菌中得到了高效表达,重组蛋白经过纯化得到了纯度较高的活性蛋白。 展开更多
关键词 小麦 14-3-3蛋白 基因克隆 重组蛋白 原核表达
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松材线虫和拟松材线虫14-3-3蛋白基因全长cDNA克隆与分析 被引量:5
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作者 黄麟 许剑涛 +2 位作者 付涵予 吴小芹 叶建仁 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第36期22368-22373,共6页
[目的]对松材线虫和拟松材线虫的14-3-3蛋白基因进行全长cDNA克隆,并进行序列分析。[方法]根据GenBank数据库中14-3-3蛋白EST序列BXC56(登录号为FG589472)、BMC120(登录号为FG589351),采用RACE技术获取松材线虫和拟松材线虫14-3-3蛋白... [目的]对松材线虫和拟松材线虫的14-3-3蛋白基因进行全长cDNA克隆,并进行序列分析。[方法]根据GenBank数据库中14-3-3蛋白EST序列BXC56(登录号为FG589472)、BMC120(登录号为FG589351),采用RACE技术获取松材线虫和拟松材线虫14-3-3蛋白的全长cDNA克隆Bx14-3-3a和Bm14-3-3a,并对克隆片段序列进行分析。[结果]Bx14-3-3a全长1 039 bp,包含一个756 bp的开放阅读框,编码蛋白含有251个氨基酸残基,包含2个14-3-3蛋白标签,编码蛋白分子量为61.43 kD,等电点为4.88。Bx14-3-3a基因组结构中包含4个外显子和3个内含子序列。Bm14-3-3a全长992 bp,有与Bx14-3-3a编码完全相同的氨基酸序列。序列比对结果表明,14-3-3在真核生物间高度保守,Bx14-3-3A和Bm14-3-3A蛋白在系统进化上与线形动物门(Nematomorpha)的物种近缘关系较近,与植物线虫南方根结线虫(Meloidogyne incognita)系统发育关系上最为亲近。[结论]Bx14-3-3a和Bm14-3-3a的成功克隆,为进一步研究其功能及其调控因子对形态、致病力、繁殖力和环境适应性等方面的分子调控机制奠定了重要基础。 展开更多
关键词 松材线虫 拟松材线虫 14-3-3蛋白 基因结构 生物信息学分析
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香菇C_(91-3)菌丝发酵液蛋白抑制小鼠宫颈癌细胞株U14生长及诱导凋亡的实验研究 被引量:21
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作者 戴兵 黄敏 +1 位作者 宁安红 高鹏 《浙江医学》 CAS 2004年第9期656-658,共3页
目的研究香菇C91-3菌丝发酵液蛋白LFP91-3对小鼠腹水型宫颈癌细胞株(U14)的作用。方法应用不同剂量(50、100、150μg)的LFP91-3对U14所致小鼠腹水型宫颈癌模型进行治疗,观察荷瘤小鼠的生存期;并用MTT法LFP91-3浓度5、10、15μgml和流式... 目的研究香菇C91-3菌丝发酵液蛋白LFP91-3对小鼠腹水型宫颈癌细胞株(U14)的作用。方法应用不同剂量(50、100、150μg)的LFP91-3对U14所致小鼠腹水型宫颈癌模型进行治疗,观察荷瘤小鼠的生存期;并用MTT法LFP91-3浓度5、10、15μgml和流式细胞仪对经LFP91-3作用的U14进行观察和检测。结果LFP91-3能明显延长U14所致荷瘤小鼠的生存期。对体外培养的U14有直接杀伤作用,抑制率随LFP91-3浓度的增加和作用时间的延长而升高。流式细胞仪检测结果显示LFP91-3阻滞U14于细胞周期的分裂中期。结论LFP91-3能抑制小鼠宫颈癌细胞株的生长并诱导其凋亡。 展开更多
关键词 香菇C91-3菌丝发酵液蛋白 小鼠 宫颈癌 肿瘤细胞 u14细胞 细胞生长 细胞凋亡
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日本血吸虫信号转导分子14-3-3蛋白epsilon亚型基因的克隆与序列分析 被引量:5
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作者 汪学龙 沈继龙 蒋作君 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期264-266,共3页
目的 克隆日本血吸虫 14 - 3- 3蛋白 epsilon亚型的编码基因 ,以研究其在血吸虫信号传导及其在免疫预防的作用。方法 以日本血吸虫成虫总 RNA为模板逆转录合成 c DNA链 ,设计合成引物 ,用 PCR法扩增14 - 3- 3蛋白 epsilon亚型基因编... 目的 克隆日本血吸虫 14 - 3- 3蛋白 epsilon亚型的编码基因 ,以研究其在血吸虫信号传导及其在免疫预防的作用。方法 以日本血吸虫成虫总 RNA为模板逆转录合成 c DNA链 ,设计合成引物 ,用 PCR法扩增14 - 3- 3蛋白 epsilon亚型基因编码序列 ,将其克隆入 p GEM- T载体 ,并用双酶切和以质粒为模板的 PCR进行鉴定。结果  RT- PCR扩增出一条约 75 3bp大小的特异性条带 ,重组质粒的双酶切和以质粒为模板的 PCR均获得了一条与 RT- PCR扩增出大小相同条带 ,序列测定结果表明其具有 75 3bp的开放阅读框 ,并具蛋白激酶、酪氨酸激酶磷酸化位点。结论 成功构建了日本血吸虫 14 - 3- 3蛋白 epsilon亚型重组 p GEM- T克隆载体 ,为进一步的研究提供了条件。 展开更多
关键词 信号转导分子 日本血吸虫 14-3-3蛋白 基因克隆 序列分析
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14-3-3和CLIC4蛋白在U251细胞自噬中的相互作用 被引量:3
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作者 袁兆新 金笛 张宏宇 《中风与神经疾病杂志》 CAS 北大核心 2015年第5期449-451,共3页
目的通过饥饿诱导神经胶质瘤U251细胞发生自噬,探讨细胞CLIC4和14-3-3蛋白在饥饿条件下诱导自噬过程中的相互作用。方法通过Hoechst、14-3-3 epsilon、CLIC4染色于共聚焦显微镜下观察抑制CLIC4表达对于饥饿条件下,14-3-3 epsilon蛋白与C... 目的通过饥饿诱导神经胶质瘤U251细胞发生自噬,探讨细胞CLIC4和14-3-3蛋白在饥饿条件下诱导自噬过程中的相互作用。方法通过Hoechst、14-3-3 epsilon、CLIC4染色于共聚焦显微镜下观察抑制CLIC4表达对于饥饿条件下,14-3-3 epsilon蛋白与CLIC4共定位的影响。通过Western Blot技术检测Beclin 1及14-3-3蛋白表达。免疫共沉淀技术检测14-3-3 epsilon蛋白与CLIC4蛋白的结合水平。结果共聚焦显微镜观察14-3-3 epsilon和CLIC4荧光染色结果显示,饥饿条件下,14-3-3 epsilon蛋白与CLIC4共定位显著增加,并广泛分布于胞浆及细胞核中。同时Western Blot结果表明抑制CLIC4表达能够引起14-3-3蛋白以及自噬相关蛋白Beclin1表达增加。饥饿条件下,14-3-3 epsilon蛋白与CLIC4共沉淀增强,而抑制CLIC4表达能够降低两者结合水平。结论 14-3-3epsilon蛋白与CLIC4的相互作用由于RNA干扰而减弱,促进了14-3-3蛋白水平上调,进而增强了14-3-3蛋白对Beclin1信号通路的调节,引起Beclin1表达增加,进一步激活饥饿条件下U251细胞自噬过程。 展开更多
关键词 u251细胞 自噬 14-3-3蛋白 CLIC4
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弓形虫14-3-3信号转导蛋白基因序列测定 被引量:2
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作者 王维 沈继龙 +2 位作者 汪学龙 王朝兰 蒋作君 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第3期16-18,共3页
目的 克隆与鉴定弓形虫 14- 3- 3(Toxo14- 3 - 3)信号转导蛋白基因 ,用于寻找弓形虫新的诊断和候选疫苗分子 ,并在寄生虫入侵宿主细胞中寻找分子干预环节。方法 设计合成引物 ,以弓形虫RH株速殖子RNA为模板逆转录合成cDNA链 ,用PCR扩... 目的 克隆与鉴定弓形虫 14- 3- 3(Toxo14- 3 - 3)信号转导蛋白基因 ,用于寻找弓形虫新的诊断和候选疫苗分子 ,并在寄生虫入侵宿主细胞中寻找分子干预环节。方法 设计合成引物 ,以弓形虫RH株速殖子RNA为模板逆转录合成cDNA链 ,用PCR扩增出弓形虫 14- 3 - 3蛋白编码基因序列 ,克隆入 pGEM -T载体 ,并用双酶切法、以质粒为模板PCR法和DNA测序进行鉴定。结果 Toxo14- 3 - 3具有一个长度为 798bp的完整开放阅读框 ,与GenBank收录 (编号为ABO12 775 )Toxo14- 3 - 3蛋白编码基因一致 ,2个碱基出现密码简并。结论 本实验获得了完全正确的Toxo14- 3 - 3蛋白基因克隆 。 展开更多
关键词 弓形虫 14-3-3蛋白 基因克隆 信号转导
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维生素D3诱导U937细胞表达CD14蛋白的方法 被引量:1
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作者 陈莉 龚建平 +2 位作者 王晓丽 朱谨 韩本立 《华南国防医学杂志》 CAS 2005年第1期16-17,F003,共3页
目的探讨维生素D3诱导的U937细胞CD14蛋白表达的方法及其对内毒素刺激的反应性。方法用(0.1μMol)VitD3 与U937细胞共同培养24h以诱导其表达CD14基因,使其产生CD14蛋白,并观察U937细胞对不同浓度LPS刺激不同时间后的反应。结果发现VitD... 目的探讨维生素D3诱导的U937细胞CD14蛋白表达的方法及其对内毒素刺激的反应性。方法用(0.1μMol)VitD3 与U937细胞共同培养24h以诱导其表达CD14基因,使其产生CD14蛋白,并观察U937细胞对不同浓度LPS刺激不同时间后的反应。结果发现VitD3能稳定诱导U937细胞表达CD14 mRNA基因和CD14蛋白,转型的U937/CD14细胞显著增加了对LPS刺激的敏感性,表现为低浓度LPS刺激能诱导其细胞核中NF-kB激活,指导TNF-α的mRNA的转录和表达,进一步合成和释放TNF-α。结论U937细胞是研究CD14在LPS介导MO激活的理想细胞模型,维生素D3能诱导U937细胞CD14基因和蛋白的表达,并增加其对内毒素刺激的反应性。 展开更多
关键词 CD14蛋白 维生素D3 细胞表达 u937细胞 CD14基因 内毒素刺激 TNF-a MRNa基因 VITD3 LPS 蛋白表达 共同培养 不同时间 不同浓度 细胞模型 反应性 24h 敏感性 4细胞 细胞核 低浓度 激活
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油茶14-3-3蛋白基因的cDNA克隆及序列分析 被引量:1
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作者 刘巧 谭晓风 +1 位作者 胡孝义 田晓明 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期541-546,共6页
以构建的油茶近成熟种子cDNA文库和EST文库为基础,采用分子克隆技术,分离克隆1个14-3-3蛋白的全长cDNA序列,由1 156个核苷酸组成,5’非编码区57 bp,3’非编码区301 bp,开放阅读框长777 bp,编码259个氨基酸。该基因编码蛋白的分子质量为2... 以构建的油茶近成熟种子cDNA文库和EST文库为基础,采用分子克隆技术,分离克隆1个14-3-3蛋白的全长cDNA序列,由1 156个核苷酸组成,5’非编码区57 bp,3’非编码区301 bp,开放阅读框长777 bp,编码259个氨基酸。该基因编码蛋白的分子质量为29.466 ku,等电点4.78,无信号肽序列,是非分泌蛋白,命名为Co-14-3-3a。推测的二级结构有9个α-螺旋,1个反平行的β-折叠,位于αC和αD之间。 展开更多
关键词 油茶 14-3-3蛋白 基因克隆 序列分析 结构预测
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14-3-3ζ蛋白在人类疾病中的研究 被引量:3
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作者 万曦娣 王枫 黄欧平 《南昌大学学报(医学版)》 CAS 2013年第4期92-95,共4页
14-3-3ζ属于14-3-3蛋白家族,它主要通过与不同的配体蛋白相互结合,参与多种细胞信号通路的调节,调控包括细胞生长、增殖、迁徙、凋亡在内的多种生物学过程,影响人类疾病的发生和发展。本文就近年来有关14-3-3ζ在人类疾病发生发展过程... 14-3-3ζ属于14-3-3蛋白家族,它主要通过与不同的配体蛋白相互结合,参与多种细胞信号通路的调节,调控包括细胞生长、增殖、迁徙、凋亡在内的多种生物学过程,影响人类疾病的发生和发展。本文就近年来有关14-3-3ζ在人类疾病发生发展过程中的作用作一简要综述。 展开更多
关键词 14-3-3ζ蛋白 生物学功能 人类疾病
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日本血吸虫14-3-3蛋白质编码基因在原核细胞中的表达 被引量:3
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作者 汪学龙 沈继龙 蒋作君 《安徽医学》 2001年第2期5-7,共3页
目的 :为了寻找日本血吸虫病新的诊断和候选疫苗分子 ,克隆日本血吸虫 14 -3 -3蛋白质编码基因 ,并进行表达。方法 :提取日本血吸虫成虫RNA ,设计合成引物 ,用RT -PCR法扩增出日本血吸虫 14 -3 -3抗原 (Sj14 -3 -3 )基因编码序列 ,将其... 目的 :为了寻找日本血吸虫病新的诊断和候选疫苗分子 ,克隆日本血吸虫 14 -3 -3蛋白质编码基因 ,并进行表达。方法 :提取日本血吸虫成虫RNA ,设计合成引物 ,用RT -PCR法扩增出日本血吸虫 14 -3 -3抗原 (Sj14 -3 -3 )基因编码序列 ,将其克隆入pGEM -T载体 ,然后在真核表达载体 pBKCMV中亚克隆 ,用IPTG诱导表达 ,SDS -PAGE观察表达结果。结果 :RT -PCR法扩增出一条大小约 765bp的特异性片断 ,克隆质粒pGEM -Sj14 -3 -3和真核表达质粒pBKCMV经双酶切和以重组质粒为模板进行PCR扩增 ,均可获得一条与PCR产物一致的DNA片段 ,诱导表达后 ,经SDS -PAGE可见一条约 3 2 5kDa大小的融合蛋白条带。结论 :本实验成功地克隆了日本血吸虫 14 -3 -3抗原的编码基因 ,并在原核细胞中进行表达 ,为进一步的免疫诊断和核酸疫苗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 日本血吸虫 14-3-3蛋白 基因克隆 原核细胞
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弓形虫14-3-3信号转导蛋白基因亚克隆及鉴定 被引量:1
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作者 王维 汪学龙 +1 位作者 沈继龙 蒋作君 《安徽医科大学学报》 CAS 2001年第1期12-14,共3页
目的 将弓形虫 14 3 3(Toxo14 3 3)信号转导蛋白基因亚克隆入表达载体pBK CMV ,用于寻找弓形虫新的诊断和候选疫苗分子以及寄生虫 宿主相互作用等研究。方法 根据Toxo14 3 3核苷酸序列设计并合成一对引物 ,以弓形虫速殖子mRNA为模板 ... 目的 将弓形虫 14 3 3(Toxo14 3 3)信号转导蛋白基因亚克隆入表达载体pBK CMV ,用于寻找弓形虫新的诊断和候选疫苗分子以及寄生虫 宿主相互作用等研究。方法 根据Toxo14 3 3核苷酸序列设计并合成一对引物 ,以弓形虫速殖子mRNA为模板 ,RT PCR法扩增Toxo14 3 3DNA片段 ,通过TA连接将其克隆入 pGEM T载体、经测序证实序列完全正确。再将该目的基因亚克隆入表达载体 pBK CMV中 ,转化大肠杆菌XL1 blue,提取质粒 ,经双酶切法和以该质粒为模板PCR法证实。结果 Toxo14 3 3信号蛋白基因ORF含 798bp ,编码 2 6 5个氨基酸。 结论 获得表达质粒pBK CMV/Toxo14 3 3阳性重组体 ,为原核和真核基因表达奠定了基础。 展开更多
关键词 弓形虫属 基因表达 克隆 分子 信号转导 14-3-3蛋白
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朊蛋白病诊断标志分子14-3-3Zeta基因亚克隆及其表达 被引量:4
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作者 沈继龙 SG CHEN 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第5期8-10,共3页
目的 为了制备朊蛋白病特异性实验诊断的标志物及为探讨 14- 3 - 3在神经细胞功能调节中的作用创造条件。方法 根据 14- 3- 3Zeta亚型基因序列设计引物 ,扩增DNA片段 ,经酶切纯化后连接到pCYB3表达载体 ,转化大肠杆菌BL2 1菌株 ,用培... 目的 为了制备朊蛋白病特异性实验诊断的标志物及为探讨 14- 3 - 3在神经细胞功能调节中的作用创造条件。方法 根据 14- 3- 3Zeta亚型基因序列设计引物 ,扩增DNA片段 ,经酶切纯化后连接到pCYB3表达载体 ,转化大肠杆菌BL2 1菌株 ,用培养基筛选 ,经管状凝胶电泳纯化融合蛋白。结果与结论 获取了 14- 3- 3/pCYB3阳性重组体 ,经IPTG诱导及免疫印迹 -增强化学发光 (Westernblot-ECL)鉴定 ,表达出 14- 3- 3/intein -CBD融合蛋白 ,分子量为 82 7kDa . 展开更多
关键词 14-3-3蛋白 蛋白 Zeta基因亚克隆
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日本血吸虫(中国大陆株)14-3-3信号转导蛋白epsilon亚型基因[Parasitol1]真核表达重组质粒的构建及序列分析
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作者 唐小牛 汪学龙 +1 位作者 沈继龙 陈文魁 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第3期220-222,227,共4页
目的 构建日本血吸虫中国大陆株 14 - 3- 3信号转导蛋白epsilon亚型基因真核表达重组质粒 pBK -Sj14 - 3- 3,为进一步对重组蛋白的融合表达及保护性免疫的研究提供条件。方法 根据日本血吸虫 14 - 3- 3蛋白的核苷酸序列 ,设计合成一... 目的 构建日本血吸虫中国大陆株 14 - 3- 3信号转导蛋白epsilon亚型基因真核表达重组质粒 pBK -Sj14 - 3- 3,为进一步对重组蛋白的融合表达及保护性免疫的研究提供条件。方法 根据日本血吸虫 14 - 3- 3蛋白的核苷酸序列 ,设计合成一对引物 ,以日本血吸虫中国大陆株成虫总RNA为模板 ,用RT -PCR法合成日本血吸虫中国大陆株 14 - 3- 3蛋白epsilon亚型基因cDNA片段。将其克隆入 pGEM -T载体 ,经双酶切及PCR鉴定后 ,再亚克隆入 pBK -CMV真核表达质粒 ,构建重组质粒 pBK -Sj14 - 3- 3,转化到大肠杆菌BL2 1感受态细胞 ,提取重组质粒双酶切鉴定并进行序列分析。 结果 RT -PCR产物、pGEM -T -Sj14 - 3- 3及 pBK -Sj14 - 3- 3分别经双酶切均获得一特异性基因片段 经测序分析后该片段具有一个 75 3bp完整开放阅读框 (openreadingframe ,ORF) ,由此推导的氨基酸序列具有多种蛋白激酶的磷酸化位点。 结论 成功地构建了日本血吸虫中国大陆株 14 - 3- 3信号蛋白epsilon亚型基因真核表达重组质粒 ,并对其核苷酸序列及推导的氨基酸序列蛋白激酶磷酸化位点进行分析。 展开更多
关键词 日本血吸虫 1433信号转导蛋白 epsilon亚型基因 真核表达 重组质粒 构建 序列分析
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