人粒系集落刺激因子(hG-CSF)cDNA于P_RP_L启动子作用下在大肠杆菌中的表达

hG—CSF cDNA在天然状态下很难在大肠杆菌中表达。本文以作者克隆的高活性形式hG—CSF cDNA为模板,经PCR扩增出含hG—CSF信号肽中丙氨酸(Ala)及成熟型全部氨基酸编码序列的cDNA片段,于NcoⅠ、BamHⅠ位点克隆于原核表达载体PJLA602中,用高活性hG—CSF特异探针菌落原位杂交筛选出阳性克隆。此克隆hG—CSF cDNA在λ噬菌体 P_RP_L串联启动子和大肠杆菌atpE翻译起始区(TIR)共同作用下,阳性菌株热诱导表达后经小鼠骨髓细胞体外CFU-G测试表明,表达产物具明显的粒细胞集落刺激活性。

▽5-人粒系集落刺激因子(▽5-hG-CSF)的cDNA克隆、序列测定与表达

从LPS刺激的正常中国人外周血单核细胞中提取mRNA,经反转录(RT)-PCR扩增出不含信号肽和成熟型N端5氨基酸(V5-hG-CSF)的cDNA片段,酶切后组入大肠杆菌表达载体pJLA602中。序列测定表明,克隆片段与国外报道的高活性hG-CSF cDNA序列一致。重组子经诱导表达、小鼠骨髓细胞体外CFU-G测试表明,表达产物具明显的粒细胞集落刺激活性。

用NSF─60细胞MTT比色法检测重组人粒系集落刺激因子的生物活性

利用Ｇ－ＣＳＦ依赖型细胞株Ｎ８Ｆ－６０，尝试将ＭＴＴ比色法应用于基因工程产品重组人粒系集落刺激因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ）的活性检测。多次实验探索出最适的细胞浓度和培养时间，细胞数为低于１×１０￣４／孔，培养时间为３０─４８ｈ。在宽的线性范围内检测Ｇ－ＣＳＦ样品的生物活性，结果经传统的ＣＦＵ－Ｇ方法验证可靠，且较后者更灵敏、简便、省时、省力，并可定性、定量地检测样品活性。特别适用于大量样品的同时检测。另外，此方法可避免接触放射性。

改良CVP联合rhG-CSF动员方案外周血干细胞移植治疗血液肿瘤及实体瘤41例

目的:研究改良CVP联合rhG-CSF方案对血液肿瘤和实体瘤41例患者自体外周血干细胞移植(APBSCT)动员及造血重建效果。方法:2001年3月至2006年3月采用改良CVP联合rhG-CSF动员方案,完成APBSCT41例(血液肿瘤32例,实体瘤9例),平均年龄39.6岁(18岁～67岁)。WBC升至4.0×109/L左右采集单个核细胞(MNC)并计数MNC和CD34+细胞数;预处理结束48h～72h回输MNC。结果:动员期间患者WBC均降至1.0×109/L以下,PLT40×109以下。34例1次采集成功,7例(双次移植5例)作第2次采集。采集MNC数0.9×108/kg～8.3×108/kg(2.8±2.0×108/kg),CD34+细胞1.1×106/kg～9.4×106/kg(3.2±2.6×106/kg)。预处理后所有病例均达到骨髓抑制,WBC恢复到1.0×109/L时间为+8～+16d(平均+11.3d);38例PLT恢复到50×109/L时间为+13～+22d(平均+16.8d),3例PLT恢复延迟,最长+35d。随访15～65个月,持续完全缓解19例(46.3%),部分缓解或好转13例(31.7%),总有效率78.0%,无效9例(22.0%),无1例发生移植相关死亡(其中5例带瘤生存,17例死亡)。结论:改良CVP联合rhG-CSF动员方案行APBSCT是一种安全有效的动员自体外周血造血干细胞的方法,临床疗效满意。

灵芪红胶囊对放化疗所致小鼠白细胞减少症的治疗作用

目的研究灵芪红胶囊对环磷酰胺和60Co-γ射线照射所致小鼠白细胞减少症的治疗作用,及其升高白细胞的作用机理。方法采用环磷酰胺和60Co-γ射线造模,观察灵芪红胶囊对两个模型所致白细胞减少症的作用。分别测定骨骼造血干细胞脾脏节结(CFU-S)和人粒-巨噬系祖细胞集落(CFU-GM)及外周白细胞数和骨髓DNA。结果环磷酰胺和60Co-γ射线照射能使小鼠骨髓白细胞生成减少,灵芪红胶囊能减少环磷酰胺和60Co-γ对小鼠造血系统的损伤作用。结论灵芪红胶囊升白细胞的作用优于盐酸小檗胺。