重型乙型肝炎患者肝组织中人纤维介素基因的表达及意义

目的 研究人纤维介素基因 (hfgl2凝血酶原酶 /hfgl2 )在重型乙型肝炎患者肝组织内蛋白及mRNA水平的特异性表达 ,hfgl2表达的细胞类型及其与纤维蛋白沉积、微血栓及肝细胞坏死形成之间的关系。方法 采用免疫组化法研究了 2 3例重型乙型肝炎、13例慢性乙型肝炎、14例乙型肝炎肝硬化患者的肝组织及重型乙型肝炎患者的肝外组织中hfgl2的表达 ,同时制备hfgl2cDNA探针并对上述组织进行原位杂交以了解其在mRNA水平的表达。对枯否氏细胞表面标志CD6 8、纤维蛋白进行了检测。进一步对在重型肝炎肝组织中hfgl2凝血酶原阳性标本进行了hfgl2凝血酶原酶和纤维蛋白双染色。结果 2 1例重型乙型肝炎患者肝组织中可见hfgl2表达 ,而在慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化患者的肝组织、重型乙型肝炎肝炎的肝外组织均无hfgl2表达。重型乙型肝炎肝组织枯否氏细胞明显增生活化 ,主要分布于炎性坏死区 ,表达hfgl2之细胞主要为活化枯否氏细胞和血管内皮细胞 ,邻近组织发现有纤维蛋白的沉积和微血栓的形成。结论 hfgl2在重型乙型肝炎肝组织活化枯否氏细胞中的异常表达 ,激活凝血酶原 ,启动局部的凝血过程 ,导致纤维蛋白的沉积、微血栓的形成、微循环障碍和局部炎性反应 ,并最终引发肝细胞大量坏死 。

乙型肝炎病毒蛋白对纤维介素基因的激活作用

纤维介素基因(fgl2)在人和小鼠的重型肝炎的发病机制中发挥重要作用.为探讨乙型肝炎病毒(HBV)编码蛋白对人纤维介素基因(hfgl2)的激活作用,构建了HBV编码蛋白C、S和X的真核表达质粒pcDNA-HBc、pcDNA-HBs和pcDNA-HBx,分别与hfgl2启动子荧光素酶报告基因质粒及β半乳糖苷酶基因质粒(-βGal)共转染到CHO细胞和HepG2细胞,采用免疫组织化学和免疫印记方法(Western blotting)鉴定病毒蛋白的表达.通过检测报告基因荧光素酶(LUC)及β半乳糖苷酶的表达活性,反映病毒蛋白对hfgl2启动子的转录激活作用.结果显示,转染了真核表达质粒的细胞均能瞬时表达相应的肝炎病毒蛋白,在CHO细胞,转染pcDNA-HBc组和pcDNA-HBx组相对荧光素酶的活性是对照组的5.4和6倍,在hepG2细胞,转染pcDNA-HBc组和pcDNA-HBx组相对荧光素酶的活性是对照组的8.7和11倍.研究表明,CHO和HepG2细胞中表达的HBV C蛋白和X蛋白均具有激活hfgl2的功能,而S蛋白则不能激活.进一步揭示了HBV病毒蛋白与宿主基因的相互作用机制.

重型肝炎相关的人纤维介素基因启动子的克隆及功能分析

目的明确在病毒蛋白HBc和HBx作用下，hfgl2基因5’端非编码区对转录激活起重要作用的转录调控序列。方法运用基因重组的方法，构建一系列5’端缺失而保留共同3’端的hfgl2基因启动子虫荧光素酶报告质粒，将其分别与病毒蛋白HBc和HBx真核表达质粒共转染CHO细胞和HepG2细胞，检测各组细胞的相对荧光素酶活性。结果酶切鉴定以及DNA测序等证实一系列hfgl2基因启动子虫荧光素酶报告基因质粒构建成功，系列启动子缺失试验证实：在hfgl2基因启动子-817位至堋位（相对于转录起始点）之间存在着激活该基因的调控序列。结论在HBV病毒蛋白HBc及HBx作用下，hfgl2基因的启动子区存在一个与其转录表达有关的调控序列，探讨了重型肝炎相关的hfgl2基因高度表达的分子机制，为下一步研究相关的顺式作用元件及反式作用因子奠定了基础。