人组织激肽释放酶11在甲状腺乳头状癌患者血清和组织中的表达及临床意义

目的人组织激肽释放酶11(KLK11)表达水平对前列腺癌、卵巢癌等内分泌相关癌组织中的诊断价值已有报道。文中探讨甲状腺乳头状癌(PTC)患者血清和组织中KLK11的表达与肿瘤发生发展的关系。方法回顾性分析2019年9月-2021年3月在解放军联勤保障部队第九四〇医院90例行手术治疗,且病理学检查证实为PTC患者,以及40例健康对照者外周血、术后癌组织以及匹配的癌旁正常组织。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清中KLK11的表达含量,通过ROC曲线评估血清中KLK11对PTC的诊断价值。采用免疫组化法检测PTC癌组织与癌旁正常组织中KLK11的表达水平,分析其与临床病理资料的关系。结果PTC患者血清中KLK11含量大于健康对照者[(1232.06±133.99)pg/mL vs(1029.45±137.29)pg/mL],差异具有统计学意义(P<0.05)。KLK11对PTC诊断的临界值为1073.37 pg/mL,敏感性为87.78%、特异性为70.00%,ROC曲线下面积为0.854。KLK11主要在表达于细胞质中,PTC癌组织中KLK11的阳性表达率高于匹配癌旁正常组织中(72.22%vs 21.11%),差异有统计学意义(P<0.05)。KLK11的表达水平与PTC患者淋巴结转移、腺外侵犯及TNM分期有关(P<0.05);但与患者的年龄、性别、肿瘤直径及肿瘤位置无关(P>0.05)。结论KLK11在PTC患者血清和组织中的表达增强,可能与PTC的发生、发展过程以及恶性生物学行为有关。

组织激肽释放酶家族在病原微生物感染中的作用

组织激肽释放酶(tissue kallikrein-related peptidase, KLK)家族是丝氨酸蛋白酶家族中一种具有胰蛋白酶或胰凝乳蛋白酶性质的蛋白水解酶亚群,有15个家族蛋白,分别为KLK1~KLK15。近年来,越来越多的研究表明,KLK家族可通过切割病毒和细菌关键蛋白、激活多种宿主受体、调控激肽系统等方式参与机体的多种生理活动,影响着病毒、细菌和真菌中多种病原微生物感染的进程,作用机制复杂且广泛。本文通过对近年来KLK家族蛋白在微生物感染中的作用和机制进行综述,以更好地探究KLK在微生物感染中的重要作用,特别是为其在结核分枝杆菌感染中的研究提供思路,也为KLK家族蛋白作为抗结核治疗靶点提供理论基础。

难治性癫痫儿童血浆激肽释放酶、组织蛋白酶B的表达及其临床意义

目的:探讨难治性癫痫儿童血浆激肽释放酶(KLK)、组织蛋白酶B(catB)表达及其临床意义.方法:选取2017年3月至2019年3月河南中医药大学第五临床医学院收治的难治性癫痫患儿43例为研究对象,纳入研究组.选择同期在本院治疗的治疗有效癫痫患儿,同期在本院体检的健康儿童作为对照,分别纳入治疗有效组(n=35)及对照组(n=50).①对3组受试儿血浆KLK、catB,白细胞介素(IL)-6、IL-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平分别进行统计学分析.②分析研究组患儿血浆KLK、catB水平,分别与其血浆IL-8、IL-6、TNF-α水平的相关关系.③受试者工作特征(ROC)曲线的曲线下面积(AUC),对难治性癫痫的诊断截断值、诊断灵敏度及特异度.④采取多因素非条件Logistic回归分析难治性癫痫临床诊断的独立影响因素.结果:①研究组患儿血浆KLK、catB、IL-6、IL-8、TNF-α水平,均显著高于对照组、治疗有效组,并且差异均有统计学意义(P<0.05).②研究组患儿血浆KLK、catB水平与其IL-6、IL-8、TNF-α水平,均呈正相关关系(r=0.625、0.628、0.657,0.634、0.619、0.664,P<0.05).③血浆KLK、catB水平ROC曲线的AUC分别为0.889、0.856,对难治性癫痫的诊断截断值分别为3.99 U/mL、3.66 U/mL,二者单独诊断难治性癫痫的灵敏度分别为72.10%、72.10%,特异度分别为92.00%、94.00%;二者联合诊断的AUC为0.950,灵敏度为86.00%,特异度为90.70%.④血浆KLK高表达(OR=2.652,95%CI:1.668~4.218,P<0.05),以及catB高表达(OR=2.635,95%CI:1.704~4.075,P<0.05),均是导致患儿发生难治性癫痫的独立危险因素.结论:难治性癫痫儿童血浆KLK、catB水平高表达,对难治性癫痫患儿的临床诊断具有重要参考价值.

前列腺癌激肽释放酶3 mRNA表达与前列腺癌病理特征的相关性

目的:探究前列腺癌激肽释放酶3(klk3)mRNA表达与前列腺癌病理特征的相关性。方法:选取39例前列腺增生患者(良性组)、57例无家族遗传史的前列腺癌患者(非家族遗传组)、29例家族遗传性前列腺癌患者(家族遗传组)为研究对象。分析klk3 mRNA表达与前列腺癌临床病理特征的关系。结果:家族遗传组外周血klk3 mRNA水平高于非家族遗传组、良性组(P<0.05)。外周血klk3 mRNA水平诊断家族性前列腺癌的曲线下面积(AUC)为0.843,灵敏度为62.07%,特异度为96.49%。Logistic回归显示,外周血klk3 mRNA水平为家族性前列腺癌发生的危险因素(P<0.05)。Gleason评分8~10分患者的外周血klk3 mRNA水平高于Gleason评分7分、6分患者,肿瘤分期Ⅲ~Ⅳ期患者的外周血klk3 mRNA水平高于Ⅰ~Ⅱ期患者,Psa水平>20 ng/mL患者的外周血klk3 mRNA水平高于Psa水平10~20 ng/mL及<10 ng/mL患者(P<0.05)。结论:klk3基因mRNA表达对家族遗传性前列腺癌具有诊断价值,且与Gleason评分、肿瘤分期等病理特征有关。

组织型激肽释放酶通过诱导自噬对缺血性脑卒中发挥保护作用

目的:通过在体实验研究组织型激肽释放酶(TK)对缺血性卒中的神经保护作用是否与诱导保护性自噬有关。方法:成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、生理盐水(NS)组、TK组、3-MA组和3-MA+TK组,每组11只。假手术组和NS组分别于侧脑室注射NS,TK组和3-MA组分别于侧脑室注射TK和自噬抑制剂3-MA,3-MA+TK组先注射3-MA,30 min后再注射TK。各组完成侧脑室给药后,采用线栓法建立永久性大脑中动脉缺血模型(pMCAO)。在缺血后12 h,采用Longa评分法评估各组大鼠的神经功能。完成神经损伤评分后,TTC染色检测各组大鼠脑梗死体积,免疫印迹实验检测各组自噬相关蛋白LC3和p62的表达水平。结果:NS组大鼠缺血侧脑皮质LC3-Ⅱ较假手术组表达升高,p62水平降低(均P<0.01)。与NS组相比,TK组缺血侧脑皮质LC3-Ⅱ表达增高,p62水平降低(均P<0.01),大鼠神经功能损伤较轻、脑梗死体积明显缩小(均P<0.01);与TK组比较,3-MA组缺血脑皮质LC3-Ⅱ的表达降低和p62的水平水平较高,大鼠神经功能损伤较重、脑梗死体积较大(均P<0.01);与TK组相比,3-MA+TK组大鼠神经损伤评分增加、脑梗死体积明显增加(均P<0.01)。结论:TK对缺血性卒中大鼠具有神经保护作用,其机制与诱导自噬发生有关。

组织激肽释放酶在皮肤病发病机制中的作用研究进展

组织激肽释放酶(KLKs)家族由15种丝氨酸蛋白酶组成,广泛表达于各种组织,参与机体多种生理与病理进程。其中KLKs家族因KLK1在激肽释放酶-激肽系统中的作用,以及KLK3作为前列腺癌筛查生物标记物的临床应用而闻名。在皮肤组织中,KLKs调控角质形成细胞脱落和增殖,是内瑟顿综合征(NS)和特应性皮炎(AD)的重要致病基因。此外,越来越多的证据表明KLKs还参与炎性反应信号激活、瘙痒信号传递、抗菌肽活性裂解等多种皮肤病理过程,与银屑病、玫瑰痤疮、黑色素瘤等皮肤疾病的发生发展有关。本文主要介绍KLKs在皮肤中的生理功能及病理意义,以及KLKs在皮肤病中的研究进展。

人组织激肽释放酶在肝癌中的研究进展

肝癌是一种高度恶性的消化系统肿瘤,因其早期无典型症状,不易引起人们重视,一旦确诊已是进展期或晚期。人组织激肽释放酶(KLKs)是丝氨酸蛋白酶家族中一种具有胰蛋白酶或胰凝乳蛋白酶性质的蛋白水解酶亚群,与恶性肿瘤的增殖、侵袭和转移密切相关,可以作为一些恶性肿瘤的生物学标志物应用于疾病的早期筛查、明确诊断、个性化治疗以及预后评估等临床实践中。本文综述了KLKs基因及其在肝癌中的表达调控、作用机制、化疗敏感性及预后价值。

血清组织激肽释放酶6和簇集素在血管性痴呆患者中的表达及临床意义

目的探究血清组织激肽释放酶6(KLK6)和簇集素(CLU)在血管性痴呆(VD)患者中的表达及临床意义。方法选取2020年7月至2021年8月空军军医大学第二附属医院收治的95例VD患者作为VD组,另选取同期来该院体检的健康者90例作为对照组。比较不同组别中血清KLK6、CLU水平差异。通过Pearson相关分析KLK6、CLU与简易精神状态量表(MMSE)评分、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估KLK6、CLU对VD患者预后发生重度功能障碍的诊断价值。结果VD组患者血清KLK6、CLU水平较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05)。随着VD患者病情严重程度的增加,血清KLK6和CLU水平逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05)。随着VD患者神经功能缺损程度的增加,血清KLK6和CLU水平逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05)。血清KLK6、CLU水平与MMSE评分呈负相关,而与NIHSS评分呈正相关(P<0.05)。ROC曲线显示,KLK6和CLU检测的曲线下面积(AUC)分别为0.832、0.761(Z=7.221,P<0.05;Z=3.392,P<0.05)。KLK6、CLU两项指标联合检测的AUC为0.873(95%CI:0.838~0.945),其灵敏度和特异度分别为90.48%和79.73%(Z=7.219,P<0.05)。结论VD患者血清KLK6和CLU水平与病情程度及神经功能缺损程度关系密切,二者联合检测对VD患者预后发生重度功能障碍具有良好的诊断效能,可为临床实施早期干预治疗提供科学依据。

组织激肽释放酶8在神经系统疾病中作用的研究进展

组织激肽释放酶8(KLK8)与中枢神经系统的联系极为紧密,通过改变突触间的黏附关系和细胞外基质分子从而改变突触形态,调节突触可塑性,最终参与多种神经系统疾病的病理过程。本文针对KLK8的生理特性,对其在神经系统疾病如情绪障碍、阿尔茨海默病、癫痫、多发性硬化中的作用与发病机制进行综述。期待能够为神经系统疾病诊断和预后提供理论依据,为此类疾病的研究提供方向。

降压宝蓝片对SHR肾损害及激肽释放酶-激肽系统的影响

目的探讨降压宝蓝片对自发性高血压大鼠(SHR)肾损害及激肽释放酶-激肽系统(KKS)的影响。方法30只12周龄雄性SHR随机分为模型(SHR)组(0.5%羧甲基纤维素钠)、依那普利组(0.02 g/kg依那普利)、降压宝蓝片组(0.6 g/kg降压宝蓝片),另设同龄正常血压的雄性WKY大鼠为对照(WKY)组(0.5%羧甲基纤维素钠),灌胃给药,连续12 w。取肾组织,苏木素-伊红(HE)及马松三色(Masson)染色观察肾小球硬化指数(GSI)及肾组织间质胶原蛋白容积分数(CVF)变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定肾组织匀浆液低分子量激肽原(LK)、组织激肽释放酶(TK)、缓激肽(BK)、前列环素(PG)I2;Western印迹测定肾组织缓激肽2型受体(B2R)蛋白表达。结果与WKY组比较,SHR组GSI和CVF显著增加(P<0.01),肾组织BK、PGI2含量及B2R蛋白表达显著降低(P<0.05)。降压宝蓝片能显著降低SHR大鼠GSI、CVF(P<0.01),明显升高肾组织PGI2含量及B2R蛋白表达(P<0.05),对BK、TK、LK含量有升高的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论降压宝蓝片对SHR有肾保护作用,部分作用机制与激活KKS活性有关。

外周血脑型脂肪酸结合蛋白和激肽释放酶6对高龄髋关节置换患者术后认知功能障碍的预测价值

目的 探讨外周血脑型脂肪酸结合蛋白(B-FABP)和激肽释放酶6(KLK6)对高龄髋关节置换患者术后认知功能障碍(POCD)的预测价值。方法 选取145例高龄髋关节置换患者,根据术后7 d的蒙特利尔认知功能量表(MoCA)评估结果分为POCD组(n=39)和非POCD组(n=106)。比较2组患者术前及术后3、7 d血清B-FABP和KLK6水平;采用Pearson法分析不同时点血清指标与MoCA评分的相关性;采用单因素和多因素Logistic回归分析确定POCD发生的影响因素;应用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清指标对POCD的诊断效能。结果 POCD组术后3、7 d的B-FABP高于非POCD组,KLK6低于非POCD组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析显示,认知功能障碍评分与术后3、7 d的B-FABP呈负相关(r=-0.469、-0.341,P<0.05),认知功能障碍评分与术后3、7 d的KLK6呈正相关(r=0.891、0.473,P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,术后3 d的B-FABP(OR=1.898, 95%CI:1.202~2.997)、术后7 d的B-FABP(OR=1.669, 95%CI:1.125~2.474)、术后3 d的KLK6(OR=0.676, 95%CI:0.553~0.828)和术后7 d的KLK6(OR=0.604, 95%CI:0.400~0.912)是POCD发生的影响因素。ROC曲线显示,当术后3 d的B-FABP临界值为156.34 ng/L时,其对应的敏感度为69.23%,特异度为70.75%,曲线下面积(AUC)为0.801(95%CI:0.750~0.852);当术后7 d的B-FABP临界值为133.02 ng/L时,其对应的敏感度为71.79%,特异度为71.70%,AUC为0.760(95%CI:0.707~0.812);当术后3 d的KLK6临界值为5.52μg/L时,其对应的敏感度为58.97%,特异度为60.38%,AUC为0.631(95%CI:0.564~0.698);当术后7 d的KLK6临界值为6.01μg/L时,其对应的敏感度为61.54%,特异度为63.21%,AUC为0.708(95%CI:0.645~0.772);根据Logistic回归结果建立上述4个指标联合应用的风险预测模型,当模型临界值为1.29(去常数项)时,对应的敏感度为82.05%,特异度为80.19%,AUC为0.869(95%CI:0.831~0.907)。结论 血清B-FABP和KLK6与髋关节置换患者POCD发生密切相关,单独和联合检测时可有效预测POCD的发生,临床应根据指标进行干预。

人组织激肽释放酶成熟蛋白在大肠杆菌中的高效表达

将编码人组织激肽释放酶成熟蛋白的基因片段扩增并分别克隆到原核表达载体pET2 8(b)及分泌型表达载体pET2 0 (b)中 ,使其C端融合 6×HisTag序列 .转化不同受体菌 ,IPTG诱导表达后利用SDS PAGE、免疫印记等方法对重组蛋白进行分析 .在 6株基因工程菌株中 ,均表达出分子量约30kD的激肽释放酶融合蛋白 ,其中激肽释放酶在pET2 8载体中的表达水平高于pET2 0载体 .pET2 8和pET2 0载体表达的重组激肽释放酶蛋白分别占菌体总蛋白约 2 6 %和 10 % .Western印迹分析表明 ,目的蛋白可与抗人血清KK单克隆抗体发生特异性反应 .未经纯化的激肽释放酶融合蛋白具有一定的水解苯甲酰精胺酸乙酯 (BAEE)的能力 .在大肠杆菌中获得了人组织激肽释放酶的高效表达 ,表达产物具有免疫原性和生物活力 。

卵巢上皮性癌组织中激肽释放酶7及14的表达及临床意义

目的研究激肽释放酶(kallikrein,KLK)7及KLK14在卵巢上皮性癌组织中的表达,并探讨其临床意义。方法采用RT-PCR及Western-blot技术测定KLK7及KLK14在50例不同临床分期、不同组织分级的卵巢上皮性癌中mRNA及蛋白表达。结果KLK7在卵巢癌中表达明显增高,且低分化组织较高分化组织表达高(P<0.01);KLK14在卵巢癌中表达亦增高(P<0.05),且晚期卵巢癌(Ⅲ、Ⅳ期)明显高于早期卵巢癌(Ⅰ、Ⅱ期,P<0.01);G3级卵巢癌高于G1、G2级卵巢癌(P<0.05)。结论KLK7、KLK14在卵巢癌的发生及转移中有潜在促进作用。

人激肽释放酶10在卵巢癌组织中的表达及其意义

目的:研究人激肽释放酶10(hK10)在卵巢癌组织中的表达,探讨hK10基因在卵巢癌早期诊断研究中的意义。方法:①应用4097靶基因点基因芯片对5例卵巢浆液性囊腺癌及5例正常卵巢组织进行基因表达谱分析,筛查差异表达基因。②应用RT-PCR检测32例卵巢浆液性囊腺癌组织、20例卵巢浆液性囊腺瘤组织及16例正常卵巢组织中hK10表达并对比分析。结果:①基因芯片筛查出差异表达基因58个,其中表达增高(上调趋势)基因30个,表达降低(下调趋势)基因28个,hK10基因为表达上调基因(Cy5/Cy3=3.031)。②hK10基因在正常卵巢及卵巢瘤组织中有弱表达(0.023±0015和0.023±0.045),在卵巢癌组织中表达明显增强(0.106±0.045),hK10基因在卵巢癌组的表达明显高于正常卵巢组及卵巢瘤组(P<0.01)。结论:基因芯片能够用于筛查卵巢癌差异表达基因;hK10基因在卵巢癌组织表达明显增强,有望成为卵巢癌的肿瘤标志物。

人组织激肽释放酶基因对2型糖尿病大鼠血压的影响及机制

目的:探讨人组织激肽释放酶(HK)基因对2型糖尿病大鼠血压的影响及其机制。方法:高脂高糖饮食加小剂量链脲佐菌素建立2型糖尿病动物模型。以重组腺相关病毒为载体介导HK基因(HK组)或对照基因LacZ(LacZ组)在糖尿病大鼠体内表达,观察实验动物血压变化及离体主动脉对乙酰胆碱(Ach)依赖性血管舒张反应和一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、内皮素受体A(ETA-R)表达。结果:(1)HK组第2周开始出现血压下降,并一直持续到实验结束(12周时),而LacZ组血压无明显下降。(2)LacZ组离体主动脉对乙酰胆碱(Ach)依赖性血管舒张反应明显低于HK组。(3)HK组大鼠主动脉NO2-/NO3-浓度明显高于LacZ组,而ET-1和ETA-RmRNA明显低于LacZ组。结论:重组腺相关病毒介导HK基因表达明显降低2型糖尿病大鼠血压,改善内皮依赖性血管舒张功能,原因可能与增加动脉NO释放,减少ET-1和ETA-R的表达有关。

导入人组织激肽释放酶基因治疗肾血管性高血压实验研究

目的构建重组人组织激肽释放酶基因真核表达载体并研究其骨骼肌注射对高血压大鼠的降压效应。方法以pBluescripeⅡKSKLK(+)为模板用PCR扩增人组织激肽释放酶基因,将其定向克隆至pcDNA3载体上,形成重组质粒pcDNA3/KLK,并经酶切和测序鉴定。给“两肾一夹”肾性高血压大鼠的股四头肌注入1000μgpcDNA3/KLK,,随后给予100V、1Hz、40ms电刺激6次,并用RT PCR、Western杂交检测人KLKcDNA在体内的表达。尾套法测血压每周2次。结果一次肌肉注射人组织激肽释放酶cDNA可明显延缓“两肾一夹”肾性高血压大鼠的血压升高;能降低血压达8～21mmHg。局部肌肉组织的信使核糖核酸(mRNA)和KLK表达阳性。结论成功构建了pcD NA3/KLK真核表达载体,肌肉注射人组织激肽释放酶基因可引起“两肾一夹”肾性高血压大鼠血压的持续性下降,显示了人KLK基因对高血压患者降压治疗的可能性。

组织激肽释放酶对酸敏感离子通道1a介导的大鼠酸中毒神经元氧化应激的影响

目的探讨组织激肽释放酶(TK)对酸中毒损伤神经元的保护作用及对酸敏感离子通道1a(ASIC1a)介导的氧化应激反应的影响。方法取原代培养8～10 d的新生SD大鼠皮质神经元,随机分为正常对照组,酸中毒组(pH=6.0的细胞外液处理4 h),TK(100 nmol/L)、缓激肽B2受体(B2R)激动剂(缓激肽,100 nmol/L)、ASIC1a阻断剂(狼蛛毒素,100 ng/ml)及B2R拮抗剂(HOE140)预处理组。TK、B2R激动剂、ASIC1a阻断剂预处理组在给予酸性液处理前,先给予相应药物预处理30 min;B2R拮抗剂预处理组,在TK干预前30 min,给予HOE140(500 nmol/L),30 min后给予酸性液处理。采用活细胞计数试剂盒(CCK-8)测定各组神经元的存活率。应用不同的荧光探针标记细胞内活性氧(ROS),一氧化氮(NO),线粒体膜电位(MMP)以及细胞内游离Ca2+,采用荧光酶标仪测定上述各组细胞内各荧光物质的相对强度,计算各物质的相对含量。结果①正常对照组,TK、ASIC1a阻断剂及B2R激动剂预处理组的神经元存活率分别为(96.6±2.6)%、(79.7±5.9)%、(74.2±4.6)%、(77.7±5.0)%,与酸中毒组的(59.0±6.0)%比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。B2R拮抗剂预处理组为(64.6±3.8)%,与TK预处理组比较差异有统计学意义(P<0.01)。②与正常对照组比较,酸中毒组细胞内ROS、NO及游离Ca2+水平显著增高(P<0.01),MMP水平显著下降(P<0.01);与酸中毒组比较,TK、ASIC1a阻断剂及B2R拮抗剂预处理组细胞内ROS、NO及Ca2+水平显著下降,MMP水平显著增高(P<0.01或P<0.05);而与TK预处理组比较,B2R拮抗剂预处理组细胞内ROS、NO含量,游离Ca2+水平明显增高,MMP水平明显下降,P<0.01。结论在酸性环境下,ASIC1a激活介导了神经元内氧化应激反应,诱导神经元损伤;TK通过B2R能够减轻ASIC1a介导的氧化应激性损伤。

人组织激肽释放酶对周围神经系统损伤后的修复效应

目的:评价人组织激肽释放酶(HTK)促进周围神经系统损伤后的修复作用。方法:取30只体重180～200g的雄性SD大鼠,随机分成3组:假手术组、HTK组(17.5×10-3PNAU/kg)、对照组,每组各10只。术前第0天和术后第1、第3、第5、第7、第9、第11、第13天测定坐骨神经功能指数(SFI)以及静止坐骨神经指数(SSI),术后第14天测定坐骨神经干动作电位传导速度(NCV)。结果:SFI、SSI值在假手术组手术前后未见明显改变。HTK组和对照组中,术后第1天SFI、SSI均为-100左右。以后发现HTK组的SFI、SSI恢复的情况要优于对照组,从第5天开始两组SFI、SSI值有统计学差异(P<0.05)。术后第14天HTK组的NCV值要高于对照组,两组间有统计学差异(P<0.05)。结论:HTK具有促进周围神经系统损伤后的修复作用。

前列腺增生间质对上皮细胞组织激肽释放酶7表达的影响

目的:研究前列腺增生间质细胞对上皮细胞组织激肽释放酶7(KLK7)表达的影响。方法:分离良性前列腺增生(BPH)组织的间质细胞与上皮细胞,经细胞形态学及化学发光微粒子免疫分析(CM IA)方法证实后,构建上皮/间质细胞共培养模型;分别提取单独、共培养条件下上皮细胞的mRNA与蛋白;RT-PCR检测KLK7mRNA表达变化,W estern印迹检测KLK7基因编码蛋白(hK7)表达的改变。结果:细胞形态学、CM IA结果显示成功分离上皮与间质细胞,并构建前列腺间质/上皮细胞共培养模型;RT-PCR检测发现,KLK7基因mRNA的表达在有间质细胞共培养的上皮细胞中均高于单独培养的上皮细胞。KLK7/GAPDH的灰度比值分别为1.41±0.04、1.78±0.10,具有显著差异(P<0.01);W estern印迹与RT-PCR结果一致。结论:前列腺增生间质细胞抑制上皮细胞KLK7基因表达,KLK7可能是前列腺上皮细胞应对间质细胞调控的一种效应物质。

人组织激肽释放酶基因的克隆及测序分析

目的克隆中国人组织激肽释放酶基因 ,为开展基因治疗高血压研究奠定基础。方法提取人胰腺组织总RNA ,逆转录后进行PCR扩增。将PCR产物回收、插入质粒KS ,酶切鉴定后双向测序分析。结果本实验克隆的激肽释放酶基因与GenBank报告的激肽释放酶基因相比 ,有一个碱基不同 ,同源性为 99.8%。结论克隆的中国人组织激肽释放酶基因可用于基因治疗等深入研究工作。