人细胞核自身抗原精子蛋白的重组表达及多克隆抗体制备

目的:获得纯化的人细胞核自身抗原精子蛋白(hNASP)及其多克隆抗体,为其功能研究做准备。方法:提取人睾丸组织总RNA,用自行设计的引物,PCR扩增hNASP的一段序列,PCR产物经TA克隆后,通过BamHⅠ和HindⅢ双酶切克隆到pET-28 a(+)中。在E.coliBL21中,用异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达H is融合蛋白。样品超声处理后,经镍离子亲和树脂进行亲和层析纯化。用纯化的重组蛋白免疫家兔获取多克隆抗体。结果:对表达重组蛋白的质粒进行DNA测序以及表达的重组蛋白经过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,证实获取了目的蛋白。ELISA证实免疫家兔后获得高效价的抗体。结论:用上述原核生物表达的方法可以得到纯化的hNASP蛋白,用纯化的蛋白免疫家兔也能获得高效价的抗体。

人细胞核自身抗原精子蛋白的研究进展

人细胞核自身抗原精子蛋白(human nuclear autoantigenic sperm protein,hNASP)是一种组蛋白结合蛋白,存在于所有的分裂细胞中。NASP作为组蛋白的转运蛋白参与细胞周期的调节。人类NASP分为睾丸型和体细胞型两种,与组蛋白结合参与核小体形成,其表达不充分将会使DNA复制停止以及细胞分裂的停止。本文就NASP的组成、活性调节、生理功能、在细胞周期调节中的作用以及其临床检测的应用进行综述。

染锰鼠睾丸增殖细胞核抗原与热休克蛋白表达

目的研究锰对小鼠精子数量与睾丸增殖细胞核抗原(PCNA)和热休克蛋白70(HSP70)表达的影响。方法将小鼠随机分为3个不同剂量MnCl2(7.5,15,30 mg/kg)组和对照组,分别于染锰,3,7,14,28,56 d计数精子数量,用免疫组化S-P法结合图象分析技术测定睾丸PCNA和HSP70表达。结果随染锰剂量增加和时间延长精子数量减少、睾丸PCNA表达降低。3个不同剂量MnCl2组精子计数于染锰28 d明显低于对照组(P<0.05,P<0.01,P<0.01),睾丸PCNA表达于染锰14,28,56 d比对照组明显降低(P<0.05,P<0.01,P<0.01),直线相关分析各染锰组小鼠精子数量与睾丸PCNA表达呈正相关(r=0.794,P<0.01)。睾丸HSP70表达,15,30 mg/kg组染锰56 d明显低于染锰28 d(P<0.01)。结论锰对小鼠生精功能的损伤呈一定的剂量-效应和时间-效应关系。各染锰组小鼠精子数量与睾丸PCNA表达呈正相关(r=0.794,P<0.01)。锰可诱导小鼠睾丸HSP70表达,染锰28 d达高峰。

胃癌组织P16,P53蛋白和增殖细胞核抗原的表达意义

目的探讨Ｐ１６，Ｐ５３蛋白和增殖细胞核抗原（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇｃｅｌｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｇｅｎ，ＰＣＮＡ）在胃癌的发生、发展中的作用及临床意义．方法应用免疫组织化学方法，对７７例胃癌和癌旁粘膜组织、２１例胃正常组织中Ｐ１６，Ｐ５３蛋白表达产物和ＰＣＮＡ进行检测，并结合临床资料进行分析．结果胃癌组织中Ｐ１６蛋白的阳性率为２０８％（１６／７７），明显低于癌旁粘膜组织５９７％（４６／７７）和胃正常组织９０５％（１９／２１，Ｐ＜００５）；Ｐ５３蛋白与ＰＣＮＡ在胃癌组织中的阳性率为８０５％（６２／７７）和９２２％（７１／７７），明显高于癌旁粘膜组织４１６％（３２／７７），６４９％（５０／７７）和胃正常组织００％（０／２１，Ｐ＜００５）．Ｐ１６，Ｐ５３蛋白和ＰＣＮＡ阳性表达与胃癌组织学类型、浸润深度、分化程度及淋巴结转移有显著性差异（Ｐ＜００５），与患者年龄、性别、肿瘤大小及部位无关（Ｐ＞００１）．结论Ｐ１６，Ｐ５３蛋白和ＰＣＮＡ的异常表达对胃癌的发生发展、恶性程度、淋巴结转移及预后有密切关系和重要临床意义．

原发性肺癌p53蛋白、增殖细胞核抗原表达及DNA含量与预后的关系

目的探讨ｐ５３蛋白、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）在肺癌中表达的特征、相关性及与ＤＮＡ含量和预后的关系。方法应用免疫组织化学方法检测原发性肺癌组织标本ｐ５３蛋白和ＰＣＮＡ的表达，并用图像分析技术测定ＤＮＡ含量。结果ｐ５３蛋白阳性表达组ＤＮＡ含量（８．９１Ｃ）和ＰＣＮＡ半定量分级（Ｉ～Ⅳ级例数为９，１３，１２，１０，下同）显著高于ｐ５３蛋白阴性组（６．６０ｃ）（１４，１５，７，２）在肺腺癌，半年内死亡组ｐ５３蛋白阳性表达率（１１／１５）和ＰＣＮＡ半定量分级（２，５，４，４）显著高于５年以上生存组（７／１９）（１０，６，１，２），且两者表达与淋巴结转移有显著关系；在肺鳞癌，半年内死亡组ＰＣＮＡ半定量分级（４，１，６，２）显著高于５年以上生存组（６，１４，７，０），而ｐ５３蛋白表达与患者预后关系不明显。结论ｐ５３蛋白、ＰＣＮＡ及ＤＮＡ含量间具有显著正相关关系，且ｐ５３蛋白、ＰＣＮＡ表达对于估测肺癌患者的预后有重要意义。

葛根素对血管平滑肌细胞增殖及增殖细胞核抗原和凋亡抑制蛋白表达的影响

目的:通过观察葛根素对培养的脐动脉平滑肌细胞增殖细胞核抗原(PCNA)和凋亡抑制蛋白(Survivin)表达的影响,探讨葛根素抑制平滑肌细胞增殖的机制。方法:分离培养人脐动脉平滑肌细胞,加入不同浓度葛根素与细胞孵育,采用免疫组化法检测血管平滑肌细胞的PCNA表达;提取RNA,采用Rt-PCR检测Survivin表达水平,并经核苷酸序列分析验证,灰度扫描测定Survivin/GAPDH(s/G)比率。结果:葛根素抑制血管平滑肌细胞的PCNA表达(P=0.0000);葛根素组Survivin/磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)(s/G)比率较对照组低。结论:葛根素具有抑制血管平滑肌细胞增殖的作用。

肺鳞癌发生过程中p53蛋白和增殖细胞核抗原的表达

应用免疫组织化学方法在含有肺鳞癌及其癌前病变的标本上观察了Ｐ５３蛋白和ＰＣＮＡ在肺鳞癌发生过程中出现表达的时间和频率。结果在癌旁正常和鳞状化生的支气管上皮未见ｐ５３蛋白表达，在轻→中→重度不典型增生、原位癌、浸润癌、ｐ５３蛋白表达的阳性率逐渐升高，阳性细胞也逐渐增多。在ｐ５３阳性的不典型增生的支气管上皮，其相应的鳞癌ｐ５３蛋白也呈阳性。ＰＣＮＡ的表达也呈现上述特点，但出现表达的时间早于ｐ５３蛋白。结果表明ｐ５３蛋白和ＰＣＮＡ可作为判断肿瘤发生可能性的有用的标志物，在肺鳞癌的早期诊断中具有重要意义。

P53蛋白和增殖细胞核抗原在口腔粘膜扁平苔癣中的表达

目的 :探讨 P5 3蛋白和增殖细胞核抗原 ( PCNA)在口腔粘膜扁平苔癣 ( OLP)中的表达情况。方法 :采用免疫组织化学方法检测 P5 3蛋白及 PCNA在 OLP和口腔鳞癌 ( OSCC)中的表达情况。结果 :P5 3蛋白和 PCNA在正常口腔粘膜及糜烂型 OLP中表达阴性 ;在糜烂型 OLP和 OSCC中表达阳性。结论 :糜烂型 OLP的 P5 3蛋白和 PCNA的表达高于非糜烂型 OLP。

持久饥饿对涡虫转氨酶、磷酸酶、蛋白水解酶和增殖细胞核抗原的影响

目的探讨持久饥饿对涡虫转氨酶、磷酸酶、蛋白水解酶和增殖细胞核抗原(PCNA)的影响。方法采用全自动生化分析仪测定转氨酶的活性变化,用复性电泳技术分析磷酸酶和蛋白水解酶的变化,用半定量RT-PCR技术分析PCNA mRNA的表达变化。结果饥饿过程中谷丙转氨酶和谷草转氨酶的活性显著升高,是对照水平的10倍以上,恢复喂食后逐渐降低到正常水平;碱性磷酸酶(ALP)的活性在饥饿过程中明显减弱,而酸性磷酸酶(ACP)活性却显著增强;受饥饿影响,140kD和40kD蛋白水解酶的活性均明显增加;然而饥饿过程中PCNA的表达没有明显变化,说明饥饿对该基因的影响很小。结论持久饥饿对涡虫的生理和生化代谢有重要影响,酶活性的变化反应了涡虫适应持久饥饿的能量代谢变化。

P^(53)蛋白、增殖细胞核抗原及胎盘型谷胱甘肽S—转移酶在胃癌中的表达及其意义

目的：研究胃癌中Ｐ５３、ＰＣＮＡ和ＧＳＴπ表达及意及。方法：应用免疫组织化学ＳＰ方法检测５例正常胃组织和５４例胃癌组织中Ｐ５３蛋白、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）和胎盘型谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴπ）的表达水平。结果：５例正常组织中未见Ｐ５３ＰＣＮＡ和ＧＳＴπ表达。５４例胃癌组织中Ｐ５３，ＰＣＮＡ和ＧＳＴπ阳性检出率分别为６１１１％，７０３７％和６８５２％。表达阳性Ｐ５３和ＰＣＮＡ均定位于肿瘤细胞核内，ＧＳＴπ定位于胞浆。Ｐ５３、ＰＣＮＡ和ＧＳＴπ表达率与胃癌组织类型和淋巴转移关系密切。结论：检测Ｐ５３。

p^53蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)在大肠癌中的表达及其与预后的关系

用免疫组化键菌素亲生物素过氧化物酶（LSAB）法检测94例大肠癌石蜡标本中的p53蛋白及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达，发现术后有远处转移者的p53蛋白的阳性表达率比无转移者显著提高（P＜0.05），非粘波癌的p53阳性表达率比粘液癌病（P＜0.01）。PCNA表达与DukesC期有无淋巴结转移相关。两者与性别、年龄、肿瘤部位、分化程度、术后局部复发等无关。p53蛋白阳性及PCNA强阳性表达提示预后较差。分层分析示p53蛋白并非独立的预后因素．在粘液癌和非粘液癌中不能仅以此点作为预后判断的良好指标，PCNA表达对DukesC期病例具有判断预后意义。

细胞周期相关蛋白和增殖细胞核抗原蛋白在Bowen病皮损中的表达

目的探讨细胞周期相关蛋白-细胞周期蛋白A,E(CyclinA,E),P16INK4a(P16),P21WAF1(P21)和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白在Bowen病发病中的作用。方法采用免疫组化法检测24例Bowen病皮损中CyclinA,CyclinE,P16,P21和PCNA蛋白的表达。结果CyclinA,P21,PCNA蛋白在所有的Bowen病标本中呈阳性表达,P16和CyclinE蛋白在22例Bowen病标本中呈阳性表达;其中13例、6例和23例Bowen病标本分别呈现强而弥漫的P16、P21和PCNA蛋白表达。结论CyclinA,CyclinE,P16,P21和PCNA蛋白在Bowen病皮损中的高表达可能与其增殖和分化有关。

肠镜活检组织中p53蛋白和增殖细胞核抗原表达及其意义

目的研究肠镜活检标本中p53及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达及其意义。方法应用免疫组化SP法检测110例肠镜活检组织p53及PCNA表达，其中20例大肠癌患者手术切除组织再行p53及PCNA染色。结果正常粘膜P53表达阴性，腺瘤及腺癌中p53表达率分别为10％和51．3％，两者差异有显著性（P＜0．05）。腺癌中PCNA强阳性率高于腺瘤组（P＜0．01），PCNA表达与大肠癌组织分化有关（P＜0．05）。20例大肠癌活检组织中7例P53F目性，11例PCNA强阳性，相同患者其手术切除标本9例p53阳性，14例PCNA强阳性，两者一致率分别为90％和85％。结论p53基因突变及细胞异常增殖在大肠癌发生中起重要作用，检测p53及PCNA表达状况有助于大肠癌的早期诊断和判断预后。

葡萄糖转运蛋白1、血管内皮生长因子及增殖细胞核抗原在非小细胞肺癌中的表达及其相关性

目的探讨葡萄糖转运蛋白1（Glut1）、血管内皮生长因子（VEGF）与增殖细胞核抗原（PCNA）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达和相关性。方法研究标本取自潍坊市人民医院胸外科2013年8月～2015年6月期间住院行肺部手术的患者113例,其中93例NSCLC组织作为实验组,20例肺部良性病变组织作为对照组,采用免疫组化法检测Glut1、VEGF及PCNA在NSCLC组织和肺部良性病变组织中的表达,并分析其与NSCLC临床病理学参数间的关系及三者间的相关性。结果实验组中Glut1、VEGF阳性率及PCNA标记指数（PCNA-LI）分别为89.25%（83/93）、80.65%（75/93）和（67.65±26.11）%,均高于对照组[15.00%（3/20）、25.00%（5/20）和（25.25±9.34）%],差异均有高度统计学意义（P〈0.01）。Glut1表达与病理类型、TNM分期、淋巴结转移有关（P〈0.05）。VEGF表达与TNM分期、淋巴结转移有关（P〈0.05）。PCNA表达与淋巴结转移有关（P〈0.05）。Glut1与VEGF表达呈正相关（r=0.312,P〈0.01）。Glut1、VEGF的表达与PCNA均呈正相关（r=0.306,P〈0.01;r=0.415,P〈0.01）。结论 Glut1、VEGF及PCNA与NSCLC的发生、发展密切相关,联合检测三者有助于判断NSCLC的预后。

病理性瘢痕组织中基质金属蛋白酶-1、金属蛋白酶组织抑制剂-1、血小板源性生长因子、增殖细胞核抗原的表达

目的探讨病理性瘢痕组织中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)、血小板源性生长因子(PDGF)、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及意义。方法采用免疫组织化学方法检测58例病理性瘢痕、16例正常皮肤及16例非病理性瘢痕组织中MMP-1、TIMP-1、PDGF及PCNA的表达情况。结果病理性瘢痕组织中MMP-1、TIMP-1、PDGF阳性表达率及PCNA指数均高于非病理性瘢痕及正常皮肤组织(P均<0.05)。病理性瘢痕组织中TIMP-1与PDGF、MMP-1、PCNA及PDGF与PCNA表达均呈正相关(P均<0.05)。结论病理性瘢痕的形成与MMP-1、TIMP-1、PDGF及PCNA相互作用失衡有关。

乳腺癌p53蛋白、增殖细胞核抗原表达与预后的关系

目的 探讨p53蛋白增殖细胞核抗原 (PCNA)在乳腺浸润性导管癌中的表达及预后的关系。方法 应用免疫细胞ABC法对乳腺癌p53和PCNA的表达进行检测。结果 死亡组p53蛋白阳性表达率 (94 2 8% ,33/ 35)和PCNA指数 (PI) (55 .5 %± 2 5 .47% )明显高于存活组的p53蛋白阳性表达率 (46 .1 5 % ,30 / 65)和PI(30 .8%±2 0 .0 8% )。临床分期和淋巴结转移有显著关系。结论 p53蛋白与PCNA间有显著的正相关 。

喉鳞癌中增殖细胞核抗原和p53蛋白表达的临床意义及其相互关系

本文以ＬＳＡＢ免疫组化方法，用单克隆抗体ＰＣ１０和ＤＯ－１对３０例喉鳞癌及１０例对照组（声带息肉）的增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）与ｐ５３蛋白表达进行研究，探讨其生物学意义。结果发现：１）喉鳞癌组织ＰＣＮＡ阳性表达率为１００％（ＰＣＮＡ－ＬＩｓ１６％～９２％），强阳性率为３６７％（１１／３０），对照组６例阴性，４例弱阳性表达（ＰＣＮＡ－ＬＩｓ＜１０％），试验组阳性表达率及表达程度明显高于对照组（Ｐ＜００５）。２）ｐ５３蛋白在喉鳞癌中阳性表达率为６６７％，对照组全部阴性，有显著差异（Ｐ＜００５）。３）在喉鳞癌组织中，ＰＣＮＡ和ｐ５３蛋白表达与临床分型、Ｔ分期及病理分化程度无显著关系（Ｐ＞００５），与淋巴转移及术后生存率关系密切（Ｐ＜００５）。４）ＰＣＮＡ与ｐ５３蛋白表达正相关。提示：１）喉鳞癌的增殖活性显著增强，ｐ５３基因突变与喉鳞癌的发生和发展有关。２）检测ＰＣＮＡ和ｐ５３蛋白有助于喉鳞癌的早期诊断和鉴别诊断，帮助治疗决策及判断预后。３）ｐ５３对ＰＣＮＡ有调节作用，为研究肿瘤的发生机理和寻找防治对策提供了新的理论依据。

翼状胬肉中增殖细胞核抗原、DNA-依赖蛋白激酶、c-myc的表达及其临床意义

目的 分析增殖细胞核抗原 (proliferatingcellnuclearantigen ,PCNA)、DNA 依赖蛋白激酶 (DNA dependentproteinkinase,DNA PK)、原癌基因蛋白 (C MYC)在翼状胬肉中的表达 ,探讨其与翼状胬肉增殖的关系。方法 应用免疫组化LSAB法对 33例翼状胬肉组织中PCNA、DNA PK、C MYC的表达进行观察和分析。结果 PCNA、DNA PK、C MYC在翼状胬肉中的表达率分别为 4 2 .4 2 %、18.18%、36 .36 % ,与翼状胬肉形成有密切关系。PCNA、DNA PK、C MYC 3者之间在表达上未见相关意义 (P >0 .0 5 )。结论 PC NA、DNA PK、C MYC表达与翼状胬肉形成密切相关 。