miR-30c-5p对人绒毛滋养层细胞线粒体自噬、间充质转化及PEG10水平影响

目的探讨miR-30c-5p对人绒毛滋养层细胞线粒体自噬、间充质转化及PEG10水平影响。方法人绒毛滋养层细胞HTR-8/SVneo分为空白组(HTR-8/SVneo细胞正常培养)、低氧组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养)、miR-30c-5p mimics组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养转染miR-30c-5p mimics)、NC-mimics组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养转染NC-mimics)、miR-30c-5p inhibitor组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养转染miR-30c-5p inhibitor)、NC-inhibitor组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养转染NC-inhibitor)。qRT-PCR检测各组细胞miR-30c-5p表达;Transwell小室检测细胞侵袭数目;划痕试剂盒检测细胞划痕愈合率;相关试剂盒检测ROS水平;免疫印记检测PEG10、Parkin、PINK1蛋白水平。结果空白组、低氧组、miR-30c-5p mimics组、NC-mimics组、miR-30c-5p inhibitor组及NC-inhibitor组的miR-30c-5p表达分别为1.00±0.00、1.00±0.00、1.61±0.15、1.03±0.13、0.75±0.08及0.96±0.10,差异有统计学意义(F=45.750,P<0.05);与空白组相比,低氧组HTR-8/SVneo细胞侵袭数目、划痕愈合率、PEG10、Parkin、PINK1降低,ROS升高,差异均有统计学意义(P<0.05);低氧组与NC-mimics组、NC-inhibitor组比较上述指标,差异均无统计学意义(P>0.05);与低氧组相比,miR-30c-5p mimics组细胞侵袭数目、划痕愈合率、PEG10、Parkin、PINK1降低,ROS升高,差异均有统计学意义(P<0.05),miR-30c-5p inhibitor组细胞侵袭数目、划痕愈合率、PEG10、Parkin、PINK1升高,ROS降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论抑制miR-30c-5p可加快低氧状态下的人绒毛滋养层细胞侵袭及迁移,并通过促进线粒体自噬降低ROS表达,机制与抑制PEG10水平相关。

棕榈酸诱导人绒毛滋养层细胞胰岛素抵抗模型的建立

目的探讨人胎盘绒毛滋养层细胞HTR8-S/Vneo在高脂环境下是否会形成胰岛素抵抗。方法用MTT法测定棕榈酸和胰岛素不影响HTR8-S/Vneo细胞增殖的最适浓度,在该最适浓度下分为四组(对照组、棕榈酸组、胰岛素组、棕榈酸-胰岛素协同处理组)处理HTR8-S/Vneo细胞,检测不同处理条件及不同处理时间下,细胞葡萄糖摄取量和细胞内总糖量。结果用MTT法检测不同浓度棕榈酸及胰岛素处理的HTR8-S/Vneo细胞,发现棕榈酸浓度为0.125mmol/L、胰岛素浓度为100nmol/L时,对细胞增殖没有显著影响(P>0.05),故选择该浓度的棕榈酸与胰岛素处理HTR8-S/Vneo细胞。在处理12h、18h、24h、36h分别检测葡萄糖的消耗量和细胞内总糖量,发现与对照组相比,胰岛素处理后葡萄糖消耗量和细胞内总糖量呈上升趋势(P<0.05),而棕榈酸处理后葡萄糖消耗量和细胞内总糖量无显著变化(P>0.05);与棕榈酸单独处理组相比,棕榈酸-胰岛素协同处理组在12h和18h能显著增加细胞内总糖量(P<0.05),但在24h和36h时这种显著差异消失(P>0.05),且与单独胰岛素处理组相比,棕榈酸-胰岛素协同处理组显著降低了葡萄糖消耗量和细胞内总糖量(P<0.05)。结论棕榈酸-胰岛素协同处理24h,引起HTR8-S/Vneo细胞对胰岛素的敏感性降低,HTR8-S/Vneo细胞胰岛素抵抗模型建立;与文献报道模型相比,棕榈酸-胰岛素协同处理大大缩短了细胞出现胰岛素抵抗的时间。

不同阻断剂在人绒毛滋养层细胞中p38MAPK信号传导通路的作用

目的针对三种不同的阻断剂在人绒毛滋养层细胞中p38MAPK信号传导通路的作用进行比较,探讨人绒毛滋养层细胞受阻断剂对其侵袭性的影响程度。方法分别对阻断剂影响EMMPRIN表达的程度采用RT-PCR及Western blot方法分别进行观察。人绒毛滋养层细胞在浓度不同佛波酯作用下,对其中p38MAPK活性变化采用ELISA方法进行检测,人绒毛滋养层细胞侵袭作用采用trans well细胞侵入系统进行检测,将浓度不同的p38MAPK抑制剂加入其中,对阻断剂影响人绒毛滋养层细胞侵袭性的效果进行观察。结果 p38MAPK抑制剂分别由5、10、15及20μmol·L^(-1)浓度持续24h作用后,对EMMPIRN分别达到7.4%、24.5%、31.7%及39.2%的的抑制率;p38MAPK抑制剂10μmol·L^(-1)浓度进行24h培养后,能够对EMM PRIN基因和蛋白表达具有21.5%的抑制率,培养48h与72h可分别达到45.5%和75.9%的抑制率。分别采用佛波酯0.1、1、10μmol·L^(-1)浓度加入培养细胞中持续30min作用,采用时间剂量依赖方式将p38MAPK激活,p38MAPK抑制剂采用时间剂量依赖方式对佛波酯激活p38MAPK进行抑制。结论在人绒毛人绒毛滋养层细胞中EMMPRIN表达中体现出p38MAPK信号传导途径,该通路对于侵袭人绒毛滋养层细胞的行为具有重要作用,p38MAPK抑制剂在防治子痫前期-子痫中将发挥重要作用。

SHP-2对人绒毛膜滋养层细胞增殖、侵袭、迁移和PI3K/AKT信号通路蛋白表达的影响

目的探讨Src同源物2磷酸酶2(SHP-2)对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo增殖、侵袭、迁移和PI3K/AKT信号通路蛋白表达的影响。方法用定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SHP-2在子痫前期(PE)组胎盘组织中的表达水平。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、克隆形成实验、划痕闭合和Transwell分析检测敲低或过表达SHP-2对人绒毛膜滋养细胞(HTR-8/SVneo)增殖、集落形成、迁移和侵袭能力的影响。Western blot检测侵袭相关蛋白的表达和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平。结果HP-2在PE组胚胎组织中低表达。敲低SHP-2显著抑制HTR-8/SVneo细胞的增殖、集落形成、侵袭和迁移,此外,基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达显著下调,E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达显著上调,PI3K和AKT的磷酸化水平显著降低,然而,过表达SHP-2具有相反的效果。结论SHP-2在PE胎盘组织中低表达,SHP-2过表达可促进滋养层细胞的增殖、侵袭和迁移能力,提示SHP-2可能是临床治疗PE的潜在靶点。

METTL3对人绒毛膜滋养层细胞增殖、迁移、侵袭及PI3K/AKT信号通路蛋白的调控作用

目的探讨甲基转移酶样蛋白3(METTL3)在子痫前期(PE)患者胎盘组织中的表达,并分析METTL3对人绒毛膜滋养层细胞增殖、迁移、侵袭的影响及机制。方法选择行剖宫产分娩的PE产妇15例、行剖宫产分娩的正常产妇15例。收集PE产妇及正常产妇胎盘组织,采用qRT-PCR法检测METTL3 mRNA表达水平。取人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo,分为空白对照组、空载对照组和过表达METTL3组,空白对照组正常培养,空载对照组感染阴性对照慢病毒,过表达METTL3组感染过表达METTL3慢病毒。采用CCK-8法观察三组细胞增殖能力,Tran⁃swell实验观察细胞迁移和侵袭能力,Western blotting法检测细胞p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平。结果与正常产妇胎盘组织相比,PE产妇胎盘组织METTL3 mRNA表达水平升高(P均<0.01)。与空白对照组以及空载对照组相比,过表达METTL3组细胞增殖活力降低,细胞迁移数量、细胞侵袭数量减少,细胞p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平降低(P均<0.01)。空白对照组与空载对照组上述指标比较,差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论PE患者胎盘组织中METTL3表达升高;METTL3可能通过调控PI3K/AKT信号通路影响人绒毛膜滋养层细胞增殖、迁移和侵袭,从而参与PE的发生发展。

miR-30c-5p通过调节Notch1的表达抑制人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo的迁移、侵袭和管状形成

目的:探讨miR-30c-5p通过调节Notch1表达对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo迁移、侵袭和管状形成调控的机制,确定其在子痫前期发病中的潜在作用。方法:在体外对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo进行培养,慢病毒系统构建miR-30c-5p过表达及敲低稳转HTR-8/SVneo细胞系。分为对照组、导入miR-30c-5p过表达质粒组和导入miR-30c-5p敲低质粒组。通过荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-30c-5p和Notch1基因的表达量,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中Notch1蛋白的表达量,划痕愈合实验、Transwell侵袭实验和管状形成实验分别检测各组细胞的迁移、侵袭和管状形成能力。结果:与对照组比较,miR-30c-5p过表达质粒组中细胞的miR-30c-5p基因表达水平升高(P<0.0001),细胞Notch1蛋白表达水平下降(P<0.01),细胞迁移(P<0.01)、侵袭(P<0.001)和管状形成能力(P<0.05)均受到抑制。反之,miR-30c-5p敲低质粒组中细胞的miR-30c-5p基因表达水平下降(P<0.01),细胞Notch1蛋白表达升高(P<0.001),细胞的迁移(P<0.01)、侵袭(P<0.05)以及细胞的管状形成能力(P<0.01)增强。结论:miR-30c-5p能够通过抑制Notch1的表达降低人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo的迁移、侵袭和管状形成能力,参与子痫前期的发病。

原代人绒毛滋养层细胞分离培养及其对巨细胞病毒的易感性研究

目的通过分离培养原代人绒毛滋养层细胞(HTCs)并检测其对人巨细胞病毒(HCMV)的易感性,探讨胎儿宫内感染HCMV的可能途径。方法将30例健康孕妇经负压真空吸引手术所得的流产早孕绒毛组织充分剪碎,用0.25%胰蛋白酶和0.2%DNA酶混合消化法制备细胞悬液,细胞悬液经200目不锈钢筛网过滤后用Percoll液密度梯度离心对HTCs进行初步纯化,细胞传代中应用反复胰酶消化法对HTC进行3～5次纯化,通过细胞学形态观察和免疫荧光染色方法对HTCs进行鉴定;用HCMV病毒株体外感染HTCs,应用PCR、Westernblot和免疫荧光方法对HCMV基因及蛋白进行检测,从而确定HTCs对HCMV的易感性。结果 Percoll分离联合胰酶、DNA酶消化法对原代HTCs有较好的分离效果,免疫荧光染色结果表明90%以上细胞表达CK-7相关抗原,HTCs体外感染HCMV 72h后形态学发生明显改变,病毒基因及蛋白均呈阳性表达。结论原代HTCs对HCMV易感,通过HTCs感染胎儿可能是HCMV宫内感染的重要传播途径之一。

人绒毛膜滋养层细胞的体外培养

目的 培养符合实验要求的人绒毛膜滋养层细胞。方法 胰蛋白酶、胶原酶消化绒毛组织 ,进行原代培养 ,胰蛋白酶消化法传代培养 ,光镜、免疫细胞化学染色进行细胞鉴定。结果 原代培养滋养层细胞 3h后开始贴壁 ,18h后全部贴壁 ,3天可传代 ,角蛋白、波形蛋白染色细胞纯度达 95 %以上。结论 胰蛋白酶、胶原酶消化法简便易行 ,可获得符合实验要求的人绒毛膜滋养层细胞 ,建立了稳定的人类绒毛膜滋养层细胞体外培养体系。

过氧化物酶体增殖物激活受体α对人绒毛滋养层细胞功能的影响

人绒毛膜滋养层细胞(HTR8/SVneo)是胎盘建立血液循环的重要组成部分,过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)是调节脂代谢的关键转录因子亚型,本研究旨在研究PPARα对人绒毛滋养层细胞功能的影响。将构建的PPARα表达载体和PPARα小干扰RNA分别转染HTR8/SVneo细胞,检测细胞功能的变化。本实验采取EdU法和MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,transwell小室法检测细胞迁移和浸润能力。结果显示,PPARα过表达能抑制滋养层细胞增殖、迁移和浸润能力,促进细胞凋亡能力;敲低PPARα能促进细胞的增殖、迁移和浸润能力,抑制细胞凋亡能力。PPARα表达水平与其对细胞生长和迁移的影响负相关。

miR-130b-5p下调胰岛素样生长因子-1抑制人绒毛膜滋养层细胞迁移及侵袭的作用及机制

【目的】探究微小RNA 130b-5p(miR-130b-5p)靶向胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对人绒毛膜滋养层细胞(HTR8/SVneo)迁移及侵袭的影响。【方法】将HTR8/SVneo细胞分为对照组、miR-NC组、miR-130b-5pmimics组、miR-130b-5pmimics+pcDNA3.1组和miR-130b-5pmimics+pcDNA3.1-IGF-1组,双荧光素酶报告基因检测miR-130b-5p和IGF-1的靶向关系;采用实时荧光定量PCR检测HTR8/SVneo细胞样本中miR-130b-5p及IGF-1表达水平;采用CCK-8法检测HTR8/SVneo细胞增殖情况;采用全息细胞仪及Transwell法分析HTR8/SVneo细胞迁移、侵袭能力;Western blot法检测HTR8/SVneo细胞样本中IGF-1及侵袭、上皮间充质转化(EMT)蛋白表达情况。【结果】双荧光素酶报告基因结果显示,IGF-1是miR-130b-5p的潜在靶基因;相较于miR-NC组,miR-130b-5pmimics组中miR-130b-5p表达水平、细胞增殖抑制率、钙粘附蛋白E(E-cadherin)表达水平显著增加,IGF-1、c-Myc、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)表达水平、迁移距离、侵袭细胞数、基质金属蛋白酶9(MMP9)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、神经型钙粘附蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达水平显著降低(P<0.05);相较于miR-130b-5pmimics+pcD⁃NA3.1组,miR-130b-5pmimics+pcDNA3.1-IGF-1组中细胞增殖抑制率、E-cadherin表达水平显著降低,c-Myc、Cy⁃clinD1表达水平、迁移距离、侵袭细胞数、MMP9、MMP2、Vimentin和N-cadherin表达水平显著增加(P<0.05)。【结论】miR-130b-5p过表达可能通过抑制IGF-1表达来抑制HTR8/SVneo细胞的迁移和侵袭。

枸杞多糖对BaP诱导人绒毛外滋养层细胞凋亡和侵袭的影响

目的 研究枸杞多糖对苯并芘(BaP)诱导人绒毛外滋养层细胞凋亡和侵袭的影响和机制。方法 用BaP诱导人绒毛膜滋养层细胞,以枸杞多糖干预,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移,Western blot检测细胞中MMP-9、Bax、Bcl-2、p65蛋白表达。用p65激活剂处理人绒毛膜滋养层细胞,探讨p65激活剂对枸杞多糖影响人绒毛膜滋养层细胞凋亡和侵袭的作用。结果 与对照组比较,模型组细胞凋亡率升高,细胞侵袭能力下降,细胞中Bax、p65蛋白表达升高(P<0.05),MMP-9、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,枸杞多糖各剂量组细胞凋亡率降低(P<0.05),细胞侵袭能力增强(P<0.05),Bax、p65蛋白表达降低(P<0.05),MMP-9、Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05),并呈剂量依赖性。p65激活剂可以逆转枸杞多糖对BaP诱导人绒毛膜滋养层细胞凋亡和侵袭的影响。结论 枸杞多糖具有拮抗BaP诱导的人绒毛膜滋养层细胞凋亡,促进细胞侵袭的作用,其机制可能与p65有关。

分散人绒毛膜滋养层细胞及细胞培养

目的 获取人绒毛膜滋养层细胞。方法 应用胰酶 /DNA酶法进行消化后进行培养。经光镜和电镜观察。结果 我们获取了人绒毛滋养层细胞并成功培养。结论 取人妊娠 4 5～ 5 5D刮宫术后的绒毛组织 ,经胰酶。

CircACTR2调节miR-23a-3p/TBL1X轴对高糖诱导的滋养层细胞损伤的影响

目的探讨环状RNA肌动蛋白相关蛋白2(circACTR2)调节miR-23a-3p/转导素β1X连锁蛋白(TBL1X)轴对高糖诱导的滋养层细胞损伤的影响。方法将人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo分为NG组(5.5 mmol/L葡萄糖)、HG组(25 mmol/L葡萄糖)、si-NC组(25 mmol/L葡萄糖+转染si-NC)、si-circACTR2组(25 mmol/L葡萄糖+转染si-circACTR2)、si-circACTR2+inhibitor-NC组(25 mmol/L葡萄糖+si-circACTR2和inhibitor-NC共转染)、sicircACTR2+miR-23a-3p inhibitor组(25 mmol/L葡萄糖+si-circACTR2和miR-23a-3p inhibitor共转染)。实时荧光定量PCR(qPCR)检测细胞中circACTR2、miR-23a-3p的表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移;酶联免疫吸附试验检测丙二醛(MDA)水平和乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western blot检测细胞中TBL1X、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、胱天蛋白酶3(caspase-3)的表达。双萤光素酶报告基因实验分别验证circACTR2、TBL1X和miR-23a-3p的靶向关系。结果与NG组相比,HG组HTR-8/Svneo细胞miR-23a-3p表达、增殖能力、划痕愈合率、PCNA、MMP-2、MMP-9表达、SOD活性降低,circACTR2、TBL1X和caxpase-3表达、MDA含量、LDH活性、凋亡率升高(P<0.05);与HG组和si-NC组相比,si-circACTR2组HTR-8/Svneo细胞中miR-23a-3p表达、增殖能力、划痕愈合率、PCNA、MMP-2、MMP-9表达、SOD活性升高,circACTR2、TBL1X和caxpase-3表达、MDA含量、LDH活性、凋亡率降低(P<0.05);在敲低circACTR2的基础上,下调miR-23a-3p可明显减弱circACTR2敲低对高糖诱导的HTR-8/Svneo细胞的增殖和迁移的促进作用,增强细胞凋亡和氧化应激能力。双萤光素酶报告基因实验结果显示,circACTR2靶向负调控miR-23a-3p表达,miR-23a-3p靶向负调控TBL1X表达。结论敲低circACTR2可调控miR-23a-3p/TBL1X轴,进而通过抑制高糖诱导的滋养层细胞损伤来发挥保护作用。

微小miR-184在调控女性滋养层细胞凋亡中的作用及其分子机制探究

目的:探究微小miR-184(miR-184)在调控女性滋养层细胞凋亡中的作用及其分子机制。方法:利用定量的反转录(PCR)技术检测62例女性滋养层细胞组织中微小miR-184的表达,以分析和观察女性滋养层细胞组织中的miR-184在人绒毛膜滋养层细胞(HTR8/Svneo)和滋养层细胞系(Swan71)两种细胞中的表达水平和对细胞增殖与凋亡的作用机制。结果:miR-184在人绒毛膜滋养层细胞(HTR8/Svneo)和人滋养层细胞(Swan71)两种细胞中的相对表达水平在滋养层细胞中比在正常的上皮组织细胞中更高(均P<0.05);转染小干扰RNA(siRNA)沉默miR-184促使miR-184的表达能够抑制HTR8/SVneo和Swan71细胞的增殖,利用si-miR-184的转染降低miR-184的表达水平能够阻碍女性滋养层细胞的凋亡(P<0.01),而miR-184的过度表达能够明显推动女性滋养层细胞的凋亡(P<0.01)。结论:通过抑制miR-184表达可以调控和诱导滋养层细胞凋亡的保护作用。

lncRNA SNHG17靶向miR-525-5p对人绒毛膜滋养层细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨lncRNA SNHG17对人绒毛膜滋养层细胞生长及转移的影响及其可能作用机制。方法qRT-PCR检测正常胎盘组织、子痫前期胎盘组织中lncRNA SNHG17和miR-525-5p表达。体外培养人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo,分别转染si-SNHG17、anti-miR-525-5p及其阴性对照;采用平板克隆形成实验、划痕实验与Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测miR-525-5p与SNHG17的靶向关系。结果与正常胎盘组织比较,子痫前期胎盘组织中lncRNA SNHG17表达升高,miR-525-5p表达降低(P<0.05)。转染si-SNHG17后细胞克隆形成数和侵袭细胞数增多,划痕愈合率升高(P<0.05)。lncRNA SNHG17靶向调控miR-525-5p;共转染si-SNHG17和anti-miR-525-5p后细胞克隆形成数和侵袭细胞数减少,划痕愈合率降低(P<0.05)。结论沉默lncRNA SNHG17可通过促进miR-525-5p表达而促进人绒毛膜滋养层细胞增殖、迁移及侵袭。

PTEN/mTOR通路在高糖诱导的人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo凋亡中的作用机制探讨

目的探讨高糖诱导人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo凋亡的相关机制。方法体外培养人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo,分为空白对照组、高糖组、NC组(阴性对照组)、第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因(PTEN)-siRNA组(抑制PTEN表达组)及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路抑制剂(GDC-0349)组。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测HTR-8/SVneo细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白及PTEN/mTOR通路相关蛋白表达情况。结果与空白对照组比较,高糖组HTR-8/SVneo细胞增殖抑制率、凋亡率及Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、PTEN蛋白表达水平均显著升高(P<0.05),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶(p-PI3K)/PI3K、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)/AKT、磷酸化mTOR(p-mTOR)/mTOR蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与高糖组、NC组比较,PTENsiRNA组HTR-8/SVneo细胞增殖抑制率、凋亡率及Bax、cleaved caspase-3、PTEN蛋白表达水平均显著降低,Bcl-2、pPI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与PTEN-siRNA组比较,GDC-0349组HTR-8/SVneo细胞增殖抑制率、凋亡率及Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平均显著升高,Bcl-2、p-PI3K/PI3K、pAKT/AKT、p-mTOR/mTOR蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论高糖可抑制人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo增殖能力,诱导其凋亡,可能是通过上调PTEN表达、抑制PI3K/AKT/mTOR通路活化实现的。

miR-34a靶向MMP2对TNF-α诱导人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo迁移及侵袭的影响

目的探讨微小RNA(miR)-34a靶向基质金属蛋白酶(MMP)2对肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo迁移和侵袭的影响。方法体外培养人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo,利用0.5μg/LTNF-α刺激细胞;将细胞分为对照组、TNF-α诱导组、NC组、miR-34a mimics组、iNC组、miR-34a inhibitor组;实时荧光定量PCR(qPCR)检测各组细胞中miR-34a、MMP2 mRNA的表达;CCK-8法、Transwell法和划痕实验分别检测各组细胞增殖、侵袭和迁移情况;蛋白免疫印迹法检测MMP2蛋白的表达;双荧光素酶报告实验证明miR-34a和MMP2的靶向关系。结果与对照组比较,TNF-α诱导组细胞miR-34a表达水平、细胞增殖抑制率显著升高(P<0.05),MMP2 mRNA和蛋白表达水平、细胞侵袭数目、细胞迁移率显著降低(P<0.05);与TNF-α诱导组和NC组比较,miR-34a mimics组细胞miR-34a表达水平、细胞增殖抑制率显著升高(P<0.05),MMP2 mRNA和蛋白表达水平、细胞侵袭数目、细胞迁移率显著降低(P<0.05);与TNF-α诱导组和iNC组比较,miR-34a inhibitor组细胞miR-34a表达水平、细胞增殖抑制率显著降低(P<0.05),MMP2 mRNA和蛋白表达水平、细胞侵袭数目、细胞迁移率显著升高(P<0.05);miR-34a与MMP2具有靶向关系。结论miR-34a可能通过负调控MMP2的表达抑制TNF-α诱导的人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo迁移和侵袭。

PGRN在植入性胎盘组织中的表达及其对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo迁移、侵袭的影响

目的:探讨颗粒蛋白前体(PGRN)在植入性胎盘组织中的表达以及PGRN对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo迁移、侵袭的影响及潜在的作用机制。方法:收集河北省中医院收治的植入性胎盘组织和正常胎盘组织各25例,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western Blot)检测胎盘组织(绒毛膜层)中PGRN mRNA和蛋白水平;体外培养人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo,采用重组腺病毒载体和小干扰RNA(siRNA)技术过表达和干扰HTR-8/SVneo细胞中的PGRN,通过qRT-PCR和Western Blot检测细胞中PGRN表达确定过表达和干扰有效后,划痕实验和Transwell实验分别检测HTR-8/SVneo细胞迁移、侵袭能力;Western Blot检测HTR-8/SVneo细胞迁移、侵袭相关蛋白的表达。结果:植入性胎盘组织中PGRN mRNA和蛋白表达水平均显著高于正常胎盘组织(P<0.05);过表达PGRN后,HTR-8/SVneo细胞迁移、侵袭能力显著增加(P<0.05),N-钙黏蛋白(N-cadherin)、纤维连接蛋白(FN)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平显著升高,E-钙粘蛋白(E-cadherin)表达水平显著降低(P<0.05),而PGRN沉默后,HTR-8/SVneo细胞的迁移、侵袭能力显著降低(P<0.05),同时N-cadherin、FN、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平显著降低,E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论:PGRN在植入性胎盘组织中过表达,PGRN的过表达可能促进人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo的迁移和侵袭;而下调PGRN的表达能抑制人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo的迁移和侵袭;其作用机制可能与促进上皮-间质转化(EMT)过程有关。

胎盘滋养层细胞的感染和凋亡与HBV的宫内传播机制

目的:通过HBV感染体外培养的人绒毛膜滋养层细胞,探讨HBV宫内感染发生的机制.方法:对人早孕绒毛膜滋养层细胞进行原代培养和对人滋养层细胞系JEG-3进行传代培养,将HBV感染血清与原代及传代培养细胞共同孵育8-48h,倒置显微镜观察细胞形态及细胞间连接,细胞免疫荧光和免疫组织化学染色方法检测滋养层细胞中HBsAg和HBcAg的表达,荧光定量PCR方法检测被感染的滋养层细胞中的HBV DNA,TUNEL方法检测滋养层细胞的凋亡.结果:与HBV阳性血清共同孵育对滋养层细胞的形态和细胞间连接无明显影响;细胞免疫荧光和免疫组织化学染色结果显示,滋养层细胞与HBV感染血清共同孵育(8,24,48h)后,滋养层细胞可以出现HBsAg和HBcAg的阳性表达,24 h时HBsAg阳性细胞数量最多(8h:18.0%±3.67%;24h:30.6%±2.88%;48 h:24.8%±4.21%);荧光定量PCR方法检测到被感染的滋养层细胞中HBV DNA的存在;TUNEL结果显示,与HBV感染血清共同孵育可导致滋养层凋亡细胞数量逐渐增加(24h:18.6%±3.05%;48h:26.8%±2.86%:P<0.01).结论:滋养层细胞的感染可能是HBV通过胎盘屏障的途径之一;HBV感染可以诱导滋养层细胞产生凋亡,这可能是胎盘屏障阻止HBV宫内感染的一种保护性机制.