桉叶油对体外培养人绒毛膜细胞增殖的影响

目的观察桉叶油对体外培养人绒毛膜细胞增殖的影响,为其在食品添加及药品开发中的应用提供依据。方法胰酶消化法收集正常妊娠6～8周人绒毛膜细胞,随机分为桉叶油组和对照组,其中桉叶油组分别加入桉叶油使终质量浓度分别为0.75、0.15、0.015、0.001 5 mg/mL;对照组加入70%乙醇10μL/mL。采用台盼蓝染色,细胞计数法绘制细胞生长曲线;桉叶油处理后12、24、36 h以MTT法测定细胞增殖抑制率,12、24 h时同时以流式细胞仪测定细胞周期和凋亡情况。结果①随培养时间延长,两组人绒毛膜细胞数量均逐渐减少,其中0.75mg/mL桉叶油组人绒毛膜细胞生长明显受抑,与对照组相比有显著差异;其余桉叶油各组绒毛膜细胞生长情况与对照组相比无显著差异。②0.75 mg/mL桉叶油组人绒毛膜细胞增殖抑制率显著高于对照组(P<0.05),其余桉叶油各组人绒毛膜细胞增殖抑制率与对照组相比无显著差异。③桉叶油作用12 h后,0.75 mg/mL桉叶油组G0～G1期细胞减少、S期细胞增多、G2～M期细胞减少、凋亡率明显增高,与对照组相比,P<0.05;与对照组相比,其余桉叶油各组G0～G1期、G2～M期细胞比例有显著差异(P<0.05),S期细胞比例及凋亡率无显著差异。桉叶油作用24 h后,与对照组相比,0.75 mg/mL桉叶油组G0～G1期细胞比例减少、S期细胞比例减少、G2～M期细胞比例增多、凋亡率升高(P<0.05);其余桉叶油各组S期细胞比例均显著升高(P<0.05),G2～M期细胞比例及凋亡率均无明显变化。结论质量浓度≤0.15 mg/mL的桉叶油对人绒毛膜细胞无明显生长抑制、细胞毒性及诱导凋亡的作用,但可影响细胞周期,且此影响可能随作用时间不同而异;此为桉叶油在食品添加及药物开发中的应用提供了实验依据。

桉叶油对体外培养人绒毛膜细胞生长及分泌功能的影响

目的：探讨桉叶油对体外培养人绒毛膜细胞生长及分泌功能的影响。方法胰酶消化法收集正常妊娠6∽8周人绒毛膜细胞，分别用0.75、0.15、0.015、0.0015g·L-1的桉叶油作用12h、24h、48h，倒置显微镜观察细胞形态变化，活细胞计数测定细胞的生长曲线，MTT法检测桉叶油对细胞的抑制率，化学发光法检测细胞培养上清液中的雌激素、孕激素和绒毛膜促性腺激素的浓度。结果与对照组比较,质量浓度≥0.75g·L-1的桉叶油对绒毛膜细胞生长有明显的抑制作用（P〈0.05）；质量浓度≤0.15g/L的桉叶油对绒毛膜细胞生长的抑制率与对照组比较无明显差异（P＞0.05）。桉叶油作用绒毛膜细胞24h 时，0.75g/L桉叶油组细胞上清液中雌二醇、孕激素浓度均较对照组显著降低（P〈0.05），其余各组细胞上清液中雌二醇、孕激素浓度均与对照组比较无差异。桉叶油作用绒毛膜细胞24h时，桉叶油各组细胞上清液中绒毛膜促性腺激素浓度较对照组显著增高（P〈0.05）。结论质量浓度≥0.75g/L桉叶油对人绒毛膜细胞生长有抑制作用，质量浓度≤0.15g/L桉叶油对人绒毛膜细胞生长无抑制作用。桉叶油对体外培养的绒毛膜细胞分泌雌二醇、孕激素无明显影响，但可刺激绒毛膜细胞分泌HCG。

采用miR-148a低表达人绒毛膜滋养细胞构建的子痫前期模型细胞活力、焦亡、炎性和氧化应激反应观察

目的观察采用微小RNA-148a(miR-148a)低表达人绒毛膜滋养细胞系HTR-8/SVneo构建的子痫前期(Preeclampsia,PE)模型细胞的细胞活力、焦亡、炎症和氧化应激反应。方法取对数生长期人绒毛膜滋养细胞系HTR-8/SVneo,分为甲、乙、丙、丁组:甲组细胞用抑制miR-148a表达的miR-148a inhibitor转染24 h,加入100 ng/L的LPS培养24 h(建立PE模型);乙组细胞用空白对照NC-inhibitor转染24 h,加入100 ng/L的LPS培养24 h;丙组加入100 ng/L的LPS培养24 h;丁组不做任何处理。培养48 h时,采用qRT-PCR法检测各组细胞miR-148a,采用CCK8法检测各组细胞活力,采用TUNEL法测算各组细胞焦亡率,采用Western Blotting法检测各组细胞焦亡相关蛋白Caspase-1、GSDMD,采用ELISA法检测各组上清液炎症因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6]及氧化应激指标[谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)]。结果与丁组相比,丙组细胞miR-148a相对表达量高,培养24、48、72 h时OD值低,细胞焦亡率高,细胞Caspase-1、GSDMD蛋白相对表达量高(P均<0.05);与乙组相比,甲组细胞miR-148a相对表达量低,培养24、48、72 h时OD值高,细胞焦亡率低,细胞Caspase-1、GSDMD和NLRP3蛋白相对表达量低(P均<0.05)。与丁组相比,丙组细胞上清液TNF-α、IL-1β及IL-6水平高,细胞GSH和SOD表达降低、MDA表达升高(P均<0.05);与乙组相比,甲组细胞上清液TNF-α、IL-1β及IL-6水平低,细胞GSH和SOD表达升高、MDA表达降低(P均<0.05)。结论miR-148a低表达HTR-8/SVneo细胞构建的PE模型细胞活力高,细胞焦亡程度、炎性反应及氧化应激反应低。miR-148a可能是PE的治疗靶点之一。

单增李斯特菌感染人绒毛膜滋养层细胞比较蛋白质组学研究

目的分析单核细胞增生李斯特氏菌(简称单增李斯特菌)感染人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo过程中引起的细胞蛋白质组变化。从宿主细胞分子水平对单增李斯特菌感染胎盘的机制进行研究。方法运用TMT(Tandem Mass Tags)蛋白质组学技术对HTR-8/Svneo感染组和非感染组蛋白质组进行定量分析,运用GO(Gene Ontology)、KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)数据库对差异表达蛋白进行分子功能、生物过程及代谢途径富集分析。结果共鉴定肽段76285个,可定量蛋白6979个。HTR-8/Svneo感染过程中356个蛋白发生了显著性差异表达。153个表达量上调,203个表达量下调。差异表达量倍数最高的蛋白为微管马达蛋白(B4DYE2),最低为翻译起始因子1(Q6IAV3)。GO功能富集和KEGG代谢途径富集结果表明,上调蛋白参与的生物过程和代谢途径集中在微管、微丝运动,细胞自噬等方面,下调蛋白集中在碳代谢、氮代谢、氨基酸生物合成、核酸代谢等初级代谢途径和泛素介导的蛋白质水解等方面。结论单增李斯特菌侵袭HTR-8/Svneo过程中,宿主细胞的基础代谢可能发生了显著降低,并处于较高的自噬水平。细胞迁移诱导透明质酸酶CEMIP(Q8WUJ3)的显著上调说明该蛋白可能在调节滋养层细胞迁移、侵袭能力进而造成不良妊娠方面具有重要作用,为单增李斯特菌感染胎盘分子机制研究提供新的思路。

黄芪甲苷对高糖诱导人绒毛膜滋养层细胞(HTR-8/SVneo)焦亡及侵袭迁移的影响

【目的】探讨黄芪甲苷对高糖诱导的人绒毛膜滋养层细胞(HTR-8/SVneo)焦亡及侵袭迁移的影响。【方法】将HTR-8/SVneo细胞分为4组:对照组(未处理)、高糖组(高糖刺激)及黄芪甲苷50、100μmol/L组(高糖刺激+黄芪甲苷)。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞活力,分别采用Transwell实验和划痕实验测定细胞侵袭、迁移能力,Hoechst 33342/碘化丙啶(PI)双荧光染色评估细胞焦亡情况,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测细胞NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶剪切体(cleaved-Caspase-1)、消皮素D-N端(GSDMD-NT)、白细胞介素18(IL-18)蛋白表达水平。【结果】与对照组比较,高糖组HTR-8/SVneo细胞活力显著降低,细胞迁移率显著降低,侵袭细胞数显著减少,PI阳性细胞比例显著增加,NLRP3、cleaved-Caspase-1、GSDMD-NT、IL-18蛋白表达水平显著升高(P<0.05或P<0.01);与高糖组比较,黄芪甲苷处理组细胞活力显著升高,细胞迁移率显著增加,侵袭细胞数显著增加,PI阳性细胞比例显著下降,NLRP3、cleaved-Caspase-1、GSDMD-NT、IL-18蛋白表达水平显著下降(P<0.05或P<0.01)。【结论】黄芪甲苷可抑制高糖诱导的HTR-8/SVneo细胞焦亡,改善细胞侵袭及迁移能力。

SHP-2对人绒毛膜滋养层细胞增殖、侵袭、迁移和PI3K/AKT信号通路蛋白表达的影响

目的探讨Src同源物2磷酸酶2(SHP-2)对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo增殖、侵袭、迁移和PI3K/AKT信号通路蛋白表达的影响。方法用定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SHP-2在子痫前期(PE)组胎盘组织中的表达水平。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、克隆形成实验、划痕闭合和Transwell分析检测敲低或过表达SHP-2对人绒毛膜滋养细胞(HTR-8/SVneo)增殖、集落形成、迁移和侵袭能力的影响。Western blot检测侵袭相关蛋白的表达和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平。结果HP-2在PE组胚胎组织中低表达。敲低SHP-2显著抑制HTR-8/SVneo细胞的增殖、集落形成、侵袭和迁移,此外,基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达显著下调,E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达显著上调,PI3K和AKT的磷酸化水平显著降低,然而,过表达SHP-2具有相反的效果。结论SHP-2在PE胎盘组织中低表达,SHP-2过表达可促进滋养层细胞的增殖、侵袭和迁移能力,提示SHP-2可能是临床治疗PE的潜在靶点。

高糖环境下PLGF基因沉默对人绒毛膜外滋养细胞增殖、迁移及侵袭及Nrf2/HO-1信号通路的影响

目的探究高糖环境下胎盘生长因子(PLGF)基因沉默对人绒毛膜外滋养细胞(EVCT)的影响。方法体外培养HTR-8/SVneo细胞,将细胞分为对照组(不做处理)、空载组(空载质粒转染)及PLGF沉默组(PLGF双切口酶质粒转染)。CCK-8法、划痕实验及Transwell实验检测各组细胞增殖、迁移、侵袭能力;q RT-PCR及Western blot检测各组细胞PLGF、核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)mRNA及蛋白表达情况。结果对照组与空载组细胞增殖抑制率、划痕愈合率、侵袭细胞数比较,差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,PLGF沉默组细胞增殖抑制率升高,划痕愈合率、侵袭细胞数降低(P<0.05)。对照组与空载组PLGF、Nrf2及HO-1 m RNA及蛋白表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,PLGF沉默组PLGF、Nrf2及HO-1m RNA及蛋白表达量降低(P<0.05)。结论高糖环境下PLGF基因沉默能够抑制EVCT增殖、迁移及侵袭,其作用机制可能与抑制Nrf2/HO-1信号通路活性有关。

METTL3对人绒毛膜滋养层细胞增殖、迁移、侵袭及PI3K/AKT信号通路蛋白的调控作用

目的探讨甲基转移酶样蛋白3(METTL3)在子痫前期(PE)患者胎盘组织中的表达,并分析METTL3对人绒毛膜滋养层细胞增殖、迁移、侵袭的影响及机制。方法选择行剖宫产分娩的PE产妇15例、行剖宫产分娩的正常产妇15例。收集PE产妇及正常产妇胎盘组织,采用qRT-PCR法检测METTL3 mRNA表达水平。取人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo,分为空白对照组、空载对照组和过表达METTL3组,空白对照组正常培养,空载对照组感染阴性对照慢病毒,过表达METTL3组感染过表达METTL3慢病毒。采用CCK-8法观察三组细胞增殖能力,Tran⁃swell实验观察细胞迁移和侵袭能力,Western blotting法检测细胞p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平。结果与正常产妇胎盘组织相比,PE产妇胎盘组织METTL3 mRNA表达水平升高(P均<0.01)。与空白对照组以及空载对照组相比,过表达METTL3组细胞增殖活力降低,细胞迁移数量、细胞侵袭数量减少,细胞p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平降低(P均<0.01)。空白对照组与空载对照组上述指标比较,差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论PE患者胎盘组织中METTL3表达升高;METTL3可能通过调控PI3K/AKT信号通路影响人绒毛膜滋养层细胞增殖、迁移和侵袭,从而参与PE的发生发展。

miR-30c-5p通过调节Notch1的表达抑制人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo的迁移、侵袭和管状形成

目的:探讨miR-30c-5p通过调节Notch1表达对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo迁移、侵袭和管状形成调控的机制,确定其在子痫前期发病中的潜在作用。方法:在体外对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo进行培养,慢病毒系统构建miR-30c-5p过表达及敲低稳转HTR-8/SVneo细胞系。分为对照组、导入miR-30c-5p过表达质粒组和导入miR-30c-5p敲低质粒组。通过荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-30c-5p和Notch1基因的表达量,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中Notch1蛋白的表达量,划痕愈合实验、Transwell侵袭实验和管状形成实验分别检测各组细胞的迁移、侵袭和管状形成能力。结果:与对照组比较,miR-30c-5p过表达质粒组中细胞的miR-30c-5p基因表达水平升高(P<0.0001),细胞Notch1蛋白表达水平下降(P<0.01),细胞迁移(P<0.01)、侵袭(P<0.001)和管状形成能力(P<0.05)均受到抑制。反之,miR-30c-5p敲低质粒组中细胞的miR-30c-5p基因表达水平下降(P<0.01),细胞Notch1蛋白表达升高(P<0.001),细胞的迁移(P<0.01)、侵袭(P<0.05)以及细胞的管状形成能力(P<0.01)增强。结论:miR-30c-5p能够通过抑制Notch1的表达降低人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo的迁移、侵袭和管状形成能力,参与子痫前期的发病。

紫草素诱导人绒毛膜癌JEG-3细胞凋亡机制的研究

背景与目的:研究紫草素(shikonin)诱导人绒毛膜癌JEG-3细胞的凋亡作用及其机制。材料与方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定紫草素对JEG-3细胞生长的抑制作用;Hoechst33258荧光染色和流式细胞术(FCM)检测紫草素处理JEG-3细胞后发生凋亡的形态变化;Western blot检测凋亡相关蛋白的活化。结果:MTT分析表明,紫草素抑制JEG-3细胞增殖,并呈时间和剂量依赖性(P<0.01),其半数有效抑制浓度(IC50)为(6.3±0.6)μmol/L;紫草素处理JEG-3细胞后,Hoechst33258染色出现典型的凋亡特征,且FCM检测出现明显的亚二倍体峰,Annexin V/PI双染出现早期凋亡细胞;Western blot检测结果显示经紫草素处理后JEG-3细胞的Caspase-3、ERK、JNK蛋白均被激活,而PARP蛋白被剪切成cleaved PARP(85 KD)。结论:紫草素可能经Caspase-3途径诱导人绒毛膜癌细胞JEG-3凋亡,并且MAPK通路的活化、抑制对细胞的凋亡有一定的影响。

人胎盘绒毛膜来源间充质干细胞的生物学特性

背景:骨髓是间充质干细胞的主要来源,但骨髓中间充质干细胞数量和质量会随着年龄的增长而逐渐降低。因此,寻找一种新的干细胞来源具有重要意义。目的:分离研究了一种新的间充质干细胞来源——人绒毛膜来源间充质干细胞,并研究其生物学特性。方法:将胎盘冲洗干净后,分离出脐带和羊膜组织,将剩余的胎盘组织进行原代和传代培养。通过短串联重复序列分析检测细胞是否来源于绒毛膜,用MTT法检测细胞生长方式,流式细胞仪分析细胞表型及干细胞标记,使用不同的诱导分化培养基检测其多向分化的能力。将该细胞与植物血凝素刺激的外周血单个核细胞共培养,用酶联免疫吸附试验检测上清γ-干扰素的水平。结果与结论:短串联重复序列分析证明所得到的细胞来源于绒毛膜,这种绒毛膜来源的细胞生长呈典型的成纤维细胞形态。细胞表达常见的间充质干细胞表面标记CD90、CD73、CD105、CD44,不表达CD45,CD11b和CD34。同时,细胞也表达Nestin和Sox-2。在不同的条件培养基培养状态下,细胞可向成骨、成脂方向分化。这些结果证明所得到的细胞为人绒毛膜间充质干细胞。这些绒毛膜间充质干细胞能抑制植物血凝素刺激的人外周血单个核细胞分泌γ-干扰素。可见绒毛膜来源的间充质干细胞具有和传统的骨髓来源间充质干细胞具有相似的生物学特性。

人绒毛膜滋养层细胞的体外培养

目的 培养符合实验要求的人绒毛膜滋养层细胞。方法 胰蛋白酶、胶原酶消化绒毛组织 ,进行原代培养 ,胰蛋白酶消化法传代培养 ,光镜、免疫细胞化学染色进行细胞鉴定。结果 原代培养滋养层细胞 3h后开始贴壁 ,18h后全部贴壁 ,3天可传代 ,角蛋白、波形蛋白染色细胞纯度达 95 %以上。结论 胰蛋白酶、胶原酶消化法简便易行 ,可获得符合实验要求的人绒毛膜滋养层细胞 ,建立了稳定的人类绒毛膜滋养层细胞体外培养体系。

马鞭草C部位单体4′-甲醚-黄芩素对人绒毛膜癌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨马鞭草有效成分所提取的单体4′-甲醚-黄芩素(4′-methylether-scutellarein,4-MS)对人绒毛膜癌JAR细胞的增殖抑制作用及其相关机制。方法:JAR细胞传代后加入不同浓度4-MS作用一定时间,应用MTT法检测对细胞增殖的抑制作用,流式细胞术测定细胞凋亡率及细胞周期变化,AO/EB双染法区分早、晚期凋亡细胞和坏死细胞,RT-PCR技术分析4-MS对人绒毛膜癌JAR细胞凋亡相关基因Caspase3、p38MAPK及Survivin表达的影响,并进一步用Western blotting测定Caspase3、p38MAPK及Survivin在用药前后蛋白水平的表达差异。结果:不同质量浓度(10、20、40mg/L)的4-MS对JAR细胞均有增殖抑制作用,并随药物浓度和作用时间的增加而不断增强(P<0.05,P<0.01);流式细胞术显示,随着药物浓度的增加细胞凋亡率亦逐渐升高,G2/M期细胞所占比例增大(P<0.05);AO/EB双染后发现,随着4-MS剂量的增加,晚期凋亡细胞逐渐增多;20和40mg/L的4-MS作用48h后,JAR细胞中p38MAPK及Caspase3mRNA表达下降,Survivin mRNA表达上升,与对照组相比均有统计学意义(P<0.05);Western blotting证实,20mg/L和40mg/L4-MS作用48h后Survivin蛋白表达量显著下降,p38磷酸化水平升高,Caspase3被明显激活。结论:4-MS能抑制人绒毛膜癌JAR细胞的增殖并诱导凋亡,可能与其阻滞细胞生长于G/M期、抑制Survivin抗凋亡活性,直接激活p38MAPK信号通路和Caspase3活化有关。

miR-130b-5p下调胰岛素样生长因子-1抑制人绒毛膜滋养层细胞迁移及侵袭的作用及机制

【目的】探究微小RNA 130b-5p(miR-130b-5p)靶向胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对人绒毛膜滋养层细胞(HTR8/SVneo)迁移及侵袭的影响。【方法】将HTR8/SVneo细胞分为对照组、miR-NC组、miR-130b-5pmimics组、miR-130b-5pmimics+pcDNA3.1组和miR-130b-5pmimics+pcDNA3.1-IGF-1组,双荧光素酶报告基因检测miR-130b-5p和IGF-1的靶向关系;采用实时荧光定量PCR检测HTR8/SVneo细胞样本中miR-130b-5p及IGF-1表达水平;采用CCK-8法检测HTR8/SVneo细胞增殖情况;采用全息细胞仪及Transwell法分析HTR8/SVneo细胞迁移、侵袭能力;Western blot法检测HTR8/SVneo细胞样本中IGF-1及侵袭、上皮间充质转化(EMT)蛋白表达情况。【结果】双荧光素酶报告基因结果显示,IGF-1是miR-130b-5p的潜在靶基因;相较于miR-NC组,miR-130b-5pmimics组中miR-130b-5p表达水平、细胞增殖抑制率、钙粘附蛋白E(E-cadherin)表达水平显著增加,IGF-1、c-Myc、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)表达水平、迁移距离、侵袭细胞数、基质金属蛋白酶9(MMP9)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、神经型钙粘附蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达水平显著降低(P<0.05);相较于miR-130b-5pmimics+pcD⁃NA3.1组,miR-130b-5pmimics+pcDNA3.1-IGF-1组中细胞增殖抑制率、E-cadherin表达水平显著降低,c-Myc、Cy⁃clinD1表达水平、迁移距离、侵袭细胞数、MMP9、MMP2、Vimentin和N-cadherin表达水平显著增加(P<0.05)。【结论】miR-130b-5p过表达可能通过抑制IGF-1表达来抑制HTR8/SVneo细胞的迁移和侵袭。

HBV阳性血清体外感染人绒毛膜滋养细胞株JEG-3的研究

目的 建立乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）体外感染人绒毛膜滋养细胞株JEG-3的模型,探讨HBV宫内感染的可能危险因素.方法 对人绒毛膜滋养细胞株JEG-3进行传代培养,将不同复制水平的HBV阳性血清与传代培养的JEG-3细胞在无人为干扰因素下共同孵育48~72小时,实时荧光定量PCR方法检测细胞内HBV-DNA的复制水平.结果 在无人为干扰因素下,HBV阳性血清体外可感染人绒毛膜滋养细胞株JEG-3,正常人血清细胞中未能检测出HBV-DNA;低、中危组细胞内也未检测出HBV-DNA;高危组复制水平为4.56×103U/mL,极高危组复制水平为2.72×104U/mL,随着HBV阳性血清复制水平的提高,JEG-3细胞内HBV复制水平有升高的趋势.结论 HBV体外可感染人绒毛膜滋养细胞株JEG-3,HBV高复制水平可能是其宫内感染的独立危险因素之一.

蛋白激酶C在人绒毛膜癌JAR细胞中作用的研究

目的:研究蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)对人绒毛膜癌JAR细胞分泌人绒毛膜促性腺激素(hCG)的影响,进一步探讨PKC在调控JAR细胞hCG分泌中的作用。方法:不同浓度的PKC激动剂phorbol 12-myristrate 13-acelate(PMA)急性和慢性刺激、PKC抑制剂chelerythrine chlorine(CHEL)分别作用JAR细胞,用ELASA法测定hCG分泌量变化,以及蛋白印迹(Western blot)法测定细胞内磷酸化丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)的改变。结果:不同浓度PMA急性刺激时,抑制JAR细胞hCG分泌,在200 nmol/L时,其抑制作用最强;不同浓度PMA慢性刺激时,JAR细胞hCG分泌量增加,在200 nmol/L时,其作用最强。CHEL作用JAR细胞时,hCG分泌量升高,在600 nmol/L时,其作用最强。对照组及各实验组都有活性的MAPK的表达,与对照组相比,PMA慢性刺激组、CHEL组MAPK磷酸化水平升高;PMA急性刺激组MAPK磷酸化水平降低。结论:PKC参与调节JAR细胞hCG的分泌,活性升高时,下调MAPK磷酸化,使JAR细胞hCG分泌减少,而活性降低时,增强MAPK磷酸化,JAR细胞hCG分泌量增加。MAPK通路激活是PKC介导的JAR细胞分泌hCG的重要机制。

分散人绒毛膜滋养层细胞及细胞培养

目的 获取人绒毛膜滋养层细胞。方法 应用胰酶 /DNA酶法进行消化后进行培养。经光镜和电镜观察。结果 我们获取了人绒毛滋养层细胞并成功培养。结论 取人妊娠 4 5～ 5 5D刮宫术后的绒毛组织 ,经胰酶。

二甲双胍对人绒毛膜癌细胞凋亡的影响

目的观察二甲双胍对人绒毛膜癌细胞凋亡的影响和可能的作用机制。方法选用人绒毛膜癌细胞系JEG-3,分为对照组和二甲双胍组(终浓度为5、10、20、40mmol/L)处理48h后,使用流式细胞术和免疫荧光检测细胞凋亡情况,分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和免疫蛋白印迹检测凋亡相关基因半胱天冬酶-3(Caspase-3)、Bcl-2和凋亡调节蛋白(Bax)的mRNA及蛋白变化趋势。结果和对照组相比,二甲双胍组的JEG-3细胞早晚期凋亡率显著上升,同时Caspase-3和Bax的mRNA及蛋白表达水平显著增加,但Bcl-2的mRNA和蛋白表达显著降低。结论二甲双胍可以通过Caspase-3及Bcl-2/Bax通路诱导JEG-3细胞发生凋亡。

促性腺激素释放激素(GnRH)对人绒毛膜上皮癌细胞系JEG-3侵润性的调节

促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)是生殖过程中起重要调节作用的激素.近年来的研究发现,Ⅰ型GnRH(GnRHⅠ)和Ⅱ型GnRH(GnRHⅡ)在胎盘和胎盘来源的滋养层细胞中发挥生理功能.利用人滋养层细胞模型人绒毛膜上皮癌细胞系(JEG-3)细胞,探讨GnRHⅠ和GnRHⅡ对人滋养层细胞侵润的调节作用.荧光实时定量PCR证实,GnRHⅠ和GnRHⅡ可调节JEG-3细胞中经典GnRH受体(GnRHRⅠ)的表达.RNA干扰实验显示,特异性针对GnRHRⅠ的siRNA可显著阻断GnRHⅠ对JEG-3细胞的促侵润作用,但不能影响GnRHⅡ的促细胞侵润功能,提示GnRHⅡ可能通过经典GnRH受体以外的其他受体介导,以发挥促进滋养层细胞侵润的功能.对信号通路的进一步研究表明,GnRHⅠ和GnRHⅡ通过ERK和JNK激酶级联促进基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达,以调节细胞的侵润.

lncRNA SNHG17靶向miR-525-5p对人绒毛膜滋养层细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨lncRNA SNHG17对人绒毛膜滋养层细胞生长及转移的影响及其可能作用机制。方法qRT-PCR检测正常胎盘组织、子痫前期胎盘组织中lncRNA SNHG17和miR-525-5p表达。体外培养人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo,分别转染si-SNHG17、anti-miR-525-5p及其阴性对照;采用平板克隆形成实验、划痕实验与Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测miR-525-5p与SNHG17的靶向关系。结果与正常胎盘组织比较,子痫前期胎盘组织中lncRNA SNHG17表达升高,miR-525-5p表达降低(P<0.05)。转染si-SNHG17后细胞克隆形成数和侵袭细胞数增多,划痕愈合率升高(P<0.05)。lncRNA SNHG17靶向调控miR-525-5p;共转染si-SNHG17和anti-miR-525-5p后细胞克隆形成数和侵袭细胞数减少,划痕愈合率降低(P<0.05)。结论沉默lncRNA SNHG17可通过促进miR-525-5p表达而促进人绒毛膜滋养层细胞增殖、迁移及侵袭。