基于PI3K/Akt信号通路探讨重楼皂苷Ⅶ对人结直肠癌细胞增殖的影响

目的:观察重楼皂苷(PP)Ⅶ对人结直肠癌HT29和LoVo细胞增殖的影响及可能机制。方法:使用梯度浓度的PPⅠ、PPⅡ、PPⅦ处理人结直肠癌HT29和LoVo细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测药物对细胞活力的影响,统计药物对应最大半抑制浓度(IC50)值;克隆形成实验检测PPⅦ干预10 d对人结直肠癌HT29和LoVo细胞克隆形成的影响;细胞增殖检测实验分析梯度浓度PPⅦ作用48 h对人结直肠癌HT29和LoVo细胞增殖的影响;通过蛋白质印迹法(Western blotting)检测HT29和LoVo细胞中磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路中内PI3K、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、Akt、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的蛋白水平变化。结果:PPⅠ、PPⅡ、PPⅦ均能降低HT29和LoVo细胞的活力,以PPⅦ效果最为显著;PPⅦ能够有效抑制HT29和LoVo细胞的克隆形成能力;PPⅦ能够抑制HT29和LoVo细胞的增殖能力。PPⅦ各剂量组可降低对应的p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平。结论:PPⅦ可能通过下调PI3K和Akt的磷酸化水平,抑制PI3K/Akt信号通路,从而抑制结直肠癌细胞的增殖。

白头翁皂苷干预糖酵解途径抑制SW480人结直肠癌细胞增殖作用研究

目的:观察白头翁皂苷抑制人结直肠癌细胞的增殖作用及对肿瘤细胞糖酵解途径的影响。方法:采用人结直肠癌细胞株SW480,通过噻唑蓝(MTT)比色法研究白头翁皂苷(1.25、2.5、5、10、20、40μg/mL)对SW480细胞增殖的抑制作用,检测1、3、9μg/mL白头翁皂苷干预后SW480的葡萄糖消耗、乳酸生成和三磷酸腺苷含量变化,评价白头翁皂苷对SW480细胞糖酵解的干预作用;采用RT-PCR技术检测SW480细胞酵解途径中关键蛋白GLUT1、HK2、LDHA、MCT4、MCT1、c-Myc、HIF-1a mRNA表达水平;采用Western blot检测糖酵解调节因子HIF-1a、c-Myc蛋白及乳酸外排蛋白MCT4的表达。结果:白头翁皂苷对SW480细胞的增殖具有抑制作用,作用强度呈浓度依赖性,其对SW480的IC50为11.69μg/mL;9μg/mL白头翁皂苷能显著降低SW480细胞葡萄糖消耗、乳酸生成和三磷酸腺苷含量,能使糖酵解关键蛋白GLUT1、HK2、MCT4、MCT1、c-Myc、HIF-1a mRNA表达显著下调,并使调节因子c-Myc、HIF-1a蛋白和乳酸转运蛋白MCT4表达显著降低。结论:白头翁皂苷能显著抑制SW480细胞增殖,降低细胞糖酵解水平,其机制与调控c-Myc、HIF-1a而干预GLUT1、HK2、MCT4、MCT1的表达相关。白头翁皂苷可能是一种潜在的肿瘤能量代谢阻断剂。

人结直肠癌细胞HCT116红色和绿色荧光标记肿瘤模型的建立

目的筛选表达绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白基因的人的单克隆结直肠癌细胞系,为体内监测肿瘤的早期生长建立一种新的肿瘤动物模型。方法以脂质体2000介导chickenβ-actin-GFP-neo和chickenβ-actin-DsRed-neo转染人结直肠癌细胞HCT-116,经梯度浓度G418筛选获得稳定表达红色和绿色荧光蛋白的细胞克隆并扩大培养。BALB/CA-nu裸鼠皮下接种1×106个发光细胞使其成瘤,活体荧光成像系统观察肿瘤的生长情况。结果获得了稳定表达GFP、DsRed的人结肠癌细胞株,将其接种到裸鼠体内可成瘤,利用活体成像系统观察了肿瘤的生长过程,肿瘤的发光随着观察时间的延长而增加。结论红色和绿色荧光蛋白能够在人结直肠癌细胞HCT-116中长期稳定表达,用红色和绿色荧光蛋白标记的人结直肠癌细胞HCT-116建立的裸鼠肿瘤模型为进一步研究结肠肿瘤和相应的药物筛选提供了一种简便、可行的新方法。

高尔基体磷酸化蛋白2对人结直肠癌细胞放射敏感性的影响

目的观察人结直肠癌细胞的放射敏感性及辐射对其高尔基磷酸化蛋白2表达的影响。方法体外培养人结直肠癌细胞株HCT116、SW480及正常结直肠细胞株FHC,检测GOLPH2基因转录及蛋白表达。选取指数生长期人结直肠癌细胞进行0、2、4、6、8、10Gy照射,计数细胞克隆形成率,制备细胞存活曲线。应用RT-PCR和Western blotting检测2种结直肠癌细胞株在不同剂量照射时GOLPH2基因mRNA转录水平及GOLPH2蛋白表达情况。应用Transwell侵袭实验观察不同照射剂量对人结直肠癌细胞株HCT116、SW480迁移能力的影响。结果随着照射剂量在一定范围内增高时,人结直肠癌细胞株HCT116、SW480克隆形成率逐渐下降,两种细胞株中GOLPH2基因mRNA转录水平及GOLPH2蛋白表达水平均逐渐下降。不同X射线照射剂量对人结直肠癌细胞株HCT116、SW480迁移有抑制作用,并且在8Gy、10Gy时对人结肠癌细胞株迁移能力抑制最明显。结论 X射线对人结直肠癌细胞株HCT116和SW480的增殖及迁移能力均有抑制作用,可降低人结直肠癌细胞株HCT116和SW480中GOLPH2基因mRNA转录水平及GOLPH2蛋白表达水平。

柴胡皂苷D通过抑制EMT和细胞干性抑制人结直肠癌细胞SW480的迁移和侵袭

目的:研究柴胡皂苷D(saikosaponin-D,SSD)对人结直肠癌细胞SW480迁移和侵袭能力的影响,并初步探讨SSD抑制细胞迁移和侵袭的机制。方法:MTT检测SSD对细胞增殖的影响。划痕实验和Transwell迁移实验研究SSD对细胞迁移能力的影响。Transwell侵袭实验研究SSD对细胞侵袭能力的影响。Western-blot检测SSD对上皮间质转化(epithelial mesenchymal transformation,EMT)相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin和Vimentin)表达的影响。克隆球形成实验研究SSD对细胞干性的影响。结果:在划痕实验和Transwell迁移实验中,SSD显著抑制SW480的迁移能力(P<0.05)。在Transwell侵袭实验中,SSD显著抑制SW480的侵袭能力(P<0.05)。SSD处理后,细胞E-cadherin的表达增高,N-cadherin和Vimentin的表达降低(P<0.05),同时SSD抑制SW480细胞克隆球的形成(P<0.05)。结论:柴胡皂苷D通过抑制EMT和细胞干性抑制人结直肠癌细胞SW480的迁移和侵袭。

柴胡皂苷D通过诱导自噬抑制人结直肠癌细胞SW480增殖的实验研究

目的:研究柴胡皂苷D(saikosaponin-D,SSD)对人结直肠癌细胞SW480自噬的影响,并探讨诱导的自噬对细胞增殖的影响。方法:Western-blot检测SSD对自噬相关蛋白LC3A/B和p62表达的影响,LC3翻转实验和GFP-RFP-LC3荧光实验验证自噬流的发生。Western-blot检测3-MA对SSD所诱导自噬的抑制作用,MTT和细胞计数实验研究3-MA抑制自噬后SSD对SW480细胞增殖的影响。结果:SSD能够诱导SW480细胞发生自噬,表现在LC3A/B II及LC3A/B II/I比值的增高、自噬经典底物蛋白p62的减少、LC3翻转试验阳性以及LC3荧光实验中黄色和红色荧光颗粒的增多(P<0.05)。自噬抑制剂3-MA能够抑制SSD所诱导自噬的发生(P<0.05),且3-MA抑制自噬后,SSD对SW480的增殖抑制效应减弱(P<0.05),提示SSD诱导的自噬对细胞的增殖起抑制作用。结论:SSD通过诱导自噬抑制人结直肠癌细胞SW480的增殖。

细胞穿透肽YARA介导增强型绿色荧光蛋白转导入人结直肠癌细胞的实验研究

目的构建原核表达载体pET15b-YARA-EGFP,表达并纯化出融合蛋白YARA-EGFP,观察其穿透人结直肠癌细胞的情况。方法用分子克隆技术构建出表达型载体pET15b-YARA-EGFP,在E.coli BL21(DE3)中表达融合蛋白YARA-EGFP,将鉴定和纯化后的融合蛋白加入体外培养的人结直肠癌细胞。结果得到纯化的融合蛋白YARA-EGFP,能高效地转导入体外培养的人结直肠癌细胞,并表现出剂量和时间依赖性,MTT法检测在其高浓度时仍对细胞无毒性。结论 YARA-EGFP融合蛋白能高效地转导入体外培养的人结直肠癌细胞。

藏红花素抑制音猬因子信号通路对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 探究藏红花素抑制音猬因子(Shh)信号通路对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响。方法 2021年1月至2022年7月体外培养人结直肠癌细胞SW620,使用不同浓度(5、10、20、40、60、80 mg/L)的藏红花素处理SW620细胞24 h后,CCK-8法检测藏红花素对SW620细胞的细胞毒性作用。将SW620细胞分别用不同剂量藏红花素(10、20、40 mg/L,藏红花素L/M/H组)、40 mg/L藏红花素+1μmol/L Purmorphamine(藏红花素H+Shh通路激活剂组)、1μmol/L Purmorphamine(Shh通路激活剂组)处理,另设置未经处理的对照(Control)组,检测SW620细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力以及Shh信号通路相关蛋白Shh、平滑蛋白(Smo)、神经胶质瘤相关癌基因-1(Gli-1)表达。结果 藏红花素以剂量依赖性方式降低SW620细胞活力。与对照组相比,Shh通路激活剂组SW620细胞活力升高,克隆形成数、划痕面积愈合率、侵袭数、Shh(1.47±0.09比1.27±0.08)、Smo(1.38±0.12比1.15±0.09)、Gli-1(1.25±0.09比0.98±0.07)蛋白表达增加,细胞凋亡率减少(P<0.05),藏红花素L组、藏红花素M组、藏红花素H组SW620细胞活力下降,克隆形成数、划痕面积愈合率、侵袭数减少,凋亡率增加,Shh(1.07±0.12、0.85±0.11、0.52±0.08比1.32±0.14)、Smo(0.96±0.11、0.72±0.08、0.43±0.06比1.19±0.12)、Gli-1(0.76±0.09、0.61±0.09、0.37±0.06比0.96±0.11)蛋白表达减少(P<0.05);与藏红花素H组相比,藏红花素H+Shh通路激活剂组SW620细胞活力升高,克隆形成数、划痕面积愈合率、侵袭数增加,凋亡率减少,Shh(0.84±0.08比0.52±0.08)、Smo(0.81±0.09比0.43±0.06)、Gli-1(0.70±0.08比0.37±0.06)蛋白表达增加(P<0.05)。结论 藏红花素可抑制SW620细胞增殖、迁移和侵袭,促进其凋亡,可能与抑制Shh信号通路有关。

SOX7靶向ERK1/2/PD-L1通路抑制结直肠癌血管生成

目的探讨性别决定区Y框蛋白7(SOX7)对结直肠癌血管生成的影响及潜在作用机制。方法应用免疫荧光检测结直肠癌患者组织样本中SOX7表达水平,之后通过裸鼠、转染SOX7 mimic的人结直肠癌细胞系SW480细胞和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)共培养进一步研究。用Western-blot验证SOX7与ERK1/2/PD-L1对结直肠癌细胞的相关蛋白表达的影响。用CCK8检测SOX7与ERK1/2/PD-L1对HUVEC增殖的影响。通过体外内皮细胞成管实验测定SOX7与ERK1/2/PD-L1对肿瘤血管生成的影响。结果SOX7在人结直肠癌组织中表达被抑制(P<0.01),同时SOX7的过表达抑制了小鼠体内肿瘤生长(P<0.01)。SW480细胞中SOX7的过表达抑制了ERK1/2、c-Jun的表达,并在ERK1/2的激动剂Senkyunolide I的作用下上调了SW480细胞的ERK1/2、c-Jun蛋白表达(P<0.01),逆转了SOX7对SW480细胞中ERK1/2、c-Jun蛋白表达的影响(P<0.01)。HUVEC中SOX7抑制了PD-L1、V-EGFR2、p-PI3K、HIF-1α的蛋白表达,Senkyunolide I上调了HUVEC的PD-L1、V-EGFR2、p-PI3K、HIF-1α的蛋白表达,并逆转了SOX7对HUVEC中上述相关蛋白表达的影响(P<0.01)。PD-1/PD-L1 Inhibitor 3抑制了PD-L1、V-EGFR2、p-PI3K、HIF-1α的蛋白表达,SOX7过表达在PD-1/PD-L1 Inhibitor 3的影响下并没有表现出抑制作用。CCK8实验结果显示SOX7过表达显著抑制了HUVEC的增殖能力,Senkyunolide I作用下的两组HUVEC增殖能力较SOX7 NC组与SOX7 mimic组明显上升,PD-1/PD-L1 Inhibitor 3作用下的两组HUVEC增殖能力较SOX7 NC组与SOX7 mimic组明显下降,以上均有明显统计学差异(P<0.01)。成管实验结果显示SOX7过表达抑制了HUVEC的血管生成,Senkyunolide I强烈加速了血管生成,而PD-1/PD-L1 Inhibitor 3血管生成则被显著抑制,以上均有明显统计学差异(P<0.01)。结论SOX7通过ERK1/2/PD-L1通路抑制结直肠肿瘤的增殖和血管生成,SOX7可能是晚期CRC患者临床治疗中潜在的抗血管生成靶点。

FOXC2与上皮型钙黏蛋白对老年结直肠癌患者临床预后及细胞活性的影响

目的探讨叉头框蛋白(FOX)C2与上皮型钙黏蛋白对老年结直肠癌患者临床预后及细胞活性的影响。方法收集84例老年结直肠癌患者,留取手术切除的肿瘤病灶组织和癌旁正常组织,免疫组化法检测FOXC2与上皮型钙黏蛋白阳性表达情况。收集患者人口学特征和病理指标,术后进行3年随访,收集生存情况;术前采集患者空腹外周静脉血,检测血清FOXC2与上皮型钙黏蛋白浓度。使用脂质体转染人结直肠癌细胞HCT116,分为空白对照组、阴性对照组、FOXC2低表达组。CCK-8检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western印迹检测细胞中FOXC2、上皮型钙黏蛋白、基质金属蛋白酶表达。结果结直肠癌组织中FOXC2阳性率明显高于癌旁正常组织,上皮型钙黏蛋白阳性率明显低于癌旁正常组织(P<0.01)。TNM分期Ⅲ-Ⅳ期、有淋巴结转移、浸润深度T3-T4的结直肠癌患者FOXC2阳性率明显升高,上皮型钙黏蛋白阳性率明显降低。随访3年期间,84例老年结直肠癌患者生存65例(77.38%);死亡组血清FOXC2浓度明显高于生存组,上皮型钙黏蛋白浓度明显低于生存组(P<0.01)。血清FOXC2、上皮型钙黏蛋白检测对老年结直肠癌患者临床预后具有较高的评估价值,联合检测的评估价值最高〔曲线下面积(AUC)=0.939〕。FOXC2低表达组结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭水平均明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.01)。FOXC2低表达组结直肠癌细胞中上皮型钙黏蛋白表达水平明显高于阴性对照组和空白对照组,基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.01)。结论结直肠癌组织和血清中FOXC2高表达,上皮型钙黏蛋白低表达,联合检测可用于评估老年结直肠癌患者的预后;FOXC2可能通过作用于上皮型钙黏蛋白、基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9参与结直肠癌细胞的迁移和侵袭过程。

LINC01224靶向miR-485-5p调节PAK4表达影响结直肠癌术后复发的研究

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)LINC01224靶向miR-485-5p调节p21激活激酶4(PAK4)的表达,继而影响结直肠癌(CRC)患者术后复发的分子机制。方法选取2019年1月至2022年1月承德市中心医院病理科归档的病历资料完整的96例患者的CRC组织,其中54例未复发患者设为未复发组,42例局部复发、转移患者设为复发组。采用实时荧光定量PCR法检测2组CRC组织中LINC01224、miR-485-5p和PAK4的表达水平。将人CRC细胞CACO-2和HCT116各分为3组,分别制备2种细胞的对照组(为正常培养细胞)、NC组(为转染阴性组,转染NC-siRNA慢病毒质粒)和LINC01224下调组(转染LINC01224-siRNA慢病毒质粒)。采用CCK-8法、细胞划痕实验和Transwell实验分别检测各组细胞的增殖、迁移和侵袭能力,荧光素酶报告实验鉴定LINC01224与miR-485-5p、miR-485-5p与PAK4的靶向关系,蛋白质印迹法检测PAK4蛋白的表达水平。结果与未复发组患者相比,复发组患者CRC组织中LINC01224和PAK4表达水平均显著升高,miR-485-5p表达水平显著降低(P均<0.01)。与NC组和对照组细胞相比,LINC01224下调组细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著减弱(P<0.05,P<0.01,P<0.01),而NC组与对照组细胞的差异均无统计学意义(P均>0.05)。荧光素酶报告实验结果显示,LINC01224与miR-485-5p、miR-485-5p与PAK4均存在靶向关系。LINC01224下调组细胞的PAK4蛋白表达水平较NC组和对照组均显著降低(P均<0.01)。结论下调LINC01224的表达可以抑制CRC细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能是LINC01224靶向miR485-5p调节PAK4的表达,从而影响CRC术后复发。

七氟醚通过上调miR-34a抑制结直肠癌细胞的迁移和侵袭的机制研究

目的研究七氟醚对人结直肠癌HCT116细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其分子机制.方法以细胞计数法(CCK-8)检测七氟醚对HCT116细胞增殖能力的影响;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中miR-34a表达水平, Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,蛋白免疫吸附法(Western blot)检测细胞中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloprotease,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平.结果通过CCK-8实验筛选出七氟醚的作用浓度为4%.以4%七氟醚处理HCT116细胞4h后miR-34a表达水平升高了79%.转染miR-34a inhibitor后,细胞中miR-34a的表达水平下降了81%.七氟醚干预后迁移细胞数由(97.75±16.10)降低到(36.60±8.58),侵袭细胞数由(64.22±6.25)降低到(26.48±3.10),MMP-2蛋白表达水平由(0.68±0.11)下调到(0.24±0.04), MMP-9蛋白表达水平由(0.48±0.07)下调到(0.13±0.02);而抑制miR-34a的表达后,迁移细胞数由(40.15±9.02)提高到(88.65±12.74),侵袭细胞数由(26.12±3.02)提高到(59.24±4.68),MMP-2蛋白表达水平由(0.22±0.03)上调到(0.61±0.09),M M P-9蛋白表达水平由(0.14±0.03)上调到(0.43±0.06).结论七氟醚通过上调miR-34a的表达抑制人结直肠癌HCT116细胞的迁移和侵袭,可能与下调MMP-2和MMP-9蛋白表达有关.

十味有毒中药对人结直肠癌HCT116细胞株的作用研究

目的:研究大肠癌HCT116细胞对10味有毒中药的敏感性。方法:采用MTT法测定药物对细胞增殖的抑制率。结果:中华蟾酥注射液、斑蟊酸钠注射液、亚砷酸氯化钠注射液及藤黄对大肠癌HCT116细胞的增殖有抑制作用,且随着药物浓度的增加抑制效果明显增强,有明显的量效关系;黄药子、龙葵、重楼、白花蛇舌草、天南星、雷公藤在相同浓度下未表现出抑制作用。斑蝥酸钠及藤黄IC50优于亚砷酸氯化钠(P<0.05),华蟾素注射液由于采用的原药未提供原液浓度,未能得出具体的IC50值。结论:通过实验筛选证明华蟾酥注射液、斑蟊酸钠注射液、亚砷酸氯化钠注射液及藤黄可抑制HCT116细胞增殖,为进一步的体内动物研究提供实验数据,其机制还待进一步研究。

姜烯酚6衍生物M14通过调控Keap1/Nrf2信号通路诱导人结直肠癌HCT-8细胞凋亡

目的探讨姜烯酚6衍生物M14(S6-M14)诱导人结直肠癌HCT-8细胞凋亡的作用及可能的分子机制。方法MTT法检测不同浓度的姜烯酚6衍生物M14对人结直肠癌HCT-8细胞增殖的影响;ATP显色法检测姜烯酚6衍生物M14促进人结直肠癌HCT-8细胞凋亡的剂量依赖效应;Western blot检测胞质内Keap1和Nrf2蛋白及核内Nrf2蛋白的表达。结果0.25、0.5、1、2、4 mmol·L^(-1)S6-M14均可抑制人结直肠癌HCT-8细胞的增殖(P均<0.001);姜烯酚6衍生物M14剂量依赖性地诱导人结直肠癌HCT-8细胞凋亡;姜烯酚6衍生物M14下调人结直肠癌HCT-8细胞胞质内Keap1和Nrf2蛋白表达,促进Nrf2蛋白的核易位(P均<0.05)。结论姜烯酚6衍生物M14抑制人结直肠癌HCT-8细胞增殖、诱导细胞凋亡,调控Keap1/Nrf2信号通路,有潜在的预防结直肠癌发生的作用。

基于ATM/CHK2/p53信号通路探究下调XRCC6对结直肠癌细胞的影响

目的探究下调XRCC6对人结直肠癌细胞凋亡、侵袭的影响及其与ATM/CHK1/p53信号通路的相关性。方法将人结直肠癌细胞SW620分为对照组、si⁃NC组和si⁃XRCC6组。MTT法检测各组细胞活力;流式细胞法检测各组细胞凋亡水平;细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力;Transwell检测各组细胞侵袭能力;定量聚合酶链反应(qPCR)检测ATM、CHK2、p53的转录水平;免疫印迹(Westernblot)检测ATM、CHK2、p53的蛋白表达和磷酸化(p⁃ATM、p⁃CHK2、p⁃p53)水平。结果MTT实验结果表明,与对照组和si⁃NC组相比,si⁃XRCC6组细胞活力显著降低(P<0.05);流式细胞实验结果表明,与对照组和si⁃NC组相比,si⁃XRCC6组细胞存活比例降低(P<0.01),早期凋亡比例增加(P<0.01),晚期凋亡细胞比例显著增加(P<0.01),si⁃NC组和si⁃XRCC6组差异无统计学意义(P>0.05);细胞划痕及Transwell实验结果表明,与对照组和si⁃NC组相比,si⁃XRCC6组细胞迁移能力降低(P<0.01),侵袭能力降低(P<0.01)。qPCR及Westernblot结果表明,与对照组和si⁃NC组相比,si⁃XRCC6组细胞ATM、CHK2、p53的转录和蛋白表达水平有上升的趋势,其磷酸化蛋白p⁃ATM、p⁃CHK2、p⁃p53表达水平也具有上升的趋势。结论下调XRCC6可以抑制人结直肠癌细胞活性,诱导细胞早期凋亡,其机制可能与ATM、CHK2、p53信号通路的调控及其磷酸化水平的调控相关。

鬼臼苦素对人结直肠癌HCT-15细胞增殖的影响

目的:研究鬼臼苦素对人结直肠癌细胞HCT-15增殖的影响。方法:体外培养人结直肠癌HCT-15细胞,采用CCK-8法检测不同浓度鬼臼苦素作用HCT-15细胞24h、48h、72h后的增殖活性,并在倒置显微镜下观察HCT-15细胞形态的变化。结果:CCK8法结果显示鬼臼苦素能显著抑制HCT-15细胞的增殖活性,鬼臼苦素浓度在0.125μmol/L～2μmol/L范围内,随着鬼臼苦素浓度的增加和作用时间的延长,HCT-15细胞的抑制率逐渐增加,呈剂量-时间依赖性。倒置显微镜下观察发现,鬼臼苦素作用后HCT-15细胞不同程度皱缩、折光性降低、活细胞数明显减少。结论:鬼臼苦素对人结直肠癌HCT-15细胞具有明显的抑制作用。

蟾毒灵通过JAK2/STAT3信号通路抑制结直肠癌细胞的作用

目的探索蟾毒灵通过Janus激酶2(JAK2)/信号转导子和转录激活子3(STAT3)通路抑制结直肠癌增殖、迁移和侵袭的机制研究。方法将人结直肠癌HT29细胞随机分为对照组和低、中、高剂量实验组;对照组细胞不做处理,低、中、高剂量实验组细胞分别给予2.5、5.0、10.0μmol·L^(-1)的蟾毒灵处理48 h。用FLAG STAT3慢病毒感染HT29细胞后,细胞分为慢病毒感染组、高剂量实验+慢病毒感染(10.0μmol·L^(-1))组。用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞存活率;用克隆实验验证细胞增殖率;用Transwell实验验证蟾毒灵作用后细胞的迁移能力;用蛋白质印迹(Western blot)法检测慢病毒转染效率以及细胞相关蛋白表达情况。结果药物作用48 h后,对照组和低、中、高剂量实验组细胞数分别为(1003.25±255.53)、(698.00±152.25)、(562.13±31.56)和(449.50±82.40)个,侵袭细胞数分别为(932.00±188.84)、(742.22±108.64)、(514.67±124.82)和(343.56±86.42)个,p-JAK2蛋白相对表达水平分别为1.37±0.27、0.97±0.06、0.74±0.06和0.39±0.12;对照组、高剂量实验组、慢病毒感染组、高剂量实验+慢病毒感染组细胞数分别为(906.88±211.71)、(389.00±143.08)、(1279.38±210.34)和(604.75±12.52)个,侵袭细胞分别为(671.22±44.74)、(246.11±28.16)、(1080.78±119.13)和(574.78±16.23)个。中、高剂量实验组的细胞增殖数量、细胞侵袭数量和p-JAK2蛋白相对水平与对照组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05);高剂量实验组、慢病毒感染组、高剂量实验+慢病毒感染组细胞增殖数量、细胞侵袭数量与对照组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论蟾毒灵可通过激活JAK2/STAT3信号通路抑制结直肠癌增殖、迁移和侵袭。

mTOR信号通路介导黄芩苷抑制人结肠癌细胞的增殖

目的探讨黄芩苷抑制人结肠癌细胞(HCT116)增殖的分子机制。方法采用MTT比色法检测不同浓度的黄芩苷(0.01～100μg/ml)对体外培养的HCT116细胞增殖的抑制作用;采用Western blot分析检测被黄芩苷干预的HCT 116细胞的增殖相关蛋白的表达。结果与对照组比较,浓度为1～100μg/ml的黄芩苷处理组明显抑制HCT 116细胞的增殖(P<0.05)。用100μg/ml黄芩苷处理后,增殖相关的蛋白mTOR、p70S6K、S6、eIF4E表达明显下调(P<0.05),4E-BP1表达明显上调。p-mTOR(Ser2448)、p-S6(Ser235/236)、p-4E-BP1(Thr37/46)的磷酸化水平下降(P<0.05)。结论黄芩苷能通过抑制mTOR信号通路来抑制人结直肠癌HCT116细胞的增殖。

Glut1基因沉默对人结肠癌HT-29细胞株增殖、分化及凋亡的影响及机制研究

目的探究葡萄糖转运蛋白1(Glut 1)基因沉默对人结直肠癌HT-29细胞增殖、分化及凋亡的影响及机制。方法将Glut 1干扰序列(siRNA)转染至人结肠癌HT-29细胞作为shGlut 1组,非干扰序列转至HT-29细胞作为NC组,HT-29细胞作为Blank组,癌旁正常组织细胞作为Control组,应用qRT-PCR法和Western blot法检测各组细胞中Glut 1、TGF-β1、PI3K、AKT、PTEN、mTOR mRNA和相应蛋白的表达水平,并检测Bcl-2/Bax比值,p-PI3K、p-S 473-AKT、p-S 389-S6K1、p-T 70-4 EBP1、Cleaved Caspase-3、Cleaved-PARP蛋白的表达;MTT法检测各组细胞增殖能力变化,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况,克隆形成实验检测肿瘤细胞体外增殖成瘤能力。结果免疫荧光结果表明shGlut 1组转染效率较高,符合实验标准;与Control组比较,结肠癌组织中Glut 1、TGF-β1、PI3K、AKT、mTOR、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达上调,而PTEN、Bax的mRNA和蛋白的表达下调,p-PI3K、p-S 473-AKT、p-S 389-S6K1和p-T 70-4 EBP1蛋白表达上调,Cleaved Caspase-3、Cleaved-PARP蛋白表达下调(P均<0.05);与Blank组和NC组比较,shGlut 1组Glut 1、TGF-β1、PI3K、AKT、mTORC 1、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达下调,PTEN、Bax mRNA和蛋白的表达上调,p-PI3K、p-S 473-AKT、p-S 389-S6K1和p-T 70-4 EBP1表达下调,Cleaved Caspase-3、Cleaved-PARP蛋白的表达上调,增殖率下调,G0/G1期较多而S期较少,凋亡率上调,克隆形成细细胞生长较慢(P均<0.05)。结论Glut 1基因沉默能抑制结直肠癌细胞的增殖与分化,促进其凋亡,考虑为抑制TGF-β/PI3K-AKT-mTOR信号通路。

奥曲肽联合5-FU对体外培养的大肠癌细胞增殖及突变型p53蛋白表达的影响

目的:通过生长抑素类似物奥曲肽(OCT)联合5-FU对体外培养的大肠癌细胞作用及对p53蛋白的影响为大肠癌的临床治疗提供一定的理论依据。方法:采用结肠癌细胞原代培养,采用MTT比色分析法测定奥曲肽与5-FU联合是否抑制作用增强;流式细胞仪间接免疫荧光技术检测药物作用后的肿瘤细胞突变型p53蛋白表达情况。结果:5-FU和奥曲肽联合应用对大肠癌的抑制率高于单独应用。5-FU和1.0μg/mlOCT组均抑制突变型p53蛋白的表达,联合用药组更为明显。结论:奥曲肽和5-FU都能抑制肿瘤细胞的突变型p53蛋白的表达,且联合应用抑制作用强于两者的单独应用,这可能是奥曲肽能增强5-FU对结肠癌细胞抑制作用的机制之一。