TPARM对人结直肠癌细胞株SW480增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响

目的 探讨四肽重复结构域(TTC)12,也被称为TPARM,其表达对人结肠癌细胞SW480增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法 将人结肠癌SW480细胞株分为3组:NC组、TPARM-siRNA组和Scr-siRNA组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法和Western印迹法检测各组TPARM mRNA和蛋白表达。细胞计数试剂盒(CCK)8法、平板克隆法测定各组TPARM表达对SW480细胞增殖的影响。Western印迹法检测TPARM表达对各组周期相关蛋白及凋亡相关蛋白的表达。流式细胞术检测各组TPARM表达对SW480细胞凋亡的影响。Transwell小室侵袭实验和划痕实验观察TPARM表达对SW480细胞侵袭、迁移能力的影响。结果 与NC组、Scr-siRNA组比较,转染TPARM-siRNA后,SW480细胞中TPARM mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。分别与NC组和Scr-siRNA组比较,TPARM-siRNA转染组SW480细胞增殖明显减少(P<0.05),周期蛋白依赖性激酶(CDK)2、CDK4、CDK6的蛋白表达明显下降(P<0.05);SW480细胞凋亡水平明显增加(P<0.05),髓细胞白血病序列(Mcl)-1、B淋巴细胞瘤(Bcl)-xl及Bcl-2的蛋白表达水平明显下降,Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达明显升高(P<0.05);SW480细胞的侵袭和迁移能力被抑制。结论 TPARM可能通过使结直肠癌细胞增殖增加和凋亡减少及促进结肠癌细胞的侵袭和迁移能力,从而在结直肠癌发生发展中发挥作用。

低密度脂蛋白受体相关蛋白11在结直肠癌组织中的表达及其对SW480细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白11(LRP11)在结直肠癌(CRC)组织中的表达及其对结肠癌SW480细胞增殖与凋亡的影响。方法:利用生物信息学方法分析TCGA数据库中LRP11在CRC组织中的表达水平。用慢病毒感染技术分别将sh-LRP11及sh-NC质粒转染至SW480细胞,采用qPCR、WB法检测感染后各组细胞中LRP11的mRNA和蛋白的表达,CCK-8法、流式细胞术分别检测细胞的增殖活力、凋亡率及细胞周期分布情况,WB法检测SW480细胞中cyclin D1、BAX、Bcl-2、β-catenin、活化β-catenin等蛋白的表达水平。结果:TCGA数据库数据分析显示,LRP11 mRNA在CRC组织中的表达水平显著高于正常组织(P<0.05)。与sh-NC组比较,sh-LRP11组SW480细胞的增殖活力明显降低、细胞凋亡率显著升高(均P<0.01),细胞中BAX表达显著升高、Bcl-2表达显著降低(均P<0.01);G0/G1期细胞增多、S期细胞明显减少(均P<0.01),cyclin D1的蛋白表达显著降低(P<0.01);Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin和活化β-catenin的蛋白表达均显著下降(均P<0.01)。结论:LRP11 mRNA在CRC组织中呈高表达,干扰LRP11表达可抑制结肠癌SW480细胞增殖并促进其凋亡,为CRC提供了一种潜在的治疗靶点。

藏红花素抑制音猬因子信号通路对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 探究藏红花素抑制音猬因子(Shh)信号通路对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响。方法 2021年1月至2022年7月体外培养人结直肠癌细胞SW620,使用不同浓度(5、10、20、40、60、80 mg/L)的藏红花素处理SW620细胞24 h后,CCK-8法检测藏红花素对SW620细胞的细胞毒性作用。将SW620细胞分别用不同剂量藏红花素(10、20、40 mg/L,藏红花素L/M/H组)、40 mg/L藏红花素+1μmol/L Purmorphamine(藏红花素H+Shh通路激活剂组)、1μmol/L Purmorphamine(Shh通路激活剂组)处理,另设置未经处理的对照(Control)组,检测SW620细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力以及Shh信号通路相关蛋白Shh、平滑蛋白(Smo)、神经胶质瘤相关癌基因-1(Gli-1)表达。结果 藏红花素以剂量依赖性方式降低SW620细胞活力。与对照组相比,Shh通路激活剂组SW620细胞活力升高,克隆形成数、划痕面积愈合率、侵袭数、Shh(1.47±0.09比1.27±0.08)、Smo(1.38±0.12比1.15±0.09)、Gli-1(1.25±0.09比0.98±0.07)蛋白表达增加,细胞凋亡率减少(P<0.05),藏红花素L组、藏红花素M组、藏红花素H组SW620细胞活力下降,克隆形成数、划痕面积愈合率、侵袭数减少,凋亡率增加,Shh(1.07±0.12、0.85±0.11、0.52±0.08比1.32±0.14)、Smo(0.96±0.11、0.72±0.08、0.43±0.06比1.19±0.12)、Gli-1(0.76±0.09、0.61±0.09、0.37±0.06比0.96±0.11)蛋白表达减少(P<0.05);与藏红花素H组相比,藏红花素H+Shh通路激活剂组SW620细胞活力升高,克隆形成数、划痕面积愈合率、侵袭数增加,凋亡率减少,Shh(0.84±0.08比0.52±0.08)、Smo(0.81±0.09比0.43±0.06)、Gli-1(0.70±0.08比0.37±0.06)蛋白表达增加(P<0.05)。结论 藏红花素可抑制SW620细胞增殖、迁移和侵袭,促进其凋亡,可能与抑制Shh信号通路有关。

山慈菇提取物对人结直肠癌SW480细胞迁移和侵袭能力的影响及其分子机制

目的探讨山慈菇提取物对人结直肠癌SW480细胞迁移和侵袭能力的影响及其分子机制。方法选择人结直肠癌SW480细胞株,分为空白对照组,不同浓度山慈菇组(200 mg·L^(-1)、400 mg·L^(-1)),5-Fu组(10μmol·L^(-1)),分别进行划痕实验、细胞增殖抑制实验、细胞迁移与侵袭实验。同时,通过细胞转染技术沉默SW480细胞中的AEG-1基因,采用Western blotting检测AEG-1基因沉默对SW480细胞AEG-1、E-cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白表达的影响,并观察不同浓度山慈菇组各蛋白表达的变化。结果不同浓度山慈菇组和5-Fu组SW480细胞的划痕愈合率、细胞迁移率及侵袭率均较空白对照组明显下降,而细胞生长增殖抑制率较空白对照组明显升高(P<0.05);山慈菇提取物具有与5-Fu相似的抑制结直肠癌细胞增殖和侵袭的效果,且与SW480细胞的迁移与侵袭率呈浓度依赖性,与细胞增殖抑制率呈浓度、时间依赖性;不同浓度山慈菇组和5-Fu组SW480细胞中AEG-1、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平均显著降低,E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论山慈菇提取物可能通过抑制AEG-1蛋白表达来上调E-cadherin蛋白表达,下调MMP-2、MMP-9蛋白表达,从而抑制人结直肠癌SW480细胞的迁移与侵袭。

METTL3修饰的RNASEH1-AS1通过BUD13/ANXA2/Wnt/β-catenin轴调控结直肠癌SW480细胞的恶性生物学行为

目的:探究甲基转移酶样蛋白3(METTL3)修饰的RNASEH1-AS1通过BUD13/膜联蛋白A2/Wnt/β-连环蛋白(BUD13/ANXA2/Wnt/β-catenin)轴调控结直肠癌细胞SW480恶性生物学行为的分子机制。方法:选取2022年6月至2022年11月间在复旦大学附属中山医院厦门医院手术治疗的24例CRC患者,收集患者的CRC组织和对应的癌旁组织,用qPCR法检测其中METTL3、RNASEH1-AS1、BUD13、ANXA2、β-catenin、GSK-3β mRNA的表达,用Pearson法分析CRC组织中RNASEH1-AS1表达分别与METTL3和BUD13表达的相关性。常规培养结直肠癌细胞SW480,分为sh-NC组、sh-RNASEH1-AS1组、NC组、sh-METTL组、si-NC组、si-BUD13组、sh-RNASEH1-AS1+pc-NC组、sh-RNASEH1-AS1+pc-ANXA2组、sh-METTL+pc-NC组、sh-METTL+pc-ASEH1-AS1组,用Lipofectamine?2000转染试剂将sh-NC、sh-RNASEH1-AS1、sh-NC、sh-METTL、si-NC、si-BUD13、sh-RNASEH1-AS1+pc-NC、sh-RNASEH1-AS1+pc-ANXA2、sh-METTL+pc-NC、sh-METTL+pc-ASEH1-AS1分别转染SW480细胞,用qPCR法检测后SW480细胞中METTL3、RNASEH1-AS1、BUD13、ANXA2的表达,细胞克隆形成实验检测转染后各组SW480细胞的增殖能力,FCM术检测转染后各组SW480细胞的凋亡情况,细胞划痕实验检测转染后各组SW480细胞的迁移能力,WB法检测转染后各组SW480细胞中ANXA2、β-catenin、p-β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β、c-Myc、cyclinD1蛋白表达,RNA免疫沉淀(RIP)法检测RNASEH1-AS1与BUD1、BUD1与ANXA2的靶向关系。结果:数据库CRC数据分析和中国人CRC组织和癌旁组织的qPCR法检测结果均显示,与癌旁组织相比CRC组织中METTL3、RNASEH1-AS1、BUD13、ANXA2、β-catenin、GSK-3β均呈明显高表达(均P<0.01),且RNASEH1-AS1表达与METTL3(r=0.698,P<0.01)、BUD13(r=0.784,P<0.01)的表达呈正相关。在结直肠癌各细胞中METTL3、RNASEH1-AS1、BUD13、ANXA2 mRNA均呈高表达(均P<0.05);敲减RNASEH1-AS1或METTL3后SW480细胞中RNASEH1-AS1、BUD13、ANXA2表达显著降低(均P<0.05),而过表达RNASEH1-AS1后上述分子表达明显上调(均P<0.05);敲减RNASEH1-AS1或METTL3可抑制SW480的增殖、迁移和p-β-catenin、p-GSK-3β、c-Myc、cyclinD1蛋白的表达,促进其凋亡(均P<0.05),而过表达RNASEH1-AS1则可促进SW480增殖、迁移和p-β-catenin、p-GSK-3β、c-Myc、cyclinD1蛋白的表达和抑制其凋亡(均P<0.05);RNASEH1-AS1通过招募BUD13靶向促进ANXA2的表达(均P<0.05);过表达ANXA2可部分逆转敲减RNASEH1-AS1对SW480细胞的影响(均P<0.05)。结论:METTL3修饰的RNASEH1-AS1通过BUD13/ANXA2/Wnt/β-catenin轴调控SW480细胞的恶性生物学行为。

CDK7抑制剂THZ1对人结直肠癌SW480细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的探究细胞周期蛋白依赖性激酶7(Cyclin-Dependent Kinase 7,CDK7)抑制剂THZ1(CDK7共价抑制剂)对人结直肠癌SW480细胞增殖、迁移及凋亡的影响。方法通过体外培养人结直肠癌细胞系SW480细胞,CCK8法测定细胞增殖活力以筛选THZ1对SW480细胞的作用浓度。将SW480细胞分为对照组(加入相应体积的DMSO)、低、中、高浓度组(处理后THZ1药物浓度为20、80、160 nmol/L)。平板克隆实验法检测细胞克隆能力测定THZ1对SW480细胞克隆形成的影响;划痕实验分别测定THZ1对SW480细胞迁移能力的影响,TUNEL法检测细胞凋亡情况;蛋白质印迹法检测CDK-7、p-CDK7、Bax、Bcl-2、Mcl-1、Parp蛋白表达水平。结果SW480细胞增殖抑制率在药物浓度大于80 nmol/L时显著升高(P<0.05),低、中、高浓度组SW480细胞克隆能力低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),低浓度组的划痕愈合率低于对照组,中浓度组的划痕愈合率低于对照组,高浓度组的划痕愈合率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),低、中、高浓度组的凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),高浓度组CDK-7、p-CDK7、Bcl-2、Mcl-1蛋白表达水平低于对照组,高浓度组Bax、Parp蛋白表达水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。说明THZ1可促进SW480细胞凋亡,抑制其增殖和迁移。结论CDK7抑制剂THZ1可以抑制人结直肠癌SW480细胞增殖和迁移能力,并诱导细胞凋亡。

SOX7靶向ERK1/2/PD-L1通路抑制结直肠癌血管生成

目的探讨性别决定区Y框蛋白7(SOX7)对结直肠癌血管生成的影响及潜在作用机制。方法应用免疫荧光检测结直肠癌患者组织样本中SOX7表达水平,之后通过裸鼠、转染SOX7 mimic的人结直肠癌细胞系SW480细胞和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)共培养进一步研究。用Western-blot验证SOX7与ERK1/2/PD-L1对结直肠癌细胞的相关蛋白表达的影响。用CCK8检测SOX7与ERK1/2/PD-L1对HUVEC增殖的影响。通过体外内皮细胞成管实验测定SOX7与ERK1/2/PD-L1对肿瘤血管生成的影响。结果SOX7在人结直肠癌组织中表达被抑制(P<0.01),同时SOX7的过表达抑制了小鼠体内肿瘤生长(P<0.01)。SW480细胞中SOX7的过表达抑制了ERK1/2、c-Jun的表达,并在ERK1/2的激动剂Senkyunolide I的作用下上调了SW480细胞的ERK1/2、c-Jun蛋白表达(P<0.01),逆转了SOX7对SW480细胞中ERK1/2、c-Jun蛋白表达的影响(P<0.01)。HUVEC中SOX7抑制了PD-L1、V-EGFR2、p-PI3K、HIF-1α的蛋白表达,Senkyunolide I上调了HUVEC的PD-L1、V-EGFR2、p-PI3K、HIF-1α的蛋白表达,并逆转了SOX7对HUVEC中上述相关蛋白表达的影响(P<0.01)。PD-1/PD-L1 Inhibitor 3抑制了PD-L1、V-EGFR2、p-PI3K、HIF-1α的蛋白表达,SOX7过表达在PD-1/PD-L1 Inhibitor 3的影响下并没有表现出抑制作用。CCK8实验结果显示SOX7过表达显著抑制了HUVEC的增殖能力,Senkyunolide I作用下的两组HUVEC增殖能力较SOX7 NC组与SOX7 mimic组明显上升,PD-1/PD-L1 Inhibitor 3作用下的两组HUVEC增殖能力较SOX7 NC组与SOX7 mimic组明显下降,以上均有明显统计学差异(P<0.01)。成管实验结果显示SOX7过表达抑制了HUVEC的血管生成,Senkyunolide I强烈加速了血管生成,而PD-1/PD-L1 Inhibitor 3血管生成则被显著抑制,以上均有明显统计学差异(P<0.01)。结论SOX7通过ERK1/2/PD-L1通路抑制结直肠肿瘤的增殖和血管生成,SOX7可能是晚期CRC患者临床治疗中潜在的抗血管生成靶点。

紫花前胡苷经通过PI3K/AKT通路对结直肠癌细胞生物学行为的影响

目的:探究紫花前胡苷(NK)经磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)通路对结直肠癌(CRC)细胞生物学行为的影响。方法:将SW480细胞分为SW480组(SW480细胞未做任何处理)、NK低剂量组(L-NK组,40μmol/L NK)、NK中剂量组(M-NK组,60μmol/L NK)、NK高剂量组(H-NK组,80μmol/L NK)、H-NK+740Y-P组(80μmol/L NK+10μmol/L PI3K激活剂740Y-P处理SW480细胞)。平板克隆检测SW480细胞克隆能力;3-(4,5-二甲基噻唑-2)2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测细胞增殖能力;流式细胞术和Hoechst 33258染色检测SW480细胞凋亡能力;细胞侵袭实验(Transwell)检测SW480细胞侵袭能力;MTT法检测SW480细胞黏附情况;蛋白质印迹法(Western blotting)检测黏附、凋亡以及通路相关蛋白水平。结果:与SW480组相比,L-NK组、M-NK组、H-NK组细胞核出现缩小、破碎现象,克隆数、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、Twist相关蛋白1(Twist1)蛋白表达、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比例依次显著降低(P<0.05),细胞生长抑制率、细胞凋亡率以及Bcl-2关联X的蛋白(Bax)、活化的半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved-Caspase-3)、E-钙黏附蛋白(E-cadherin)蛋白表达以及细胞黏附抑制率依次显著升高(P<0.05);与H-NK组相比,H-NK+740Y-P组克隆数、Bcl-2、N-cadherin、Twist1蛋白表达、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比例显著升高(P<0.05),细胞生长抑制率、细胞凋亡率以及Bax、cleaved-Caspase-3、E-cadherin蛋白表达以及细胞黏附抑制率显著降低(P<0.05)。结论:NK可能通过下调PI3K/AKT通路抑制SW480细胞增殖和侵袭,促进其凋亡。

基因沉默PRDX1表达对人结直肠癌SW480细胞侵袭迁移的影响

目的:探讨RNA干扰过氧化还原酶1(Peroxiredoxin 1,PRDX1)表达对人结直肠癌SW480细胞侵袭转移能力的影响。方法:筛选RNA干扰PRDX1的慢病毒质粒,与阴性对照慢病毒质粒分组转染结直肠癌SW480细胞,转染后的SW480细胞可分为PRDX1基因沉默组(si-PRDX1)和阴性对照组(Vector)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)分别检测两组细胞中PRDX1 mRNA和蛋白表达;采用Transwell侵袭和迁移实验检测基因沉默PRDX1表达对结直肠癌细胞侵袭及迁移能力的影响;通过Western blot检测两组细胞中基质金属蛋白酶(MMP)家族部分蛋白表达水平。结果:基因沉默PRDX1表达可有效抑制结直肠癌SW480细胞中PRDX1 mRNA和蛋白水平的表达,与阴性对照组相比(Vector),差异均具有统计学意义(P<0.01),说明基因沉默PRDX1的SW480细胞系构建成功;Transwell侵袭和迁移实验显示si-PRDX1组细胞的侵袭及迁移能力较对照组均明显降低(P<0.01);Western blot结果显示,与Vector组相比,si-PRDX1组细胞中组织基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)的表达明显增加,而MMP-2及MMP-9的表达显著下降,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:基因沉默人结直肠癌SW480细胞的PRDX1表达可有效抑制细胞的侵袭、迁移及转移能力,其机制可能会通过调控TIMP-2、MMP-2及MMP-9的表达介导。

细胞穿透肽PEP-1介导增强型绿色荧光蛋白转导人结直肠癌SW480细胞

背景与目的:细胞穿透肽是近年来发现的一类能介导大分子物质跨膜转导的小分子肽段,本实验研究细胞穿透肽PEP-1携带大分子蛋白穿透人结直肠癌细胞SW480的能力。方法:用基因工程的方法制备并纯化EGFP蛋白和PEP-1-EGFP融合蛋白,将纯化后的两种蛋白与体外培养的人结直肠癌细胞共同孵育,在荧光显微镜下直接观察PEP-1介导目的蛋白EGFP转导入SW480细胞的能力。结果:EGFP蛋白不能进入细胞内,PEP-1-EGFP融合蛋白和SW480细胞共同孵育1h后可见有明亮绿色荧光分布于胞浆和胞核。结论:PEP-1能有效携带目的蛋白进入人结直肠癌细胞。

山慈菇提取物对人结直肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察不同浓度山慈菇提取物对人结直肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法:以SW480细胞为研究对象,设立不同浓度山慈菇提取物与空白组,采用CCK-8法检测SW480细胞的活性,克隆形成实验检测SW480细胞克隆形成能力,Hoechst 33258染色检测SW480细胞凋亡时细胞核的形态学变化,Western blot法检测SW480细胞中星形细胞上调基因-1(Astrocyte elevated gene-1,AEG-1)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2-associated X的蛋白质(Bax)表达水平,最后采用shRNA干扰技术沉默SW480细胞中AEG-1基因的表达检测AEG-1基因是否能影响SW480细胞的增殖以及Bcl-2和Bax的蛋白表达。结果:与空白组比较,山慈菇提取物能显著抑制SW480细胞活性和细胞克隆形成能力(P<0.05);Hoechst 33258染色后观察可见细胞形态皱缩并形成凋亡小体;与空白组比较,山慈菇提取物组AEG-1和Bcl-2蛋白表达水平明显降低,Bax蛋白表达水平则明显增加(P<0.05);经shRNA沉默AEG-1基因表达后,SW480细胞中AEG-1蛋白水平显著下降(P<0.05);与阴性对照组比较,AEG-1沉默慢病毒转染组SW480细胞中Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05),Bax蛋白表达明显增加(P<0.05),细胞活性和细胞克隆形成能力均受到明显抑制(P<0.05)。结论:山慈菇提取物具有明显抑制SW480细胞增殖并诱导凋亡的作用,其机制可能与抑制AEG-1蛋白表达、继而下调Bcl-2蛋白的表达水平、上调Bax蛋白表达水平有关。

RNAi沉默STAT3对结直肠癌SW480细胞的抑制作用及其机制

目的:慢病毒介导siRNA沉默结直肠癌SW480细胞内信号转导和转录活化因子3(signal transducer and activators of transcription 3,STAT3)的表达,观察其对SW480细胞凋亡、侵袭、集落形成及下游信号分子Mcl-1、caspase3表达的影响。方法:用携带针对STAT3的siRNA的慢病毒Lenti-STAT3-siRNA感染SW480细胞,Real-time PCR和Western blotting分别检测Lenti-STAT3-siRNA感染对SW480细胞内STAT3、Mcl-1及caspase3 mRNA和蛋白表达的影响,流式细胞术检测下调STAT3表达对SW480细胞凋亡的影响。Transwell实验检测下调STAT3表达对SW480细胞侵袭能力的影响。结果:Lenti-STAT3-siRNA组SW480细胞STAT3 mRNA和蛋白的相对表达量较Lenti-GFP组和对照组显著降低(均P<0.05)。Lenti-STAT3-siRNA组SW480细胞集落形成能力受到抑制,对照组、Lenti-GFP组和Lenti-STAT3-siRNA组SW480细胞凋亡率分别为1.32%、4.92%及11.9%,Lenti-STAT3-siRNA组SW480细胞穿膜细胞数较对照组和Lenti-GFP组显著下降[(178.49±15.42)vs(340.20±41.31)、(320.61±13.30)个,均P<0.05]。Lenti-STAT3-siRNA组Mcl-1 mRNA和蛋白的相对表达量显著降低(均P<0.05),caspase3 mRNA和蛋白的相对表达量显著增加(均P<0.05)。结论:慢病毒Lenti-STAT3-siRNA感染能够有效下调结直肠癌细胞SW480内STAT3基因的表达,促进其凋亡并抑制其侵袭、集落形成能力,其机制可能与降低Mcl-1、提高caspase3的表达有关。

白头翁皂苷干预糖酵解途径抑制SW480人结直肠癌细胞增殖作用研究

目的:观察白头翁皂苷抑制人结直肠癌细胞的增殖作用及对肿瘤细胞糖酵解途径的影响。方法:采用人结直肠癌细胞株SW480,通过噻唑蓝(MTT)比色法研究白头翁皂苷(1.25、2.5、5、10、20、40μg/mL)对SW480细胞增殖的抑制作用,检测1、3、9μg/mL白头翁皂苷干预后SW480的葡萄糖消耗、乳酸生成和三磷酸腺苷含量变化,评价白头翁皂苷对SW480细胞糖酵解的干预作用;采用RT-PCR技术检测SW480细胞酵解途径中关键蛋白GLUT1、HK2、LDHA、MCT4、MCT1、c-Myc、HIF-1a mRNA表达水平;采用Western blot检测糖酵解调节因子HIF-1a、c-Myc蛋白及乳酸外排蛋白MCT4的表达。结果:白头翁皂苷对SW480细胞的增殖具有抑制作用,作用强度呈浓度依赖性,其对SW480的IC50为11.69μg/mL;9μg/mL白头翁皂苷能显著降低SW480细胞葡萄糖消耗、乳酸生成和三磷酸腺苷含量,能使糖酵解关键蛋白GLUT1、HK2、MCT4、MCT1、c-Myc、HIF-1a mRNA表达显著下调,并使调节因子c-Myc、HIF-1a蛋白和乳酸转运蛋白MCT4表达显著降低。结论:白头翁皂苷能显著抑制SW480细胞增殖,降低细胞糖酵解水平,其机制与调控c-Myc、HIF-1a而干预GLUT1、HK2、MCT4、MCT1的表达相关。白头翁皂苷可能是一种潜在的肿瘤能量代谢阻断剂。

山慈菇提取物通过下调AEG-1表达抑制人结直肠癌SW480细胞迁移和侵袭

目的本研究旨在观察山慈菇提取物对人结直肠癌SW480细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其分子机制。方法取人结直肠癌SW480细胞作为研究对象,采用划痕实验和Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,采用短发夹RNA(Short hairpin RNA,shRNA)干扰技术沉默SW480细胞中星形细胞上调基因-1(astrocyte elevated gene-1,AEG-1)基因的表达,利用Western blot法检测基质金属蛋白酶-2,9(matrix metalloproteinase-2,9,MMP-2,9)、E-钙粘蛋白(E-cadherin)和AEG-1等蛋白的表达变化。结果山慈菇提取物可使人结直肠癌SW480细胞愈合率、迁移率和侵袭率均显著下降(P<0.05),下调MMP2、MMP9和AEG-1蛋白表达水平(P<0.05)以及上调E-cadherin蛋白表达水平(P<0.05),上述作用均具有浓度依赖性。经shRNA干扰AEG-1基因表达后,SW480细胞中AEG-1蛋白表达水平显著下降(P<0.05);同时AEG-1干扰SW480细胞中E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05),MMP2和MMP9蛋白表达水平均显著下降,同时单独或者联合山慈菇提取物组的细胞迁移率、侵袭率也降低(P<0.05)。结论山慈菇提取物能浓度依赖性地抑制人结直肠癌SW480细胞迁移和侵袭,这可能与山慈菇提取物抑制AEG-1蛋白表达,继而下调MMP2、MMP9蛋白表达和上调E-cadherin蛋白表达有关。

桂枝水提物诱导人结直肠癌SW480细胞周期进程及其凋亡机制

目的研究桂枝水提物对人结直肠癌SW480细胞增殖周期和凋亡的影响及其机制。方法取对数生长期SW480细胞,分别给予不同浓度的桂枝水提物(100、200、400μg/ml)进行干预,48 h后通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖抑制率。流式细胞术检测细胞周期进程变化及细胞凋亡率,透射电子显微镜检测其亚细胞结构改变。结果不同浓度的桂枝水提物对SW480细胞增殖均有抑制作用,抑制率分别为9.4%、15.2%和25.6%,与对照组相比差异有统计学意义(t=9.59,P<0.01;t=11.02,P<0.01;t=16.88,P<0.01),抑制率呈明显的剂量依赖性,流式细胞仪结果显示桂枝水提物主要作用于细胞周期的G0/G1期,使G0/G1细胞增多,不能进入S期,造成S期细胞减少,从而使G2/M期细胞相对增多,且细胞凋亡率升高。电子显微镜可见SW480细胞线粒体肿胀,有大量空泡形成,核染色质凝聚,可见凋亡小体。结论桂枝水提物抗肿瘤效果主要取决于药物浓度及作用靶点,可有效降低SW480细胞存活率,阻滞SW480细胞G1期向S期细胞转化进程,诱导SW480细胞凋亡,为结直肠癌术后综合治疗提供理论依据。

FGFR4在结直肠癌组织中表达及其对SW620细胞生物学功能的影响

目的探究成纤维细胞生长因子受体4(fibroblast growth factor receptor 4,FGFR4)在结直肠癌组织中的表达情况及其对SW620细胞生物学功能的影响。方法利用癌症基因图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库中结直肠癌的数据分析FGFR4 mRNA在结直肠癌组织中的表达。使用基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)进行生物信息学分析寻找FGFR4影响的相关信号通路。构建pcDNA3.1-FGFR4过表达载体,分为实验组与对照组。分别采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)实验、流式细胞凋亡检测、细胞划痕实验和Transwell实验检测过表达FGFR4对SW620细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。结果TCGA数据库数据分析结果显示FGFR4 mRNA在结直肠癌中的表达高于癌旁组织(P<0.05),GSEA结果显示FGFR4高表达在碱基切除修复、谷胱甘肽代谢、磷酸戊糖途径、核糖核酸聚合酶、硒氨酸代谢等通路富集(P<0.05)。CCK-8实验、细胞划痕实验和Transwell实验结果表明,与对照组相比,实验组中SW620细胞的增殖、迁移、侵袭能力均明显得到促进(P<0.05)。流式细胞凋亡检测结果显示,过表达的FGFR4可以抑制结直肠癌SW620细胞凋亡(P<0.05)。结论FGFR4在结直肠癌组织中存在高表达,且与预后相关。过表达FGFR4促进结直肠癌SW620细胞的增殖、迁移及侵袭等特性并抑制SW620细胞的凋亡。FGFR4有可能成为结直肠癌诊断和治疗的潜在靶点。

Peroxiredoxin 2基因慢病毒载体的构建及对结直肠癌SW480细胞增殖的影响

目的:构建Peroxiredoxin 2(Prdx2)基因慢病毒表达载体,建立能够稳定高表达Prdx2的结直肠癌SW480细胞株,研究Prdx2的高表达对SW480细胞生长增殖的影响。方法:利用PCR扩增Prdx2编码区片段,克隆插入载体Ubi-MCS-EGFP-IRES-Puromycin(GV218)中,构建Ubi-Prdx2-EGFP-Puromycin(LV-Prdx2)慢病毒表达载体,包装产生慢病毒颗粒,鉴定后将其转染SW480细胞,荧光显微镜观察细胞绿色荧光蛋白表达;应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot方法检测SW480细胞中Prdx2的mRNA和蛋白水平表达情况;MTT法检测细胞生长情况;平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力。结果:构建的重组慢病毒表达载体Ubi-Prdx2-EGFP-Puromycin(LV-Prdx2)经鉴定正确;慢病毒转染SW480细胞后,细胞中Prdx2在mRNA和蛋白水平高表达。MTT法及平板克隆形成实验结果显示Prdx2高表达的SW480细胞增殖能力显著增强(P<0.05)。结论:成功构建Prdx2基因慢病毒表达载体Ubi-Prdx2-EGFP-Puromycin,筛选出稳定高表达Prdx2的SW480细胞株;高表达的Prdx2分子可显著促进结直肠癌SW480细胞增殖。

miR-106a对人结直肠癌SW480细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:研究microRNA-106a(miR-106a)对低转移性人结直肠癌SW480细胞增殖和侵袭等恶性生物学行为的影响。方法:采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测20对结直肠癌组织及其癌旁组织中miR-106a的表达,将miR-106amimics转染到SW480细胞中,用qRTPCR法检测miR-106a的表达水平,并用CCK8实验、克隆形成实验和划痕法检测SW480细胞的增殖、克隆形成以及体外迁移能力。结果:与癌旁组织相比较,结直肠癌组织中miR-106a的表达水平升高(t=2.05,P=0.047);与mimics control转染组相比,miR-106amimcs转染组miR-106a的表达水平显著升高(t=13.25,P=0.000),且细胞活力(72h,t=4.52,P=0.000;96h,t=6.17,P=0.000)和细胞克隆数明显升高(t=5.69,P=0.005),以及伤口愈合能力升高(48h,t=5.44,P=0.032)。结论:过表达miR-106a可显著促进低转移的人结直肠癌SW480细胞增殖和迁移能力,为结直肠癌的治疗提供了潜在的策略。

白花败酱草提取物对人结直肠癌细胞SW480增殖和凋亡的影响

目的探讨白花败酱草提取物通过抑制Notch信号通路影响人结直肠癌细胞SW480增殖、凋亡机制的研究。方法噻唑蓝(MTT)法检测不同质量浓度的白花败酱草对人结直肠癌SW480细胞增殖的影响,流式细胞仪检测白花败酱草对SW480细胞凋亡的影响,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测其对凋亡相关蛋白剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的影响,荧光定量聚合酶链式反应(RTqPCR)检测其对SW480细胞中Notch信号通路中Notch1及下游靶基因Hes-1 mRNA表达的影响。结果白花败酱草提取物能够抑制人结直肠癌SW480细胞的增殖,呈质量浓度和时间依赖效应,差异具有统计学意义(P<0.05);流式细胞检测显示白花败酱草提取物干预SW480细胞后凋亡率升高,呈质量浓度依赖性(P<0.05);白花败酱草提取物可促进SW480细胞中cleaved caspase-3和Bax的表达,抑制Notch1和Hes-1的表达,具有质量浓度依赖性(P<0.05)。结论白花败酱草提取物能够抑制人结直肠癌SW480细胞的增殖,诱导SW480细胞凋亡,作用机制与其抑制Notch信号通路的激活有关。

DLC-1基因重组慢病毒表达载体的构建及其在结直肠癌SW480细胞中的表达

目的:构建携带肝癌缺失基因-1(deleted in liver cancer-1,DLC-1)的重组慢病毒表达载体并实现DLC-1基因在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)SW480细胞中的过表达。方法:将DLC-1基因的靶序列与载体质粒pcDNA3.1(+)-GFP连接成重组质粒。重组质粒经双酶切法及基因测序验证构建正确后包装成慢病毒颗粒并计算病毒滴度。重组慢病毒感染SW480细胞,同时设置阴性对照组和空白对照组流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测感染率;real-time PCR及Western blot检测SW480细胞中DLC-1基因表达水平。结果:重组质粒构建正确。重组慢病毒滴度为1×109 TU/ml;对SW480细胞的感染率为90%;DLC-1mRNA在重组慢病毒组细胞中过表达;重组慢病毒组DLC-1蛋白的表达水平显著高于阴性对照组(P=0.000);阴性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义(P=0.902)。结论:成功构建了高滴度的DLC-1基因重组慢病毒,其携带的DLC-1基因能够在CRC SW480细胞中过表达,为后续研究DLC-1基因的表达在CRC的发生、发展中的作用奠定了实验基础。