十味有毒中药对人结直肠癌HCT116细胞株的作用研究

目的:研究大肠癌HCT116细胞对10味有毒中药的敏感性。方法:采用MTT法测定药物对细胞增殖的抑制率。结果:中华蟾酥注射液、斑蟊酸钠注射液、亚砷酸氯化钠注射液及藤黄对大肠癌HCT116细胞的增殖有抑制作用,且随着药物浓度的增加抑制效果明显增强,有明显的量效关系;黄药子、龙葵、重楼、白花蛇舌草、天南星、雷公藤在相同浓度下未表现出抑制作用。斑蝥酸钠及藤黄IC50优于亚砷酸氯化钠(P<0.05),华蟾素注射液由于采用的原药未提供原液浓度,未能得出具体的IC50值。结论:通过实验筛选证明华蟾酥注射液、斑蟊酸钠注射液、亚砷酸氯化钠注射液及藤黄可抑制HCT116细胞增殖,为进一步的体内动物研究提供实验数据,其机制还待进一步研究。

粉防己碱对人结直肠癌HCT116细胞株生物功能的影响及其机制

目的:探究粉防己碱对人结直肠癌HCT116细胞株生物功能的影响及其可能机制。方法:采用CCK-8检测粉防己碱对HCT116细胞活力的影响及其半数抑制浓度;用不同浓度粉防己碱(0、2.5、5和10μmol/L)处理细胞,细胞集落形成实验检测细胞增殖;流式细胞术、线粒体膜电位检测技术和Hoechst 33342细胞核染色技术检测细胞凋亡;细胞迁移实验和划痕实验检测细胞迁移能力;蛋白印迹技术检测细胞上皮间质转化标志蛋白表达水平及PI3K/AKT/NF-κB信号通路中关键分子活化程度。结果:HCT116细胞活力随粉防己碱处理浓度增加而降低,粉防己碱半数抑制浓度为9.441μmol/L;与0μmol/L组相比,2.5、5和10μmol/L粉防己碱组细胞形成集落数明显减少(P均<0.05);5、10μmol/L粉防己碱组G0/G1期细胞比例增加,S期和G2/M期细胞比例下降,凋亡细胞比例增加(P均<0.05);2.5、5、10μmol/L粉防己碱组细胞线粒体膜电位降低,细胞核荧光增强,迁移能力降低(P均<0.05);与0μmol/L组相比,10μmol/L粉防己碱组细胞多呈圆形,有更多上皮细胞形态;2.5、5和10μmol/L粉防己碱组细胞上皮标志蛋白E-钙黏蛋白表达增加,而间充质标志物N-钙黏蛋白和波形蛋白表达减少,且PI3K/AKT/NF-κB信号通路中关键分子AKT和NF-κB的磷酸化水平降低(P均<0.05)。结论:粉防己碱可能通过抑制PI3K/AKT/NF-κB信号途径逆转HCT116细胞上皮间质转化,进而降低细胞增殖迁移能力,诱导其凋亡。

蟾蜍他灵对人结直肠癌细胞HCT116增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化的影响

目的探讨不同浓度蟾蜍他灵(BT)对人结直肠癌细胞HCT116增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化的影响。方法采用CCK-8实验检测不同浓度(0、10、20、40、80、160、320 nmol/L)的BT处理24和48 h后的细胞活力,并计算半抑制浓度(IC 50);平板克隆实验验证0、12.5、25.0 nmol/L BT(设为A、B、C组)处理14 d后对HCT116细胞集落形成能力的影响;使用划痕和Transwell实验验证0、25、50 nmol/L BT(设为A、C、D组)处理24 h后对HCT116细胞迁移和侵袭能力的影响;应用Western blot实验检测A、C、D组处理24 h后HCT116细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表达水平。结果CCK-8实验结果显示,BT处理HCT116细胞24或48 h后,随着BT的浓度增加,其抑制HCT116细胞增殖的作用显著增强(F=2106.00、3725.00,P<0.05),处理24和48 h的IC 50分别为49.59、24.10 nmol/L;平板克隆实验结果显示,B、C组细胞的集落数量显著少于A组(F=159.30,t=12.40、17.32,P<0.05);划痕和Transwell实验结果显示,C、D组细胞迁移率和侵袭细胞数量显著低于A组(F=120.30、296.80,t=12.71~21.27,P<0.05);Western blot实验结果显示,BT显著上调HCT116细胞内E-cadherin蛋白表达(F=2736.00,P<0.05),其中C、D组显著高于A组(t=50.27、72.13,P<0.05);而BT显著下调N-cadherin蛋白表达(F=626.80,P<0.05),其中C、D组显著低于A组(t=26.54、33.57,P<0.05)。结论BT可明显抑制人结直肠癌细胞HCT116的增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化过程,有望成为结直肠癌治疗的潜在候选药物。

复方葛根汤诱导结肠癌HCT116细胞铁死亡分子机制研究

为探究复方葛根汤对结肠癌HCT116细胞增长作用及其分子机制,通过MTT法检测、克隆形成、形态学分析探讨复方葛根汤对HCT116细胞增长作用,以活性氧试剂盒检测、荧光显微成像及蛋白免疫印迹法探究其分子机制。研究结果显示,与溶媒对照组相比,复方葛根汤能显著抑制HCT116细胞增长能力,并呈浓度和时间依赖性,机制上能显著增加细胞内活性氧,显著上调铁死亡相关蛋白PTGS2、ACSL4蛋白的表达,及明显下调铁死亡相关蛋白GPX4表达,表明复方葛根汤可能通过诱导铁死亡机制抑制HCT116细胞增长。

姜黄素通过靶向PBK对结直肠癌HCT116细胞增殖的抑制作用

目的研究姜黄素抑制结直肠癌HCT116细胞增殖的分子机制。方法体外培养HCT116细胞,四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测不同浓度姜黄素(0、10、20、50、100、200μmol/L)对HCT116细胞增殖率的影响,实验分空白对照组、EGF组(单独加入20 ng/m L EGF)、EGF+姜黄素组;细胞锚定增殖实验检测药物对HCT116细胞增殖的抑制作用;体外结合及体外激酶实验检测姜黄素对磷酸化酶b激酶(PBK)活性的影响;Western blotting及免疫组织化学方法检测姜黄素对PBK下游信号通路的影响。结果当姜黄素浓度<50μmol/L时,对HCT116细胞影响较小;而当浓度达到100μmol/L时,HCT116细胞凋亡明显增加。HCT116细胞在软琼脂内锚定增殖的结果显示:与EGF组比较,EGF+姜黄素组细胞克隆小且克隆数量少,具有药物浓度依赖性。体外结合及体外激酶实验结果显示姜黄素可以结合PBK,并抑制PBK的活性。Western blotting及免疫组织化学结果显示姜黄素明显下调PBK下游信号通路ERK1/2及H3的磷酸化水平,具有时间和浓度依赖性。结论在结直肠癌HCT116细胞中,姜黄素可能通过抑制PBK的活性,起到抗HCT116细胞增殖的作用。

清血颗粒与祛邪胶囊对人结直肠癌HCT-116细胞的增殖抑制作用及其机制研究

目的:探讨中国中医科学院西苑医院2种院内制剂清血颗粒和祛邪胶囊含药血清对人结直肠癌细胞系HCT-116的癌细胞生长、细胞凋亡以及细胞凋亡相关蛋白、自噬蛋白表达的影响。方法:实验分为对照组、清血颗粒组、祛邪胶囊组、健脾活血组、健脾活血加清血颗粒组、健脾活血加祛邪胶囊组,分别采用酸性磷酸酶法(APA)、流式细胞术(FCM)和Western Blot法检测各组含好药血清对肿瘤细胞长、细胞凋亡率的变化、细胞凋亡相关蛋白caspase-3表达以及自噬相关蛋白LC3表达。结果:清血颗粒、祛邪胶囊、健脾活血清血颗粒、健脾活血组的10%含药血清作用24h后,可明显抑制HCT-116肿瘤细胞的生长;而健脾活血加祛邪胶囊组则不能抑制其生长。光镜下可见,祛邪胶囊组作用24h后细胞密度稀疏,细胞皱缩体积缩小且凋亡相关蛋白caspase3表达上调。结论:清血颗粒和祛邪胶囊均能明显抑制HCT-116肿瘤细胞的生长,祛邪胶囊组主要通过凋亡途径诱导HCT-116细胞发生程序性死亡。

三叶青乙酸乙酯提取物通过miR-515-5p/CDCA5调控结直肠癌细胞HCT116增殖、迁移及侵袭

结直肠癌是临床常见的一种消化系统恶性肿瘤,中药提取物具有抗氧化、抗肿瘤等作用,并可抑制结直肠癌等肿瘤细胞的增殖等生物学行为[1-3]。三叶青属于葡萄科崖爬藤属多年生藤本植物,可抑制肝癌细胞增殖并可促进细胞凋亡[4]。miR-515-5p在肿瘤细胞中表达下调,上调其表达可抑制肿瘤细胞迁移[5]。starbase预测显示CDCA5可能是miR-515-5p的靶基因,CDCA5在结直肠癌细胞中表达水平升高,并可通过激活ERK信号通路从而促进结直肠癌发展进程[6]。因此,本研究主要探究三叶青乙酸乙酯提取物对结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响,探讨其对miR-515-5p/CDCA5分子轴的调控作用。

FBXW7基因点突变对结直肠癌HCT-116细胞的增殖、迁移、侵袭和抗凋亡能力的影响

目的:探讨FBXW7基因点突变对结直肠癌细胞株HCT-116增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:通过构建FBXW7基因野生型及突变型过表达的重组载体,并将其转染HCT-116细胞,应用Western blotting检测转染后FBXW7蛋白表达情况。CCK-8检测细胞增殖能力,平板细胞克隆形成实验(HTCA)检测肿瘤细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,划痕及Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移和侵袭能力。结果:转染野生型FBXW7基因的HCT-116细胞中FBXW7蛋白表达水平高于对照组(转染突变型FBXW7基因的HCT-116细胞)、阴性对照组(转染空质粒载体p EZ-M90的HCT-116细胞)及空白对照组(未进行任何特殊处理的HCT-116细胞)(均P<0.05)。转染野生型FBXW7的HCT-116细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力相较于其余各组均显著下降(均P<0.05),且细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。结论:FBXW7基因点突变可使其蛋白表达水平降低,从而促进结直肠癌HCT-116细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制其凋亡。

ACL的构建及其对结直肠癌HCT116细胞增殖和迁移的作用

目的制备阿托伐他汀钙脂质体(ACL),探究其对结直肠癌HCT116细胞增殖、迁移的影响。方法采用乳化-溶剂挥发法制备ACL并进行相关参数的测定。以香豆素6为荧光探针探究HCT116细胞摄取的变化;MTT实验和细胞平板克隆实验检测ACL和阿托伐他汀钙(AC)对HCT116细胞增殖的影响;Transwell实验检测ACL和AC对HCT116细胞迁移的影响。结果成功制备ACL,其平均粒径为(87.24±0.485)nm,分散系数为0.240~0.250,Zeta电位为(-12.19±3.642)mV。脂质体形态似球形或圆形结构,外观完整,且大小均匀。脂质体组细胞内荧光强度显著增强,细胞摄取增加。AC和ACL作用后,细胞增殖率和克隆形成率显著降低,迁移细胞数减少,且ACL的抑制作用均显著强于AC。结论ACL可以显著增加HCT116细胞的摄取,增强AC对HCT116细胞的抑制作用。

非洲爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白C'末端SBP-3×Flag标记的HCT 116结直肠癌细胞模型的建立

目的建立非洲爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白(TPX2)C'末端SBP-3×Flag标记的HCT116结直肠癌细胞模型。方法 PCR扩增同源臂,构建TPX2的腺相关病毒打靶载体,包装病毒后打靶HCT116结直肠癌细胞,G418和PCR筛选获得含有新霉素抗性基因的阳性细胞株,最后通过Cre病毒感染去除抗性基因,并用PCR方法筛选获得TPX2C末端SBP和3×Flag内源性双标签的HCT116结直肠癌细胞株。结果筛选获得2个含有新霉素抗性基因的细胞株,随后经Cre病毒感染得到去除新霉素抗性基因的阳性细胞克隆,并经Western blot检测验证了SBP-3×Flag基因的敲入。结论成功建立了TPX2 C'末端SBP-3×Flag标记的HCT116结直肠癌细胞模型。

泛素特异性蛋白酶53在结直肠癌中的表达及其对HCT116细胞的抑制作用

目的:探讨泛素特异性蛋白酶53(ubiquitin specific peptidase 53,USP53)在结直肠癌组织中的表达水平及其过表达对人结直肠癌HCT116细胞功能的影响。方法:运用Real-time PCR及IHC方法检测结直肠癌及癌旁组织中USP53的表达情况;利用UCSC CANCER BROWSER提供的TCGA数据库,检测USP53 mRNA表达水平与临床特征及预后的关系;HCT116细胞中瞬时过表达USP53,利用CCK-8及克隆形成实验检测HCT116细胞增殖变化。结果:免疫组化结果显示,USP53在癌旁组织中的表达显著高于肿瘤组织[91.67%(44/48)vs 18.75%(9/48),P<0.01]。癌旁组织中USP53 mRNA水平也高于癌组织[(0.85±0.32)vs(0.46±0.27),P<0.05]。组织中USP53 mRNA表达水平与预后有关,表达越低预后越差(P<0.05)。过表达USP53后,细胞克隆形成数目显著下降[(123±27.22)vs(338±55.24)个,P<0.01];CCK-8实验结果显示,肿瘤细胞增殖受到显著抑制[(0.14±0.01)vs(0.18±0.04),P<0.05;(0.23±0.01)vs(0.32±0.01),P<0.01;(0.45±0.03)vs(0.80±0.05),P<0.01;(0.83±0.03)vs(1.18±0.10),P<0.01]。结论:USP53在结直肠癌中表达下调与不良预后相关,USP53可抑制肿瘤细胞增殖,提示USP53可作为诊断及治疗结直肠癌的新靶标。

SIRT1通过NF-κB通路调节结直肠癌细胞HCT116增殖和活力

目的探讨SIRT1是否通过NF-κB通路来调节结直肠癌细胞HCT116点增殖和活力。方法选用结直肠癌细胞HCT116,通过转染SIRT1质粒来过表达SIRT1,此为过表达组;通过siRNA来敲低SIRT1,此为敲低组;用MTT法、CCK-8法和克隆形成试验来测定HCT116细胞的增殖和活力情况;通过免疫印迹试验来检测NF-κB通路相关蛋白的表达情况。结果过表达组中,p-P65、p-IKKalpha的表达量明显降低(P<0.05),而P65和IKKalpha的总体表达量没有明显差异(P>0.05),HCT116的生长速度、增殖速率以及细胞活力明显降低(P<0.05);敲低组中,p-P65、p-IKKalpha的表达量明显上升(P<0.05),而P65和IKKalpha的总体表达量没有明显差异(P>0.05),HCT116的生长速度、增殖速率以及细胞活力明显上升(P<0.05)。在过表达SIRT1的同时,用NF-κB的抑制剂Curcumin处理HCT116后,NF-κB通路相关蛋白的表达量以及HCT116的生长速度和增殖速率无明显变化(P>0.05)。结论 SIRT1通过抑制NF-κB的激活来降低结直肠癌细胞HCT116增殖和活力。

羽扇豆醇对结直肠癌HCT116细胞的抑制作用及机制研究

目的探讨羽扇豆醇对结直肠癌HCT116细胞的抑制作用及潜在分子机制。方法体外培养结直肠癌HCT116细胞,采用CCK-8法、克隆形成试验、划痕愈合试验、Transwell试验及流式细胞术评估不同浓度羽扇豆醇对HCT116细胞的增殖,克隆形成、迁移和侵袭能力,以及凋亡的影响;进一步通过TMT标记定量蛋白质组学分析及生物信息学分析羽扇豆醇抑制HCT116细胞生长的潜在机制,并运用蛋白质免疫印迹法验证相关蛋白的表达水平。结果羽扇豆醇具有抑制HCT116细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力,以及促进细胞凋亡,并且均呈浓度依赖性。羽扇豆醇干预HCT116细胞后共发现490种蛋白表达差异明显。经生物信息学分析发现,羽扇豆醇主要参与了HCT116细胞的分裂、增殖、凋亡及营养物质代谢等生物学过程,可能与糖酵解/糖异生、缺氧诱导因子(HIF)-1信号通路、淀粉和蔗糖代谢途径等信号通路有关。蛋白质免疫印迹法结果显示,羽扇豆醇可下调HIF-1α、α-烯醇化酶(ENO1)和乳酸脱氢酶A(LDHA)蛋白表达水平。结论羽扇豆醇对人结直肠癌HCT116细胞的生长及转移有明显抑制作用,其机制与下调糖酵解信号通路中HIF-1α、LDHA和ENO1蛋白的表达水平有关。

miR-22表达载体的构建及其对结直肠癌细胞HCT116增殖的影响

目的构建pc DNATM6.2-GW-miR-22表达载体,并检测其对结直肠癌HCT116细胞增殖的影响。方法人工合成pre-hsa-miR-22基因片段,应用分子克隆技术构建pc DNATM6.2-GW-miR-22表达载体,酶切、DNA测序及BLAST验证;瞬时转染HCT116细胞,应用RT-PCR检测miR-22表达水平,MTT实验检测miR-22对HCT116细胞增殖的影响。结果酶切及测序结果验证miR-22表达载体构建成功;转染HCT116细胞后miR-22表达水平显著增高;MTT结果表明miR-22对细胞增殖具有抑制作用。结论本研究成功构建miR-22真核表达载体,证明miR-22高表达可以抑制结直肠癌细胞HCT116的增殖。

miR-485-5p靶向调控Survivin基因对人结直肠癌HCT116细胞侵袭性的影响

目的探讨miR-485-5p对人结直肠癌HCT116细胞中Survivin基因的靶向调控作用以及对细胞侵袭性的影响。方法培养HCT116细胞,应用免疫荧光检测Survivin基因在细胞中的表达。采用生物信息学方法对mi R-485-5p和Survivin基因的靶向匹配关系进行预测,并应用双荧光素酶报告基因系统鉴定。脂质体2000转染mi R-485-5p模拟物后,Real-time PCR检测mi R-485-5p和Survivin基因的表达,Western blotting检测Survivin蛋白的表达,Transwell小室检测HCT116细胞体外的侵袭性。结果倒置相差显微镜下可见细胞均匀分布,形态规则均一;细胞免疫荧光显示胞质内有Survivin蛋白的表达。靶基因预测软件mi Randa和Target Scan显示mi R-485-5p和Survivin基因匹配良好,双荧光素酶报告基因系统鉴定发现mi R-485-5p能够结合Survivin m RNA 3'UTR,并有效抑制其表达。Real-time PCR和Western blotting检测结果显示,过表达mi R-485-5p能够导致Survivin基因表达的下降。Transwell实验结果显示,mi R-485-5p的过表达能够抑制HCT116细胞的侵袭。结论 mi R-485-5p通过靶向作用于Survivin mRNA 3'UTR能够负性调控Survivin基因的表达,并能够抑制人结直肠癌HCT116细胞的侵袭。

半边旗二萜化合物5F对人结直肠癌细胞增殖、凋亡和自噬的影响

目的探讨半边旗二萜化合物5F对人结直肠癌细胞增殖、凋亡和自噬的影响及其作用机制。方法采用MTT法检测6.25、12.5、25、50、100μmol·L^(-1)的5F对结直肠癌细胞SW480、HCT116的增殖抑制作用。Hoechst 33342染色观察5F作用结直肠癌细胞后细胞形态学的变化。吖啶橙染色观察5F对结直肠癌细胞酸性小泡细胞器的影响。Western blot分析5F对结直肠癌细胞相关凋亡、自噬蛋白的影响。另外,用5F单独给药以及与自噬抑制剂氯喹联合用药检测其对自噬标志蛋白LC3、凋亡相关蛋白表达和细胞存活情况的影响。结果与空白组相比,5F处理的SW480、HCT116细胞活力均显著降低(P<0.05,P<0.01)。Hoechst33342染色显示5F处理SW480、HCT116后细胞核固缩,表现为明显的亮蓝色,呈凋亡特征。随着5F浓度的增加,Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP、Bax蛋白表达显著增加(P<0.05,P<0.01),Bcl-2蛋白表达显著减少(P<0.01);Caspase广谱抑制剂z-VAD-fmk与5F联用可削弱Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP蛋白表达(P<0.01)。25、50μmol·L^(-1)的5F分别处理结直肠癌细胞后,细胞内被吖啶橙染成红色的酸性小泡有增加趋势;100μmol·L^(-1)的5F处理结直肠癌细胞后,代表酸性小泡的红色荧光反而减少。低浓度的5F处理结直肠癌细胞后LC3-Ⅱ蛋白表达增加(P<0.01),而100μmol·L^(-1)的5F组表达反而减少(P<0.01)。与50μmol·L^(-1)的5F组相比,同浓度的5F联合氯喹处理组,LC3-Ⅱ蛋白表达增加(P<0.01);Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP表达明显减少(P<0.01)。与50μmol·L^(-1)的5F组比,同浓度的5F联合氯喹处理结直肠癌细胞后细胞存活率增加(P<0.01);与100μmol·L^(-1)的5F组比,同浓度的5F联合氯喹处理结直肠癌细胞后细胞存活率几乎不变。结论5F可通过增加Bax蛋白,降低Bcl-2蛋白,促进结直肠癌细胞凋亡。低浓度的5F还可诱导结直肠癌细胞发生自噬,发挥促凋亡作用;高浓度的5F主要诱导结直肠癌细胞凋亡。

新疆蜂胶挥发油对结直肠癌HCT-116细胞增生、周期及凋亡的影响

目的:探讨新疆蜂胶挥发油对体外培养的大肠癌细胞HCT-116细胞增生、细胞周期和凋亡的影响.方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)显色法,检测不同浓度蜂胶挥发油作用不同时间对HCT-116细胞生长所产生的不同影响;倒置显微镜观察凋亡细胞的形态特点;PI染色、流式细胞仪检测细胞周期分布;AnnexinV-FITC/PI双染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果:蜂胶挥发油能抑制HCT-116细胞生长,其抑制活性与5-氟尿嘧啶(5-FU)一致,在一定剂量和时间范围内,可见凋亡细胞明显增多,给予5、10、20mg/L蜂胶挥发油处理HCT-116细胞24h后,较对照组G0/G1期细胞(%)增多(57.57±2.31,67.94±1.90,86.09±1.72vs44.60±3.43,均P<0.01),S期细胞(%)减少(33.51±3.40,27.30±4.65,7.30±4.76vs47.78±4.54,均P<0.01),G2/M期细胞无明显变化,细胞凋亡率明显上升,呈剂量依赖性(58.33%±2.44%,44.53%±2.59%,35.40%±0.42%vs4.38%±0.92%,均P<0.01).结论:新疆蜂胶挥发油对HCT-116细胞具有明显的增殖抑制作用,其机制与其阻滞细胞周期和诱导凋亡有关.

磷酸甘油酸变位酶1在结直肠癌组织中的表达及其对患者预后和癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨结直肠癌(CRC)组织中磷酸甘油酸变位酶1(PGAM1)的表达及其与患者预后的关系,研究PGAM1对CRC细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:选择2003年3月至2008年11月间在天津医科大学肿瘤医院手术切除的30例CRC患者的肿瘤组织标本及临床资料,采用免疫组织化学染色法检测CRC组织中PGAM1蛋白的表达,分析PGAM1表达与患者临床病理特征的关系,Kaplan-Meier生存分析法比较PGAM1高表达与低表达患者的OS、PFS来评价PGAM1表达与患者预后的关系。利用RNA干扰技术分别将si-PGAM1及si-NC质粒转染至HCT-116和SW480细胞,WB法检测转染细胞中PGAM1蛋白的表达水平,CCK-8、Transwell实验分别检测敲低PGAM1对CRC细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果:30例CRC组织中PGAM1阳性染色定位于CRC细胞的细胞质,其中33.3%(10/30例)呈高表达。虽然PGAM1高表达与CRC患者年龄、性别、组织学类型、肿瘤大小、淋巴结转移、远处转移及临床TNM分期无关(均P>0.05),但是PGAM1高表达与低表达患者相比其OS、PFS显著缩短。在CRC细胞中敲低PGAM1后,细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著降低(均P<0.05)。结论:CRC组织中PGAM1呈高表达,PGAM1高表达的患者预后较差;敲低PGAM1后细胞的增殖、迁移及侵袭能力均显著降低,提示PGAM1可能是CRC患者预后的生物标志物。

七氟醚通过上调miR-34a抑制结直肠癌细胞的迁移和侵袭的机制研究

目的研究七氟醚对人结直肠癌HCT116细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其分子机制.方法以细胞计数法(CCK-8)检测七氟醚对HCT116细胞增殖能力的影响;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中miR-34a表达水平, Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,蛋白免疫吸附法(Western blot)检测细胞中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloprotease,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平.结果通过CCK-8实验筛选出七氟醚的作用浓度为4%.以4%七氟醚处理HCT116细胞4h后miR-34a表达水平升高了79%.转染miR-34a inhibitor后,细胞中miR-34a的表达水平下降了81%.七氟醚干预后迁移细胞数由(97.75±16.10)降低到(36.60±8.58),侵袭细胞数由(64.22±6.25)降低到(26.48±3.10),MMP-2蛋白表达水平由(0.68±0.11)下调到(0.24±0.04), MMP-9蛋白表达水平由(0.48±0.07)下调到(0.13±0.02);而抑制miR-34a的表达后,迁移细胞数由(40.15±9.02)提高到(88.65±12.74),侵袭细胞数由(26.12±3.02)提高到(59.24±4.68),MMP-2蛋白表达水平由(0.22±0.03)上调到(0.61±0.09),M M P-9蛋白表达水平由(0.14±0.03)上调到(0.43±0.06).结论七氟醚通过上调miR-34a的表达抑制人结直肠癌HCT116细胞的迁移和侵袭,可能与下调MMP-2和MMP-9蛋白表达有关.

HT29和HCT116结直肠癌细胞增殖及其裸鼠移植成瘤研究

【目的】比较HT29和HCT116两株细胞系体外培养细胞增殖和在裸鼠体内移植后的成瘤情况。【方法】检测结直肠癌细胞HT29和HCT116的细胞活力,观察克隆形成细胞的形态,检测2株细胞p53和p21蛋白的表达水平;将2株细胞移植于裸鼠右侧腹股沟皮下,观察移植瘤的生长情况,记录裸鼠的体质量及移植瘤的体积。【结果】与HT29细胞相比,HCT116细胞在体外的增长率极显著升高(P<0.01),p21蛋白正常表达,p53蛋白表达水平极显著降低(P<0.01);在阿霉素存在的情况下,HCT116细胞中的p21蛋白表达水平极显著升高(P<0.01)。14 d内HCT116细胞移植量对裸鼠体质量无显著影响(P>0.05);单只细胞接种量为4×10^(5)和2×10^(6)个时,HT29细胞肿瘤体积显著高于HCT116细胞(P<0.05)。【结论】HCT116细胞在体外的增殖速率显著高于HT29细胞,但是在体内HT29细胞比HCT116细胞更易成瘤,其分子基础可能与HT29细胞中p53基因突变导致的p53蛋白高表达及其下游p21蛋白低表达有关;高浓度的癌细胞移植有利于肿瘤形成。本研究为结直肠癌动物模型的建立及其进一步研究奠定了基础。