罗哌卡因减轻LPS诱导的人结肠上皮细胞系NCM-460凋亡

目的探究罗哌卡因对脂多糖(LPS)诱导的人结肠上皮细胞系NCM-460凋亡和对核苷酸寡聚化结构域(NOD)样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体活性的影响。方法体外培养人结肠上皮细胞系NCM-460,将细胞分组:对照组(control,不干预)、模型组(model,10μg/mL的LPS处理)、低/中/高浓度组(0.5、1、1.5 mmol/L罗哌卡因干预模型组)。然后将细胞分为对照组、模型组、罗哌卡因组(1.5 mmol/L罗哌卡因干预模型组)、罗哌卡因+抑制剂组(1μmol/L NF-κB通路抑制剂BAY 11-7082干预罗哌卡因组)、抑制剂组(1μmol/L NF-κB通路抑制剂BAY 11-7082干预罗哌卡因组)和罗哌卡因+激活剂组(1μmol/L NF-κB通路激活剂Prostratin干预罗哌卡因组),干预24 h。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-6、IL-8及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;EdU掺入法检测增殖率、Hoechst 33258染色法检测凋亡率;Western blot检测周期蛋白D1(cyclinD1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、NLRP3和NF-κB通路相关蛋白水平。结果与对照组相比,模型组细胞活力降低,高浓度罗哌卡因组活力升高(P<0.05)。与对照组相比,模型组细胞炎性因子IL-6、IL-8、TNF-α浓度、凋亡率和caspase-3、NLRP3、磷酸化(p)-NF-κB蛋白水平上升(P<0.05),增殖率和cycilnD1蛋白水平下降(P<0.05);与模型组相比,罗哌卡因组和抑制剂组IL-6、IL-8、TNF-α浓度、凋亡率和caspase-3、NLRP3、p-NF-κB蛋白水平下降(P<0.05),增殖能力和cycilnD1蛋白水平上升(P<0.05);与罗哌卡因组相比,罗哌卡因+抑制剂组上述指标趋势变化更加显著(P<0.05),罗哌卡因+激动剂组则显著扭转了这些指标趋势(P<0.05)。结论罗哌卡因抑制LPS诱导的NCM-460细胞凋亡,促进增殖,NF-κB通路可能参与起作用。

DADS负调控uPAR/uPA信号抑制人结肠癌SW480细胞侵袭和EMT

目的探讨二烯丙基二硫(DADS)抑制人结肠癌SW480细胞侵袭和上皮间质转化(EMT)的可能机制。方法免疫组化检测结肠癌组织中尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)受体(uPAR)的表达。基因转染技术构建uPAR过表达细胞。实验分为SW480组、SW480+DADS组、uPAR组、uPAR+DADS组。迁移、侵袭实检测各组细胞迁移与侵袭能力。RT-PCR、Western blotting分别检测相关信号通路分子mRAN及其蛋白的表达。裸鼠实验验证DADS对uPAR过表达SW480细胞移植瘤的影响。结果结肠癌组织中uPAR表达显著高于癌旁正常黏膜组织(P<0.05)。成功构建稳定uPAR过表达SW480细胞。uPAR过表达上调uPA、uPAR表达,而DADS下调uPA、uPAR表达。uPAR过表达增强细胞迁移、侵袭能力,DADS抑制uPAR过表达细胞的迁移、侵袭能力。DADS通过下调Vimentin、基质金属蛋白酶(MMP-9)表达,上调E-cadherin、组织金属蛋白酶抑制物(TIMP)-3表达抑制SW480细胞EMT。裸鼠实验结果显示,DADS可体内抑制uPAR过表达SW480细胞EMT。结论DADS通过负调控uPAR/uPA信号体内外抑制人结肠癌SW480细胞侵袭和EMT。

信号转导子与转录活化子6(STAT6)在人结肠癌细胞株HT29(STAT6^(high))、Caco2(STAT6^(null))细胞凋亡中的作用

目的通过分析信号转导子与转录活化子6(signal transducer and activator of transcription 6,STAT6)活化状态时不同的人结肠癌细胞株HT29(STAT6high)和Caco2(STAT6null)凋亡情况来研究STAT6与细胞凋亡之间的关系,并从分子水平探讨其可能的机制。方法采用流式细胞仪检测人结肠癌细胞株HT29(STAT6high)和Caco2(STAT6null)细胞凋亡的情况,比较其差异;同时采用RT-PCR检测人结肠癌细胞株HT29(STAT6high)和Caco2(STAT6null)中凋亡相关基因(Caspase家族蛋白Caspase3 mRNA、Caspase7 mRNA和Bcl-2家族蛋白凋亡抑制蛋白Bcl-2 mRNA、Bcl-xl mRNA、促凋亡蛋白Hrk mRNA)的表达水平,比较其差异。结果人结肠癌细胞株Caco2(STAT6null)细胞早期凋亡率为(13.30±0.73)%,明显高于HT29(STAT6high)的(2.00±0.43)%(P<0.01)。RT-PCR显示,人结肠癌细胞株Caco2(STAT6null)中Caspase3 mRNA和Caspase7 mRNA表达水平均明显高于HT29(STAT6high)(均P<0.01)。人结肠癌细胞株Caco2(STAT6null)中凋亡抑制蛋白Bcl-2 mRNA、Bcl-xl mR-NA、促凋亡蛋白Hrk mRNA表达水平均明显高于HT29(STAT6high)(均P<0.01)。人结肠癌细胞株Caco2(STAT6null)、HT29(STAT6high)中STAT6活性水平与Caspase7、Caspase3、Bcl-2、Bcl-xl、Hrk mRNA表达水平均呈负相关(r=-0.514、-0.562、-0.518、-0.512、-0.426,均P<0.05)。结论 STAT6可能参与结肠癌细胞凋亡,其机制可能与凋亡相关基因的表达有关。

凋亡素基因对人结肠癌细胞作用的研究

目的探讨凋亡素基因的导入对人结肠癌细胞的影响。方法将凋亡素基因VP3克隆入真核表达载体pEGFP-C2,构建成重组质粒pEGFP-VP3。用脂质体转染法将pEGFP-C2和pEGFP-VP3分组分别转染人类结肠癌细胞(Lovo)和小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3),通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白在不同组细胞中的定位、表达及细胞的生长、凋亡情况,MTT法测定不同组细胞的生长曲线,并用An-nexinV-FITC流式细胞技术检测细胞的凋亡率。结果在Lovo/EGFP组和3T3/EGFP-VP3组细胞中,EGFP均匀分布于细胞中,细胞形态无明显变化,细胞凋亡率较非转染细胞组亦无明显增加。而在Lovo/EGFP-VP3组细胞中,EGFP-VP3以荧光颗粒形式集中在细胞核,并逐渐变粗,最后细胞碎裂成片状,流式细胞技术检测Lovo/EGFP-VP3组的细胞凋亡率明显高于其他对照组(P<0.01)。结论pEGFP-VP3可诱导人类结肠癌细胞凋亡。

δ-榄香烯通过线粒体途径诱导人结肠癌细胞DLD-1凋亡的研究

目的探讨δ-榄香烯诱导人结肠癌细胞DLD-1凋亡的作用及其机制。方法采用MTT法考察了δ-榄香烯对肿瘤细胞增殖的影响;ELISA法定量检测细胞DNA片段化;Annexin-VFITC/PI流式细胞术检测细胞PS外翻的影响;用Westernblot分析药物对蛋白质表达的影响。结果δ-榄香烯明显抑制DLD-1细胞的增殖。DNA核小体的检测、细胞PS外翻证实δ-榄香烯的抗肿瘤作用是以诱导肿瘤细胞凋亡的方式产生的;Bax蛋白转入线粒体内,细胞色素C的释放以及凋亡因子AIF从线粒体释放入胞质,δ-榄香烯激活caspase信号通路,引起pro-caspase-3蛋白水解为caspase-3,进一步发生PARP底物的断裂。结论δ-榄香烯通过线粒体途径诱导DLD-1细胞发生凋亡。

乳酸菌体外粘附人结肠腺癌细胞系HT-29细胞的研究

用实验室保存的24株乳酸菌菌种做了对人结肠腺癌细胞系HT-29细胞的体外粘附性试验。发现双歧杆菌的粘附能力较高,平均在 10.5个/细胞;乳杆菌的粘附能力较低,平均在 3.2个/细胞;球菌的粘附能力很低,平均在 2.3个/细胞。其中双歧杆菌中 Bifidobacterium bifidum 02菌株粘附能力最好,达到(18.4±2.7)个/细胞。乳杆菌中 Lactobacillus acidophilus 99101粘附能力最好,达到(10.2±1.8)个/细胞。同时,同种不同株的乳酸菌粘附能力有差异,而同属中,来自人粪便与来自猪粪便的乳酸菌的粘附能力没有明显差异。

藏灵菇嗜热链球菌胞外多糖对人结肠癌细胞的增殖抑制

探讨从藏灵菇中筛选的嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus)所产胞外多糖(exopolysaccharide,EPS)对人结肠癌HCT-8细胞增殖的影响。采用CCK-8法测定EPS对HCT-8细胞生长的抑制率;形态学观察EPS对HCT-8细胞的杀伤作用;流式细胞术检测EPS对HCT-8细胞周期的影响。结果显示:EPS对HCT-8细胞增殖有明显的抑制作用,且呈时间-剂量依赖性;倒置显微镜下观察部分细胞脱壁、核碎裂、固缩,细胞悬浮坏死;细胞周期分析显示G1期细胞百分率增大。说明EPS通过直接杀伤人结肠癌HCT-8细胞,使细胞周期阻滞于G1期而抑制细胞增殖,从而发挥抗肿瘤作用。

藏灵菇源干酪乳杆菌KL1胞外多糖抑制人结肠癌细胞增殖的研究

分离纯化藏灵菇源干酪乳杆菌KL1胞外多糖(EPS),研究EPS纯品对HCT-8人结肠癌细胞的增殖抑制和诱导细胞凋亡作用。利用Sepharose CL-6B凝胶柱探讨干酪乳杆菌KL1菌株EPS粗品的纯化条件,应用紫外全波长扫描及苯酚-硫酸法鉴定EPS纯度;采用CCK-8法和Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒研究EPS对HCT-8人结肠癌细胞的增殖抑制和凋亡作用。结果表明:在0.02～0.12mol/L磷酸盐缓冲液梯度洗脱、流速3mL/min、样品上样质量浓度15.0mg/mL、样品上样量2.0mL的纯化条件下获得EPSa和EPSb两个单一组分的胞外多糖,其纯度分别为91.67%和82.86%。EPSa处理HCT-8人结肠癌细胞体外实验发现,EPSa对HCT-8细胞的增殖有抑制作用,以及诱导细胞凋亡的发生,且细胞生长抑制率呈时间-剂量依赖性。提示藏灵菇源干酪乳杆菌KL1菌株的EPSa有抑制结肠癌细胞增殖的生物活性。

全反式维甲酸提高人结肠癌LoVo细胞对奥沙利铂敏感性

目的探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,AT-RA)提高人结肠癌LoVo细胞对奥沙利铂的药物敏感性和机制。方法MTT法筛选ATRA和奥沙利铂实验浓度。流式细胞仪检测ATRA对细胞周期的影响。分别用ATRA、奥沙利铂、ATRA联合奥沙利铂作用LoVo细胞;MTT法检测药物抑制率,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率,原子光谱吸收仪检测细胞DNA含铂(Pt)量。结果奥沙利铂抑制LoVo细胞作用呈量效依赖;其GI50(GI,inhibit net cell growth by%)为6.5mg.L-1,主要阻滞肿瘤细胞在S期。ATRA抑制LoVo细胞作用呈时效和量效依赖。1.0μmol.L-1ATRA作用12h后G1期细胞增多;48h后伴S期、G2/M期细胞减少并明显抑制肿瘤细胞增殖;作用12h至48h后联合奥沙利铂,两药联合由相加作用转变为协同作用;联合用药后S期细胞明显增多,细胞DNA含Pt量明显增加,但不提高奥沙利铂凋亡率。结论小剂量ATRA通过改变LoVo细胞周期和提高细胞DNA含Pt量,明显增加肿瘤细胞对奥沙利铂的药物敏感性。

NF-κB对人结肠癌细胞上皮间质转化及侵袭转移的影响

目的:研究核转录因子-κB(nuclear factorkappa B,NF-κB)对人结肠癌细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及侵袭和转移的影响.方法:将人结肠癌HCT116细胞分为NF-κB激活组,抑制组和空白对照组.分别用NF-κB活化激活剂肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α),终浓度为20 ng/mL,NF-κB活化抑制剂吡咯烷二硫代甲酸铵(ammonium pyrrolidinedithiocarbamate,PDTC),终浓度为20μmol/L干预HCT116细胞4 d.采用相差显微镜观察细胞形态变化,Transwell小室模型观察细胞侵袭迁移能力变化,Western blot检测p65、P-p65、E-cadherin和N-cadherin的蛋白表达,QT-PCR检测E-cadherin和N-cadherin的mRNA表达.结果:TNF-α可上调P-p65和N-cadherin的表达,抑制E-cadherin的表达,同时明显促进HCT116细胞的EMT形态发生(如细长丝状伪足和纺锤状细胞形成),并使侵袭和迁移能力增强;相反,PDTC则降低P-p65和N-cadherin的表达,而增加E-cadherin的表达,且抑制细胞的EMT形态发生(如伪足不明显,细胞成多角形并紧密排列)及减弱细胞的侵袭迁移能力.对照组、TNF-α组及PDTC组的侵袭细胞数(97.75±3.77 vs 118.50±1.95,51.00±1.83);迁移细胞数(140.00±4.32 vs 167.00±6.36,80.00±2.53);N-cadherin mRNA的表达(1.00±0.00 vs 3.90±0.47,0.08±0.02);E-cadherin mRNA的表达(1.00±0.00 vs0.26±0.08,6.03±0.59,均P<0.05).结论:NF-κB可以促进结肠癌HCT116细胞的EMT发生、侵袭和转移.

美洛昔康对人结肠癌细胞增殖、迁移和PTEN基因表达的影响

目的研究美洛昔康(meloxicam,Mel)对人结直肠癌LoVo细胞增殖和迁移能力的抑制作用及其对抑癌基因PTEN表达水平的影响。方法以人结肠癌细胞株LoVo为试验对象,通过集落形成试验分析Mel对LoVo细胞增殖的影响,Western blot检测Mel对PCNA蛋白和PTEN蛋白表达水平的影响;细胞迁移试验分析Mel对LoVo细胞活性的影响;RT-PCR检测Mel对LoVo细胞中PTEN m RNA表达水平的影响;使用重组腺病毒作为干预手段,Annexin-V试验验证Mel是否通过PTEN发挥抑癌作用。结果与对照组相比,Mel能明显抑制LoVo细胞的集落形成能力,能抑制LoVo细胞的细胞核增殖抗原PCNA的蛋白表达水平,80μmol·L^(-1)Mel干预48 h,可将LoVo细胞中PCNA的蛋白表达水平抑制到61.57%±2.81%(T=7.086,P=0.019);Mel能上调LoVo细胞内抑癌基因PTEN的m RNA表达水平,80μmol·L^(-1)Mel干预48 h后PTEN的m RNA表达水平上调至160.43%±4.71%(T=24.244,P=0.002);Mel能上调LoVo细胞内PTEN的蛋白表达水平,80μmol·L^(-1)Mel干预48 h后PTEN的蛋白表达水平上调至152.63%±3.33%(T=27.359,P=0.001);Annexin-V试验结果说明Mel的对LoVo细胞的抑制作用可能与上调PTEN基因表达有关。结论Mel能抑制LoV o细胞的增殖和迁移,其机制可能与上调PTEN的表达水平有关。

乌骨藤提取物对人结肠腺癌细胞增殖的实验研究

目的:研究乌骨藤提取物对体外培养的人肠癌细胞(Lovo)增殖的影响。方法:用两种方法(A、B)制备乌骨藤提取物,分别采用不同浓度作用Lovo细胞,通过细胞形态学和MTT法检测乌骨藤提取物对Lovo细胞增殖的影响。结果:乌骨藤提取物A对细胞的最大无毒浓度约为0.648 mg/mL;药物浓度在0.389、0.648、1.08、1.8、3 mg/mL时的抑制率分别为6.58%、8.24%、13.02%、59.69%、66.23%,用回归法求出乌骨藤提取物A对Lovo细胞增殖的半数抑制浓度(IC_(50))为1.625 mg/mL。乌骨藤提取物B对细胞的最大无毒浓度约为0.648 mg/mL,药物浓度在0.389、0.648、1.08、1.8、3 mg/mL时的抑制率分别为14.49%、15.48%、29.69%、63.26%、64.05%,用回归法求出乌骨藤提取物B对Lovo细胞增殖的半数,IC_(50)为1.84 mg/mL。结论:乌骨藤提取物对体外培养的Lovo细胞的增殖有明显抑制作用。

姜黄素对人结肠癌SW620细胞凋亡机制的影响

目的探讨体外姜黄素对人结肠癌SW620细胞生长及凋亡的影响。方法体外培养SW620细胞,用不同浓度的姜黄素作用为实验组,同时设对照组,以CCK8法测细胞增殖抑制作用、流式细胞仪检测细胞凋亡及p53和Bcl-2蛋白表达情况。结果不同浓度姜黄素作用SW620细胞24 h增殖抑制显著(P﹤0.05),其抑制效应具有剂量依赖性,同时诱导SW620细胞凋亡、上调p53基因表达、下调Bcl-2基因表达(P﹤0.05)。结论姜黄素可抑制SW620细胞的生长且具有剂量依赖性,并可诱导肿瘤细胞凋亡,其抗肿瘤效应可能与细胞凋亡相关基因表达的调控有关。

丁酸钠对人结肠癌细胞株HCT-116细胞凋亡及基质相互作用分子和Orai1蛋白活性的影响

目的研究丁酸钠诱导结肠癌细胞株HCT-116细胞凋亡机制。方法 hoechst 33342和AnnexinV+PI检测丁酸钠诱导结肠癌细胞HCT-116的凋亡作用;免疫荧光法检测丁酸钠对基质相互作用分子(STIMl)和钙离子通道Orail蛋白在细胞内定位的影响;免疫印迹法检测STIMl和Orail蛋白表达量的变化。结果丁酸钠可诱导结肠癌细胞HCT-116凋亡、STIMl移位并与Orail具有共定位现象。结论丁酸钠可通过调节STIM1和Orail在结肠癌细胞中的定位而促发细胞凋亡。

刚地弓形虫细胞培养上清对人结肠癌细胞sw480增殖与凋亡的影响

目的观察刚地弓形虫RH株速殖子与人结肠癌sw480细胞系共培养上清对人结肠癌sw480细胞增殖的影响和诱导其凋亡与坏死的情况。方法取对数生长期的人结肠癌sw480细胞(1×106),建立弓形虫RH株速殖子数目分别为2×106、4×106、8×106、16×106的共培养模型,观察弓形虫速殖子在sw480细胞中的寄生,提取共同孵育72h后的培养上清,以新鲜培养基稀释为半量,体外作用人结肠癌sw480细胞12h、24h、48h、72h,CKK-8法检测吸光度(A450值)并计算抑制率;Annexin-v-FITC/PI染色细胞后上流式细胞仪检测细胞凋亡与坏死率;琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡DNA条带;透射电镜和荧光显微镜观察细胞形态学改变。结果弓形虫RH株速殖子可在人结肠癌sw480细胞内寄生和增殖。CKK-8法检测结果显示上述共培养上清对sw480细胞增殖抑制率随上清作用时间延长均明显增大,48h最大抑制率达44.55%。流式细胞仪检测显示实验组sw480细胞早期凋亡率和晚期凋亡与坏死率随上清作用时间延长均明显增加,48h早期凋亡率达最高值(11.54%),48h以后早期凋亡率下降,晚期凋亡和坏死率显著上升,72h总死亡率可达46.11%,细胞杀伤效果明显;琼脂糖凝胶电泳显示典型的DNA云梯状条带;荧光显微镜和透射电镜观察到细胞凋亡和坏死典型形态。结论弓形虫RH株速殖子与人结肠癌sw480细胞共培养上清对体外培养的sw480细胞增殖有明显的抑制作用,并可诱导sw480细胞凋亡与坏死。

人结肠癌耐药细胞系HT29／L-OHP的建立及其生物学特性

目的建立人结肠癌奥沙利铂耐药细胞系HT29/L-OHP,探讨结肠癌对奥沙利铂(Oxaliplatin,L-OHP)产生耐药的特征规律和耐药的机制。方法采用逐步递增L-OHP浓度,间歇作用体外诱导法培养建立了人结肠癌L-OHP耐药细胞模型HT29/L-OHP。MTT法测定生长曲线、交叉耐药性和耐药指数;并用光镜、电镜、流式细胞仪(FCM)等方法观察其一般生物学特性的改变。结果历时3个月建成了L-OHP耐药细胞模型HT29/L-OHP,其耐药性能稳定,耐药指数为10.64;并且与5-氟尿嘧啶、长春新碱、阿霉素等多种抗癌药有不同程度的交叉耐药性。HT29/L-OHP的细胞形态及染色体数目发生了改变;体外细胞群体倍增时间较亲代细胞延长29.71h;细胞周期分析结果显示其S期与G0/G1期细胞减少、G2/M期细胞增多。结论HT29/L-OHP细胞是模拟临床用药特点建立的耐药性较稳定的多药耐药细胞,具有耐药细胞的基本生物学特性,是研究L-OHP耐药机制及筛选逆转剂的理想细胞模型。

Sphk1对人结肠癌细胞株Lovo增殖与侵袭的影响及其作用机制

目的:研究Sphk1对结肠癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响并探讨其机制.方法:将人结肠癌Lovo细胞株分成Sphk1激活组,Sphk1抑制组,空白对照组.以佛波醇-12-豆蔻酸酯-13-乙酸酯(phorbol12-myristate13-acetate,PMA)为Sphk1激活剂(终浓度为100nmol/L),N,N-二甲基鞘胺醇(erythro-sphingo-sineN,N-Dimethyl,DMS)为Sphk1抑制剂(终浓度为50μmol/L)处理Lovo细胞24h后,用MTT方法测定细胞的增殖活性,用流式细胞术检测细胞凋亡,用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,用Westernblot测定细胞Sphk1、ERK1/2、p-ERK1/2、NF-κBp65蛋白水平的变化.结果:PMA可以明显诱导Sphk1蛋白的表达,促进Lovo细胞生长,抑制细胞的凋亡,并促进细胞的侵袭;相反,DMS明显抑制Sphk1的表达,抑制细胞生长,促进细胞的凋亡,并抑制细胞的侵袭.Sphk1激活组、对照组、抑制组的细胞凋亡率分别是9.15%,16.25%,32.58%.与对照组相比,Sphk1激活组、抑制组的细胞相对侵袭率分别是190.57%,9.65%,差异有统计学意义(均P<0.01).PMA诱导Sphk1表达,同时伴有ERK1/2、p-ERK1/2和NF-κBp65蛋白表达的上调,DMS抑制Sphk1表达,可抑制ERK1/2、p-ERK1/2、NF-κBp65蛋白的表达.结论:Sphk1可促进Lovo细胞的生长增殖与侵袭并抑制细胞的凋亡,其机制可能与ERK1/2和NF-κB信号通路的激活有关.

粉防己碱对人结肠癌细胞增殖的影响

目的 :观察粉防己碱对人结肠癌细胞 H T2 9增殖的影响 ,并初步探讨其作用机制。方法 :采用流式细胞仪分析细胞周期变化 ,并测定细胞内游离钙离子浓度水平 ;MTT比色法测定细胞增殖情况。结果 :2～ 10 μg/m L 的粉防己碱 (Tet)能明显抑制 HT2 9细胞的增殖 (P<0 .0 5 ) ,其半数抑制浓度 (IC5 0 )约为 8μg/m L。 8μg/m L 的 Tet可以使细胞内游离钙离子浓度 (〔Ca2 +〕i)水平明显降低 (P<0 .0 1)。不同浓度的 Tet可使 HT2 9细胞 C1 期或 G2 + M期明显增加 ,S期细胞明显减少 (P<0 .0 1)。结论 :粉防己碱通过抑制钙离子信号传递途径 ,使细胞周期进行受阻 ,可能是其抑制 HT2 9细胞增殖的一个主要机制。

神经酰胺诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡的研究

目的探讨外源性神经酰胺诱导人结肠癌HT-29细胞的凋亡作用及对Bcl-2家族蛋白基因表达的影响。方法不同浓度C2-神经酰胺处理HT-29细胞,采用Hoechest荧光染色和琼脂糖凝胶电泳方法检测细胞凋亡,RT-PCR方法检测Bcl-2、Bcl-xl、Bax、Bad和Bid基因表达水平。结果C2-神经酰胺诱导HT-29细胞发生核染色质断裂、出现凋亡小体等典型凋亡改变,50μmol/L神经酰胺作用12和24小时凋亡细胞率分别达到64·7%和81·3%。同时神经酰胺使Bax、Bad和Bid基因表达水平增高,使Bcl-2和Bcl-xl基因表达水平减弱,Bcl-2与Bax比值下降,呈现剂量-效应关系。结论外源性神经酰胺能通过上调或下调Bcl-2家族基因表达水平诱导人结肠癌HT-29细胞发生凋亡。

新城疫病毒7793株对人结肠癌细胞的杀伤作用

目的:研究新城疫病毒NDV7793对人结肠癌细胞的体外杀伤作用,为结肠癌的生物疗法奠定基础。方法:通过蚀斑实验纯化病毒并测定纯化的NDV7793株的感染力;用乳酸脱氢酶微量释放法测定纯化病毒对人LoVo和Ls174t结肠癌细胞株的杀伤作用并且通过血凝实验测定病毒在不同细胞中的增殖力。结果:NDV7793在感染细胞96h后出现直径约为0.5mm左右的空斑,PFU为1.25×107个/ml,为弱毒株;NDV7793对LoVo和Ls174t人结肠癌细胞株有明显的杀伤作用,而且杀伤作用的强度与病毒作用的时间和病毒的浓度呈正相关的关系;NDV7793可以在肠癌细胞中生长复制,该病毒株在人结肠癌细胞株LoVo的复制能力强于Ls174t。结论:NDV7793具有较强的选择性杀伤人结肠癌细胞的作用,且为弱毒株,这株病毒具备肿瘤生物治疗的潜能。