人参皂苷Rg3对人结肠癌细胞株SW480增殖的影响及其作用机制

目的观察人参皂苷Rg3对人结肠癌细胞株SW480增殖的影响,并探讨其可能作用机制。方法取对数生长期SW480细胞,分别加入含160、80、40、0μmol/L人参皂苷Rg3的储备液(分别计为A、B、C、D组)培养24 h,采用MTT法检测人参皂苷Rg3对SW480细胞增殖活性(OD值)的影响,倒置显微镜观察人参皂苷Rg3诱导SW480细胞凋亡形态学改变,流式细胞术检测SW480细胞凋亡率,RT-PCR法检测细胞间黏附分子1(ICAM-1)、闭锁蛋白(Occludin)mRNA,Western blotting法检测ICAM-1、Occludin蛋白。结果与D组比较,A、B、C组细胞OD值下降,凋亡率增加,ICAM-1 mRNA、蛋白表达降低,Occludin mRNA、蛋白表达升高(P均<0.05)。结论人参皂苷Rg3可抑制SW480细胞增殖,促进其凋亡,机制可能与ICAM-1表达下调、Occludin表达上调有关。

miRNA-224-3p对人结肠癌细胞株SW480的增殖及侵袭的作用

目的探讨低表达miRNA-224-3p对结肠癌细胞株SW480增殖及侵袭的作用机制。方法采用siRNA技术沉默miRNA-224-3p在结肠癌细胞株SW480中的表达,实验分为si RNA组和NC组;采用CCK8法检测细胞增殖率;采用流式细胞术检测细胞周期分布;采用Western blot检测细胞中miRNA-224-3p、Cyclin D1以及CDK4蛋白的表达;采用Transwell小室检测细胞侵袭力。结果转染si RNA后,siRNA组中miRNA-224-3p蛋白表达明显低于NC组(P<0.05);CCK8结果表明在结肠癌细胞株在转染24 h、48 h和72 h时的细胞增殖率分别明显低于NC组(P<0.05);流式检测结果表明在siRNA组中,处于G0~G1期的SW480的细胞数量显著高于NC组(P<0.05),处于S期的SW480细胞数量显著低于NC组(P<0.05);Western blot结果表明siRNA组中的Cyclin D1和CDK4蛋白表达明显高于NC组(均P<0.05);Transwell小室检测表明siRNA组细胞的侵袭力明显低于NC组(P<0.05)。结论低表达miRNA-224-3p可显著抑制结肠癌细胞株SW480增殖和侵袭,其机制可能与阻滞细胞周期进程有关。

天马颗粒剂抑制人结肠癌细胞株SW480增殖机制研究

目的:探讨天马颗粒剂抑制人结肠癌细胞株SW480增殖的作用,并对其增殖抑制作用机制进行初步探讨。方法:采用不同质量浓度的天马颗粒剂(10^(-1)g·mL^(-1)、10^(-2)g·mL^(-1)、10^(-3)g·mL^(-1)及10^(-4)g·mL^(-1))处理人结肠癌细胞株SW480,同时设立空白对照组(RPMI 1640培养液处理)及阳性对照组(以5-氟尿嘧啶处理)。观察SW480细胞的形态学动态变化,以MTT法检测各组SW480细胞的增殖情况,另以速率法检测各组SW480细胞中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)比活性的变化情况。建立人结肠癌细胞株SW480免疫抑制小鼠肾包膜下移植瘤模型,同时设立天马颗粒剂组(天马颗粒剂灌胃),空白对照组(生理盐水灌胃)及阳性对照组(5-氟尿嘧啶腹腔注射),8 d后采集肿瘤组织,以免疫组织化学法及图像分析技术定量检测各组移植瘤SW480细胞中Ki-67及PCNA基因的表达情况。结果:随着天马颗粒剂质量浓度的增加,SW480细胞逐渐稀疏,散在生长,细胞变大,透明度差,颗粒增多;当天马颗粒剂质量浓度为10^(-4)g·mL^(-1)时,SW480细胞颜色加深,且部分细胞从瓶壁脱落,甚至部分细胞可见坏死崩解的碎片;实验组10^(-1)g·mL^(-1)、10^(-2)g·mL^(-1)、10^(-3)g·mL^(-1)及10^(-4)g·mL^(-1)的天马颗粒剂均可显著抑制SW480细胞增殖,且随天马颗粒剂作用时间延长及质量浓度增大,SW480活细胞计数逐渐降低(P<0.05);随着质量浓度的增加OD值逐渐降低,增殖抑制率逐渐升高(P<0.05);10^(-1)g·mL^(-1)、10^(-2)g·mL^(-1)、10^(-3)g·mL^(-1)及10^(-4)g·mL^(-1)的天马颗粒剂均会使SW480细胞的AKP比活性升高,且以10^(-2)g·mL^(-1)时的AKP比活性最高,且显著高于其他各组(P<0.05或P<0.01)。阳性对照组AKP比活性与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);Ki-67及PCNA基因主要表达于SW480细胞的细胞核,天马颗粒剂组及阳性对照组Ki-67及PCNA基因阳性着色较空白对照组明显减少,其表达的面积均值及积分光密度均显著降低(P<0.01)。结论:天马颗粒剂可显著抑制人结肠癌细胞株SW480增殖,原因可能与其诱导SW480细胞成熟分化或抑制SW480细胞Ki-67及PCNA基因表达相关。

羽扇豆醇对人共刺激细胞及结肠癌细胞株SW480的影响

目的：共刺激细胞是一种对肿瘤细胞有杀伤作用的 NK样T细胞，既往研究表明羽扇豆醇作为一种天然植物提取物，能改变NK细胞、γδT细胞的生长及其对肿瘤细胞的作用。文中主要探讨羽扇豆醇对人共刺激细胞杀伤结肠癌细胞株 SW480的影响。方法取健康人外周血单个核细胞在体外经多种细胞因子诱导为共刺激细胞；不同浓度的羽扇豆醇在作用于共刺激细胞及结肠癌细胞株不同时间段后，甲基偶唑蓝（ MTT）法检测羽扇豆醇对共刺激细胞及结肠癌细胞株 SW480生长的影响；乳酸脱氢酶（ LDH）法检测共刺激细胞对结肠癌细胞株SW480的杀伤活性。结果羽扇豆醇浓度在0．1～200.0μg/mL时对共刺激细胞的生长有促进作用，对结肠癌细胞株SW480有抑制作用；羽扇豆醇诱导后，共刺激细胞对SW480的杀伤活性增强，浓度为12．5 mg/L时与空白对照比较的差异有统计学意义（76％vs 40％， P＜0．05）。结论羽扇豆醇能促进共刺激细胞的增殖，抑制结肠癌细胞株SW480的生长，并能增加SW480对共刺激细胞的敏感性，增强共刺激细胞对SW480细胞株的杀伤能力。

全反式维甲酸提高人结肠癌细胞亚株SW480/M5对奥沙利铂敏感性

目的探讨全反式维甲酸(all-trans retinoicacid,ATRA)提高人结肠癌细胞亚株SW480/M5对奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)敏感性的可能机制。方法 MTT法筛选ATRA和L-OHP实验浓度。流式细胞仪检测ATRA对肿瘤细胞周期影响。分别用ATRA、L-OHP、ATRA联合L-OHP作用SW480/M5细胞,MTT法检测药物对肿瘤细胞抑制率,流式细胞仪检测肿瘤细胞周期及凋亡率,原子光谱吸收仪检测肿瘤细胞DNA含铂(Pt)量。结果 L-OHP抑制SW480/M5细胞增殖的GI50为58.0mg/L,主要阻滞肿瘤细胞在S和G2/M期。ATRA8.0μmol/L作用24小时后,G1期细胞减少,S期细胞增多;作用72小时后,S期和G2/M期细胞增加并明显抑制肿瘤细胞增殖。8.0μmol/LATRA作用至48小时后联合L-OHP,两药联合由相加作用转变为协同作用;联合用药后S期和G2/M期细胞明显增多,细胞DNA含Pt量显著增加,呈时效依赖性。相对于单独用药,联合用药并不上调肿瘤细胞凋亡率。结论 ATRA通过改变SW480/M5细胞周期和提高细胞DNA含Pt量,明显增加肿瘤细胞对L-OHP敏感性。

瘤果黑种草子总黄酮成分对结肠癌细胞株SW480增殖、迁移能力的影响及机制

目的探讨瘤果黑种草子总黄酮成分对人结肠癌细胞株SW480增殖、迁移能力的影响及可能的作用机制。方法用不同浓度的瘤果黑种草子总黄酮成分药物干预的结肠癌细胞株SW480,MTT法检测SW480细胞株的增殖能力,倒置显微镜观察对结肠癌细胞株SW480细胞形态的影响,划痕实验检测对细胞的迁移能力的影响,实时荧光定量PCR检测瘤果黑种草子总黄酮成分对细胞中BECN1、MAPILC3B基因表达的影响。结果瘤果黑种草子总黄酮对人结肠癌细胞株SW480体外增殖的抑制作用明显,并呈浓度依赖性抑制人结肠癌细胞株SW480的增殖,在25μg/mL时达到最大的抑制率,抑制率为81.28%。倒置显微镜观察,用瘤果黑种草子总黄酮成分药物干预后,人结肠癌细胞株SW480形态学发生明显变化,瘤果黑种草子总黄酮成分可抑制人结肠癌细胞株SW480迁移能力,同时,可上调自噬相关基因BECN1、MAPILC3B的表达量。结论瘤果黑种草子总黄酮成分可抑制人结肠癌细胞株SW480的增殖、迁移能力,机制可能与能影响细胞中BECN1、MAPILC3B基因表达量有关。

九香虫含药血清对人结肠癌细胞SW480凋亡相关因子FADD·p53表达作用的研究

[目的]观察九香虫含药血清对人结肠癌细胞SW480增殖及凋亡相关因子FADD、p53表达的影响,初步探讨其诱导结肠癌细胞凋亡的作用机制。[方法]20只雄性SD大鼠按随机数字表法分为2组(生理盐水对照组和九香虫含药血清组),每组10只。其中,九香虫含药血清组给予九香虫煎剂灌胃5 d后,制备九香虫含药血清,按不同浓度体外作用于SW480细胞72 h。CCK8细胞增殖试验检测其对SW480细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测其对SW480细胞凋亡的诱导作用,Western blot法、荧光定量PCR法检测细胞中FADD、p53蛋白及mRNA的表达。[结果]各浓度九香虫含药血清对SW480细胞生长均有抑制作用,且明显促进其凋亡,凋亡率明显高于对照组(P<0.01)。Western bolt及荧光定量PCR结果表明,九香虫含药血清干预可使FADD表达明显增强,p53表达明显减弱。[结论]九香虫含药血清可诱导人结肠癌细胞凋亡,并影响凋亡相关因子p53、FADD的表达,从而达到抗肿瘤作用。

刚地弓形虫细胞培养上清对人结肠癌细胞sw480增殖与凋亡的影响

目的观察刚地弓形虫RH株速殖子与人结肠癌sw480细胞系共培养上清对人结肠癌sw480细胞增殖的影响和诱导其凋亡与坏死的情况。方法取对数生长期的人结肠癌sw480细胞(1×106),建立弓形虫RH株速殖子数目分别为2×106、4×106、8×106、16×106的共培养模型,观察弓形虫速殖子在sw480细胞中的寄生,提取共同孵育72h后的培养上清,以新鲜培养基稀释为半量,体外作用人结肠癌sw480细胞12h、24h、48h、72h,CKK-8法检测吸光度(A450值)并计算抑制率;Annexin-v-FITC/PI染色细胞后上流式细胞仪检测细胞凋亡与坏死率;琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡DNA条带;透射电镜和荧光显微镜观察细胞形态学改变。结果弓形虫RH株速殖子可在人结肠癌sw480细胞内寄生和增殖。CKK-8法检测结果显示上述共培养上清对sw480细胞增殖抑制率随上清作用时间延长均明显增大,48h最大抑制率达44.55%。流式细胞仪检测显示实验组sw480细胞早期凋亡率和晚期凋亡与坏死率随上清作用时间延长均明显增加,48h早期凋亡率达最高值(11.54%),48h以后早期凋亡率下降,晚期凋亡和坏死率显著上升,72h总死亡率可达46.11%,细胞杀伤效果明显;琼脂糖凝胶电泳显示典型的DNA云梯状条带;荧光显微镜和透射电镜观察到细胞凋亡和坏死典型形态。结论弓形虫RH株速殖子与人结肠癌sw480细胞共培养上清对体外培养的sw480细胞增殖有明显的抑制作用,并可诱导sw480细胞凋亡与坏死。

二氢青蒿素对结肠癌细胞系SW480增殖凋亡的影响

目的:研究二氢青蒿素(DHA)对结肠癌细胞系SW480的增殖、凋亡的作用,初步探讨其机制。方法:采用结肠癌细胞SW480为研究对象,观测不同浓度和作用时间的DHA对细胞作用,MTT噻唑蓝比色法检测对细胞的增殖抑制作用,普通光镜观察细胞形态的变化,分别PI单染及Annexin-V双染法流式细胞术分析细胞周期分布和早期凋亡率的变化,免疫细胞化学检测凋亡抑制蛋白Survivin及效应蛋白Caspase-3表达情况。结果:DHA对SW480细胞增殖有抑制作用且呈浓度和时间依赖性。普通光镜下观察SW480呈典型的凋亡形态学改变。流式细胞仪检测细胞阻滞于G0/G1期,随药物剂量增大G0/G1期比例而逐渐增高,S期比例降低,Annexin-V双染法示早期细胞凋亡率呈明显浓度依赖性升高。免疫细胞化学结果示DHA作用48 h后Survivin表达减弱,而Caspase-3表达增强,呈剂量依赖关系。结论:DHA能显著抑制结肠癌细胞生长,影响细胞周期,诱导细胞凋亡,可能与抑制Survivin蛋白表达,促使Caspase-3表达增强有关。

前药热化疗对转CD基因结肠癌细胞SW480的作用机制

目的:探讨5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)热化疗对转染组织特异性胞嘧啶脱氨基酶(cytosinedeaminase,CD)基因的大肠癌细胞SW480的作用及机制.方法:脂质体法将CEA基因顺式转录调控序列(TRS)驱动CD基因的组织特异性逆转录病毒载体G1CEACDNa转导入大肠癌细胞SW480,以G418筛选阳性克隆扩增后,采用水浴加温法,43℃作用30min共3次,同时给予前药5-FC进行敏感试验;RT-PCR法检测目的基因的表达,MTT法检测细胞存活率,电镜检测细胞的形态学变化,流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡.结果:SW480-CEACD细胞在43℃作用30min共3次条件下,CD基因能稳定表达;热疗本身对SW480细胞有一定的杀伤作用(P<0.05),转CD基因后,SW480细胞对5-FC的敏感性明显提高(P<0.01),热疗与前药5-FC合用,对SW480-CEACD的杀伤作用显著大于对未转基因细胞的杀伤作用(P<0.01,t=4.356,n=9),亦大于单独应用5-FC时对SW480-CEACD细胞的杀伤作用(P<0.05,t=2.376,n=9),增加了SW480-CEACD细胞对5-FC的敏感性,电镜及流式细胞术检测显示,细胞死亡以细胞凋亡为主,前药热化疗导致结肠癌细胞SW480产生G1期阻滞,凋亡细胞比例增加.结论:热疗与前药5-FC联合应用,导致结肠癌细胞SW480产生G1期阻滞,细胞凋亡比例增加,提高了CEA组织特异性CD/5-FC系统的靶向性杀伤作用.

舒林酸对结肠癌细胞SW480FasL蛋白表达及诱导淋巴细胞凋亡的影响

目的在体外通过细胞培养,探讨舒林酸对结、直肠癌发生、发展的化学预防机制。方法应用Western blot法检测舒林酸作用前后SW480细胞FasL蛋白表达的变化;应用流式细胞术检测舒林酸作用前后SW480细胞诱导淋巴细胞凋亡率的变化。结果舒林酸处理后较处理前SW480细胞FasL蛋白表达明显降低,而且FasL蛋白表达随舒林酸作用浓度增加显著降低;随舒林酸作用浓度升高,SW480细胞诱导淋巴细胞凋亡率明显降低,不同浓度组比较均有显著性差异(P<0.01)。结论舒林酸降低结肠癌SW480细胞FasL蛋白表达,使SW480细胞诱导Jurkat细胞凋亡率降低,可能是其对结、直肠癌发生、发展的化学预防机制。

抑癌基因DLC-1在结肠癌细胞sw480中表达的研究

目的:初步探讨DLC-1基因在结肠癌细胞sw480中的表达改变及其可能机制;方法:采用RT-PCR和Western blot分析结肠癌细胞CaCo2、sw480的DLC-1表达情况;应用去甲基化药物5—氮杂胞苷处理DLC-1基因阴性表达的细胞株,观察用药前后该细胞DLC-1基因的表达水平、细胞周期、细胞增殖力和侵袭力的影响。结果:CaCo2细胞高表达DLC-1 mRNA,而sw480则呈现表达缺失。经去甲基化药物5—氮杂胞苷处理sw480后,DLC-1 mRNA恢复表达,比较用药前后sw480细胞增殖力下降、细胞周期被阻滞在G2期、细胞侵袭力减弱。结论:DLC-1基因可影响结肠癌细胞sw480的增殖能力和侵袭力,并使结肠癌细胞sw480细胞周期阻滞于G2期,DNA甲基化可能是导致DLC-1在sw480细胞中的失活的一个重要原因。

氧化苦参碱诱导结肠癌细胞株SW1116凋亡的实验研究

目的:探讨氧化苦参碱(OM)抗肿瘤的作用机制,为OM在抗结肠癌方面的应用提供理论依据。方法:采用流式细胞仪检测不同浓度的OM对结肠癌细胞凋亡率及其细胞周期分布的影响。结果:OM具有一定的诱导结肠癌细胞凋亡的作用,可使S期细胞数目减少,随着OM剂量的加大,结肠癌细胞凋亡率增高,与剂量呈正相关。随药物浓度及作用时间的变化,细胞周期分布呈现G1期细胞比例逐渐增高。结论:OM具有一定的抗结肠癌作用,其机制与抑制癌细胞的增殖及促进癌细胞的凋亡有关。

奥沙利铂对人结肠癌细胞LoVo和SW480/M5作用的实验研究

目的探讨体外实验奥沙利铂对人结肠癌LoVo和SW480/M5细胞的抑制作用及其可能机制。方法 MTT法检测不同剂量奥沙利铂对LoVo和SW480/M5细胞增殖的抑制作用。流式细胞仪检测1/2GI_(50)和GI_(50)浓度奥沙利铂对LoVo和SW480/M5细胞周期和早期凋亡的影响。原子光谱吸收仪检测GI_(50)浓度奥沙利铂作用4、8、24h后LoVo和SW480/M5细胞DNA含铂量。结果奥沙利铂对LoVo和SW480/M5细胞增殖的抑制作用呈量效依赖;其GI_(50)浓度:LoVo细胞为6.5mg/L,SW480/M5细胞为58.0mg/L。自然对数增殖周期,LoVo细胞中G_1期细胞比例高于、G_2期细胞比例低于SW480/M5细胞(P<0.05)。奥沙利铂浓度GI_(50)时,降低肿瘤细胞G_1期比例,升高LoVo细胞S期比例较SW480/M5细胞明显,升高SW480/M5细胞而降低LoVo细胞G_2/M期比例。1/2GI_(50)、GI_(50)奥沙利铂均可诱导两种肿瘤细胞发生早期凋亡,但1/2GI_(50)L-OHP促凋亡作用两种肿瘤细胞间无统计学差异,GI_(50)L-OHP对LoVo细胞的促凋亡作用高于SW480/M5细胞。GI_(50)L-OHP奥沙利铂使两种肿瘤细胞DNA含铂量显著升高,并呈时效依赖。LoVo细胞DNA交联铂原子能力高于SW480/M5细胞。结论奥沙利铂主要通过阻滞细胞于S期或(和)G_2/M期并诱导细胞凋亡而抑制两种肿瘤细胞增殖。LoVo细胞对奥沙利铂敏感性明显高于SW480/M5细胞。

Trastuzumab修饰四代聚酰胺-胺型枝状聚合物纳米粒靶向结肠癌细胞SW480的研究

目的该研究旨在探讨Trastuzumab修饰四代聚酰胺-胺型枝状聚合物纳米粒对结肠癌SW480的靶向效果,为构建新型的靶向结肠癌的纳米递送系统提供实验数据。方法 MTT法确定SW480细胞摄取PAMAM NPs和PAMAM-Trastuzumab NPs适当的浓度;通过激光共聚焦和荧光显微镜定性观察SW480对罗丹明B标记的PAMAM NPs和PAMAM-Trastuzumab NPs的摄取;并采用流式细胞计数仪定量研究SW480细胞对两者的摄取差别;尾静脉注射荷SW480瘤裸鼠研究两者体内分布情况。结果 PAMAM NPs和PAMAM-Trastuzumab NPs的浓度在0.2 mg/mL时细胞存活率较高且对SW480细胞的毒性较小。激光共聚焦断层扫描显示SW480细胞可以较好地摄取PAMAM-Trastuzumab NPs,同时流式细胞仪定量显示PAMAM-TrastuzumabNPs在SW480细胞的分布较PAMAM NPs高40%(P<0.05)。PAMAM NPs和PAMAM-Trastuzumab NPs在移植瘤中的分布明显多于其他脏器,并且随时间的延长PAMAM-Trastuzumab NPs体现了更好的靶向效果。结论体外与体内实验证明Trastuzumab修饰的PAMAM NPs对结肠癌细胞SW480有很好的靶向效果,可为结肠癌的靶向治疗提供较好的药物载体。

DcR3-siRNA对SW480结肠癌细胞系放射治疗敏感性的增强作用

目的:观察DcR3对SWF480结肠癌细胞系放疗前疗效评估的价值,以及应用siRNA沉默DcR3基因对增强放疗敏感性的作用.方法:ELISA方法检测经不同剂量放射性137Cs照射的SW480结肠癌细胞中DcR3的含量,应用siRNA技术,构建小双链DNA,克隆入表达载体,转染入经放射性照射的SW480细胞及对照组细胞.应用图像分析系统进行记录细胞集落数量,流式细胞仪检测细胞凋亡状况.结果:与对照组相比,不同时间和不同剂量放射线照射后,SW480细胞DcR3含量均有增加(P<0.05),当照射10G、48h后,其含量明显增加.经5G137Cs照射后的DcR3-siRNA-SW480转染的细胞集落数量减少.DcR3-siRNA照射的SW480细胞M1期峰值明显增高,凋亡小体明显增加.结论:DcR3高表达可能对放射线抵抗性有一定预示作用,DcR3-siRNA可增强SW480结肠癌细胞对放射性照射的敏感性.

甲基化寡核苷酸对SW480结肠癌细胞CHFR基因的诱导灭活作用及其临床意义

目的:探讨甲基化寡核苷酸诱导灭活SW480结肠癌细胞CHFR基因甲基化和表达情况对生物学行为的影响.方法:将与CHFR基因启动子序列互补的甲基化寡核苷酸转染进SW480结肠癌细胞内,分别应用MSP和RT-PCR检测转染前后CHFR基因启动子甲基化状态和mRNA表达.应用MTT法检测转染前后细胞增殖状态.结果:正常未转染寡核苷酸组和对照组SW480结肠癌细胞CHFR基因启动子表现未甲基化状态并表达CHFR基因mRNA.转染互补甲基化寡核苷酸后,CHFR基因启动子被诱导成甲基化状态,mRNA表达受到抑制而缺失,细胞增殖速度明显高于正常未转染寡核苷酸组和对照组;正常未转染寡核苷酸组和对照组细胞增殖速度无明显差异.结论:互补甲基化寡核苷酸可诱导SW480结肠癌细胞CHFR基因启动子甲基化状态并抑制其mRNA表达,促进细胞增殖.

人突变p27重组腺病毒的构建及其在结肠癌细胞SW480中的表达

目的 :为了探讨腺病毒载体用于基因治疗的可行性及突变 p2 7的抗肿瘤特性 ,构建复制缺陷型重组hp2 7mt基因腺病毒。 方法 :hp2 7mt自载体pORF9-hp2 7mt中切出 ,经 2次亚克隆 ,插入到穿梭质粒 pShuttle -CMV中 ,形成转移质粒 pShuttle -CMV -hp2 7mt;然后再用PmeI线性化的 pShuttle -CMV -hp2 7mt转化含腺病毒骨架质粒 pAdeasy - 1的超感受态BJ5 183,使其在细菌内发生同源重组。重组质粒鉴定正确后经PacⅠ酶切 ,转入Ad2 93细胞 ,包装成重组腺病毒Ad -hp2 7mt。采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定 ,用紫外分光光度计进行滴度测定。用重组 p2 7mt的腺病毒Ad - p2 7mt感染大肠癌细胞SW 4 80 ,WesternBlot检测p2 7蛋白的表达。结果 :用含pShuttle -CMV -hp2 7mt转化含 pAdeasy - 1的超感受态BJ5 183后 ,可获得约 30 %的阳性重组质粒。PCR检测表明重组腺病毒DNA中含有目的基因。重组腺病毒滴度为 7.95× 10 15pfu/L。转染大肠癌细胞后 ,p2 7在SW4 80中获得了高表达 ,而未转染细胞和Ad -LacZ转染的细胞中仅有低表达。结论 :腺病毒作为一种基因转移载体 ,可有效介导 p2 7在肿瘤细胞中的表达 ,在肿瘤基因治疗方面具有很大的应用前景。

桑椹汁对结肠癌细胞株SW620增殖和凋亡的影响

为证实桑椹的抗肿瘤功能,以不同浓度桑椹汁处理结肠癌细胞株SW620,应用MTT法对比绘制生长曲线,调查SW620细胞的增殖情况,通过荧光定量PCR、SDS-PAGE检测SW620细胞凋亡相关基因p53的转录及蛋白质表达变化,分析桑椹汁对SW620细胞增殖、凋亡的影响机制。结果显示,桑椹汁对SW620细胞增殖的抑制作用随着桑椹汁浓度的升高而明显增强,以花青素质量浓度为6.267 3×10-3mg/mL的桑椹汁处理24 h后SW620细胞发生了以下变化:细胞的生长明显受到抑制,细胞脱落、变形与贴壁性下降,出现凋亡现象;细胞基因组DNA发生较明显的降解;荧光定量PCR检测细胞中p53基因的转录水平较对照组增加约6.5倍,SDS-PAGE检测p53蛋白的表达量也明显高于对照组。研究结果表明,桑椹汁对结肠癌细胞株SW620的增殖有抑制作用,其抑制机制可能是通过其活性物质诱导SW620细胞中p53基因上调表达导致细胞凋亡。