6-姜烯酚诱导人结肠癌细胞HT29凋亡及与VEGFR2表达变化的关系

本文通过研究不同浓度6-姜烯酚诱导结肠癌细胞HT 29凋亡及与VEGFR2(血管内皮细胞受体2)不同表达之间的关系,以探讨其可能的抑制结直肠肿瘤相关机制。通过应用不同浓度6-姜烯酚(0、10、20和40μM)分别对体外细胞实验培养的HT29细胞株进行诱导处理24 h,相差倒置荧光显微镜观察细胞形态变化,CCK8(Cell Counting Kit-8)法测定药物诱导后细胞抑制率,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测不同浓度药物干预后细胞凋亡率及凋亡周期变化,最后用Western-blot检测分析VEGFR2蛋白不同表达变化。结果显示,与对照组相比,6-姜烯酚可呈浓度依赖性地诱导HT29凋亡,并使细胞周期G0/G1期细胞数由49.48%下降到24.39%和17.18%,而G2/M期细胞数由3.44%增加到34.78%和49.54%,进而将细胞周期阻滞在G2/M期,抑制细胞增殖,而且还不同程度地抑制了VEGFR2表达(p<0.05)。结果表明,6-姜烯酚主要是通过诱导HT29凋亡进而起到抑制肿瘤细胞增殖的作用,这可能与不同程度抑制VEGFR2有关。

清肠温中方含药血清调控NLRP6途径对Caco-2/HT29-MTX细胞共培养模型MUC2表达的影响

目的:研究清肠温中方含药血清调控NLRP6途径影响Caco-2/HT29-MTX细胞共培养模型MUC2分泌的作用机制。方法:使用SD大鼠制备清肠温中方含药血清;Caco-2/HT29-MTX细胞共培养构建单层肠上皮细胞模型;IL-1β刺激共培养细胞模拟体外肠道炎症模型;si-NLRP6质粒转染干扰NLRP6,研究清肠温中方作用机制。qPCR检测NLRP6、IL-18的mRNA表达水平;Western blot检测NLRP6、IL-18蛋白表达水平;免疫荧光染色观察MUC2表达。结果:正常培养的Caco-2/HT29-MTX细胞中,NLRP6敲除后,MUC2表达明显减少。清肠温中方含药血清增加IL-1β诱导的细胞炎症模型中NLRP6和IL-18 mRNA及蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),且一定程度上抵消si-NLRP6的抑制作用。与模型组相比,清肠温中方含药血清干预后,促进MUC2蛋白表达恢复,si-NLRP6后一定程度上削弱了清肠温中方的作用。结论:清肠温中方含药血清通过调控NLRP6信号途径,进一步调节MUC2分泌,修复UC黏液屏障损伤。

信号转导子与转录活化子6(STAT6)在人结肠癌细胞株HT29(STAT6^(high))、Caco2(STAT6^(null))细胞凋亡中的作用

目的通过分析信号转导子与转录活化子6(signal transducer and activator of transcription 6,STAT6)活化状态时不同的人结肠癌细胞株HT29(STAT6high)和Caco2(STAT6null)凋亡情况来研究STAT6与细胞凋亡之间的关系,并从分子水平探讨其可能的机制。方法采用流式细胞仪检测人结肠癌细胞株HT29(STAT6high)和Caco2(STAT6null)细胞凋亡的情况,比较其差异;同时采用RT-PCR检测人结肠癌细胞株HT29(STAT6high)和Caco2(STAT6null)中凋亡相关基因(Caspase家族蛋白Caspase3 mRNA、Caspase7 mRNA和Bcl-2家族蛋白凋亡抑制蛋白Bcl-2 mRNA、Bcl-xl mRNA、促凋亡蛋白Hrk mRNA)的表达水平,比较其差异。结果人结肠癌细胞株Caco2(STAT6null)细胞早期凋亡率为(13.30±0.73)%,明显高于HT29(STAT6high)的(2.00±0.43)%(P<0.01)。RT-PCR显示,人结肠癌细胞株Caco2(STAT6null)中Caspase3 mRNA和Caspase7 mRNA表达水平均明显高于HT29(STAT6high)(均P<0.01)。人结肠癌细胞株Caco2(STAT6null)中凋亡抑制蛋白Bcl-2 mRNA、Bcl-xl mR-NA、促凋亡蛋白Hrk mRNA表达水平均明显高于HT29(STAT6high)(均P<0.01)。人结肠癌细胞株Caco2(STAT6null)、HT29(STAT6high)中STAT6活性水平与Caspase7、Caspase3、Bcl-2、Bcl-xl、Hrk mRNA表达水平均呈负相关(r=-0.514、-0.562、-0.518、-0.512、-0.426,均P<0.05)。结论 STAT6可能参与结肠癌细胞凋亡,其机制可能与凋亡相关基因的表达有关。

乳酸菌体外粘附人结肠腺癌细胞系HT-29细胞的研究

用实验室保存的24株乳酸菌菌种做了对人结肠腺癌细胞系HT-29细胞的体外粘附性试验。发现双歧杆菌的粘附能力较高,平均在 10.5个/细胞;乳杆菌的粘附能力较低,平均在 3.2个/细胞;球菌的粘附能力很低,平均在 2.3个/细胞。其中双歧杆菌中 Bifidobacterium bifidum 02菌株粘附能力最好,达到(18.4±2.7)个/细胞。乳杆菌中 Lactobacillus acidophilus 99101粘附能力最好,达到(10.2±1.8)个/细胞。同时,同种不同株的乳酸菌粘附能力有差异,而同属中,来自人粪便与来自猪粪便的乳酸菌的粘附能力没有明显差异。

青蒿琥酯对人结肠癌细胞HCT116和HT29的增殖与凋亡

目的:观察青蒿琥酯对人结肠癌细胞HCT116和HT29细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用不同浓度青蒿琥酯处理HCT116和HT29细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测青蒿琥酯对人结肠癌细胞的增殖抑制效应,采用流式细胞术检测细胞凋亡的情况。结果:不同浓度青蒿琥酯(7.5、15、30、60、120μg/m L)处理两种人结肠癌细胞48 h后,抑制率随浓度增加呈上升趋势(HCT116:19.42%、24.59%、44.84%、74.15%、92.87%;HT29:11.77%、17.63%、34.23%、48.51%、70.59%)。不同浓度青蒿琥酯(0、60、120μg/m L)处理两种人结肠癌细胞24 h后凋亡率随浓度增加逐渐上升(HCT116:2.46%、51.36%、64.10%;HT29:1.14%、35.95%、43.45%)。结论:青蒿琥酯对人结肠癌CHT116和HT29细胞具有生长抑制和诱导凋亡作用。

JR6对人结肠癌细胞HT-29氧化还原系统影响

探讨新型抗肿瘤药物JR6诱导人结肠癌细胞HT-29凋亡机制.使用噻唑兰比色法(MTT)检测JR6对人结肠癌细胞HT-29的生长抑制作用,并测定HT-29细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)的活性和丙二醛(MDA)浓度.JR6对HT-29细胞生长有明显抑制作用,可以降低HT-29细胞中SOD、GSH-Px、CAT活性,升高MDA浓度.JR6对HT-29细胞有明显的细胞毒作用,其IC50为39.8μg/mL,可能通过影响HT-29细胞中SOD、GSH-Px、CAT活性和MDA浓度,达到诱导HT-29细胞凋亡的目的.

重组质粒pEGFP-N3-APC在结肠癌细胞株HT-29中的表达

【目的】构建含有APC蛋白功能区域的pEGFP-N3-APC重组质粒,转染结肠癌细胞HT-29,观察重组质粒的表达。【方法】设计引物分别扩增5条APC基因功能区域片段。将扩增片段与pEGFP-N3载体连接后挑取阳性克隆,行菌落PCR和测序鉴定。使用Lipofectamine 2000将重组质粒转染结肠癌细胞株HT-29,观察细胞中绿色荧光蛋白的表达。【结果】构建5条带有APC不同结构域重组真核表达载体pEGFP-N3-APC,重组真核表达载体转染HT-29细胞后,可观察到绿色荧光蛋白的表达。【结论】真核细胞表达载体pEGFP-N3-APC的成功构建,为进一步研究其在细胞内的功能提供了基础。

NS-398对结肠癌细胞系HT-29超微结构的影响

目的选择性环氧合酶2抑制剂NS 398可抑制结肠癌细胞系HT- 2 9的体外侵袭力,本研究进一步观察其对HT- 2 9细胞超微结构的影响。方法通过扫描电镜观察细胞表面微绒毛,通过激光共聚焦显微镜观察细胞骨架成分F actin。结果未处理的HT- 2 9细胞表面微绒毛和丝状伪足较多,其末端有分叉现象,NS- 398处理后,细胞表面的微绒毛减少、皱缩呈小球样改变,以10 μmol/L处理组明显。荧光标记的F actin较集中地分布于HT- 2 9细胞核周围,呈现“环状”结构,10 μmol/LNS- 398处理后细胞核周围的“环状”结构消失,荧光强度减弱。结论NS- 398可显著改变HT- 2 9细胞的超微结构,这可能是其抑制HT 2 9侵袭力的机制之一。

Nup88-shRNA对人结肠癌细胞株HT-29生长及侵袭力影响的实验研究

目的构建重组慢病毒介导的Nup88-sh RNA载体,由RNA干扰(RNAi)技术沉默Nup88,研究其对结肠癌HT-29细胞的增殖、黏附、侵袭和转移的影响,为结肠癌的临床基因治疗寻找新的靶点。方法 Nup88重组慢病毒载体的构建后包装检验效价,以最佳感染复数转染结肠癌HT-29细胞,实验分为沉默组、阴性对照组和空白组3组,其中沉默组分为Nup88-sh RNA1、Nup88-sh RNA2、Nup88-sh RNA3、Nup88-sh RNA4 4个亚组。通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot印迹检测各组表达效率,主要是HT-29细胞的m RNA和蛋白;四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞术检测Nup88基因被干扰后对HT-29细胞增殖和凋亡的影响;细胞侵袭实验检测Nup88基因被干扰后对HT-29细胞侵袭力的影响。结果沉默4组病毒及1组阴性对照均构建成功,滴度均为4E+8 TU/m L。沉默组Nup88 m RNA与阴性对照组和空白组相比,蛋白表达差异均有显著统计学意义(P<0.01)。Nup88-sh RNA1转染后,沉默率可达到86%。沉默组细胞增殖程度显著减少,与空白组和阴性对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。沉默组细胞凋亡率(30.28%±0.19%)显著增加,与阴性对照组(4.15%±0.24%)和空白组(2.98%±0.27%)相比,差异有统计学意义(P<0.05)。培养肿瘤细胞常规24 h后,沉默组穿膜细胞数(120.5±8.7)和抑制率(49.22%)与阴性对照组(232.2±13.4,-2.14%)和空白组(276.4±10.2,0)相比,穿膜细胞数明显减少,抑制率明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 Nup88重组慢病毒可以通过RNAi成功抑制HT-29细胞中Nup88基因的表达,并能显著抑制其增殖及远处的侵袭能力。

熊果酸诱导人结肠癌细胞HT29凋亡机制的研究

目的探讨熊果酸（ursolicacid，uA）对人结肠癌细胞系HT29增殖凋亡的作用及机制。方法采用MTF和双染实验检测uA对HT29细胞的增殖和凋亡；流式细胞术（FCM）检测UA对细胞周期和细胞凋亡率的影响；Western blot（WB）法检测uA作用后HT29细胞内cyt—c、caspase-3及Livin蛋白表达水平的变化。结果UA对HT29细胞的增殖抑制作用呈明显的浓度和时间依赖性。荧光显微镜观察UA作用后细胞呈凋亡特征改变。FCM检测发现，UA可将HT29细胞阻滞于G1期，随着UA浓度的增加，细胞凋亡率和凋亡峰值逐渐增高。WB结果显示随着UA浓度的增加，Livin蛋白和caspase-3酶原的表达逐渐下降，而caspase-3活性片段及cyt—c的表达逐渐升高。结论UA对人结肠癌细胞系HT29有较强的抑制增殖和诱导凋亡作用，其作用机制与激活线粒体凋亡途径及下调凋亡抑制蛋白Livin的表达有关。

克瘤丸对结肠癌细胞HT-29黏附和侵袭能力的影响

目的:观察克瘤丸体外对人结肠癌细胞HT-29增殖、黏附、侵袭的影响,评价其抑瘤的效果。方法:采用MTT法、细胞黏附人工重组基底膜培养小室(TransweⅡ小室)法,观察克瘤丸对人结肠癌细胞HT-29增殖、黏附和侵袭能力的影响。结果:与对照组比较,克瘤丸有抑制人结肠癌细胞HT-29增殖的作用,随着药物浓度的增大,其对细胞的抑制率也明显增大,当药物浓度达到1mg/mL时,对HT-29细胞的抑制作用最强。克瘤丸作用于人结肠癌细胞HT-29后,细胞的黏附能力明显降低,侵袭的细胞数较对照组明显减少。结论:克瘤丸对人结肠癌细胞HT-29的增殖具有抑制作用,能抑制人结肠癌细胞HT-29的黏附能力和侵袭能力。

Su11274通过抑制C-met信号通路传导对结肠癌细胞HT-29细胞增殖抑制的作用

分子靶向治疗已成为癌症除外科手术、放射和化疗的第四种治疗方法。有许多分子靶向药物在研究,贝伐单抗、西妥昔单抗和潘尼单抗是得到批准应用于治疗进展性和（或）转移性癌症的临床药物。结肠癌是消化道常见恶性肿瘤,发病率呈逐年上升的趋势,

5-氨基水杨酸联合尼美舒利对结肠癌细胞株HT-29增殖的影响

背景:研究表明5-氨基水杨酸(5-ASA)和非甾体抗炎药(NSAIDs)对结直肠癌具有化学预防作用,但目前关于两类药物联合应用对结直肠癌影响的文献较少。目的:研究5-ASA联合选择性环氧合酶-2抑制剂尼美舒利对人结肠癌细胞株HT-29的增殖抑制作用及其可能机制。方法:采用甲基噻唑基四唑(MTT)比色法测定5-ASA、尼美舒利单独以及联合应用抑制HT-29细胞增殖的作用,分别采用原位末端标记(TUNEL)和免疫细胞化学方法检测细胞凋亡和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果:1～1000μmol/L5-ASA或尼美舒利单独应用对体外培养的HT-29细胞具有明显增殖抑制作用,呈剂量依赖性;两者在100μmol/L剂量下分别作用12～96h,抑制率逐渐增高,呈时间依赖性。20～2000μmol/L5-ASA与尼美舒利联合应用能明显抑制HT-29细胞增殖,呈剂量和时间依赖性,且优于单独应用5-ASA或尼美舒利(P<0.05)。10～500μmol/L5-ASA和尼美舒利单独或联合作用于HT-29细胞,细胞凋亡率逐渐增高,PCNA表达逐渐降低,与单独应用相比,联合用药作用更强(P<0.05)。结论:5-ASA联合尼美舒利具有抗HT-29细胞增殖的作用,其作用优于单独应用5-ASA或尼美舒利。

乳源酪蛋白糖巨肽作用人结肠癌细胞HT-29调控炎症活力研究

为进一步阐释乳源酪蛋白糖巨肽(casein glycomacropeptide,CGMP)的抗炎及修复肠道炎症的功效,本研究在确定了乳源CGMP对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的结肠癌细胞HT-29NF-κB亚单位p65蛋白的影响和乳源CGMP调控核转录因子(nuclear factor,NF)-κB信号通路的基础上,通过构建表达乳源CGMP和NF-κB必需调节蛋白(NF-κB essential modulator,NEMO)的质粒,共转HT-29细胞,免疫共沉淀测定两个蛋白的相互作用。最后采用线粒体膜电位法测定乳源CGMP对HT-29细胞的促凋亡作用。结果表明,乳源CGMP与NEMO(NF-κB essential modulator)30 h共转HT-29细胞中,乳源CGMP与NEMO蛋白均表达,且表现出二者的相互作用。乳源CGMP可与NEMO相互作用影响NF-κB信号通路;同时乳源CGMP还促进HT-29细胞凋亡,呈时间依赖性,其中0.1μg/m L的CGMP作用效果最好。乳源CGMP与NEMO相互作用是间接作用于IκB激酶(IκB kinase,IKK)而作用于?IκB,进而影响NF-κB信号通路。研究揭示了乳源CGMP调控NF-κB信号通路的另一种途径,也充分说明乳源CGMP可通过作用多种抗炎途径发挥其调控作用。

HT-29人结肠癌细胞缺氧对鞘氨醇激酶-1表达的影响

目的:研究体外缺氧对HT-29人结肠癌细胞鞘氨醇激酶-1(SK-1)表达及细胞迁移的影响。方法:模拟体外缺氧环境,应用RT-PCR及Western blot检测缺氧对HT-29细胞SK-1表达的影响,以及观察细胞迁移能力的情况。结果:缺氧状态下HT-29细胞SK-1 mRNA及蛋白表达增强,细胞迁移能力增强;且U0126具有抑制SK-1表达增强的作用。结论:缺氧状态下HT-29细胞迁移能力和SK-1基因表达存在一定关系。

熊果酸抑制人结肠癌细胞HT-29增殖作用的研究

目的 探讨熊果酸在体外对人结肠癌细胞HT-29的增殖抑制作用.方法 采用MTT法观察熊果酸对HT-29细胞的增殖抑制作用.结果 熊果酸对HT-29细胞的增殖抑制作用呈明显的浓度和时间依赖性.结论 熊果酸对人结肠癌细胞系HT-29有较强的增殖抑制作用,该作用呈浓度和时间依赖性.

NDRG 1基因转染对HT-29人结肠癌细胞株增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的研究NDRG1基因转染对HT-29人结肠癌细胞株体外增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法将重组真核表达质粒pEGFP-NDRG1-N3和空载体pEGFP-N3采用阳离子脂质体Lipofectamine转染HT-29人结肠癌细胞株,通过荧光倒置显微镜检测绿色荧光蛋白的表达。免疫组织化学染色检测转染前后HT-29细胞NDRG1的表达。并通过多种体外实验(流式细胞术法、24-transwell法、扫描电镜和透射电镜等)研究NDRG1对HT-29人结肠癌细胞株体外增殖、侵袭和迁移能力及表面和超微结构的影响。结果流式细胞术结果显示,与未转染组和转染pEGFP-N3空载体组比较,pEGFP-NDRG1-N3组细胞生长周期G0/G1期比例增高,S期明显减低,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞侵袭和迁移实验的结果显示,转染pEGFP-NDRG1-N3组细胞与空载体和空白对照组比较,穿过微孔膜的细胞数均明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。扫描和透射电镜结果显示,转染pEGFP-NDRG1-N3组HT-29细胞生长增殖受抑制,细胞分化程度有增高趋势。结论 NDRG1基因可明显抑制HT-29人结肠癌细胞的体外增殖活性,降低其侵袭和迁移能力,促进其分化,提示其可作为一种候选的肿瘤转移抑制基因。

miR-31在人结肠癌细胞系HT-29对RhoBTB1表达的影响

结肠癌（colon cancer）是世界上最常见的恶性肿瘤之一,每年死亡病例居各种恶性肿瘤第三位[1]。目前为止,根治结肠癌最有效的方法还是手术切除联合化疗,对于局部肿瘤5年生存率达到93%[2]。microRNA（miRNA）是一种大小19-24个核苷酸的非编码单链小RNA分子,能够通过排序这些基因的3’段非编码区调整下游目标基因,参与细胞增殖、分化、凋亡等多种重要细胞活动的调控[2]。

黄茶的HT-29人体结肠癌细胞的体外抗癌效果

对购买的一种绿茶和一种黄茶进行HT-29结肠癌细胞体外抗癌效果评价。通过MTT试验、DAPI荧光染色分析和RT-PCR分析验证其抗癌效果。400μg/mL质量浓度下黄茶(80%)表现出对HT-29结肠癌细胞最强的生长抑制效果。RT-PCR检查Bax,Bcl-2基因表达情况及DAPI染色分析都显示黄茶对HT-29结肠癌细胞有较强的诱其凋亡的能力。由此得出,黄茶比绿茶具有更好的抗癌预防效果。