火炭母提取物抑制人结肠癌HCT-116细胞体外增殖研究

目的研究火炭母提取物对人结肠癌HCT-116细胞的体外增殖抑制作用和诱导凋亡作用。方法 MTT法筛选火炭母各部分提取物对HCT-116细胞的增殖抑制作用及活性作用部位;于荧光显微镜下采用Hoechst 33258凋亡染色法检测细胞凋亡形态变化;通过AnnexinⅤ-FITC/PI双标记法于流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果火炭母乙酸乙酯供试液对HCT-116的细胞增殖抑制作用较强且呈剂量和时间依赖关系,作用48小时后其IC50值为120.04 mg/L;凋亡染色显示有细胞凋亡形态变化;流式细胞仪检测火炭母乙酸乙酯供试液能诱导HCT-116细胞凋亡并呈剂量依赖关系。结论火炭母乙酸乙酯供试液能抑制人结肠癌HCT-116细胞增殖并诱导细胞凋亡。

Peiminine通过调控COX-2/PGE2/EGFR信号通路促进人结肠癌HCT-116细胞凋亡的分子机制

目的研究Peiminine调控COX-2/PGE2/EGFR信号通路促使人结肠癌HCT-116细胞凋亡的分子机制。方法基于ELISA法、Real-time qPCR和Western Blot法测定Peiminine处理人结肠癌HCT-116细胞后PGE2、COX-1、COX-2、ERK、P-ERK、P53、P-P53、P38和P-P38含量的变化。结果与对照组(Ctrl)相比,Peiminine处理后细胞内PGE2含量显著降低(P<0.01)。同时利用Real-time qPCR和Western Blot法检测发现Peiminine能够明显降低人结肠癌HCT-116细胞COX-2的含量,IL-6和NF-κB也显著下调而IL-10明显上调。后期的研究发现EGFR信号通路中关键蛋白(ERK、P-ERK、P53、P-P53、P38和P-P38)的表达量经Peiminine处理后均降低,具有统计学差异(P<0.01)。结论Peiminine可以抑制COX-2的表达和PGE2的生成,改善抗肿瘤免疫反应,抑制EGFR信号通路,从而促进肿瘤细胞凋亡,达到抗肿瘤的作用。

黄芩苷对人结肠癌HCT-116细胞增殖和凋亡的影响

目的观察黄芩苷对人结肠癌HCT-116细胞增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度黄芩苷(6.25、12.5、25、50、100、200μmol/L)处理HCT-116细胞,分别用MTT、流式细胞术、实时荧光定量PCR观察细胞增殖、凋亡及Caspase-3、Survivin表达。结果黄芩苷以剂量、时间依赖方式抑制HCT-116细胞增殖、促进细胞凋亡(P<0.01或0.05)。Caspase-3表达随黄芩苷浓度增高而上调,而Survivin表达下调。结论黄芩苷可能通过调控Caspase-3、Survivin表达,抑制HCT-116细胞增殖并诱导凋亡。

复方葛根汤诱导结肠癌HCT116细胞铁死亡分子机制研究

为探究复方葛根汤对结肠癌HCT116细胞增长作用及其分子机制,通过MTT法检测、克隆形成、形态学分析探讨复方葛根汤对HCT116细胞增长作用,以活性氧试剂盒检测、荧光显微成像及蛋白免疫印迹法探究其分子机制。研究结果显示,与溶媒对照组相比,复方葛根汤能显著抑制HCT116细胞增长能力,并呈浓度和时间依赖性,机制上能显著增加细胞内活性氧,显著上调铁死亡相关蛋白PTGS2、ACSL4蛋白的表达,及明显下调铁死亡相关蛋白GPX4表达,表明复方葛根汤可能通过诱导铁死亡机制抑制HCT116细胞增长。

贝母素乙通过诱导G0/G1期阻滞抑制结肠癌细胞的增殖

目的:探讨贝母素乙对结肠癌HCT116细胞增殖的抑制作用及其分子机制。方法:利用不同浓度的贝母素乙处理人结肠癌细胞HCT116和正常结肠上皮细胞CCD841 CON,通过CCK-8法和结晶紫染色法检测贝母素乙对HCT116和CCD841 CON细胞增殖活力的影响,流式细胞术和WB法检测贝母素乙对HCT116细胞周期及其细胞周期相关蛋白表达的影响。构建HCT116移植瘤裸鼠模型和AOM/DSS结肠癌小鼠模型,观察贝母素乙对小鼠模型肿瘤生长和OS的影响,免疫组化法和WB法检测对移植瘤或肿瘤组织中细胞周期相关蛋白CDK4、CDK6和cyclin D1表达的影响。结果:贝母素乙可显著抑制结肠癌HCT116细胞的增殖能力(P<0.01),诱导HCT116细胞周期G0/G1期阻滞(P<0.01),降低CDK4、CDK6和cyclin D1的蛋白表达水平(均P<0.01)。荷瘤小鼠实验结果显示,贝母素乙(0.75 mg/kg)显著抑制HCT116细胞移植瘤的生长并延长荷瘤裸鼠的OS(P<0.05或P<0.01),降低AOM/DSS模型小鼠的体质量、延长OS、减少癌变肠组织的肿瘤个数和肿瘤体积,下调肿瘤组织中CDK4、CDK6和cyclin D1的蛋白表达(P<0.01或P<0.05)。结论:贝母素乙通过下调CDK4、CDK6和cyclin D1的表达水平,引起细胞周期G0/G1期阻滞,从而抑制结肠癌HCT116细胞的增殖。

miR-193b-3p、PAK4过表达对人结肠癌细胞增殖凋亡和迁移侵袭的影响及靶向关系

目的观察微小核糖核酸193b-3p(miR-193b-3p)、P21活化蛋白激酶4(PAK4)过表达对人结肠癌细胞系HCT116细胞增殖凋亡和迁移侵袭的影响,并验证两者的靶向关系。方法体外培养人正常结肠黏膜上皮细胞FHC及人结肠癌细胞HCT116、SW480、LoVo,采用RT-PCR检测各细胞miR-193b-3p、P21活化蛋白激酶4(PAK4)mRNA。取生长状态良好的对数生长期HCT116细胞,分为4组,miR-NC组转染miRNA阴性对照、miR-193b-3p组转染miR-193b-3p模拟物、miR-193b-3p+PAK4-NC组转染miR-193b-3p模拟物+P21活化蛋白激酶4(PAK4)空载体、miR-193b-3p+PAK4组转染miR-193b-3p模拟物+PAK4过表达载体,分别采用RT-PCR、CCK-8试验、流式细胞术、Transwell实验检测各组细胞miR-193b-3p、PAK4 mRNA表达及增殖活性、凋亡率、迁移细胞数、侵袭细胞数。采用生物信息学软件Target Scan7.2预测miR-193b-3p与PAK4的靶向关系,并采用双荧光素酶报告基因实验进行验证。结果过表达miR-193b-3p后,HCT116细胞增殖活性、迁移及侵袭能力均明显下降,凋亡率明显升高,PAK4 mRNA表达水平降低(P均<0.05)。上调PAK4表达能够部分逆转过表达miR-193b-3p对HCT116细胞增殖活性、迁移及侵袭能力的抑制及对凋亡的促进作用(P均<0.05)。双荧光素酶报告基因显示miR-193b-3p能靶向结合PAK4的3'UTR区,抑制其荧光素酶活性(P<0.05)。结论miR-193b-3p过表达可抑制HCT116细胞增殖、迁移及侵袭,并促进其凋亡,miR-193b-3p与PAK4存在靶向关系。

磷酸化蛋白质组学联合蛋白质组学分析敲除维甲酸诱导蛋白16对人结肠癌细胞的影响

目的分析人结肠癌HCT116细胞敲除维甲酸诱导蛋白16(RAI16)后细胞内总蛋白及磷酸化蛋白质表达的差异,探究RAI16影响HCT116细胞蛋白质功能的可能机制及相关信号通路。方法收集并提取HCT116 KO和WT细胞蛋白,SDS-PAGE检验蛋白提取效果。利用胰蛋白酶酶解蛋白后,标记肽段并进行质谱分析。对鉴定到的差异蛋白及差异磷酸化蛋白质利用GO数据库、KEGG数据库和STRING数据库进行生物信息学分析。结果SDS-PAGE结果提示蛋白无明显降解,且实验组与对照组部分关键条带有明显差异;按Foldchange≥1.5或Foldchange≤1/1.5且P<0.05为条件进行差异蛋白的筛选,共筛选出147个上调差异蛋白和230个下调差异蛋白;并筛选到106个上调磷酸化位点和217个下调磷酸化位点。将去本底差异磷酸化位点功能GO富集分析,发现差异蛋白主要在核质、细胞核及细胞质组成,RNA、钙黏着蛋白及染色质结合,DNA修复、RNA剪接及DNA为模板转录的正调控等多个方面有显著富集趋势。KEGG富集结果显示,差异蛋白主要在核质转运、剪接体、细胞周期、细胞间紧密连接、病毒致癌作用和癌症中的微小RNA等通路具有显著富集趋势。蛋白互作网络主要以DDX17、NCL、EEF2、CDK1、SSRP1和SMARCC1为核心蛋白质。统计发现,SKP1、ORC1和BAD等两组学差异变化均上调,且磷酸化差异变化比蛋白差异变化更显著,RBL1、RB1、CDK1、CDC6、MCM4、TFDP1、CHD4和SNW1等两组学差异变化均下调,且磷酸化差异变化比蛋白差异变化更显著。结论RAI16可能通过SKP1、ORC1、RB1和CDK1等关键蛋白质在多方面生物功能和多条信号通路中发挥作用,影响细胞周期,进而影响癌症发生发展。

甲磺酸阿帕替尼对结肠癌HCT-116细胞增殖的抑制作用及其机制

目的检测阿帕替尼对结肠癌HCT-116细胞的抑制作用,探讨其可能的作用机制及其影响的信号通路。方法 MTT方法检测不同浓度(0、0.5、1、1.5、2μmol/L)的阿帕替尼对结肠癌HCT-116细胞的毒性作用,并设置卡培他滨阳性对照组;Annexin VFITC/PI双染法检测上述不同浓度的阿帕替尼处理后结肠癌HCT-116细胞的凋亡情况,实时荧光定量PCR及Western Blotting技术检测其对凋亡相关基因及蛋白Bcl-2,Bax,Caspase-3的影响,Western blotting技术检测其对Akt、p-Akt、Erk1/2和p-Erk1/2蛋白表达的影响。结果 MTT细胞毒性检测结果表明,阿帕替尼在体外能有效抑制HCT-116细胞的增殖,IC50为1.335μmol/L。Annexin-V/PI双染法细胞凋亡检测结果表明,阿帕替尼能显著的诱导HCT-116细胞凋亡,并且呈浓度依赖性。实时荧光定量PCR和Western blotting结果表明,阿帕替尼可以诱导促凋亡基因Bax和Caspase-3的表达,并抑制抗凋亡基因Bcl-2的表达。Western blotting检测信号通路蛋白的结果表明,在阿帕替尼处理后p-Akt和p-Erk1/2的表达显著降低,而Akt和Erk总蛋白水平没有变化。结论阿帕替尼可通过抑制MAPK/Erk、PI3K/Akt信号转导通路来实现诱导细胞凋亡,从而达到抑制HCT-116细胞增殖的目的。

清血颗粒与祛邪胶囊对人结直肠癌HCT-116细胞的增殖抑制作用及其机制研究

目的:探讨中国中医科学院西苑医院2种院内制剂清血颗粒和祛邪胶囊含药血清对人结直肠癌细胞系HCT-116的癌细胞生长、细胞凋亡以及细胞凋亡相关蛋白、自噬蛋白表达的影响。方法:实验分为对照组、清血颗粒组、祛邪胶囊组、健脾活血组、健脾活血加清血颗粒组、健脾活血加祛邪胶囊组,分别采用酸性磷酸酶法(APA)、流式细胞术(FCM)和Western Blot法检测各组含好药血清对肿瘤细胞长、细胞凋亡率的变化、细胞凋亡相关蛋白caspase-3表达以及自噬相关蛋白LC3表达。结果:清血颗粒、祛邪胶囊、健脾活血清血颗粒、健脾活血组的10%含药血清作用24h后,可明显抑制HCT-116肿瘤细胞的生长;而健脾活血加祛邪胶囊组则不能抑制其生长。光镜下可见,祛邪胶囊组作用24h后细胞密度稀疏,细胞皱缩体积缩小且凋亡相关蛋白caspase3表达上调。结论:清血颗粒和祛邪胶囊均能明显抑制HCT-116肿瘤细胞的生长,祛邪胶囊组主要通过凋亡途径诱导HCT-116细胞发生程序性死亡。

结肠癌组织中SLP-2蛋白的表达及SLP-2基因对HCT-116细胞侵袭、迁移力的影响

目的:探讨结肠癌组织中SLP-2蛋白的表达情况及SLP-2基因对结肠癌细胞HCT-116侵袭、迁移力的影响。方法:采用免疫组化法检测50对结肠癌及正常结肠黏膜组织中SLP-2蛋白的表达,分析患者临床病理特征与SLP-2蛋白表达的关系。设计合成SLP-2 siRNA,转染结肠癌HCT-116细胞,Transwell法及Matrigel基质实验检测转染SLP-2 siRNA对HCT-116细胞侵袭、迁移力的影响,RT-PCR及Western blot检测转染48 h后HCT-116细胞中SLP-2 mRNA及蛋白的表达情况。结果:正常结肠及结肠癌组织中SLP-2蛋白的高表达率比较,差异有统计学意义(χ2配对=23.188,P<0.001)。SLP-2蛋白表达与结肠癌TNM分期(χ2=10.474,P=0.001)及淋巴结转移(χ2=19.647,P<0.001)有关。SLP-2 siRNA转染组细胞迁移力、侵袭力、SLP-2 mRNA及蛋白表达水平均低于阴性对照组和空白对照组(P均<0.05)。结论:结肠癌组织中SLP-2高表达;SLP-2可能通过促进结肠癌细胞的侵袭、迁移能力,参与结肠癌的转移。

FBXW7基因点突变对结直肠癌HCT-116细胞的增殖、迁移、侵袭和抗凋亡能力的影响

目的:探讨FBXW7基因点突变对结直肠癌细胞株HCT-116增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:通过构建FBXW7基因野生型及突变型过表达的重组载体,并将其转染HCT-116细胞,应用Western blotting检测转染后FBXW7蛋白表达情况。CCK-8检测细胞增殖能力,平板细胞克隆形成实验(HTCA)检测肿瘤细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,划痕及Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移和侵袭能力。结果:转染野生型FBXW7基因的HCT-116细胞中FBXW7蛋白表达水平高于对照组(转染突变型FBXW7基因的HCT-116细胞)、阴性对照组(转染空质粒载体p EZ-M90的HCT-116细胞)及空白对照组(未进行任何特殊处理的HCT-116细胞)(均P<0.05)。转染野生型FBXW7的HCT-116细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力相较于其余各组均显著下降(均P<0.05),且细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。结论:FBXW7基因点突变可使其蛋白表达水平降低,从而促进结直肠癌HCT-116细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制其凋亡。

槐果碱对人肠癌细胞HCT-116生长抑制作用

目的探讨槐果碱对人肠癌细胞HCT-116生长的影响。方法选取人肠癌细胞HCT-116,用不同浓度梯度槐果碱作用48 h后,通过细胞毒性试验检测增殖能力,根据IC_(50)选择3个浓度进一步实验。通过平板克隆形成实验检测细胞克隆能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,线粒体膜电位检测线粒体膜电位水平,蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白及生存素(survivin)的表达水平。结果细胞毒性试验显示,槐果碱可抑制HCT-116肿瘤细胞增殖,且随着槐果碱浓度的升高抑制作用增强。IC_(50)为2.134 mmol/L,并选择1、2和4 mmol/L进行进一步相关实验;在槐果碱作用后HCT-116细胞克隆能力、线粒体膜电位水平均明显下降,细胞凋亡率明显升高(P<0.05);槐果碱作用后,HCT-116细胞内Bcl-xL、Bcl-2、survivin表达显著下调,而Bax、Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9显著上调。结论槐果碱可抑制肠癌细胞HCT-116增殖并通过线粒体途径促进凋亡。

阿西替尼对结肠癌HCT-116细胞增殖、凋亡及自噬的影响研究

目的研究阿西替尼(AXI)对结肠癌HCT-116细胞增殖、凋亡及自噬的影响。方法体外培养结肠癌HCT-116细胞,分为AXI 1组(15.0μmol/L)、AXI 2组(30.0μmol/L)、AXI 3组(60.0μmol/L)及无任何添加的正常对照组(NC组)。四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测各组结肠癌HCT-116细胞增殖情况;AnnexinV-FITC/PI法检测各组结肠癌HCT-116细胞凋亡情况;Western Blot检测结肠癌HCT-116细胞自噬相关蛋白LC3Ⅱ、beclin1,雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路中p-mTOR、p-P70S6K蛋白水平、增殖相关蛋白CyclinD1、c-Myc,以及凋亡相关cleaved-caspase3、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bax蛋白表达水平。结果与NC组比较,AXI 1组和AXI 2组结肠癌HCT-116细胞增殖抑制率、凋亡率、LC3Ⅱ、beclin1、Bax、cleaved-Caspase3蛋白表达水平依次增加(P<0.05),p-mTOR、p-P70S6K、Cyclin D1、c-Myc、Bcl-2蛋白表达水平依次减少(P<0.05)。AXI 2组和AXI 3组结肠癌HCT-116细胞增殖抑制率、凋亡率、LC3Ⅱ、beclin1、p-mTOR、p-P70S6K、CyclinD1、c-Myc、cleaved-caspase3、Bcl-2、Bax蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论AXI可通过抑制mTOR通路激活,诱导结肠癌HCT-116细胞自噬,抑制其增殖,促进其凋亡,初步揭示了AXI对结肠癌细胞的作用机制,为结肠癌的靶向治疗提供了新思路。

芝麻酚对体外培养人结肠癌HCT-8细胞的影响及其机制

目的:探讨芝麻酚对体外培养人结肠癌HCT-8细胞的影响及其机制。方法:体外培养人结肠癌HCT-8细胞,分为对照组、芝麻酚50μmol/L组、芝麻酚100μmol/L组和芝麻酚250μmol/L组共4组,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测各组不同作用时间细胞增殖率,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,采用蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测各组Janus激酶2/信号转导与转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路相关蛋白、增殖相关蛋白和凋亡相关蛋白表达水平。结果:经芝麻酚处理24、48、72 h后,HCT-8细胞的OD值从高到低依次为对照组>芝麻酚50μmol/L组>芝麻酚100μmol/L组>芝麻酚250μmol/L组,HCT-8细胞的抑制率从低到高依次为对照组<芝麻酚50μmol/L组<芝麻酚100μmol/L组<芝麻酚250μmol/L组,差异有统计学意义(P<0.05);经芝麻酚处理后HCT-8细胞凋亡率从低到高依次为对照组<芝麻酚50μmol/L组<芝麻酚100μmol/L组<芝麻酚250μmol/L组,差异有统计学意义(P<0.05);各组JAK2/GAPDH和STAT3/GAPDH蛋白表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);芝麻酚处理后HCT-8细胞中p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3蛋白表达水平从高到低依次为对照组>芝麻酚50μmol/L组>芝麻酚100μmol/L组>芝麻酚250μmol/L组,差异有统计学意义(P <0.05);芝麻酚处理后HCT-8细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、c-Myc和B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白表达水平从高到低依次为对照组>芝麻酚50μmol/L组>芝麻酚100μmol/L组>芝麻酚250μmol/L组,差异有统计学意义(P<0.05);芝麻酚处理后HCT-8细胞中Bax蛋白表达水平从低到高依次为对照组<芝麻酚50μmol/L组<芝麻酚100μmol/L组<芝麻酚250μmol/L组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:不同剂量芝麻酚均对体外培养人结肠癌HCT-8细胞具有抑制增殖、诱导凋亡作用,其机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路的激活有关。

鸦胆子苦醇通过RhoA/ROCK1信号通路抑制人结直肠癌细胞HCT-116的侵袭和迁移

目的探讨鸦胆子苦醇(brusatol,BRU)对结直肠癌细胞HCT-116侵袭和迁移的影响和可能的作用机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度的BRU对HCT-116细胞增殖能力的影响;划痕和Transwell实验检测BRU对HCT-116细胞迁移能力和侵袭能力的影响;Western blot检测BRU和ROCK抑制剂(Y27632)对HCT-116细胞中迁移侵袭相关蛋白MMP2、MMP9和RhoA、ROCK1表达的影响。结果CCK-8结果显示,经过BRU(0、2.5、5、10、20、40、80、160、320 nmol·L^(-1))处理HCT-116细胞24、48、72 h后,BRU对HCT-116细胞的抑制率明显升高,并且呈浓度和时间依赖性;划痕和Transwell实验结果显示,BRU能明显抑制HCT-116细胞的迁移和侵袭能力;Western blot结果表明,BRU和Y27632都能够明显减少HCT-116细胞中的MMP2、MMP9、RhoA和ROCK1蛋白的表达。结论BRU可能通过RhoA/ROCK1通路抑制结直肠癌细胞HCT-116的迁移和侵袭。

Runt相关转录因子3在人结肠癌HCT-116/5-FU耐药细胞株中的表达及其与耐药的相关性

目的建立耐5-氟尿嘧啶(5-FU)的人结肠癌细胞株HCT-116/5-FU,初步探讨Runt相关转录因子3(RUNX3)与结直肠癌耐药的关系。方法采用低浓度梯度递增联合大剂量间断冲击法建立人结肠癌耐药细胞株HCT-116/5-FU,CCK-8法检测5-FU对亲本株HCT-116及耐药株HCT-116/5-FU的半数抑制浓度(IC_(50)值),绘制细胞生长曲线,计算细胞群体倍增时间(TD);qRT-PCR和Western blot法检测亲本株HCT-116细胞及耐药株HCT-116/5-FU细胞中RUNX3、P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)和肺耐药蛋白(LRP)的mRNA和蛋白表达。采用siRNA技术敲低HCT-116细胞中RUNX3的表达,分为RUNX3敲低组(si-RUNX3-1组、si-RUNX3-2组)和阴性对照组(si-NC组),qRT-PCR和Western blot法分别在mRNA水平和蛋白水平验证RUNX3的敲低效率;CCK-8法测定si-RUNX3组和si-NC组的IC_(50)值,Western blot法测定两组中P-gp、MRP1和LRP的表达情况。结果成功构建稳定的人结肠癌耐药细胞株HCT-116/5-FU,耐药倍数为7.7倍;HCT-116/5-FU耐药细胞株群体TD较HCT-116亲本株明显延长(P<0.001),耐药细胞群体TD是亲本细胞的1.38倍(P=0.002),耐药株细胞形态发生变化。耐药细胞HCT-116/5-FU的RUNX3 mRNA表达水平较亲本细胞株HCT-116明显降低(P=0.048),P-gp(P=0.008)、MRP1(P=0.001)和LRP mRNA(P=0.001)表达水平较亲本细胞株HCT-116明显升高;耐药细胞HCT-116/5-FU的RUNX3蛋白质相对表达量较亲本细胞株HCT-116明显降低(P<0.001),P-gp、MRP1、LRP蛋白的相对表达量较亲本细胞株明显升高(P均<0.001)。成功构建了RUNX3低表达的HCT-116细胞模型,si-RUNX3-1组RUNX3 mRNA的表达与si-NC组相比差异无统计学意义(P=0.064),si-RUNX3-2组明显低于si-NC组(P=0.034);si-RUNX3-1组和si-RUNX3-2组RUNX3蛋白的表达量均明显低于si-NC组(P均<0.001),si-RUNX3-2组的敲低效率更高。选用si-RUNX3-2组完成后续实验,si-RUNX3组的IC_(50)值较si-NC组明显升高,下调RUNX3的表达能明显降低HCT-116细胞对5-FU的敏感性(P<0.001);si-RUNX3组的P-gp、MRP1和LRP蛋白相对表达量均明显高于si-NC组(P均<0.001)。结论RUNX3表达下调能降低人结肠癌HCT-116细胞对5-FU的敏感性,可能与RUNX3表达的降低上调P-gp、MRP1和LRP等耐药蛋白表达,从而增加细胞的耐药性有关。

甲磺酸阿帕替尼对结肠癌HCT-116细胞增殖、凋亡及PI3K/Akt信号通路的影响

目的探讨甲磺酸阿帕替尼对结肠癌HCT-116细胞增殖、凋亡及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的影响。方法体外培养结肠癌HCT-116细胞实验分为空白对照组、阿帕替尼组,分别给予终浓度为0、5、10、20μmol/L的甲磺酸阿帕替尼继续培养48 h,分别检测细胞增殖和细胞凋亡情况,同时检测HCT-116细胞中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达水平。结果给予甲磺酸阿帕替尼处理后,HCT-116细胞增殖率降低,细胞凋亡率增加,且随着甲磺酸阿帕替尼剂量增加,细胞增殖率降低和细胞凋亡率增加越显著,差异均有统计学意义(P<0.05);给予甲磺酸阿帕替尼处理后,HCT-116细胞PI3K和Akt表达变化不显著,差异无统计学意义(P>0.05);p-PI3K、p-Akt和Bcl-2表达降低,Bax和Caspase-3表达增加,且随着甲磺酸阿帕替尼剂量增加,p-PI3K、p-Akt和Bcl-2降低越显著,Bax和Caspase-3表达增加越显著,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论甲磺酸阿帕替尼能抑制HCT-116细胞增殖和促进凋亡,且具有浓度依赖性,其机制可能与甲磺酸阿帕替尼抑制了PI3K/Akt信号通路,启动了细胞凋亡程序有关。

隐丹参酮对HCT-116结肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨隐丹参酮对结肠癌HCT-116细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:应用细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(CCK-8)分析隐丹参酮对HCT-116细胞的毒性作用,流式细胞术检测细胞凋亡及周期分布,同时分析隐丹参酮对正常结肠上皮NCM460细胞的毒性作用;采用Western Blot分析隐丹参酮对HCT-116细胞的蛋白表达影响。结果:隐丹参酮能抑制HCT-116结肠癌细胞的活性并诱导其凋亡,可促使细胞发生G2/M期阻滞,两种作用在正常结肠上皮NCM460细胞中减弱。隐丹参酮能够抑制HCT-116细胞中Bcl-2蛋白表达,促使Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达;隐丹参酮对HCT-116细胞中Pak1蛋白表达无明显影响,能抑制Pak1、ERK1/2蛋白的磷酸化水平。结论:隐丹参酮能抑制胃癌细胞增殖、诱导其凋亡,其作用机制可能是通过抑制Pak1/ERK信号通路活化、调控Bcl-2和Bax等凋亡相关蛋白表达。

姜黄素逆转结肠癌HCT-116/5FU细胞耐药作用机制研究

目的探讨姜黄素逆转人结肠癌耐药细胞株HCT-116/5FU耐药的作用机制。方法姜黄素、5-FU诱导耐药细胞HCT-116/5FU凋亡,按对照组、5-FU组、姜黄素组及联合用药组分为四组,对照组予普通培养基;5-FU组予含5-FU 200μM培养基;姜黄素组予姜黄素20μM培养基;联合用药组予含5-FU 200μM和姜黄素20μM培养基。采用MTT法检测细胞增殖以明确最佳实验条件;AnnexinV-FITC试剂盒检测细胞凋亡率;Western blot检测亲本株及耐药细胞株内cleaved-Caspase3、IL-6、STAT3蛋白表达水平。结果姜黄素联合5-FU干预人结肠癌耐药细胞株HCT-116/5FU后细胞增殖受明显抑制;联合用药组HCT-116/5FU细胞凋亡率为(56.0±12.1)%,明显高于5-FU组(6.5±3.2)%和姜黄素组(19.9±7.2)%(P<0.05);耐药细胞株IL-6、STAT3蛋白表达明显高于亲本株;姜黄素降低耐药细胞株IL-6、STAT3的蛋白表达量,诱导cleaved-Casepase 3蛋白表达。结论姜黄素能逆转人结肠癌耐药细胞株HCT-116/5FU耐药,其机制可能与下调IL-6/STAT3有关。

新疆蜂胶挥发油对结直肠癌HCT-116细胞增生、周期及凋亡的影响

目的:探讨新疆蜂胶挥发油对体外培养的大肠癌细胞HCT-116细胞增生、细胞周期和凋亡的影响.方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)显色法,检测不同浓度蜂胶挥发油作用不同时间对HCT-116细胞生长所产生的不同影响;倒置显微镜观察凋亡细胞的形态特点;PI染色、流式细胞仪检测细胞周期分布;AnnexinV-FITC/PI双染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果:蜂胶挥发油能抑制HCT-116细胞生长,其抑制活性与5-氟尿嘧啶(5-FU)一致,在一定剂量和时间范围内,可见凋亡细胞明显增多,给予5、10、20mg/L蜂胶挥发油处理HCT-116细胞24h后,较对照组G0/G1期细胞(%)增多(57.57±2.31,67.94±1.90,86.09±1.72vs44.60±3.43,均P<0.01),S期细胞(%)减少(33.51±3.40,27.30±4.65,7.30±4.76vs47.78±4.54,均P<0.01),G2/M期细胞无明显变化,细胞凋亡率明显上升,呈剂量依赖性(58.33%±2.44%,44.53%±2.59%,35.40%±0.42%vs4.38%±0.92%,均P<0.01).结论:新疆蜂胶挥发油对HCT-116细胞具有明显的增殖抑制作用,其机制与其阻滞细胞周期和诱导凋亡有关.