苦豆子提取物抗人结肠癌HCT116细胞株鸡胚尿囊膜移植瘤血管生成的研究

目的:通过观察苦豆子提取物抗人结肠癌HCT116细胞株鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)移植瘤的血管生成现象,探讨其抗肿瘤血管生成作用及机制。方法:采用人结肠癌HCT116细胞培养并建立鸡胚绒毛尿囊膜移植瘤模型,观察苦豆子提取物作用下CAM移植瘤血管生成的变化。结果:苦豆子提取物作用于鸡胚绒毛尿囊膜移植瘤具有明显的抗血管生成现象,用药组血管面积比(VA/CAM)均明显小于模型对照组,其中大剂量及中剂量组(1000μg/胚、500μg/胚)能达到重组人血管内皮生长因子抑制素组的抗血管生成效果(P值分别为0.899及0.362,差异无统计学意义)。结论:苦豆子提取物具有抑制人结肠癌HCT116鸡胚绒毛尿囊膜移植瘤血管生成的作用,其作用效果同剂量呈相关性。

十味有毒中药对人结直肠癌HCT116细胞株的作用研究

目的:研究大肠癌HCT116细胞对10味有毒中药的敏感性。方法:采用MTT法测定药物对细胞增殖的抑制率。结果:中华蟾酥注射液、斑蟊酸钠注射液、亚砷酸氯化钠注射液及藤黄对大肠癌HCT116细胞的增殖有抑制作用,且随着药物浓度的增加抑制效果明显增强,有明显的量效关系;黄药子、龙葵、重楼、白花蛇舌草、天南星、雷公藤在相同浓度下未表现出抑制作用。斑蝥酸钠及藤黄IC50优于亚砷酸氯化钠(P<0.05),华蟾素注射液由于采用的原药未提供原液浓度,未能得出具体的IC50值。结论:通过实验筛选证明华蟾酥注射液、斑蟊酸钠注射液、亚砷酸氯化钠注射液及藤黄可抑制HCT116细胞增殖,为进一步的体内动物研究提供实验数据,其机制还待进一步研究。

复方葛根汤诱导结肠癌HCT116细胞铁死亡分子机制研究

为探究复方葛根汤对结肠癌HCT116细胞增长作用及其分子机制,通过MTT法检测、克隆形成、形态学分析探讨复方葛根汤对HCT116细胞增长作用,以活性氧试剂盒检测、荧光显微成像及蛋白免疫印迹法探究其分子机制。研究结果显示,与溶媒对照组相比,复方葛根汤能显著抑制HCT116细胞增长能力,并呈浓度和时间依赖性,机制上能显著增加细胞内活性氧,显著上调铁死亡相关蛋白PTGS2、ACSL4蛋白的表达,及明显下调铁死亡相关蛋白GPX4表达,表明复方葛根汤可能通过诱导铁死亡机制抑制HCT116细胞增长。

siRNA沉默Survivin抑制结肠癌细胞株HCT116增殖并增强其对奥沙利铂的敏感性

目的研究Survivin特异性siRNA对人结肠癌细胞株HCT116增殖和对化疗药物奥沙利铂敏感性的影响。方法体外将Survivin特异性siRNA表达载体pgsiRNA-Survivin转染HCT116细胞,通过Western blot和Real time-PCR方法检测细胞Survivin的表达,采用流式细胞术分析细胞周期分布,MTT法检测干扰Survivin后HCT116细胞对奥沙利铂的敏感性。结果 pgsiRNA-Survivin转染HCT116细胞48 h后,细胞的Survivin基因表达明显降低,导致了HCT116细胞G2/M期阻滞;pgsiRNA-Survivin转染组细胞对奥沙利铂的敏感性显著性增强。结论 Survivin特异性siRNA能显著沉默HCT116细胞Survivin基因,抑制细胞增殖,并增强HCT116细胞对奥沙利铂的敏感性。

Runt相关转录因子3在人结肠癌HCT-116/5-FU耐药细胞株中的表达及其与耐药的相关性

目的建立耐5-氟尿嘧啶(5-FU)的人结肠癌细胞株HCT-116/5-FU,初步探讨Runt相关转录因子3(RUNX3)与结直肠癌耐药的关系。方法采用低浓度梯度递增联合大剂量间断冲击法建立人结肠癌耐药细胞株HCT-116/5-FU,CCK-8法检测5-FU对亲本株HCT-116及耐药株HCT-116/5-FU的半数抑制浓度(IC_(50)值),绘制细胞生长曲线,计算细胞群体倍增时间(TD);qRT-PCR和Western blot法检测亲本株HCT-116细胞及耐药株HCT-116/5-FU细胞中RUNX3、P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)和肺耐药蛋白(LRP)的mRNA和蛋白表达。采用siRNA技术敲低HCT-116细胞中RUNX3的表达,分为RUNX3敲低组(si-RUNX3-1组、si-RUNX3-2组)和阴性对照组(si-NC组),qRT-PCR和Western blot法分别在mRNA水平和蛋白水平验证RUNX3的敲低效率;CCK-8法测定si-RUNX3组和si-NC组的IC_(50)值,Western blot法测定两组中P-gp、MRP1和LRP的表达情况。结果成功构建稳定的人结肠癌耐药细胞株HCT-116/5-FU,耐药倍数为7.7倍;HCT-116/5-FU耐药细胞株群体TD较HCT-116亲本株明显延长(P<0.001),耐药细胞群体TD是亲本细胞的1.38倍(P=0.002),耐药株细胞形态发生变化。耐药细胞HCT-116/5-FU的RUNX3 mRNA表达水平较亲本细胞株HCT-116明显降低(P=0.048),P-gp(P=0.008)、MRP1(P=0.001)和LRP mRNA(P=0.001)表达水平较亲本细胞株HCT-116明显升高;耐药细胞HCT-116/5-FU的RUNX3蛋白质相对表达量较亲本细胞株HCT-116明显降低(P<0.001),P-gp、MRP1、LRP蛋白的相对表达量较亲本细胞株明显升高(P均<0.001)。成功构建了RUNX3低表达的HCT-116细胞模型,si-RUNX3-1组RUNX3 mRNA的表达与si-NC组相比差异无统计学意义(P=0.064),si-RUNX3-2组明显低于si-NC组(P=0.034);si-RUNX3-1组和si-RUNX3-2组RUNX3蛋白的表达量均明显低于si-NC组(P均<0.001),si-RUNX3-2组的敲低效率更高。选用si-RUNX3-2组完成后续实验,si-RUNX3组的IC_(50)值较si-NC组明显升高,下调RUNX3的表达能明显降低HCT-116细胞对5-FU的敏感性(P<0.001);si-RUNX3组的P-gp、MRP1和LRP蛋白相对表达量均明显高于si-NC组(P均<0.001)。结论RUNX3表达下调能降低人结肠癌HCT-116细胞对5-FU的敏感性,可能与RUNX3表达的降低上调P-gp、MRP1和LRP等耐药蛋白表达,从而增加细胞的耐药性有关。

粉防己碱对人结直肠癌HCT116细胞株生物功能的影响及其机制

目的:探究粉防己碱对人结直肠癌HCT116细胞株生物功能的影响及其可能机制。方法:采用CCK-8检测粉防己碱对HCT116细胞活力的影响及其半数抑制浓度;用不同浓度粉防己碱(0、2.5、5和10μmol/L)处理细胞,细胞集落形成实验检测细胞增殖;流式细胞术、线粒体膜电位检测技术和Hoechst 33342细胞核染色技术检测细胞凋亡;细胞迁移实验和划痕实验检测细胞迁移能力;蛋白印迹技术检测细胞上皮间质转化标志蛋白表达水平及PI3K/AKT/NF-κB信号通路中关键分子活化程度。结果:HCT116细胞活力随粉防己碱处理浓度增加而降低,粉防己碱半数抑制浓度为9.441μmol/L;与0μmol/L组相比,2.5、5和10μmol/L粉防己碱组细胞形成集落数明显减少(P均<0.05);5、10μmol/L粉防己碱组G0/G1期细胞比例增加,S期和G2/M期细胞比例下降,凋亡细胞比例增加(P均<0.05);2.5、5、10μmol/L粉防己碱组细胞线粒体膜电位降低,细胞核荧光增强,迁移能力降低(P均<0.05);与0μmol/L组相比,10μmol/L粉防己碱组细胞多呈圆形,有更多上皮细胞形态;2.5、5和10μmol/L粉防己碱组细胞上皮标志蛋白E-钙黏蛋白表达增加,而间充质标志物N-钙黏蛋白和波形蛋白表达减少,且PI3K/AKT/NF-κB信号通路中关键分子AKT和NF-κB的磷酸化水平降低(P均<0.05)。结论:粉防己碱可能通过抑制PI3K/AKT/NF-κB信号途径逆转HCT116细胞上皮间质转化,进而降低细胞增殖迁移能力,诱导其凋亡。

RNAi沉默Arl4c对结肠癌细胞株HCT116增殖能力的影响

目的探讨利用RNA干扰技术沉默Arl4c基因对结肠癌HCT116细胞株增殖的影响。方法将Arl4c基因的siRNA稳定转染至HCT116细胞,采用RT-PCR、Western blot鉴定干扰效果,以HCT116细胞沉默Arl4c基因组为实验组,以转染空质粒的HCT116细胞和空白的HCT116细胞为对照组,分别采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、细胞倍增时间、平板克隆形成实验、流式细胞术检测沉默Arl4c基因后,HCT116细胞生长速度、细胞周期、克隆形成能力的改变。结果沉默Arl4c基因后,实验组细胞的生长速度明显下降,G1期细胞增多、S期细胞减少,空白对照、空质粒对照组和实验组细胞平均倍增时间分别为(4.718±0.212)h,(4.981±0.24)h和(6.0±0.137)h;空白对照、空质粒对照组和实验组平均细胞克隆形成数目分别为121±9.00,117±10.00和80±9.00。实验组与空白对照、空质粒对照组相比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Arl4c基因的沉默能够抑制结肠癌细胞HCT116的增殖,可能在结肠癌的发生发展中起重要作用。

RNA干扰沉默STC-1基因对结肠癌细胞株HCT116增殖的影响

目的探讨RNA干扰技术沉默STC-1基因对结肠癌细胞株HCT116增殖的影响。方法将STC-1基因的si-RNA稳定转染至HCT116细胞;采用RT-PCR、Western blot鉴定干扰效果;以STC-1基因沉默细胞HCT116为实验组,以转染空质粒的HCT116细胞和空白的HCT116细胞为阴性对照和空白对照组,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、细胞倍增时间、平板克隆形成实验、流式细胞术等分析沉默STC-1基因后,HCT116细胞生长速度、细胞周期、克隆形成能力等的改变。结果 MTT实验结果表明,沉默STC-1基因后,实验组细胞的生长速度明显下降;其细胞周期也发生改变G1期细胞增多、S期细胞减少。空白对照组、阴性对照组和实验组细胞平均倍增时间为分别为(3.718±0.82)h,(3.981±0.918)h,(5.018±0.981)h;空白对照组,阴性对照组和实验组平均细胞克隆形成数目分别为65.68±4.826,71.28±4.662,45.95±4.432。实验组与对照组相比较,平均倍增时间和平均细胞克隆形成数目差异有统计学意义(P<0.05)。结论沉默STC-1基因对结肠癌细胞HCT116的增殖具有重要的作用,这为进一步阐明结直肠癌发病机制奠定了坚实的基础。

有毒中药对人结肠癌HCT116和SW480细胞的生长抑制作用

目的从已知具有抗肿瘤作用的有毒中药或中药化合物中筛选出具有抑制不同发生途径人结肠癌细胞作用的药物。方法应用MTT法检测白花蛇舌草、雷公藤、重楼、龙葵、藤黄、天南星、黄药子、华蟾素、斑蝥酸钠及亚砷酸氯化钠对不同发生途径的人结肠癌细胞HCT116(hMLH1缺失结肠癌细胞株)和SW480(错配修复基因正常的结肠癌细胞株)生长抑制作用。结果斑蝥酸钠、华蟾素、亚砷酸氯化钠及藤黄提取物对人结肠癌细胞HCT116及SW480的生长有抑制作用。斑蝥酸钠、华蟾素及藤黄提取物干预HCT116细胞的IC50值和干预SW480细胞的IC50值比较有统计学差异(P<0.05),亚砷酸氯化钠干预两细胞株的IC50值无统计学差异(P>0.05)。白花蛇舌草、雷公藤、重楼、龙葵、天南星、黄药子这6种中药的提取物在本实验条件下无效。结论藤黄提取物、斑蝥酸钠、亚砷酸氯化钠及华蟾素可有效抑制不同途径的人结肠癌细胞的生长,其中斑蝥酸钠、华蟾素、藤黄提取物可能具有特异性抗错配修复基因缺失所致结、直肠癌的作用。

姜黄素通过靶向PBK对结直肠癌HCT116细胞增殖的抑制作用

目的研究姜黄素抑制结直肠癌HCT116细胞增殖的分子机制。方法体外培养HCT116细胞,四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测不同浓度姜黄素(0、10、20、50、100、200μmol/L)对HCT116细胞增殖率的影响,实验分空白对照组、EGF组(单独加入20 ng/m L EGF)、EGF+姜黄素组;细胞锚定增殖实验检测药物对HCT116细胞增殖的抑制作用;体外结合及体外激酶实验检测姜黄素对磷酸化酶b激酶(PBK)活性的影响;Western blotting及免疫组织化学方法检测姜黄素对PBK下游信号通路的影响。结果当姜黄素浓度<50μmol/L时,对HCT116细胞影响较小;而当浓度达到100μmol/L时,HCT116细胞凋亡明显增加。HCT116细胞在软琼脂内锚定增殖的结果显示:与EGF组比较,EGF+姜黄素组细胞克隆小且克隆数量少,具有药物浓度依赖性。体外结合及体外激酶实验结果显示姜黄素可以结合PBK,并抑制PBK的活性。Western blotting及免疫组织化学结果显示姜黄素明显下调PBK下游信号通路ERK1/2及H3的磷酸化水平,具有时间和浓度依赖性。结论在结直肠癌HCT116细胞中,姜黄素可能通过抑制PBK的活性,起到抗HCT116细胞增殖的作用。

人HCT116结肠癌细胞系中CD133^+结肠癌干细胞分离及鉴定

目的从人结肠癌细胞系(HCT116)中分离鉴定结肠癌干细胞,并观察其体外生物学特性。方法利用RT-PCR、免疫荧光、流式细胞等技术检测HCT116细胞中CD133的表达情况;利用免疫磁珠分选技术分选CD133+细胞;采用无血清培养基培养分选后的CD133+细胞鉴定其体外增殖特性;采用含血清培养基诱导干细胞克隆球分化并采用免疫组化检测CK20表达情况鉴定其分化特性。结果HCT116细胞系中存在CD133+细胞,免疫磁珠能有效的分选CD133+细胞,分选后的阳性含量为91.92%,分选后的阳性细胞具有典型干细胞的体外增殖、分化特性。结论CD133+结肠癌干细胞在体外具有和普通干细胞类似的无限增殖、自我更新和分化能力,同时它们也表达ABCG2等耐药相关蛋白。

sTie2通过阻抑血管生成拟态抑制结肠癌HCT116细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨可溶性Tie2(soluble Tie 2,sTie2)对结肠癌HCT116细胞血管生成拟态(vascular mimicry,VM)形成、增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法:将重组质粒pBLAST49-hsTie2及对照质粒pBLAST49通过脂质体转染至HCT116细胞,分别形成hsTie2-HCT116细胞和Ctrl-HCT116细胞。通过3D模型培养、SRB法、细胞划痕实验及Transwell法分别检测HCT116细胞的VM形成、增殖、迁移及侵袭能力,采用Western blotting法检测HCT116细胞中VE-cadherin蛋白的表达。结果:pBLAST49-hsTie2重组质粒成功转染至结肠癌HCT116细胞。与Ctrl-HCT116细胞相比,hsTie2-HCT116细胞中VM的形成[(0.75±0.45)vs(7.50±0.52)个/视野,P<0.01]及VE-cadherin蛋白的表达[(1.23±0.08)vs(1.73±0.02),P<0.05]显著降低;细胞增殖率也显著降低[(32.57±4.57)%vs(88.24±21.94)%,P<0.01];细胞迁移能力[(0.37±0.07)vs(0.80±0.03)mm,P<0.01]及侵袭能力[(57.25±3.17)vs(127.25±6.25)个/视野,P<0.01]均显著减弱。结论:sTie2通过阻抑VM形成抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭,有望成为既抗血管生成又抗VM形成的双靶向治疗结肠癌的药物。

三叶青乙酸乙酯提取物通过miR-515-5p/CDCA5调控结直肠癌细胞HCT116增殖、迁移及侵袭

结直肠癌是临床常见的一种消化系统恶性肿瘤,中药提取物具有抗氧化、抗肿瘤等作用,并可抑制结直肠癌等肿瘤细胞的增殖等生物学行为[1-3]。三叶青属于葡萄科崖爬藤属多年生藤本植物,可抑制肝癌细胞增殖并可促进细胞凋亡[4]。miR-515-5p在肿瘤细胞中表达下调,上调其表达可抑制肿瘤细胞迁移[5]。starbase预测显示CDCA5可能是miR-515-5p的靶基因,CDCA5在结直肠癌细胞中表达水平升高,并可通过激活ERK信号通路从而促进结直肠癌发展进程[6]。因此,本研究主要探究三叶青乙酸乙酯提取物对结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响,探讨其对miR-515-5p/CDCA5分子轴的调控作用。

高菜硫代葡萄糖苷提取物对人结肠癌细胞HCT116的抑制作用

为了探讨高菜(Brassica juncea var.integlifolia)中硫代葡萄糖苷(简称硫苷)的含量、种类及其对人结肠癌细胞株HCT116细胞增殖和凋亡的影响,采用紫外分光光度法检测新鲜高菜中总硫苷含量,高效液相色谱-电喷雾质谱联用技术鉴定硫苷化合物结构,流式细胞仪、蛋白质印迹法和实时定量聚合酶链式反应检测高菜硫苷提取物对人结肠癌细胞株HCT116细胞增殖和凋亡的影响。结果表明:新鲜高菜中总硫苷含量为15.45 mg/g;从高菜硫苷提取物(总硫苷质量分数为73.7%)中鉴定出2-丙烯基硫苷、4-甲基硫代丁基硫苷、4-甲氧基-3-吲哚甲基硫苷3种主要的硫苷化合物;高菜硫苷提取物对正常人结肠成肌纤维细胞CCD-18Co没有抑制作用,但通过诱导细胞周期基因及相关信号蛋白(Cyclin B、CyclinD1、CyclinE)下调使HCT116细胞的细胞周期停滞,通过诱导细胞凋亡基因及相关信号蛋白(Caspase-3、Cleaved caspase-3)的上调使人结肠癌细胞株HCT116细胞凋亡,从而抑制人结肠癌细胞株HCT116细胞增殖。

藤黄对人结肠癌HCT116细胞裸鼠原位移植模型的作用

目的:研究藤黄对人结肠癌HCT116细胞建立的裸鼠外科原位移植瘤生长及转移的抑制作用.方法:通过外科原位移植能表达绿色荧光蛋白人结肠癌HCT116细胞的方法建立裸鼠结肠癌模型.40只模型裸鼠随机分为对照组(G1),5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)组(G2),10、20 mg/kg藤黄组(G3、G4),每组10只.G1组采用生理盐水灌胃,1次/d;G2组用25 mg/kg的5-FU进行腹腔灌注,3次/wk;G3、G4组分别予相应剂量的藤黄提取物灌胃,1次/d.每天观察受试裸鼠的并发症及死亡情况,2次/wk在体外荧光影像系统下观察移植肿瘤大小并测量裸鼠体质量,实验终点处死所有受试裸鼠在开放荧光系统下观察肿瘤生长及转移情况,切除移植肿瘤进行称体质量.结果:药物干预后,20 mg/kg藤黄组各观察点的平均肿瘤体积(mm3)均小于对照组(d4:104.5±35.5 vs 164.1±66.1;d7:102.6±53.8vs 286.2±132.0;d11:137.6±70.5 vs 324.4±115.8;d14:207.2±101.7 vs 434.2±169.3;d21:229.8±99.8 vs 480.4±165.5),差异有统计学意义(P<0.05).实验终点20 mg/kg藤黄组的平均肿瘤质量轻于对照组(0.58 g±0.26 g vs 0.92 g±0.26 g),差异有统计学意义(P<0.05).20 mg/kg藤黄组与5-FU组之间比较,10 mg/kg藤黄组与对照组比较,无论是各观察点平均肿瘤体积还是实验终点肿瘤重量差异无统计学意义(P>0.05).实验终点开放体内荧光成像显示各组均出现了不同程度的胰腺及淋巴结转移,比较组间淋巴结及胰腺转移率的差异无统计学意义(P>0.05).实验过程中各组实验动物均未出现药物相关的不良反应,各组荷瘤裸鼠的平均体质量未出现明显波动.结论:藤黄在达到一定干预剂量(20 mg/kg)后能安全有效地抑制人结肠癌HCT116细胞裸鼠原位移植瘤的生长,可能具有潜在的临床抗结直肠癌作用.

藤黄酸诱导人结肠癌细胞HCT116及SW480凋亡的研究

目的:探讨藤黄酸对不同发生途径的人结直肠癌细胞凋亡的影响。方法:采用Annexin V-FITC/PI双染法,检测藤黄酸给药后对HCT116及SW480细胞凋亡的影响。结果:0.25、0.5、1.0μg/m L浓度的藤黄酸对HCT116细胞的总凋亡率分别为25.98%、31.08%、37.94%,各浓度的藤黄酸对HCT116细胞的总凋亡率与空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),并且呈浓度依赖性;0.25、0.5、1.0μg/m L浓度的藤黄酸对SW480细胞的总凋亡率分别为8.36%、35.05%、38.93%,各浓度的藤黄酸对SW480细胞的总凋亡率与空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),并且呈浓度依赖性。结论:藤黄酸对人结肠癌细胞有较好的促凋亡作用。

吲哚美辛对人结肠癌HCT116和SW480细胞的影响

目的 :探讨吲哚美辛对人结肠癌HCT116和SW4 80细胞的影响。方法 :体外培养细胞 ,采用MTT法分别检测吲哚美辛作用后两系细胞的生长情况 ,计算半抑浓度 (IC50 ) ;体内建立裸鼠皮下移植瘤模型 ,喂服吲哚美辛 3mg/ (kg·d)共 4周 ,隔日测瘤结节体积及鼠重 ,评价吲哚美辛的抑瘤效果。结果 :吲哚美辛作用于结肠癌HCT116和SW4 80细胞 4 8h后 ,细胞的生长均受到明显抑制 ,呈剂量依赖效应 ,IC50 分别为 (318.2± 12 .7) μmol/L和 (70 1.4± 2 9.5 ) μmol/L ;吲哚美辛显著减慢裸鼠皮下移植瘤的生长 ,用药 4周后抑瘤率达 4 4 .6 % ,未见明显毒性反应。结论 :吲哚美辛能抑制不表达环氧合酶的人结肠癌细胞 (HCT116和SW4 80 )生长 ,间接说明其抗癌作用不完全依赖环氧合酶途径 。

ACL的构建及其对结直肠癌HCT116细胞增殖和迁移的作用

目的制备阿托伐他汀钙脂质体(ACL),探究其对结直肠癌HCT116细胞增殖、迁移的影响。方法采用乳化-溶剂挥发法制备ACL并进行相关参数的测定。以香豆素6为荧光探针探究HCT116细胞摄取的变化;MTT实验和细胞平板克隆实验检测ACL和阿托伐他汀钙(AC)对HCT116细胞增殖的影响;Transwell实验检测ACL和AC对HCT116细胞迁移的影响。结果成功制备ACL,其平均粒径为(87.24±0.485)nm,分散系数为0.240~0.250,Zeta电位为(-12.19±3.642)mV。脂质体形态似球形或圆形结构,外观完整,且大小均匀。脂质体组细胞内荧光强度显著增强,细胞摄取增加。AC和ACL作用后,细胞增殖率和克隆形成率显著降低,迁移细胞数减少,且ACL的抑制作用均显著强于AC。结论ACL可以显著增加HCT116细胞的摄取,增强AC对HCT116细胞的抑制作用。

糖化终末产物对人结肠癌HCT116细胞中ChREBP表达的影响

目的研究糖化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)对人结肠癌HCT116细胞中碳水化合物反应元件结合蛋白(carbohydrate responsive element binding protein,ChREBP)表达的影响。方法采用RTPCR检测AGEs处理的人结肠癌HCT116细胞中ChREBP及其下游基因的表达;使用N-乙酰半胱氨酸(NAC)干预氧化应激状态;运用Western印迹法观察在HCT116细胞中AGEs诱导对ChREBP表达的影响;运用MTS比色法观察AGEs诱导对HCT116细胞增殖的影响。结果 AGEs刺激后人结肠癌HCT116细胞中转录因子ChREBP表达增加(P<0.05);细胞经抗氧化剂NAC处理后,AGEs刺激所致ChREBP表达增加和HCT116细胞增殖均被明显抑制(P<0.05)。结论 AGEs通过激活氧化应激反应来上调人结肠癌HCT116细胞中的ChREBP表达。

龙胆苦苷对人结肠癌HCT116细胞增殖、凋亡的影响

目的研究龙胆苦苷对人结肠癌细胞HCT116增殖、凋亡的影响,并初步探讨其可能作用机制。方法体外培养人结肠癌HCT116细胞,采用不同浓度的龙胆苦苷(0、12.5、25、50 mg/L)作用于细胞,并同时应用5-氟尿嘧啶作用于相同的细胞,对比不同处理方法对细胞生长的抑制及对细胞形态及凋亡的影响,并检测不同浓度龙胆苦苷对细胞凋亡相关基因Caspase-3、Bax、Bcl-2表达水平的影响。结果与阴性对照组相比,5-氟尿嘧啶组和龙胆苦苷组均显著能够抑制HCT116细胞增殖,且龙胆苦苷组对HCT116细胞的抑制增殖作用呈剂量和时间依赖性,差异有统计学意义(P<0.05)。5-FU组凋亡细胞百分率最高,其次是龙胆苦苷50、25、12.5 mg/L组,与阴性对照组比较,龙胆苦苷组(50、25、12.5 mg/L)细胞凋亡率显著提高,差异有统计学意义(P<0.05)。与阴性对照组比较,龙胆苦苷(12.5、25、50 mg/L)组Bax、Caspase-3 mRNA表达水平显著升高,而Bcl-2 mRNA表达在25、50 mg/L龙胆苦苷处理后明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与阴性对照组比较,龙胆苦苷(12.5、25、50 mg/L)组促凋亡蛋白Bax、Caspase-3的表达水平明显上调,而抑凋亡蛋白Bcl-2的表达明显下调,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论龙胆苦苷可抑制HCT116细胞增殖并促进细胞凋亡,且对肿瘤细胞的抑制增殖作用呈剂量和时间依赖性,可能与激活Bax表达、抑制Bcl-2表达进而活化Caspase-3信号通路有关。