姜黄素类似物对人结肠癌HT-29细胞增殖与自噬的影响

目的初步探究姜黄素类似物——WH-8对人结肠癌HT-29细胞增殖和自噬的影响。方法选用不同浓度WH-8作用于人结肠癌HT-29细胞,应用四甲基偶氮唑盐还原法观察药物对细胞的生长抑制作用;通过荧光染色技术和细胞成像技术观察WH-8作用下细胞自噬囊泡的变化;四甲基偶氮唑盐还原法检测经自噬特异性抑制剂3-MA预处理后WH-8对细胞生长抑制率的影响;蛋白质印迹法观察WH-8作用下细胞自噬特征性蛋白酵母自噬相关基因1(Beclin 1)和微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达情况。结果WH-8呈时间-剂量依赖性抑制人结肠癌HT-29细胞增殖,48 h平均半数抑制浓度为(12.5±1.3)μmol/L;一定浓度下WH-8可诱导细胞的自噬囊泡增多;3-MA可逆转WH-8对人结肠癌HT-29细胞的生长抑制作用,差异有统计学意义(P<0.05);WH-8可诱导Beclin-1表达上调,且在一定时间内促进LC3Ⅰ向LC3Ⅱ转化。结论WH-8可抑制人结肠癌HT-29细胞增殖并诱导细胞自噬。

扶正解毒祛瘀方联合奥沙利铂对人结肠癌HT-29细胞增殖与凋亡的影响及机制研究

目的:研究扶正解毒祛瘀方(简称"扶正方")联合奥沙利铂(L-OHP)对人结肠癌HT-29细胞增殖与凋亡的影响及机制。方法:将HT-29细胞分为空白对照组(不加药物)、扶正方组(1 000 mg/L)、L-OHP组(31.25 mg/L)和联合用药组(1 000 mg/L扶正方+31.25 mg/L L-OHP)。加入相应药物作用48 h后,采用MTT法检测细胞增殖情况,倒置显微镜下观察细胞形态的改变,流式细胞术检测细胞周期和凋亡率,实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)法检测细胞中促凋亡基因Bax、抑凋亡基因Bcl-2 m RNA的表达,Western blot法检测细胞中Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果:与空白对照组比较,L-OHP组和联合用药组细胞增殖均受到抑制、S期和G_2/M期细胞比例升高、G_0/G_1期细胞比例降低(P<0.05),L-OHP组、扶正方组和联合用药组细胞凋亡率升高、细胞中Bax m RNA及蛋白的表达上调、细胞中Bcl-2 m RNA的表达下调(P<0.05),且联合用组变化较两药单用组更明显(P<0.05)。结论:扶正方与L-OHP联合应用可抑制HT-29细胞的增殖、促进细胞凋亡,且作用优于两药单用;其机制可能与上调细胞中Bax基因与蛋白表达、下调细胞中Bcl-2基因表达有关。

吉祥草提取物对人结肠癌HT-29细胞体外抑制作用的研究

目的研究吉祥草提取物对人结肠癌HT-29细胞的体外增殖抑制作用和诱导凋亡作用。方法 MTT法筛选吉祥草乙醇提取物及其不同溶剂萃取部分对HT-29细胞抑制作用的活性部位;通过凋亡染色观察细胞凋亡形态;应用流式细胞术AnnexinⅤ-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡率。结果吉祥草正丁醇萃取物对HT-29细胞的抑制作用较强,且呈量效和时效关系,作用48 h时IC50值为66.59 mg.L-1,凋亡染色显示有典型的凋亡形态出现,流式细胞仪检测其能诱导HT-29细胞凋亡并呈剂量依赖关系。结论吉祥草正丁醇萃取物能抑制人结肠癌HT-29细胞增殖并诱导细胞凋亡。

复合螺旋藻多糖对人结肠癌HT-29细胞株体外抗肿瘤作用的研究

目的研究复合螺旋藻多糖对体外培养的人结肠癌HT-29细胞的抑制作用及其机制。方法将螺旋藻多糖(PSP)与银杏叶提取物(GBE)按一定比例复合,用不同浓度的复合制剂分别对细胞作用后,在显微镜下观察细胞形态学变化、用MTT法测其生长抑制率、PI及AnnexinV-FITC/PI染色后,流式细胞仪测细胞周期及凋亡率。结果不同比例和浓度的复合螺旋藻多糖对人结肠癌HT-29细胞均有抑制作用,并呈时间和剂量依赖性,抑制作用高于单一成分组;细胞阻滞于S期,凋亡细胞增加。结论复合螺旋藻多糖通过阻断细胞周期而抑制体外培养人结肠癌HT-29细胞的生长,并能够促进细胞凋亡,具有较好的抑肿瘤活性。

血清胸腺因子9肽对人结肠癌HT-29的抑瘤作用

目的:观察血清胸腺因子9肽对人结肠癌HT-29移植瘤的抑制作用。方法:裸鼠皮下接种人结肠癌HT-29细胞,瘤块生长至体积约100mm^3后,分为血清胸腺因子9肽高、中、低剂量组(分别为1.25、0.625、0312mg/kg)、环磷酰胺阳性对照组(30mg/kg)和生理盐水空白对照组,每组10只,血清胸腺因子9肽各剂量组和空白对照组裸鼠每天皮下给受试物1次,连续28d。阳性对照组腹腔注射给药,每周2次,连续4周。每周称量体质量、测量瘤块长径和短径2次。于末次给药后24h处死动物,称取体质量、测量瘤块长径和短径,计算体积后,剥离肿瘤称瘤质量,计算相对肿瘤增殖率和抑瘤率。实验重复3次。结果:血清胸腺因子9肽高、中、低剂量组相对肿瘤体积与空白对照组比较均显著减小(P<0.01或P<0.05),其相对肿瘤增殖率分别为50%±20%、62%±20%和77%±35%;血清胸腺因子9肽高、中、低剂量组瘤质量与空白对照组比较均明显减轻(P均<0.01),抑瘤率分别为45%±3%、35%±1%、27%±3%;给药前后血清胸腺因子9肽各剂量组裸鼠体质量与空白对照组比较变化不显著(P>0.05)。结论:血清胸腺因子9肽对人结肠癌HT-29移植瘤具有明显抑制作用。

Glut1基因沉默对人结肠癌HT-29细胞株增殖、分化及凋亡的影响及机制研究

目的探究葡萄糖转运蛋白1(Glut 1)基因沉默对人结直肠癌HT-29细胞增殖、分化及凋亡的影响及机制。方法将Glut 1干扰序列(siRNA)转染至人结肠癌HT-29细胞作为shGlut 1组,非干扰序列转至HT-29细胞作为NC组,HT-29细胞作为Blank组,癌旁正常组织细胞作为Control组,应用qRT-PCR法和Western blot法检测各组细胞中Glut 1、TGF-β1、PI3K、AKT、PTEN、mTOR mRNA和相应蛋白的表达水平,并检测Bcl-2/Bax比值,p-PI3K、p-S 473-AKT、p-S 389-S6K1、p-T 70-4 EBP1、Cleaved Caspase-3、Cleaved-PARP蛋白的表达;MTT法检测各组细胞增殖能力变化,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况,克隆形成实验检测肿瘤细胞体外增殖成瘤能力。结果免疫荧光结果表明shGlut 1组转染效率较高,符合实验标准;与Control组比较,结肠癌组织中Glut 1、TGF-β1、PI3K、AKT、mTOR、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达上调,而PTEN、Bax的mRNA和蛋白的表达下调,p-PI3K、p-S 473-AKT、p-S 389-S6K1和p-T 70-4 EBP1蛋白表达上调,Cleaved Caspase-3、Cleaved-PARP蛋白表达下调(P均<0.05);与Blank组和NC组比较,shGlut 1组Glut 1、TGF-β1、PI3K、AKT、mTORC 1、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达下调,PTEN、Bax mRNA和蛋白的表达上调,p-PI3K、p-S 473-AKT、p-S 389-S6K1和p-T 70-4 EBP1表达下调,Cleaved Caspase-3、Cleaved-PARP蛋白的表达上调,增殖率下调,G0/G1期较多而S期较少,凋亡率上调,克隆形成细细胞生长较慢(P均<0.05)。结论Glut 1基因沉默能抑制结直肠癌细胞的增殖与分化,促进其凋亡,考虑为抑制TGF-β/PI3K-AKT-mTOR信号通路。

抑制人结肠癌HT-29细胞增殖乳酸菌有效成分的筛选

以鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)GG(LGG)为阳性对照,4株具有潜在抗结肠癌功效的乳酸菌为研究对象,提取其细胞壁及细胞质,通过3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法初步筛选具备抑制HT-29细胞增殖能力的成分,再通过分析提取成分对HT-29细胞DNA损伤、细胞死亡及周期的影响,获得具有抗结肠癌作用的有效成分。结果表明,与阳性对照LGG相比,乳酸菌X11、X12、M5、K14的细胞壁和乳酸菌M5、K14的细胞质对HT-29细胞增殖能力有显著抑制作用(P<0.05);HT-29细胞经乳酸菌细胞壁或细胞质(蛋白质含量为80μg/mL)处理48h后,脱氧核糖核酸(DNA)出现了明显的弥散拖尾形态;乳酸菌X12、M5和K14细胞壁诱导HT-29细胞凋亡,并调控癌细胞周期分布。通过筛选最终获得乳酸菌X12、M5和K14的细胞壁成分具有抗结肠癌作用。

辽东楤木叶总皂苷对结肠癌HT-29细胞的生长抑制作用及机制研究

目的研究辽东楤木叶总皂苷(ETS)对HT-29细胞生长的抑制作用及作用机制。方法采用MTT法检测ETS对HT-29细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测ETS对HT-29细胞周期和凋亡的影响;Western blot法检测ETS对HT-29细胞PLK1蛋白表达的影响。结果 ETS对结肠癌HT-29细胞增殖有明显抑制作用,IC50值为39.62 mg·L-1。在10～40 mg·L-1剂量作用下,可剂量依赖性诱导HT-29细胞凋亡。ETS主要将细胞周期阻滞在G0/G1期,从而可剂量依赖性抑制肿瘤细胞增殖。ETS可明显抑制HT-29细胞PLK1蛋白的表达。结论 ETS体外可明显抑制HT-29细胞的生长,其抗肿瘤作用与细胞周期阻滞、细胞凋亡及抑制PLK1蛋白表达有关。

龙葵碱联合VEGF抗体对人结肠癌鸡胚移植模型血管生成的影响

目的建立人结肠癌鸡胚移植模型,探讨龙葵碱、VEGF抗体及两者联合对人结肠癌细胞诱导肿瘤血管生成及肿瘤增殖的影响。方法将人结肠癌HT-29细胞鸡胚移植模型分为实验组和对照组,实验组加入龙葵碱、VEGF抗体和龙葵碱+VEGF抗体混合液,对照组加入磷酸盐缓冲液(PBS)液。通过立体显微镜照相、IPP 6.0图像分析软件分析图片;免疫组织化学方法检测CD34抗原和ki-67抗原,观察龙葵碱、VEGF抗体和龙葵碱联合VEGF抗体对肿瘤血管生成及肿瘤增殖的影响。结果肿瘤血管面积、CD34抗原和ki-67抗原表达:龙葵碱+VEGF抗体组明显优于单药VEGF抗体组和龙葵碱组,VEGF抗体组优于龙葵碱组,3组均明显优于对照组(P<0.01)。结论龙葵碱、VEGF抗体及两者联合时均能抑制人结肠癌HT-29细胞系诱导的肿瘤血管生成及肿瘤增殖,为抗肿瘤血管生成提供了一种新途径。

扶正解毒祛瘀方联合奥沙利铂对人结直肠癌裸鼠移植瘤的影响

目的:探讨扶正解毒祛瘀方(简称“扶正方”)联合奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)对人结直肠癌HT-29裸鼠移植瘤的影响。方法:构建裸鼠移植性结直肠癌HT-29肿瘤模型,将其随机分为空白组、扶正方组、L-OHP组及扶正方+L-OHP组,每组10只。空白组给予生理盐水灌胃,扶正方(50g/kg)为灌胃给药;L-OHP(10mg/kg)为腹腔注射给药(ip)1次。扶正方+L-OHP组为L-OHP腹腔注射给药(ip)1次,扶正方灌胃(ig)给药,每日1次,连续21d。观察扶正方对皮下移植瘤的作用及与L-OHP合用的效果;并用RT-PCR及Westernblotting法检测细胞周期相关因子细胞周期素D1(cyclinD1)、细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)、增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂P21(P21)的表达,比较各组的变化。结果:扶正方组、L-OHP组、扶正方+L-OHP组的抑瘤率分别为9.36%、29.69%、44.54%,均能抑制结肠癌移植瘤的生长。免疫器官脾的脏器指数空白组(0.41±0.04)、合用组(0.45±0.11),而扶正方组为(0.47±0.05),均高于L-OHP组(0.40±0.11);且扶正方组显著高于空白组(P<0.01)。PCR与Westernblotting结果均显示,与空白组比较,L-OHP组、扶正方+L-OHP组cyclinD1、CDK4、PCNA的表达下调(P<0.05,P<0.01),P21的表达上调(P<0.01);与L-OHP组比较,扶正方+L-OHP组PCNA(P<0.01)表达下调,P21的表达上调(P<0.01)。结论:扶正方与L-OHP单独和联合应用均对结肠癌小鼠移植瘤的生长有抑制作用,且两药合用不仅能增强化疗效果,同时在一定程度上抑制了L-OHP的毒性,其机制可能与影响周期相关因子的表达有关。

鞘氨醇对人结肠癌细胞的抑制作用

目的 研究鞘氨醇对人结肠癌细胞的影响。方法 采用四甲基偶氮唑盐法 (MTT)、细胞核分裂指数和3 H -TdR掺入试验方法 ,所设剂量鞘氨醇分别为 0 ,0 82 ,1 6 3,3 12 5 ,6 2 5 ,12 5 μmol/L ,以二甲基亚砜 (DMSO)为溶剂对照。结果 鞘氨醇对HT - 2 9细胞的生长有明显抑制作用。在MTT试验中 ,不同浓度鞘氨醇对HT - 2 9细胞的7d抑制率分别为 18% ,4 5 % ,72 % ,87%和 89% ;在核分裂指数试验中 ,随着鞘氨醇剂量的增高 ,其核分裂指数明显降低 ;在3 H -TdR掺入试验中 ,可见随着鞘氨醇剂量的增高 ,3 H -TdR掺入到HT - 2 9细胞中明显的减少 ,与阴性对照组相比有显著性差异。结论 鞘氨醇对HT - 2 9细胞的生长增殖有明显抑制作用 ,这可能是鞘磷脂抑制结肠癌的机制之一。

鞘磷脂水解产物对结肠癌细胞中碱性鞘磷脂酶的影响

背景与目的:碱性鞘磷脂酶(alk-SMase)是鞘磷脂(SM)新陈代谢和发挥抑制结肠癌作用的关键酶。通过体外实验探讨SM的水解产物的神经酰胺(Cer)和鞘氨醇(Sph)对人结肠癌细胞HT-29中alk-SMase表达的影响。材料与方法:分别用12.5、25、50μmol/L的C2-Cer和Sph处理HT-29细胞12、24、48 h后,分别用Western blot法和RT-PCR检测细胞中alk-SMase的蛋白水平和mRNA表达水平的变化。实验并设DMSO溶剂对照组。结果:C2-Cer和Sph作用HT-29细胞后,其alk-SMase蛋白及其mRNA的表达下调。结论:Cer和Sph对HT-29细胞中alk-SMase的表达具有负反馈调节作用。

氟尿嘧啶热化疗对结肠癌细胞的细胞毒作用

目的:研究5-氟尿嘧啶(5-Fu)热化疗对结肠癌HT-29细胞的细胞毒作用。方法:将HT-29细胞分为对照组、5-Fu组、5-Fu热化疗组,对照组不作任何处理,5-Fu组加入未加热5-Fu,5-Fu热化疗组加入43℃5-Fu,采用CCK8法检测3组HT-29细胞增殖率,采用流式细胞术检测3组HT-29细胞凋亡率,通过Transwell小室实验检测3组HT-29细胞侵袭能力。结果:5-Fu组HT-29细胞增殖率明显低于对照组(P<0.05);5-Fu热化疗组HT-29细胞增殖率明显低于5-Fu组(P<0.05);5-Fu组HT-29细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05);5-Fu热化疗组HT-29细胞凋亡率明显高于5-Fu组(P<0.05);5-Fu组穿过小室膜的HT-29细胞数明显少于对照组(P<0.05);5-Fu热化疗组穿过小室膜的HT-29细胞数明显少于5-Fu组(P<0.05)。结论:5-Fu热化疗对结肠癌HT-29细胞具有明显毒作用,5-Fu热化疗能够抑制结肠癌细胞增殖及侵袭,诱导结肠癌细胞凋亡,这可为临床治疗结肠癌提供一定参考。

半夏泻心汤通过调控PI3K/AKT/mTOR信号通路对结肠癌细胞增殖和转移的影响

目的:观察半夏泻心汤调控磷脂酰肌醇-3激酶(phosphoinositide 3-kinases,PI-3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路对人结肠癌HT-29细胞增殖和转移的作用机制。方法:将40只大鼠按随机数字表法分为4组,每组10只,分别是空白对照组、半夏泻心汤+5-氟尿嘧啶(5-florouracil,5-FU)组、5-FU组和半夏泻心汤组。采用MTT法检测各组大鼠用药后对人结肠癌HT-29细胞增殖的影响;采用划痕实验检测各组大鼠用药后对HT-29细胞转移能力的影响;采用Western-blotting法检测各组用药对大鼠mTOR、PTEN蛋白表达水平的影响。结果:半夏泻心汤+5-FU组能够抑制HT-29细胞增殖,且呈剂量-时间依赖性,与其他3组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);半夏泻心汤+5-FU组能够抑制HT-29细胞转移,且呈剂量依赖性,与其他3组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);半夏泻心汤+5-FU组上调抑癌基因PTEN蛋白表达量,能够下调mTOR蛋白表达量,与其他3组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:半夏泻心汤具有抑制人结肠癌HT-29细胞增殖和转移的作用,其机制可能与调控PI3K/AKT/mTOR信号通路有关。