黄芩苷通过Notch通路对人结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨黄芩苷能否通过抑制人结肠癌SW480细胞中Notch通路的表达而抑制其增殖并促进其凋亡。方法:MTT法及流式检测术分别检测不同浓度黄芩苷对人结肠癌SW480细胞生长抑制及凋亡的影响;Western Blot法及RT-PCR法分别检测不同浓度黄芩苷对人结肠癌SW480细胞Notch1、Hes-1蛋白和Jagged1基因表达的影响。结果:随着药物剂量的增大,黄芩苷对人结肠癌SW480细胞的抑制率逐步上升;黄芩苷20μmol/L组细胞凋亡率显著高于对照组;黄芩苷40μmol/L组细胞凋亡率显著高于黄芩苷20μmol/L组;黄芩苷20μmol/L组细胞Notch1、Hes-1蛋白、Jagged1基因表达均显著低于对照组,黄芩苷40μmol/L组Notch1、Hes-1蛋白、Jagged1基因表达均显著低于黄芩苷20μmol/L组。结论:黄芩苷能抑制人结肠癌SW480细胞的增殖,促进其凋亡,这种作用可能是通过对细胞中Notch通路的负性调节而实现的。

蜘蛛香提取物对人结肠癌SW480细胞增殖抑制及抗转移作用

目的:观察蜘蛛香提取物对体外培养人结肠癌SW480细胞增殖抑制及抗转移作用。方法:观察蜘蛛香提取物(400μg/m L)及80μg/m L的5-FU(阳性对照组)对SW480细胞的影响;通过MTT法、细胞脱落实验、病理观察、流式细胞仪检测观察蜘蛛香提取物对结肠癌SW480细胞的增殖抑制、促进凋亡等作用;通过划痕和同质性黏附实验观察其抗结肠癌SW480细胞转移作用。结果:MTT法检测显示蜘蛛香提取物及5-FU均能对SW480细胞产生明显的抑制作用;病理观察发现,经蜘蛛香提取物及5-FU作用后的SW480细胞,呈明显的凋亡状态;流式细胞仪检测发现,蜘蛛香提取物能使S期和G2/M期细胞百分比增加;细胞脱落实验进一步表明,与空白对照组相比,各药物组均能增强细胞的脱落率,抑制细胞的增殖,具有极显著性差异(P<0.01);划痕和同质性黏附实验表明,蜘蛛香提取物能显著降低结肠癌SW480细胞的移动能力(P<0.05)。结论:蜘蛛香提取物对人结肠癌SW480细胞有明显的增殖抑制和抗转移作用。

沉默LIMK1抑制人结肠癌SW480细胞上皮-间质转化

目的:研究沉默LIMK1对人结肠癌SW480细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)的影响。方法:RT-PCR、Western blot、免疫荧光与免疫组化检测沉默LIMK1对EMT相关分子表达的影响。裸鼠实验检测沉默LIMK1对移植瘤生长的影响。结果:RT-PCR检测显示,沉默LIMK1可下调Vimentin和上调E-cadherin mRNA表达(P<0.05)。Western blot显示,沉默LIMK1可明显下调SW480细胞Snail及Vimentin蛋白表达和上调E-cadherin表达(P<0.05)。免疫荧光显示,LIMK1沉默细胞Snail与Vimentin阳性信号较对照组明显减弱,而E-cadherin阳性信号显著增强。裸鼠实验结果显示,沉默组肿瘤生长速度较SW480组明显减慢(P<0.05)。沉默组移植瘤瘤重(0.16±0.079)g较SW480组(0.86±0.165)g明显减少,瘤重抑制率为97.7%(P<0.05)。LIMK1沉默组移植瘤较对照组的Ki-67、Vimentin、Snail与CD 34阳性表达明显减弱,而E-cadherin表达明显增加。结论:沉默LIMK1可体外抑制人结肠癌SW480细胞EMT。

虎纹捕鸟蛛毒素对人结肠癌SW480细胞体外增殖的影响

目的探讨虎纹捕鸟蛛毒素对结肠癌SW480细胞体外增殖的影响。方法以体外培养的人结肠癌SW480细胞株为实验模型,以不同浓度的虎纹捕鸟蛛毒素对SW480细胞进行体外干预,通过MTT药物敏感实验检测其抑制率及计算IC50;镜下观察经Hoechst 33342染色后的细胞形态变化;流式细胞仪观测经AnnexinⅤ-FITC/PI双染的细胞状态的变化;分光光度法测定Caspase-3的相对活化倍数的变化。结果 MTT药物敏感实验显示,5～100 mg/ml虎纹捕鸟蛛粗毒对人结肠癌SW480细胞有抑制作用,且呈一定剂量效应关系。其48 h半抑制浓度(IC50)为43.68 mg/ml;显微镜下可见虎纹捕鸟蛛粗毒干预后的SW480细胞数量明显减少,细胞形态各异,并出现细胞碎片;流式细胞结果显示:10 mg/ml虎纹捕鸟蛛粗毒诱导的SW480细胞凋亡率最高,达(57.66±20.44)%;50 mg/ml虎纹捕鸟蛛粗毒干预后,SW480细胞坏死率最高,达(25.36±15.03)%;100 mg/ml虎纹捕鸟蛛粗毒干预后Caspase-3活化最明显。结论虎纹捕鸟蛛粗毒对人结肠癌SW480细胞体外增殖具有抑制作用。

银杏内酯B对人结肠癌SW480细胞恶性生物学行为及ROS/XIAP信号通路的影响

目的探讨银杏内酯B对人结肠癌SW480细胞恶性生物学行为及活性氧(ROS)/X连锁凋亡蛋白抑制剂(XIAP)信号通路的影响。方法实验分为模型组(培养基+SW480细胞)、紫杉醇组(5 mg/L+培养基+SW480细胞),以及银杏内酯B低、高剂量组(50,100μmol/L+培养基+SW480细胞)。采用四唑盐(MTT)法测定细胞增殖水平并计算存活率,流式细胞术测定细胞凋亡情况并计算凋亡率,Transwell法测定细胞迁移侵袭水平,荧光探针法检测活性氧(ROS)水平,反转录聚合酶链反应法及Westernblot法测定细胞XIAPmRNA及蛋白表达水平。结果与模型组比较,紫杉醇组及银杏内酯B低、高剂量组细胞存活率显著降低,凋亡率显著升高,细胞侵袭水平显著降低,细胞ROS水平及XIAPmRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论银杏内酯B可有效抑制SW480细胞的迁移和侵袭并诱导其凋亡,其机制可能与抑制ROS/XIAP信号通路的激活有关。

RNA干扰抑制人结肠癌SW480细胞EGFR的表达及其对体外生长情况影响的研究

目的研究利用RNA干扰技术抑制人结肠癌SW480细胞表皮生长因子受体(EGFR)基因的表达,并观察受抑制后SW480细胞体外生长情况的改变。方法利用脂质体将siRNA转染进入SW480细胞(野生型K-ras基因表达阳性),在细胞内形成双链siRNA,识别并降解EGFR mRNA。通过荧光定量RT-PCR检测EGFR mRNA的表达水平,Western blot检测EGFR蛋白的表达,MTT法检测SW480细胞的增殖抑制情况,流式细胞学检测细胞凋亡情况。结果转染EGFR395-siRNA和EGFR1499-siRNA的SW480细胞其EGFRmRNA及蛋白表达均较对照组明显降低(P<0.05);转染EGFR395-siRNA和EGFR1499-siRNA的SW480细胞增殖率较对照组降低(P<0.05),凋亡率增高(P<0.05)。结论 siRNA能有效抑制SW480细胞EGFR基因的表达,具有抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的作用。

LIMK1高表达通过LIMK1/cofilin1通路促进人结肠癌SW480细胞增殖、迁移与侵袭

目的探究LIM激酶1(LIMK1)高表达通过LIMK1/cofilin1通路对人结肠癌SW480细胞生物学特性的影响。方法构建高表达LIMK1基因SW480细胞。实验分为空载体组、SW480组、LIMK1高表达组(LIMK1/SW480组)。RT-PCR、Western blotting分别检测LIMK1、Rac1、Pak1、p-LIMK1、cofilin1与p-cofilin1表达。MTT、流式细胞术、划痕实验和侵袭实验检测LIMK1高表达对SW480细胞增殖、细胞周期、迁移和侵袭能力的影响。结果与空载体组和SW480组比较,LIMK1/SW480组LIMK1 mRNA和蛋白表达、细胞增殖活性、穿膜细胞数升高(P<0.05),G2/M期细胞百分率、瘢痕距离减少(P<0.05)。LIMK1/SW480组LIMK1、p-LIMK1、p-cofilin1蛋白较空载体组和SW480细胞组升高(P<0.05)。各组Rac1、Pak1、cofilin1表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论LIMK1高表达可能通过抑制LIMK1/cofilin1通路促进SW480细胞增殖、迁移、侵袭。

特异性siRNA对诱骗受体3基因在人结肠癌SW480细胞系中的抑制作用研究

目的:研究特异性siRNA对诱骗受体3基因在人结肠癌SW480细胞系中的抑制作用。方法:通过RT-PCR法测定人结肠癌SW480细胞系中DcR3 mRNA的表达。用Western Blot法检测人结肠癌SW480细胞系中DcR3的蛋白表达。结果:siRNA对诱骗受体3在人结肠癌SW480细胞系的抑制实验中,同对照组比较,对DcR3的mRNA及蛋白的表达具有明显的抑制作用,细胞中的蛋白与mRNA表达明显下降。结论:特异性siRNA对诱骗受体3基因在人结肠癌SW480细胞系中具有明显的抑制作用,为明确DcR3的功能及封锁DcR3基因表达治疗结肠癌提供了理论依据。

SOX7靶向ERK1/2/PD-L1通路抑制结直肠癌血管生成

目的探讨性别决定区Y框蛋白7(SOX7)对结直肠癌血管生成的影响及潜在作用机制。方法应用免疫荧光检测结直肠癌患者组织样本中SOX7表达水平,之后通过裸鼠、转染SOX7 mimic的人结直肠癌细胞系SW480细胞和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)共培养进一步研究。用Western-blot验证SOX7与ERK1/2/PD-L1对结直肠癌细胞的相关蛋白表达的影响。用CCK8检测SOX7与ERK1/2/PD-L1对HUVEC增殖的影响。通过体外内皮细胞成管实验测定SOX7与ERK1/2/PD-L1对肿瘤血管生成的影响。结果SOX7在人结直肠癌组织中表达被抑制(P<0.01),同时SOX7的过表达抑制了小鼠体内肿瘤生长(P<0.01)。SW480细胞中SOX7的过表达抑制了ERK1/2、c-Jun的表达,并在ERK1/2的激动剂Senkyunolide I的作用下上调了SW480细胞的ERK1/2、c-Jun蛋白表达(P<0.01),逆转了SOX7对SW480细胞中ERK1/2、c-Jun蛋白表达的影响(P<0.01)。HUVEC中SOX7抑制了PD-L1、V-EGFR2、p-PI3K、HIF-1α的蛋白表达,Senkyunolide I上调了HUVEC的PD-L1、V-EGFR2、p-PI3K、HIF-1α的蛋白表达,并逆转了SOX7对HUVEC中上述相关蛋白表达的影响(P<0.01)。PD-1/PD-L1 Inhibitor 3抑制了PD-L1、V-EGFR2、p-PI3K、HIF-1α的蛋白表达,SOX7过表达在PD-1/PD-L1 Inhibitor 3的影响下并没有表现出抑制作用。CCK8实验结果显示SOX7过表达显著抑制了HUVEC的增殖能力,Senkyunolide I作用下的两组HUVEC增殖能力较SOX7 NC组与SOX7 mimic组明显上升,PD-1/PD-L1 Inhibitor 3作用下的两组HUVEC增殖能力较SOX7 NC组与SOX7 mimic组明显下降,以上均有明显统计学差异(P<0.01)。成管实验结果显示SOX7过表达抑制了HUVEC的血管生成,Senkyunolide I强烈加速了血管生成,而PD-1/PD-L1 Inhibitor 3血管生成则被显著抑制,以上均有明显统计学差异(P<0.01)。结论SOX7通过ERK1/2/PD-L1通路抑制结直肠肿瘤的增殖和血管生成,SOX7可能是晚期CRC患者临床治疗中潜在的抗血管生成靶点。

培美曲塞联合顺铂对人结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨培美曲塞联合顺铂对人结肠癌细胞SW480增殖和凋亡的影响。方法 SW480细胞单用培美曲塞(A组)、顺铂(B组)或二药联用(AB组)处理,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期及凋亡率,蛋白质印迹法检测增殖细胞核抗原(PCNA)和凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2)表达。结果培美曲塞和顺铂均呈剂量依赖性抑制SW480细胞的增殖,二药联用作用更为明显。AB组(77.8±2.3)%的SW480细胞被阻滞于G1期,高于A组的(64.9±2.2)%和B组的(66.3±1.1)%(P<0.05)。AB组SW480细胞凋亡率为(21.8±2.3)%,高于A组的(8.5±0.5)%和B组的(11.2±2.1)%(P<0.05)。三组SW480细胞中PCNA和Bcl-2蛋白表达量均较处理前下降(P<0.05)。结论培美曲塞和顺铂均可抑制结肠癌细胞SW480的增殖,并促进其凋亡;二药联用作用更明显。

白头翁皂苷A3通过M2型巨噬细胞提高人结肠癌SW480细胞对5-FU的化疗敏感性

目的:观察白头翁皂苷A3(A3)通过干预巨噬细胞极化增强人结肠癌SW480细胞对5-氟尿嘧啶(5-FU)化疗的敏感性,并探讨其作用机制。方法:采用CCK8法检测A3对人单核THP-1细胞存活率的影响,确定A3的安全作用浓度;采用佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞分化为M0型巨噬细胞,将M0型巨噬细胞分为M0对照组,M2模型组,A3低、中、高剂量干预组。其中M2模型组给予20μg·L^(-1)IL-4与20μg·L^(-1)IL-13进行造模,A3干预组在造模的同时给予低、中、高剂量(50,75,100 mg·L^(-1))A3进行干预。采用流式细胞术检测M2型巨噬细胞表面抗原CD206的表达;采用RT-PCR法检测M2型巨噬细胞极化因子CD206、IL-10、CCL22、CCL18 mRNA的表达;采用Western blot法检测细胞内p-STAT6、CD206、IL-10、CCL22蛋白的表达。A3干预巨噬细胞M2型极化后的细胞上清液作为条件培养基用于考察SW480细胞对5-FU的化疗敏感性,采用CCK8法检测SW480细胞的存活率;采用Annexin-FITC/PI双染法及Western blot法检测SW480细胞凋亡水平,以及Bax、Cleaved Caspase-3蛋白的表达。结果:A3在50,75,100 mg·L^(-1)浓度时对THP-1细胞存活率没有显著影响。A3呈剂量依赖性减少CD206阳性细胞表达比例,下调p-STAT6、CD206、IL-10、CCL22、CCL18基因与蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。A3干预巨噬细胞M2型极化后的条件培养基显著提高了SW480细胞对5-FU的敏感性,表现为SW480细胞的存活率下降、凋亡率升高,以及促凋亡蛋白Bax、Cleaved Caspase-3表达上调(P<0.05)。结论:A3能够减弱M2型巨噬细胞对SW480细胞凋亡的抑制作用从而提高SW480细胞对5-FU的化疗敏感性,作用机制可能与A3调控STAT6信号通路抑制巨噬细胞M2型极化有关。

人参皂苷CK抑制人结肠癌SW480细胞增殖的机制研究

目的研究人参皂苷CK对人结肠癌SW480细胞增殖及凋亡的影响,并进一步探讨其作用机制。方法采用CCK-8法检测细胞活力;通过流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡、活性氧(ROS)水平和线粒体膜电位(MMP)变化;Hoechst染色检测细胞凋亡;蛋白免疫印迹法检测细胞色素C(CytC)释放以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和cleaved Caspase-3等的表达。结果人参皂苷CK对SW480细胞的增殖有显著抑制作用。人参皂苷CK诱导SW480细胞周期阻滞于G0/G1期,促进细胞发生早期凋亡。人参皂苷CK可以显著增加细胞内ROS水平,降低MMP水平;人参皂苷CK促进Bax和cleaved Caspase-3的表达,抑制Bcl-2的表达。此外,人参皂苷CK使SW480细胞内CytC大量释放。结论人参皂苷CK对SW480细胞的增殖具有显著的抑制作用,其作用机制可能是通过促进线粒体超氧化物升高,导致胞内ROS水平显著增加和MMP显著下降,进而导致CytC释放,上调Bax的表达,下调Bcl-2的表达,最终导致细胞发生凋亡。

山慈菇提取物对人结直肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察不同浓度山慈菇提取物对人结直肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法:以SW480细胞为研究对象,设立不同浓度山慈菇提取物与空白组,采用CCK-8法检测SW480细胞的活性,克隆形成实验检测SW480细胞克隆形成能力,Hoechst 33258染色检测SW480细胞凋亡时细胞核的形态学变化,Western blot法检测SW480细胞中星形细胞上调基因-1(Astrocyte elevated gene-1,AEG-1)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2-associated X的蛋白质(Bax)表达水平,最后采用shRNA干扰技术沉默SW480细胞中AEG-1基因的表达检测AEG-1基因是否能影响SW480细胞的增殖以及Bcl-2和Bax的蛋白表达。结果:与空白组比较,山慈菇提取物能显著抑制SW480细胞活性和细胞克隆形成能力(P<0.05);Hoechst 33258染色后观察可见细胞形态皱缩并形成凋亡小体;与空白组比较,山慈菇提取物组AEG-1和Bcl-2蛋白表达水平明显降低,Bax蛋白表达水平则明显增加(P<0.05);经shRNA沉默AEG-1基因表达后,SW480细胞中AEG-1蛋白水平显著下降(P<0.05);与阴性对照组比较,AEG-1沉默慢病毒转染组SW480细胞中Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05),Bax蛋白表达明显增加(P<0.05),细胞活性和细胞克隆形成能力均受到明显抑制(P<0.05)。结论:山慈菇提取物具有明显抑制SW480细胞增殖并诱导凋亡的作用,其机制可能与抑制AEG-1蛋白表达、继而下调Bcl-2蛋白的表达水平、上调Bax蛋白表达水平有关。

白头翁皂苷干预糖酵解途径抑制SW480人结直肠癌细胞增殖作用研究

目的:观察白头翁皂苷抑制人结直肠癌细胞的增殖作用及对肿瘤细胞糖酵解途径的影响。方法:采用人结直肠癌细胞株SW480,通过噻唑蓝(MTT)比色法研究白头翁皂苷(1.25、2.5、5、10、20、40μg/mL)对SW480细胞增殖的抑制作用,检测1、3、9μg/mL白头翁皂苷干预后SW480的葡萄糖消耗、乳酸生成和三磷酸腺苷含量变化,评价白头翁皂苷对SW480细胞糖酵解的干预作用;采用RT-PCR技术检测SW480细胞酵解途径中关键蛋白GLUT1、HK2、LDHA、MCT4、MCT1、c-Myc、HIF-1a mRNA表达水平;采用Western blot检测糖酵解调节因子HIF-1a、c-Myc蛋白及乳酸外排蛋白MCT4的表达。结果:白头翁皂苷对SW480细胞的增殖具有抑制作用,作用强度呈浓度依赖性,其对SW480的IC50为11.69μg/mL;9μg/mL白头翁皂苷能显著降低SW480细胞葡萄糖消耗、乳酸生成和三磷酸腺苷含量,能使糖酵解关键蛋白GLUT1、HK2、MCT4、MCT1、c-Myc、HIF-1a mRNA表达显著下调,并使调节因子c-Myc、HIF-1a蛋白和乳酸转运蛋白MCT4表达显著降低。结论:白头翁皂苷能显著抑制SW480细胞增殖,降低细胞糖酵解水平,其机制与调控c-Myc、HIF-1a而干预GLUT1、HK2、MCT4、MCT1的表达相关。白头翁皂苷可能是一种潜在的肿瘤能量代谢阻断剂。

柴胡皂苷D通过抑制EMT和细胞干性抑制人结直肠癌细胞SW480的迁移和侵袭

目的:研究柴胡皂苷D(saikosaponin-D,SSD)对人结直肠癌细胞SW480迁移和侵袭能力的影响,并初步探讨SSD抑制细胞迁移和侵袭的机制。方法:MTT检测SSD对细胞增殖的影响。划痕实验和Transwell迁移实验研究SSD对细胞迁移能力的影响。Transwell侵袭实验研究SSD对细胞侵袭能力的影响。Western-blot检测SSD对上皮间质转化(epithelial mesenchymal transformation,EMT)相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin和Vimentin)表达的影响。克隆球形成实验研究SSD对细胞干性的影响。结果:在划痕实验和Transwell迁移实验中,SSD显著抑制SW480的迁移能力(P<0.05)。在Transwell侵袭实验中,SSD显著抑制SW480的侵袭能力(P<0.05)。SSD处理后,细胞E-cadherin的表达增高,N-cadherin和Vimentin的表达降低(P<0.05),同时SSD抑制SW480细胞克隆球的形成(P<0.05)。结论:柴胡皂苷D通过抑制EMT和细胞干性抑制人结直肠癌细胞SW480的迁移和侵袭。

柴胡皂苷D通过诱导自噬抑制人结直肠癌细胞SW480增殖的实验研究

目的:研究柴胡皂苷D(saikosaponin-D,SSD)对人结直肠癌细胞SW480自噬的影响,并探讨诱导的自噬对细胞增殖的影响。方法:Western-blot检测SSD对自噬相关蛋白LC3A/B和p62表达的影响,LC3翻转实验和GFP-RFP-LC3荧光实验验证自噬流的发生。Western-blot检测3-MA对SSD所诱导自噬的抑制作用,MTT和细胞计数实验研究3-MA抑制自噬后SSD对SW480细胞增殖的影响。结果:SSD能够诱导SW480细胞发生自噬,表现在LC3A/B II及LC3A/B II/I比值的增高、自噬经典底物蛋白p62的减少、LC3翻转试验阳性以及LC3荧光实验中黄色和红色荧光颗粒的增多(P<0.05)。自噬抑制剂3-MA能够抑制SSD所诱导自噬的发生(P<0.05),且3-MA抑制自噬后,SSD对SW480的增殖抑制效应减弱(P<0.05),提示SSD诱导的自噬对细胞的增殖起抑制作用。结论:SSD通过诱导自噬抑制人结直肠癌细胞SW480的增殖。

人参皂苷Rh2调控PI3K/AKT/GSK-3β信号通路诱导人结肠癌细胞凋亡

目的探究人参皂苷Rh2(ginsenoside Rh2,Rh2)诱导人结肠癌细胞SW480凋亡作用机制。方法 CCK-8法检测Rh2对SW480细胞增殖的影响;流式细胞术(Flow cyto Metry,FCM)检测Rh2对SW480细胞凋亡的影响;Hoechst33258染色观察Rh2对SW480细胞凋亡形态学的影响;Western blot检测经Rh2诱导SW480细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、p53、cleaved caspase-3,PI3K/AKT/GSK-3β信号通路相关蛋白PI3K、AKT、P-AKT、GSK-3β、P-GSK-3β表达量变化;LY294002、Rh2单独及联合诱导SW480细胞后,蛋白PI3K、AKT、P-AKT、GSK-3β、P-GSK-3β表达量变化。结果CCK-8结果显示Rh2呈时间浓度依赖抑制SW480细胞增殖。FCM结果显示细胞早期凋亡率由正常对照组的(0.70±0.09)%增至(11.06±1.04)%(P<0.05)。Hoechst33258结果显示,Rh2诱导SW480细胞48h后呈现典型的凋亡形态学改变。Western blot结果显示,经Rh2诱导的SW480细胞,凋亡相关蛋白Bcl-2表达降低,Bax、p53、激活型胱天蛋白酶3(cleaved caspase-3)蛋白表达增加;PI3K/AKT/GSK-3β信号通路蛋白PI3K、P-AKT、P-GSK-3β表达量与对照组比较明显减少,AKT、GSK-3β表达量无明显变化;LY294002、Rh2和LY294002与Rh2联合诱导SW480细胞后,总AKT蛋白和总GSK-3β蛋白表达量基本一致,LY294002与Rh2联合用药对SW480细胞中PI3K、P-AKT和P-GSK-3β的表达抑制作用较单独用药更加明显。结论Rh2可能是通过抑制PI3K/AKT/GSK-3β通路,激活p53信号通路,激活caspase-3,破坏Bcl-2/Bax比例,诱导结肠癌细胞SW480凋亡。

通泰合剂对大肠癌细胞增殖抑制及抗转移作用的实验研究

目的:观察通泰合剂对人结肠癌SW480细胞增殖的抑制作用以及对MMP-2、TIMP-2表达的影响,观察其对大肠癌细胞的增殖抑制及抗转移作用。方法:采用四唑盐比色法测定通泰合剂对SW480细胞增殖的影响,应用免疫组化法观察其对MMP-2、TIMP-2阳性表达细胞数的影响。结果:通泰合剂可阻滞SW480细胞的增殖,在一定范围内,通泰合剂的浓度越高,对肿瘤细胞增殖的抑制作用越强;与空白对照组比较,通泰合剂组作用72h后MMP-2表达阳性细胞明显减少,TIMP-2阳性细胞表达率明显增高。结论:通泰合剂能抑制人结肠癌SW480细胞的增殖及转移,其抗转移作用机制可能与调节MMP-2/TIMP-2的平衡相关。

白首乌提取物C_(21)甾体苷对结直肠癌细胞株SW480的影响

目的:探讨白首乌提取物C_(21)甾体苷对人结直肠癌细胞株SW480生长、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法:体外常规培养人结直肠癌细胞株SW480,以不同浓度的C_(21)甾体苷作用于细胞,分别培养24 h、48 h、72 h,采用溴化二甲噻唑二苯四氮法检测不同浓度的C_(21)甾体苷对人结直肠癌细胞株SW480生长的抑制作用;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Transwell小室法检测细胞的侵袭和迁移能力。结果:C_(21)甾体苷以时间和浓度依赖性抑制人结直肠癌细胞株SW480的生长,促进人结直肠癌细胞株SW480凋亡,抑制人结直肠癌细胞株SW480的侵袭和迁移。结论:C_(21)甾体苷可抑制人结直肠癌细胞株SW480的生长,该抑制作用与诱导其凋亡及降低其侵袭和迁移能力有关。

基于Hedgehog信号通路的熊果酸诱导结直肠癌SW480细胞凋亡的机制研究

目的研究熊果酸通过经典Hedgehog信号通路影响人结直肠癌SW480细胞增殖和凋亡的作用及其机制。方法通过显微镜观察熊果酸对SW480细胞形态的影响;采用MTT比色法检测熊果酸对细胞活力的影响;细胞划痕实验检测熊果酸对细胞迁移的影响;Hoechest/PI染色法观察熊果酸对细胞凋亡的影响;荧光探针法检测熊果酸对细胞线粒体膜电位的影响;Caspase活性检测试剂盒检测熊果酸对细胞凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-9的影响;蛋白免疫印迹法检测Hedgehog信号通路相关蛋白SHh、Gli1、Ptch1、Smo、c-Myc、Su Fu及细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达水平。结果SW480细胞经熊果酸给药后形态发生改变;细胞迁移能力显著下降;线粒体膜电位降低;细胞核出现致密浓染;Caspase-3、Caspase-9活性升高;SW480细胞发生凋亡;Hedgehog信号通路相关蛋白Su Fu的表达水平升高,SHh、Gli1、Ptch1、Smo、c-Myc的表达水平下降;细胞凋亡相关蛋白Bax的表达水平升高,Bcl-2的表达水平下降。结论熊果酸对SW480细胞的生长、增殖具有抑制作用,通过抑制Hedgehog信号通路的激活促进SW480细胞凋亡。