黄芩汤体外诱导人结肠癌SW620细胞凋亡及其对凋亡相关因子表达的影响

目的:研究黄芩汤对人结肠癌SW620细胞凋亡的作用及其机制。方法:CCK-8和MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot方法检测Bcl-2、Bax蛋白表达;酶标免疫测定Caspase-3和Caspase-8的相对活性。结果:与对照组相比,不同浓度黄芩汤处理的细胞增殖抑制率显著增加(P<0.05或P<0.01),细胞凋亡率升高(P<0.05或P<0.01),抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2表达降低而促细胞凋亡蛋白Bax表达明显增高(P<0.05或P<0.01),Caspase-3和Caspase-8活性增强(P<0.05或P<0.01),并呈量效依赖关系。结论:黄芩汤能够有效的促进结肠癌SW620细胞凋亡,其机制可能与抑制Bcl-2表达而促进Bax表达并增强Caspase的活性有关。

二萜类化合物excisanin A诱导人结肠癌SW620细胞凋亡及机制研究

目的本文研究大萼香茶菜有效单体exc isan in A诱导人结肠癌SW 620细胞株凋亡及其分子机制。方法MTT法检测细胞增殖抑制作用,AnnexinV/PI双染法检测细胞早期凋亡率,W estern b lot法检测exc isan in A对PARP、caspase-3、caspase-9剪切片断的影响,及对MAPKs通路相关蛋白,包括p-ERK、ERK、p-JNK、JNK、p-p38、p38、c-Jun表达的影响。结果Excisanin A对结肠癌SW620细胞株生长具有明显的抑制作用,并呈浓度依赖性,其IC50值为8.22μmol.L-1。用8.71μmol.L-1excisanin A处理SW620细胞12、24、36 h,AnnexinV/PI双染检测细胞的早期凋亡,其凋亡率分别为17.2%、20.5%、13.8%,而对照组细胞的凋亡率仅为1.9%(P<0.05)。不同浓度的excisanin A作用于SW620细胞48h后,Western blot法检测发现PARP、caspase-3,caspase-9 3种蛋白均出现断裂片断,并随着浓度的增加断裂更明显。进一步研究发现,excisanin A处理SW620细胞后,JNK、p38的磷酸化水平明显升高,c-Jun的表达亦增高。结论Excisa-nin A具有明显的细胞毒作用,能诱导SW620细胞凋亡,JNK和p38途径的激活可能是其诱导凋亡的分子机制之一。

姜黄素对人结肠癌SW620细胞凋亡机制的影响

目的探讨体外姜黄素对人结肠癌SW620细胞生长及凋亡的影响。方法体外培养SW620细胞,用不同浓度的姜黄素作用为实验组,同时设对照组,以CCK8法测细胞增殖抑制作用、流式细胞仪检测细胞凋亡及p53和Bcl-2蛋白表达情况。结果不同浓度姜黄素作用SW620细胞24 h增殖抑制显著(P﹤0.05),其抑制效应具有剂量依赖性,同时诱导SW620细胞凋亡、上调p53基因表达、下调Bcl-2基因表达(P﹤0.05)。结论姜黄素可抑制SW620细胞的生长且具有剂量依赖性,并可诱导肿瘤细胞凋亡,其抗肿瘤效应可能与细胞凋亡相关基因表达的调控有关。

霉酚酸对人结肠癌SW620细胞凋亡的诱导作用及其机制

研究霉酚酸(mycophenolic acid,MPA)对人结肠癌细胞株SW620凋亡诱导作用及其机制.MPA处理SW620细胞后,MTT法测细胞增殖抑制活性,Hoechst 33258染色法检验细胞核形态变化.提取DNA并电泳检验DNA断裂情况,流式细胞仪检测凋亡和细胞周期的影响,并检验MPA处理后细胞中Caspase-3活性.Caspase-3抑制剂z-DEVD-FMK及MPA共同作用SW620细胞,检验DNA断裂的逆转情况.结果表明:MPA有效抑制SW620细胞的增殖,IC50为0.11mol/L.在浓度高于1.0mol/L时,经过MPA处理后的细胞核呈现明显的固缩现象,基因组DNA断裂为DNA ladder.流式细胞仪的测定结果说明MPA使细胞生长周期停滞于G1/S期,并能够浓度、时间依赖诱导SW620细胞出现典型的Sub-G1凋亡峰.进一步的细胞Caspase-3活性分析结果证明MPA能剂量依赖地诱导细胞中Caspase-3的活性,Caspase-3抑制剂z-DEVD-FMK能够部分地逆转MPA诱导的凋亡,说明Caspase-3在凋亡过程中起到了非常重要的作用.因此,MPA能够部分通过激活细胞中Caspase-3途径有效诱导结肠癌细胞SW620的凋亡,这可能是MPA抑制细胞增殖的一个重要分子机制.

黄芩苷对人结直肠癌SW620细胞凋亡及周期的影响

观察黄芩苷通过抑制人结直肠癌SW620细胞增殖的作用,并探讨其可能的作用机制。方法 组别分为空白组、对照组以及按照100,200,400,600,800,1,000μmol/L黄芩苷组划分,其中空白组未利用黄芩苷培养基,黄芩苷组使用黄芩苷培养,且分别为不同浓度,并进行结肠癌SW620细胞处理。经24小时处理,利用MTT法验证黄芩苷是否会对SW620细胞增殖活性带来影响;利用CCK-8法对细胞的增殖情况、凋亡情况进行检测。结果 组间比较,黄芩苷组和对照组比较,能够对SW620细胞增殖情况予以抑制,抑制情况和药物浓度有关,两者为正比关系;经流式细胞仪器检测结果分析,黄芩苷给药组细胞凋亡率显著升高,且在G1、G2期发生阻滞。结论 黄芩苷能够抑制人结直肠癌SW620细胞增殖,并促进其凋亡,且在G1、G2期可发生细胞周期阻滞。

延龄草苷通过降低SCD1表达促进结直肠癌细胞凋亡

目的:探讨硬脂酰辅酶A去饱和酶1(stearoyl-CoA desaturase 1,SCD1)在结直肠癌中的临床意义及延龄草苷影响结直肠癌细胞增殖的作用及机制。方法:采用qPCR和Western blot检测SCD1在临床患者结直肠癌组织中的表达,并分析其与临床特征的关系;CCK-8检测不同浓度延龄草苷对SW620和HCT116细胞活力的影响;细胞集落形成实验分析不同浓度延龄草苷对上述细胞增殖能力的影响;qPCR和Western blot检测其对凋亡基因以及SCD1的影响;分子对接技术分析延龄草苷与SCD1的结合部位及结合能。结果:SCD1的mRNA和蛋白在结直肠癌中的表达较癌旁组织增高,mRNA高表达的阳性率为88%,且其表达与结直肠癌种类和临床分期相关:与结肠癌相比,SCD1在直肠癌中具有更高的表达量,且随着临床分期加重,SCD1的表达随之升高;不同浓度延龄草苷一方面量效依赖地降低SW620和HCT116细胞的活力、抑制细胞集落形成,增加促凋亡蛋白caspase-3和Bax的mRNA和蛋白表达,降低抗凋亡蛋白Bcl-2的mRNA和蛋白表达,另一方面通过氢键和共轭键与SCD1结合降低其mRNA和蛋白表达,该结合能高达−7.7 kcal/mol。结论:SCD1是与结直肠癌种类和临床分期密切相关的蛋白;延龄草苷降低结直肠癌细胞活力、抑制增殖的机制可能是与SCD1结合降低其表达从而促进细胞凋亡相关。

异莲心碱通过PI3K/Akt/mTOR信号通路影响结肠癌SW480细胞增殖、凋亡和自噬

目的:探讨异莲心碱(Iso)通过PI3K/Akt/mTOR信号通路对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡和自噬的影响。方法:用10、20和40μmol/L的Iso处理结肠癌SW480细胞,CCK-8法、流式细胞术和WB法分别检测Iso对细胞增殖活力、凋亡和自噬相关蛋白LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p62表达的影响。然后,用20μmol/L的Iso和25μmol/L的PI3K激活剂740 Y-P分别处理SW480细胞,将细胞分为对照组、740 Y-P组、Iso组和Iso+740 Y-P组,流式细胞术、WB法检测Iso和740 Y-P对各组细胞凋亡及细胞中LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p62、PI3K、p-PI3K、mTOR和p-mTOR蛋白表达的影响。结果:10、20和40μmol/L的Iso处理后,SW480细胞增殖活力均显著下降(均P<0.05),细胞凋亡率均显著升高(均P<0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达均显著上调(均P<0.05),p26蛋白表达显著下调(P<0.05)。Iso和740 Y-P处理后,与对照组相比,740 Y-P组细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达均显著下降(均P<0.05),p26、p-PI3K/PI3K和p-mTOR/mTOR表达均显著升高(均P<0.05);Iso组细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达升高(均P<0.05),p26、p-PI3K/PI3K和p-mTOR/mTOR表达均显著下降(均P<0.05);与740 Y-P组相比,Iso+740 Y-P组细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达升高(P<0.05),p26、p-PI3K/PI3K和p-mTOR/mTOR表达均显著下降(均P<0.05);与Iso组相比,Iso+740 Y-P组细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达下降(均P<0.05),p26、p-PI3K/PI3K和p-mTOR/mTOR表达均显著升高(均P<0.05)。结论:Iso通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制结肠癌SW480细胞增殖并诱导细胞凋亡和自噬。

NEDD4L增强IGF2BP2的泛素化对结直肠癌细胞SW620增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的:探讨NEDD4L对人转移性结直肠癌细胞SW620迁移和侵袭的影响及其可能的作用机制。方法:生物信息学分析筛选IGF2BP2/NEDD4L泛素化作用轴并构建NEDD4L过表达的SW620细胞株,实时荧光定量(RT-qPCR)检测NEDD4L mRNA表达水平;CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡;细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,CHX和MG132处理SW620细胞,Western blot检测IGF2BP2蛋白的表达。同时构建Flag-IGF2BP2、His-NEDD4L、HA-Ub重组质粒并在293T细胞中采用免疫共沉淀检测NEDD4L对IGF2BP2的泛素化水平的影响。结果:SW620细胞中成功实现NEDD4L过表达,并且导致细胞增殖能力显著降低(P<0.05),凋亡能力显著上升(P<0.01);同时抑制细胞周期进程(P<0.05)。细胞迁移率显著降低(P<0.01),细胞侵袭数量显著降低(P<0.01);Western blot结果显示,过表达NEDD4L能够显著降低IGF2BP2、YAP、VEGFA的蛋白表达水平,Co-IP结果显示NEDD4L增强IGF2BP2与Ub的结合能力。结论:NEDD4L在结直肠癌细胞中通过增强IGF2BP2的泛素化,进而降低YAP、VEGFA的蛋白表达来实现抑癌功能。

重楼活性单体PP-26抑制结肠癌SW620细胞增殖并诱导细胞凋亡

目的:探讨重楼活性单体PP-26对人结肠癌SW620细胞增殖抑制作用及其机制.方法:采用噻唑蓝(MTT)法和克隆形成抑制实验观察不同浓度的重楼单体PP-26对人结肠癌SW620细胞增殖抑制作用;PI单染及Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞周期变化及细胞凋亡水平;Western blotting检测PP-26对细胞周期、细胞凋亡相关蛋白以及Akt和ERK蛋白的表达.结果:与正常肝LO2细胞相比,重楼单体PP-26能显著抑制SW620细胞的生长,作用呈剂量-效应关系;随着PP-26浓度的增加,细胞克隆形成逐渐减少,与细胞对照组相比有显著差异;不同浓度PP-26作用后,细胞阻滞于G1期;PP-26作用细胞24 h后,CDK4、CDK6表达下降,P15、cyclin D1表达增加;不同浓度PP-26作用后,细胞晚期凋亡率增加,随浓度增加有上升趋势;PP-26作用细胞24 h后,线粒体相关凋亡信号通路蛋白Caspase-9、Caspase-3表达下降,PARP切割条带增加,细胞促凋亡蛋白Bax的表达增加,抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-x L减少,p-Akt和p-ERK蛋白表达均下降.结论:重楼活性单体PP-26通过上调p15促进结肠癌SW620细胞阻滞于G1期,通过抑制P13K/Akt信号通路及ERK信号通路,活化线粒体凋亡通路,诱导细胞凋亡.

三棱、莪术提取物联合热疗对结肠癌SW620细胞凋亡及迁移、侵袭能力的影响

目的:研究三棱、莪术提取物联合热疗对结肠癌SW620细胞凋亡及迁移、侵袭能力的影响。方法:采用MTT法检测不同质量浓度的三棱提取物(1.25、2.5、5、7.5、10μg/mL)、莪术提取物(5、10、15、20、25μg/mL)对SW620细胞的毒性,计算其30%细胞生长抑制浓度(IC_(30))和50%细胞生长抑制浓度(IC_(50))。采用CFSE/PI双荧光染色法、Annexin V/PI双染色法+流式细胞术考察IC50三棱提取物、IC_(50)莪术提取物分别单用或联合热疗(42℃条件下处理90 min)对SW620细胞死亡情况和凋亡率的影响;采用划痕实验和Transwell侵袭实验考察IC_(30)三棱提取物、IC_(30)莪术提取物分别单用或联合热疗对SW620细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:三棱提取物IC_(30)为3.24μg/mL,IC_(50)为4.69μg/m L;莪术提取物IC_(30)为11.27μg/mL,IC_(50)为16.81μg/m L。与IC_(50)三棱提取物组或IC_(50)莪术提取物组比较,IC_(50)三棱提取物+热疗组或IC_(50)莪术提取物+热疗组的死亡细胞显著增多,细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。与0 h时比较,IC_(30)三棱提取物组、IC_(30)莪术提取物组、IC_(30)三棱提取物+热疗组、IC_(30)莪术提取物+热疗组细胞划痕实验的愈合间距均未见明显变窄。与IC30三棱提取物组或IC_(30)莪术提取物组比较,IC_(30)三棱提取物+热疗组或IC_(30)莪术提取物+热疗组侵袭实验的跨膜细胞数均显著减少(P<0.05)。结论:联用热疗能显著增强三棱或莪术提取物对SW620细胞的杀伤作用,并能显著提高两种提取物对SW620细胞迁移和侵袭能力的抑制作用。

萝卜硫素对结直肠癌SW620细胞增殖、凋亡及迁移的影响

目的:观察萝卜硫素(SFN)对结直肠癌SW620细胞增殖、凋亡及迁移的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:采用CCK-8法检测0、5、10、15、20μmol/L SFN处理48、72 h对SW620细胞增殖能力的影响,采用流式细胞术检测0、5、10、15、20μmol/L SFN处理24、48 h对SW620细胞凋亡的影响,采用细胞划痕实验观察20μmol/L SFN处理24 h对SW620细胞迁移的影响,并采用Western blot法检测细胞中STAT3、NF-κB、p-STAT3、p-NF-κB及MMP-2、MMP-9蛋白的表达。结果:随着SFN浓度的升高,SW620细胞增殖受到抑制,细胞凋亡率升高(P<0.05)。同时20μmol/L SFN可明显减弱SW620细胞的迁移能力,降低p-STAT3、p-NF-κB与MMP-2及MMP-9蛋白的表达(P<0.05)。结论:SFN抑制SW620细胞增殖、促进其凋亡的机制可能与降低p-STAT3、p-NF-κB的表达有关,抑制侵袭及转移的机制可能与其降低MMP-2及MMP-9蛋白的表达有关。

5-氟尿嘧啶诱导结肠癌细胞系SW620凋亡的傅里叶变换红外光谱研究

探索红外光谱监测肿瘤细胞凋亡的可行性及初步分析。采用结肠癌细胞系SW620作为诱导细胞模型,MTT法确定最优5-FU诱导浓度,无血清饥饿培养协同细胞周期阻滞在G1和S期,傅里叶显微红外光谱仪(FTIR)联合流式细胞仪(FCM)对SW 620细胞和凋亡的SW 620细胞12 h、早期凋亡(24 h)和晚期凋亡(48 h)的峰位、相对峰强等指标进行比较分析。光谱分析结果显示SW 620对比凋亡细胞有以下特征:(1)与脂类相关谱带1 740 cm^(-1)相对峰强比I_(1740)/I_(1460)明显降低(p<0.05),表明凋亡细胞中脂类相对含量增多。(2)与氨基酸残基相关谱带1 410 cm^(-1),I_(1460)/I_(1460)在凋亡早期和晚期明显升高(p<0.05),与丝、苏氨基酸相关谱带1 120 cm^(-1)向高波数移动,I_(1120)/I_(1460)明显升高(P<0.05),表明凋亡细胞中DNA双螺旋解链,氨基酸残基增多。(3)DNA的反对称伸缩1 240 cm^(-1)向高波数移动,表明凋亡细胞中核酸分子构象发生改变。(4)与核酸多糖1 040 cm^(-1)相关谱带在凋亡的24和48 h出现,向高波数移动,I_(1040)/I_(1460)在凋亡晚期降低(P<0.05)。初步研究结果表明傅里叶变换红外光谱分析可能成为实时无创监测肿瘤化疗的有效方法。

麦冬皂苷B对人结肠癌SW620细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的探讨麦冬皂苷B(OPB)对人结肠癌SW620细胞增殖、凋亡及转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad信号通路的影响。方法采用含100 kU·L^-1青霉素、100 mg·L^-1链霉素、体积分数10%胎牛血清的RMPI-1640培养液体外培养结肠癌SW620细胞,取对数生长期细胞接种于96孔板中,细胞培养24 h后分为空白对照组、OPB低剂量组(5μmol·L^-1)、OPB中剂量组(10μmol·L^-1)和OPB高剂量组(20μmol·L^-1),然后将各组细胞培养板移入培养箱中继续培养。取各组培养24、48、72 h的SW620细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测SW620的细胞抑制率。取各组培养48 h的SW620细胞,采用流式细胞术检测SW620细胞周期及凋亡情况,酶联免疫吸附试验法检测SW620细胞中TGF-β1蛋白的表达,Western blot法检测SW620细胞中磷酸化Smad3(p-Smad3)、Smad4及细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达。结果OPB低、中、高剂量组SW620细胞抑制率显著高于空白对照组(P<0.05),OPB中、高剂量组SW620细胞抑制率显著高于OPB低剂量组(P<0.05),OPB高剂量组SW620细胞抑制率显著高于OPB中剂量组(P<0.05)。与空白对照组比较,OPB低、中、高剂量组G 2/M期SW620细胞比例下降,G 0/G 1和S期SW620细胞比例升高(P<0.05)。与OPB低剂量组比较,OPB中、高剂量组G 2/M期SW620细胞比例降低,G 0/G 1和S期SW620细胞比例升高(P<0.05);与OPB中剂量组比较,OPB高剂量组G 2/M期SW620细胞比例降低,G 0/G 1和S期SW620细胞比例升高(P<0.05)。OPB低、中、高剂量组SW620细胞凋亡率显著高于空白对照组(P<0.05),OPB中、高剂量组SW620细胞凋亡率显著高于OPB低剂量组(P<0.05),OPB高剂量组SW620细胞凋亡率显著高于OPB中剂量组(P<0.05)。OPB低、中、高剂量组细胞培养基中TGF-β1水平低于空白对照组(P<0.05),OPB中、高剂量组细胞培养基中TGF-β1水平低于OPB低剂量组(P<0.05);OPB高剂量组细胞培养基中TGF-β1水平低于OPB中剂量组(P<0.05)。与空白对照组比较,OPB低、中、高剂量组SW620细胞中p-Smad3、Cyclin D1蛋白相对表达量显著下降,Smad4蛋白相对表达量显著升高(P<0.05);与OPB低剂量组比较,OPB中、高剂量组SW620细胞中p-Smad3、Cyclin D1蛋白相对表达量显著下降,Smad4蛋白相对表达量显著升高(P<0.05);与OPB中剂量组比较,OPB高剂量组SW620细胞中p-Smad3、Cyclin D1蛋白相对表达量显著下降,Smad4蛋白相对表达量显著升高(P<0.05)。结论OPB可明显抑制人结肠癌SW620细胞增殖,其机制可能与OPB阻滞TGF-β1/Smad信号通路有关。

p38 MAPK信号通路在伊立替康诱导结肠癌SW620细胞凋亡中的作用分析

目的探讨p38 MAPK信号通路在伊立替康诱导结肠癌细胞SW620凋亡过程中的变化及机制。方法利用MTT实验和流式细胞术检测不同浓度(20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L)伊立替康对SW620细胞的增殖抑制和凋亡作用,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)测定该药对细胞p38活性的影响。利用p38抑制剂以及siRNA转染技术,分析p38 MAPK信号通路在伊立替康诱导SW620细胞凋亡过程中的变化。结果伊立替康抑制SW620细胞的生长和增殖的作用均呈时间和剂量依赖性。SW620细胞增殖率随着伊立替康浓度的升高显著下降,不同浓度处理组的增殖率随时间显著降低(P均<0.05)。抑制率方面,无论是早期还是晚期,20μmol/L伊立替康组诱导SW620细胞凋亡率与对照组相比均无统计学差异(P>0.05),但40μmol/L、80μmol/L组凋亡率均显著增加(P均<0.05),且后两组抑制率在晚期均显著降低(P均<0.05)。80μmol/L伊立替康处理SW620细胞后的p38激活相对缓慢,12 h时p38活性急剧升高,达到峰值,之后缓慢减弱。80μmol/L伊立替康诱导SW620细胞凋亡率为25.19%±1.25%,与其相比,p38活性抑制后的SB203580组及p38 siRNA组细胞凋亡率显著减少,分别为13.37%±0.96%和8.07%±1.32%(P<0.05)。结论p38 MAPK信号通路参与伊立替康诱导SW620细胞凋亡,其作用与p38活性相关。

虎尾轮根黄酮类提取物影响结直肠癌细胞SW620增殖、克隆形成、凋亡及PI3K/AKT通路的研究

目的:探讨虎尾轮根黄酮类提取物对体外培养的人结直肠癌细胞SW620增殖、克隆形成、凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法:用不同质量浓度(0、10、25、50、100、250、500μg/mL)的虎尾轮根黄酮类提取物处理结直肠癌SW620细胞24 h,采用细胞计数(CCK-8)法检测虎尾轮根黄酮类提取物对SW620细胞增殖抑制的影响,筛选半数抑制浓度(IC_(50))作为后续实验干预浓度;实验分为4组,空白对照组、虎尾轮根黄酮类提取物(100μg/mL)组、通路特异性抑制剂LY294002(25μmol/L)组和虎尾轮根黄酮类提取物(100μg/mL)+LY294002(25μmol/L)组。克隆形成实验、流式细胞术和AnnexinⅤ-FITC/PI双染色法检测细胞克隆形成、周期进程和凋亡情况,实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测增殖细胞核抗原(PCNA)及凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达量,蛋白免疫印迹法(Western blot)分析PI3K/AKT信号通路蛋白激酶B(AKT)磷酸化水平。结果:虎尾轮根黄酮类提取物可呈浓度依赖性抑制结直肠癌SW620细胞增殖,其干预SW620细胞24 h的IC_(50)为104.5μmol/L。与空白对照组比较,虎尾轮根黄酮类提取物组、LY294002组和虎尾轮根黄酮类提取物+LY294002组细胞克隆形成率显著降低、凋亡率及G_(0)/G_(1)期细胞比例显著升高,PCNA、Bcl-2 mRNA表达显著降低,Bax mRNA表达显著升高,AKT磷酸化水平显著降低(P<0.05);与虎尾轮根黄酮类提取物组及LY294002组比较,虎尾轮根黄酮类提取物+LY294002组上述各指标均显著改善(P<0.05)。结论:虎尾轮根黄酮类提取物可抑制结直肠癌SW620细胞增殖和克隆形成,并诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路有关。

Peptaibol类多肽Trichorzin F对结直肠癌细胞SW480增殖、侵袭、凋亡和周期的影响

目的研究Peptaibol类多肽Trichorzin F对结直肠癌细胞SW480的抑制作用以及相关机制。方法在体外培养SW480细胞,使用MTT法检测Trichorzin F对SW480细胞的活力影响;使用Transwell小室实验检测Trichorzin F对SW480细胞侵袭能力的影响;采用PI染色和流式细胞术检测Trichorzin F作用下的SW480细胞周期分布和凋亡情况;通过实时荧光定量聚合酶链反应(RTq PCR)检测细胞周期调控基因CCND1、CDK4 mRNA的表达情况;通过Western blot实验检测Trichorzin F对SW480细胞周期、凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Cyclin D1表达的影响,并分析其对Erk1/2通路的影响。结果与空白组相比,Trichorzin F能够抑制SW480细胞活力和侵袭能力;PI单染和流式细胞术结果表明Trichorzin F可呈时间和剂量依赖性地诱导SW480细胞发生凋亡,并将细胞周期阻滞在G0/G1期;RT-q PCR结果显示Trichorzin F可下调CCND1、CDK4 mRNA的表达情况;Western blot结果显示Trichorzin F可上调Bax蛋白的表达,下调Cyclin D1、Bcl-2蛋白的表达以及Erk1/2磷酸化水平。结论Trichorzin F可抑制SW480细胞的活力和侵袭能力,诱导细胞凋亡,并阻滞细胞周期进程,其作用机制可能与调控Erk1/2信号通路有关。

苦参碱联合奥沙利铂对人结肠癌SW620细胞增殖、凋亡及p53蛋白表达的影响

目的探讨苦参碱(Ma)联合奥沙利铂(OXA)对人结肠癌SW620细胞增殖、凋亡、细胞周期分布及p53蛋白表达的影响。方法用不同浓度的Ma,OXA和两药联用分别处理人结肠癌细胞SW620,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定药物对细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测用药后细胞周期分布和细胞凋亡率,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测p53蛋白的表达情况。结果 Ma,OXA单用和联用均能抑制SW620增殖(P<0.05),呈时间-浓度依赖性,且两药联用对人结肠癌细胞SW620的增殖抑制率明显高于单用(P<0.05);OXA可在一定程度上诱导细胞凋亡(P<0.05),与Ma联用后,诱导细胞凋亡作用明显增强(P<0.05);OXA能够使细胞阻滞于G2/M期(P<0.05),联用Ma对G2/M期的阻滞作用更加明显(P<0.01);OXA作用SW620细胞后p53蛋白表达增强(P<0.05),联合Ma作用SW620细胞后p53蛋白表达上调较单用明显增强(P<0.05)。结论 Ma和OXA均可抑制人结肠癌SW620细胞的增殖,诱导细胞的凋亡,二者联合应用具有协同作用,可提高OXA化疗的敏感性,该作用可能与提高细胞内p53蛋白的表达有关。

薏苡仁油联合奥沙利铂对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响

目的 分析薏苡仁油联合奥沙利铂对结肠癌HT-29细胞株增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法 将人结肠癌HT-29细胞株作为研究对象,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度注射用薏苡仁油和奥沙利铂联合作用对人结肠癌HT-29细胞株增殖的影响,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Suvivin表达水平。结果 薏苡仁油组、奥沙利铂组、奥沙利铂+薏苡仁油组均会对人结肠癌HT-29细胞增殖产生一定抑制作用,且薏苡仁油浓度越高,作用时间越长,细胞增殖抑制率越高,差异有统计学意义(P<0.05);与薏苡仁油组、奥沙利铂组相比,奥沙利铂+薏苡仁油组细胞增殖抑制率更高,差异有统计学意义(P<0.05);薏苡仁油组、奥沙利铂组、奥沙利铂+薏苡仁油组细胞凋亡率均明显高于空白对照组(P<0.05);薏苡仁油浓度越高,细胞凋亡率也越高,差异有统计学意义(P<0.05);奥沙利铂+薏苡仁油组细胞凋亡率明显高于单独奥沙利铂组、薏苡仁油组,差异有统计学意义(P<0.05);空白对照组中Survivin mRNA为阴性表达,将不同浓度薏苡仁油加入行48 h干扰之后,Survivin mRNA表达明显降低(P<0.05);与空白对照组对比,奥沙利铂组Survivin mRNA表达强度明显提高(P<0.05);奥沙利铂+薏苡仁油组Survivin mRNA表达强度较单独奥沙利铂组明显降低(P<0.05)。结论 薏苡仁油能对结肠癌HT-29细胞增殖进行抑制,并对细胞凋亡进行诱导,与奥沙利铂联合用药能发挥药物协同作用,其作用机制可能和Suvivin表达下调具有密切相关性。

茯苓酸调控PI3K/AKT/mTOR通路介导葡萄糖代谢促进结直肠癌细胞凋亡的机制研究

目的 研究茯苓酸对结直肠癌细胞葡萄糖代谢及细胞凋亡的调控作用。方法 通过细胞活性测定(Cell Counting Kit-8,CCK8)、克隆形成等实验检测茯苓酸对结直肠癌细胞增殖与细胞活性的影响;采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞凋亡实验检测茯苓酸对结直肠癌细胞凋亡的影响;使用细胞氧气消耗率和细胞外酸化率测定仪器及细胞葡萄糖代谢水平测定试剂盒检测茯苓酸对结直肠癌细胞葡萄糖代谢的影响;通过蛋白免疫印迹(Western blotting, WB)实验验证凋亡、糖酵解、磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol3-kinase, PI3K)/丝氨酸、苏氨酸蛋白激酶(AKT Serine/Threonine Kinase 1,AKT)/雷帕霉素靶蛋白(Mammalian Target of Rapamycin, mTOR)通路相关蛋白表达情况。结果 茯苓酸能够有效抑制结直肠癌细胞增殖与细胞活性,并能够通过抑制其糖酵解水平促进其细胞凋亡,同时显著抑制PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白表达水平。结论 茯苓酸可通过调控PI3K/AKT/mTOR通路介导葡萄糖代谢促进CRC细胞凋亡,可作为未来结直肠癌代谢靶向治疗的潜在药物。

β-DG过表达对结肠癌细胞系SW620细胞凋亡的影响

目的研究β-肌营养不良蛋白聚糖(β-DG)在HT29、HCT116、SW480、SW620等4种常见的结肠癌细胞系中的表达情况,及其过表达后对SW620结肠癌细胞凋亡及相关蛋白表达变化的影响。方法培养结肠癌细胞系,提取总蛋白进行免疫印迹,检测各细胞中内源性β-DG蛋白的表达情况;构建pcDGFP-β-DG真核表达质粒,瞬时转染至SW620细胞中,提取总蛋白进行免疫印迹或直接进行免疫荧光制片,检测β-DG的过表达和细胞定位情况;过表达β-DG后,利用流式细胞术检测SW620细胞凋亡的变化情况,并进一步检测细胞凋亡标志蛋白聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(PARP)的表达变化情况。结果与人胚肾上皮细胞(HEK 293T)相比,结肠癌细胞系中内源性β-DG(43 ku)的表达量均有所降低,以SW620细胞下降更为明显,且都检测到了不同表达程度的β-DG水解片段(31 ku)。成功构建pcDGFP-β-DG真核表达质粒,在SW620细胞中能够有效表达,且主要定位在细胞质中靠近核膜的位置。过表达β-DG后,SW620细胞的凋亡率为0.167±0.014,高于空白组(0.075±0.027)和对照组(0.084±0.023),差异有统计学意义(P<0.05),且过表达β-DG后,完整型PARP(113 ku)的蛋白含量有所降低,而裂解型PARP(89 ku)的蛋白含量有所增高。结论β-DG在结肠癌细胞系中异常表达,主要表现在其异常的水解断裂。过表达β-DG能够促进SW620细胞凋亡及相关凋亡蛋白的表达,为进一步了解β-DG功能,及其与结肠癌之间的关系提供了细胞学基础。