活性氧在δ-榄香烯诱导人结肠腺癌DLD-1细胞凋亡中的作用研究

目的探讨δ-榄香烯诱导人结肠腺癌DLD-1细胞凋亡的机制以及活性氧(reactive oxygen species,ROS)在δ-榄香烯诱导人结肠腺癌细胞DLD-1凋亡中的作用。方法采用MTT法考察了δ-榄香烯对人结肠腺癌DLD-1细胞和人正常肝胚胎WRL-68细胞增殖的影响;采用氯甲基二氯荧光素二乙酸酯(CM-H2DCFDA)定量检测凋亡过程中ROS的变化;流式细胞术JC-1标记检测凋亡细胞中线粒体膜电位(Δφm)的影响。结果δ-榄香烯明显抑制DLD-1细胞的增殖,对WRL-68细胞的细胞毒作用不明显。200μM的δ-榄香烯作用DLD-1细胞1小时、3小时和6小时所引起的ROS含量的增加,分别接近空白对照组的7.8倍、18.2倍和21.8倍;这种作用可以被谷胱甘肽(glu-tathione,GSH)(ROS的清除剂)显著性抑制,即加入GSH后δ-榄香烯对ROS生成率(3.46%)与空白对照(2.11%)相比无显著性差异。流式细胞仪检测结果表明,线粒体膜电位(Dφm)的降低呈时间依赖性,6小时、12小时、24小时线粒体膜电位降低量分别是空白组的(2.24±0.12)倍,(2.85±0.33)倍,(5.11±0.24)倍。结论Δφm的降低表明δ-榄香烯的抗肿瘤作用是以诱导肿瘤细胞凋亡的方式产生的,且其凋亡过程提示可能与ROS的生成增加相关。

肺腺癌患者胸水肿瘤细胞PD-L1/TTF-1表达及应用分析

目的探讨肺腺癌患者胸水肿瘤细胞程序性细胞死亡配体1(PD-L1)/甲状腺转录因子1(TTF-1)、PD-L1免疫组化染色的表达及与组织标本PD-L1表达一致性及其应用研究。方法选取2021年1月至2023年4月间首都医科大学附属北京朝阳医院收治的符合入组条件的50例肺腺癌患者为研究对象,比较同一病例组织标本中肿瘤细胞的PD-L1表达和胸水细胞蜡块中肿瘤细胞的PD-L1、PD-L1/TTF-1表达情况,评估它们之间表达的一致性。结果50例肺腺癌组织标本PD-L1的表达与患者性别、年龄、标本类型、病灶性质、标本来源和EGFR突变对比差异无统计学意义(P>0.05);胸水细胞蜡块中肿瘤细胞PD-L1/TTF-1免疫组化双染的表达与组织标本PD-L1表达的一致性较好(κ=0.846,P<0.05),明显高于PD-L1免疫组化单染(κ=0.754,P<0.05),与手术或活检切除标本一致性较好(κ=0.90,P<0.05),高于胸腔镜或穿刺小标本(κ=0.82,P<0.05),与原发病灶标本的一致性适中(κ=0.689,P<0.05),与转移病灶标本的一致性较好(κ=0.779,P<0.05)。结论胸水细胞学标本采用PD-L1/TTF-1免疫组化双染与组织标本PD-L1表达一致性较高,细胞蜡块PD-L1/TTF-1双染可在组织不易获取时作为一种有益补充,供临床制定免疫治疗方案参考。

唾液腺腺泡细胞癌中NR4A3基因重排及NOR-1蛋白表达分析

目的:探讨NR4A3基因重排和NOR-1蛋白表达在唾液腺腺泡细胞癌中的表达及在鉴别诊断中的价值。方法:收集2020年5月—2024年1月于上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔病理科诊断的唾液腺癌119例,包括腺泡细胞癌(acinic cell carcinoma,AciCC)63例,黏液表皮样癌(mucoepidermoid carcinoma,MEC)31例,分泌性癌(secretory carcinoma,SC)25例。分别使用荧光原位杂交和免疫组织化学染色检测NR4A3基因重排和NOR-1蛋白表达情况,采用SPSS 18.0软件包对数据进行统计学分析。结果:AciCC主要发生于大唾液腺。与MEC和SC相比,AciCC好发于女性(P=0.006)。NR4A3基因重排在AciCC、MEC和SC中的阳性率分别为76.2%(48/63)、0%(0/10)和0%(0/7),NOR-1蛋白表达在AciCC、MEC和SC中的阳性率分别为92.1%(58/63)、9.7%(3/31)和0%(0/25),差异具有统计学意义(P<0.001)。单独使用NR4A3基因重排诊断AciCC时,灵敏度和特异度分别为76.2%和100%。单独使用NOR-1蛋白表达诊断AciCC时,灵敏度和特异度分别为92.1%和94.6%。联合使用NR4A3基因重排和NOR-1蛋白表达诊断AciCC时,灵敏度和特异度分别为96.8%和94.6%,曲线下面积为0.896,诊断价值最优。结论:AciCC好发于女性,主要发病部位为大唾液腺。NR4A3基因重排仅见于AciCC中,在诊断工作中具有100%的特异性,但敏感性较低。NOR-1蛋白表达检测具有很好的灵敏度和特异度,可作为鉴别AciCC、MEC和SC的初筛和替代方法。联合使用NR4A3基因重排和NOR-1蛋白表达检测具有最优的诊断价值。

阑尾杯状细胞腺癌1例报告

目的探讨阑尾杯状细胞腺癌(goblet cell adenocarcinoma of the appendix,GCA)的规范诊断与治疗。方法查阅国内外相关文献,对1例GCA患者的临床诊治进行回顾性分析。结果患者男,64岁,当地医院行腹腔镜下阑尾切除术,术后病理诊断为GCA后,于南昌大学第一附属医院行腹腔镜下右半结肠根治性切除术,术后恢复可,无严重并发症,术后9 d出院,现已行2次奥沙利铂+左亚叶酸钙+氟尿嘧啶化疗方案以及6次奥沙利铂+卡培他滨规律化疗,术后随访19个月,未见明确肿瘤复发或转移。结论阑尾肿瘤诊断缺乏特异性,若阑尾切除患者年龄较大、术前肿瘤标志物升高、阑尾管壁增厚、质硬或触及肿块时,应考虑阑尾肿瘤的可能性,必要时行术中冰冻切片送检,以达到一期根治的目的。

肺腺癌转录本1及其信号通路与非小细胞肺癌的关系研究进展

转移相关肺腺癌转录本1(MALAT1)最初被发现在早期非小细胞肺癌(NSCLC)中过表达。MALAT1因其结构的特殊性呈现的半衰期使其在NSCLC组织或血液中被检测到,并在NSCLC发生、发展中起关键作用。MALAT1的表达与NSCLC的肿瘤大小、分期、转移和远处浸润显著相关。MALAT1可促进NSCLC进展,其机制为下调miR-202表达,通过miR-185-5p上调鼠双微体4表达,下调叉头框蛋白P3泛素化影响轧棉厂复合亚基1转录;靶向miR-374b-56上调富含丝氨酸/精氨酸的剪接因子7表达;靶向miR-200a上调锌指E盒结合同源盒因子家族表达。因此,MALAT1可作为NSCLC患者早期诊断、病情评估、预后预测的生物标志物。

黄芪多糖通过调控T细胞增敏PD-L1阻断剂抗肺腺癌作用的机制初探

目的:观察黄芪多糖联合PD-L1阻断剂对Lewis肺腺癌小鼠皮下肿瘤生长的影响,初步探讨基于肿瘤免疫微环境,黄芪多糖促进T细胞的增殖,增敏PD-L1阻断剂治疗肺腺癌可能的作用机制。方法:建立Lewis肺腺癌荷瘤小鼠模型,造模后给予黄芪多糖联合PD-L1阻断剂治疗,同时分别设置二者单独用药组。给药结束后计算抑瘤率,脾指数及胸腺指数;HE染色观察小鼠肿瘤组织病理变化;流式细胞术检测外周血中CD4^(+)、CD8^(+)T细胞比率;免疫荧光法检测T细胞浸润情况;ELISA法检测肿瘤组织中促炎因子IL-1β、IL-6及TNF-α的水平,Western Blot法检测肿瘤组织中IL-10以及TGF-β的蛋白表达。结果:与模型组相比,黄芪多糖联合PD-L1阻断剂组可显著增加荷瘤小鼠体重,减轻肿瘤重量,上调脾指数及胸腺指数,抑制肿瘤生长;同时,黄芪多糖联合PD-L1阻断剂组可显著上调小鼠外周血中CD4^(+)T细胞(CD3^(+)CD4^(+))比率及CD4^(+)/CD8^(+)T细胞(CD3^(+)CD4^(+)/CD3^(+)CD8^(+))比值,增加肿瘤组织中CD4^(+)和CD8^(+)T细胞的浸润,促进小鼠肿瘤组织中促炎细胞因子IL-1β、IL-6及TNF-α的分泌,降低免疫抑制因子IL-10及TGF-β的表达。结论:黄芪多糖联合PD-L1阻断剂对Lewis肺腺癌小鼠有较好的抗肿瘤效果,黄芪多糖可通过改善肿瘤免疫微环境,增加肿瘤组织中T细胞的浸润,发挥增敏PD-L1阻断剂抗肺腺癌的作用。

前列腺癌“劫持”肿瘤相关成纤维细胞通过外泌体MALAT1调控糖代谢重编程的机制研究

目的:阐明外泌体转移性肺腺癌相关转录因子1(MALAT1)介导的前列腺癌(PCa)细胞与癌相关成纤维细胞(CAFs)间相互作用,探究CAFs来源的外泌体MALAT1在PCa糖代谢重编程中的作用及其机制。方法:分析肿瘤基因组图谱(TCGA)资料,探讨MALAT1在多种肿瘤中的表达模式,尤其是其与PCa的临床关联性。运用单细胞RNA测序(scRNA-seq)及相关技术,研究MALAT1在介导PCa细胞与CAFs之间相互作用的机制。过表达CAFs细胞中的MALAT1,提取上清外泌体,并与PCa细胞共培养,通过RNA纯化的染色质分离—质谱(ChIRP-MS)等方法,研究外泌体MALAT1在PCa进展中的功能及作用机制。结果:利用TCGA数据集进行分析,观察到MALAT1与前列腺腺癌、乳腺浸润癌、胆管癌等多种肿瘤恶性程度相关,且与PCa不良预后相关。scRNA-seq分析显示,PCa肿瘤微环境细胞中的CAFs不仅存在PCa分子标记物KLK3,而且MALAT1在CAFs中的表达显著高于PCa细胞,提示PCa细胞能够“驯化”CAFs,并通过CAFs中MALAT1促进PCa进展。进一步地,共培养和ChIRP-MS实验发现外泌体MALAT1通过与PCa糖代谢关键酶的直接结合调控PCa的能量代谢。ChIRP-MS和RNAseq联合分析发现外泌体MALAT1能够与4个糖酵解关键基因(GPI、ALDOC、PGK1、ALDOA)直接结合,从而调控PCa细胞的糖代谢重编程。结论:PCa细胞能够“驯化”CAFs,并通过CAFs释放外泌体MALAT1直接作用于PCa糖酵解关键分子,从而调控糖代谢重编程加速PCa发展。

BRCA1基因与肺腺癌免疫细胞浸润和预后的关系

目的探讨乳腺癌易感基因(BRCA1)与肺腺癌免疫细胞浸润和预后的关系。方法收集68例手术切除新鲜肺腺癌组织与癌旁肺组织(>癌组织边缘10 cm)标本,qRT-PCR检测BRCA1mRNA水平与免疫组化BRCA1基因表达;采用Oncomine数据库、Kaplan-meier Plotter数据库、TIMER数据库分析BRCA1基因与肺腺癌免疫细胞浸润和预后的关系。结果采用Oncomine数据库分析显示肺腺癌(LUAD)中BRCA1基因水平高于癌旁组织(P<0.05),qRT-PCR检测结果显示肺腺癌组织中BRCA1 mRNA表达水平高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);TIMER数据库分析,BRCA1表达与中心粒细胞(γ=0.147,P=1.28×10-3)浸润水平具有强相关性,但与B细胞(γ=-0.09,P=4.73×10^(-2))、CD8+T细胞(γ=0.047,P=3.00×10^(-1))、CD4+T细胞(γ=0.039,P=3.91×10^(-1))、巨噬细胞(γ=-0.038,P=4.05×10^(-1))、及树突状细胞(γ=0.039,P=3.85×10^(-1))无相关性;Kaplan-meier Plotter数据库分析,BRCA1基因高表达肺腺癌患者总生存期、无病生存率低于低表达肺腺癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论BRCA1基因及mRNA在肺腺癌组织中呈高表达;BRCA1基因与患者不良预后及中性粒细胞免疫浸润密切相关。

CK7、TTF-1及Ki-67在肺腺癌中的表达及临床意义

目的 探讨细胞角蛋白7(CK7)、甲状腺转录因子1(TTF-1)及Ki67蛋白(ki-67)在肺腺癌中的表达及临床意义。方法 选取2020年4月至2023年1月北京市大兴区人民医院收治的131例肺腺癌患者作为研究对象。对比肺腺癌组织与癌旁组织CK7、TTF-1及ki-67的表达情况;分析肺腺癌患者病理特征与CK7、TTF-1及ki-67表达之间的关系;分析CK7、TTF-1及ki-67单独检测及联合对肺腺癌的诊断效能;分析CK7、TTF-1及ki-67单独检测以及联合诊断肺腺癌的一致性。结果CK7、TTF-1及ki-67在肺腺癌组织中表达的阳性率显著高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);不同肿瘤分期、肿瘤直径、分化程度肺腺癌患者的CK7、TTF-1及ki-67阳性表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05);有淋巴结转移的肺腺癌患者CK7、TTF-1及ki-67阳性表达率高于无淋巴结转移患者,差异有统计学意义(P<0.05);CK7、TTF-1、ki-67联合检测肺腺癌的灵敏度、特异性、准确率、阳性预测值以及阴性预测值均高于三指标单独检测(P<0.05);CK7、TTF-1及ki-67单独检测以及联合诊断肺腺癌与病理学检查结果的一致性Kappa值分别为0.734、0.763、0.719、0.935。结论 CK7、TTF-1及ki-67在肺腺癌组织中呈高表达状态,三指标可辅助诊断肺腺癌,为临床诊断肺腺癌提供可靠依据。

miR-532-3p靶向SERPINE1调控细胞外基质受体互作通路抑制结肠腺癌细胞增殖和迁移

目的本研究旨在明确miR-532-3p/SERPINE1在结肠腺癌中的具体调控机制。方法利用TCGA数据库筛选差异表达的mRNA,随后通过mirDIP、miRWalk数据库分析并确定上游调控基因miRNA。GSEA数据库进行富集通路的分析。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative PCR,qRT-PCR)、细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)实验、克隆形成实验、划痕愈合、Transwell、蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)研究SERPINE1及上游基因对结肠腺癌增殖、迁移、侵袭的调控机制。结果SERPINE1在结肠腺癌细胞和组织中显著高表达,而miR-532-3p呈显著低表达。SERPINE1与结肠腺癌患者的预后不良有关,能促进结肠腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。SERPINE1显著富集在细胞外基质受体互作通路。miR-532-3p靶向负调控SERPINE1的表达,回复实验表明miR-532-3p/SERPINE1调控细胞外基质受体互作通路影响结肠腺癌细胞的恶性进展。结论miR-532-3p作为SERPINE1的上游调控基因,通过调控细胞外基质受体互作通路抑制结肠腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。

高尔基体膜蛋白1调控结肠腺癌细胞凋亡和迁移的作用机制研究

高尔基体膜蛋白GOLM1对多种肿瘤恶性发展发挥着重要的作用,但其对结肠腺癌生成的作用目前尚不清楚。本研究通过GEPIA大数据库分析、CRISPR/Cas9基因敲除、细胞周期和Transwell及小鼠荷瘤模型实验检测等技术,发现了GOLM1在结肠腺癌病人中高表达,且在结肠腺癌MC38细胞中敲除GOLM1后,可显著促进细胞凋亡、同时抑制细胞增殖和迁移侵袭,以及小鼠肿瘤移植模型的成瘤能力。在分子机制上揭示了GOLM1敲除不仅显著降调了BCL-xL和MCL1的蛋白水平,而且降低了与细胞迁移侵袭相关的β-catenin、E-cadherin、Twist和ZEB2等蛋白的表达,并提高了其对星孢素诱导细胞凋亡的敏感性。综上,本研究发现了结肠癌组织中GOLM1过表达促进了癌细胞抗凋亡、促增殖和迁移的作用及初步分子机制。

细胞蜡块、肺原发灶和转移灶组织在肺腺癌EGFR/ALK/ROS1基因联合检测中的应用

目的探讨用457例肺腺癌患者的不同样本进行EAR(EGFR/ALK/ROS1)基因联合检测的意义。方法纳入2020年1月至2022年8月经病理确诊为肺腺癌患者457例,分别对415例肺组织标本(131例活检标本和284例手术切除标本)、32例浆膜腔积液细胞蜡块、10例转移灶组织进行EAR基因联合检测,比较肺组织标本与细胞蜡块、转移灶组织EAR基因异常检出情况。结果(1)457例肺腺癌患者EAR突变总检出率为64.3%(294/457),EGFR/ALK/ROS1分别为56.2%(257/457)、4.8%(22/457)、3.3%(15/457);肺组织标本、细胞蜡块、转移灶组织EAR基因检出率分别为:62.7%(260/415)、84.4%(27/32)、70.0%(7/10),三者数据检出率存在着统计学差异(P<0.05),其中细胞蜡块与肺活检组织检出率相比,有统计学差异(P<0.017)。(2)131例活检标本与284例手术切除标本EAR基因检出率分别为52.7%(69/131)、67.3%(191/284),手术切除标本比活检标本有更高的EAR基因检出率,差异有统计学意义(P<0.05)。结论细胞蜡块在EAR基因检测方面具有最高的突变检出率,当肺腺癌患者临床难以获取活检组织时,可以替代用于基因检测;肺手术切除标本比活检标本有更高的EAR基因突变检出率。

食管胃交界部腺癌肿瘤浸润淋巴细胞中FoxM1、GST-π表达情况与分化程度、转移及预后的关系

目的 分析食管胃交界部腺癌(AEGJ)肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)中叉头框蛋白M1(FoxM1)、谷胱甘肽-S-转移酶-Pi(GST-π)表达情况,探讨其与肿瘤分化程度、转移及患者预后之间的关系。方法 将60例行手术治疗的AEGJ患者纳为研究对象,术中留取癌灶组织与癌旁组织,机械法分离出癌灶组织及癌旁组织内TILs,流式技术检测TILs中FoxM1、GST-π表达量(以含有FoxM1、GST-π抗原细胞的百分率表示)。分析AEGJ癌灶组织及癌旁组织TILs中FoxM1、GST-π表达量与肿瘤临床特征之间的关系。随访3年,比较癌灶组织内TILs中FoxM1、GST-π不同表达量患者生存情况。结果 癌灶组织TILs内FoxM1、GST-π表达水平均高于癌旁组织TILs,差异具有统计学意义(P<0.05)。癌灶组织TILs内FoxM1表达水平与肿瘤TNM分期、浸润深度及淋巴转移相关(P<0.05),TILs内GST-π表达水平与肿瘤分化程度及浸润深度有关(P<0.05)。随访发现,FoxM1高表达组患者3年生存率及中位生存时间均低于低表达组(Rank=4.039,P=0.044),GST-π高表达组患者3年生存率及中位生存时间均低于低表达组(Rank=10.041,P=0.002)。结论 AEGJ组织TILs内FoxM1及GST-π表达水平明显高于癌旁TILs,且与AEGJ病理特点存在一定的关系。FoxM1及GST-π表达水平与AEGJ患者术后生存情况相关,是预测患者预后的潜在指标。

胃黏液腺癌、印戒细胞癌及非黏液腺癌中PD-L1、错配修复蛋白及HER-2的表达及意义

目的探讨胃黏液腺癌(mucinous gastric adenocarcinoma,MGC)、印戒细胞癌(signet ring cell carcinoma,SRC)及胃非黏液腺癌(non-mucinous gastric adenocarcinoma,NMGC)中PD-L1、错配修复蛋白及HER-2的表达及意义。方法收集2018年3月~2022年2月唐山市工人医院诊治的349例胃腺癌患者,其中MGC 14例、SRC 34例、NMGC 301例,对其PD-L1、错配修复蛋白及HER-2免疫组化及FISH检测结果进行统计分析。结果MGC的肿瘤体积大于SRC及NMGC,MGC中PD-L1的阳性率(0)低于NMGC(23.6%),MGC中错配修复缺陷(deficient mismatch repair,dMMR)发生率(50%)高于SRC(5.9%)及NMGC(8.6%)(P<0.05)。结论MGC具有独特的临床病理和分子学特征,其可能对化疗和免疫治疗获益产生不利影响。

过表达OMA1通过促进线粒体释放细胞色素C诱导肺腺癌A549细胞凋亡

目的:探讨OMA1在肺腺癌中的表达水平及其对肺腺癌A549细胞凋亡的影响及机制。方法:收集2018年01月至2019年10月在本院保存的42例经病理确诊为肺腺癌患者的癌组织样本及其癌旁组织(距离肿瘤边缘≥5 cm),免疫组化染色法检测癌组织及癌旁组织中OMA1表达情况。体外培养人肺腺癌细胞系NCI-H2009、Calu-3、SPC-A-1、A549及人正常肺上皮细胞BEAS-2B,qRT-PCR和Western blotting检测细胞中OMA1 mRNA和蛋白表达水平。采用OMA1过表达慢病毒及其空载慢病毒感染A549细胞,分为OMA1过表达慢病毒感染组(OMA1组)和空载慢病毒感染组(Vector组),另设置空白对照组(Blank组)。采用MTT检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡水平;JC-10染色法检测细胞线粒体膜电位变化;qRT-PCR法检测细胞中OMA1 mRNA表达水平;Western blotting法检测细胞中OMA1、cleaved caspase-3、OPA1以及细胞线粒体和胞浆中Cyt C蛋白表达水平。结果:肺腺癌患者癌组织中OMA1表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05)。NCI-H2009、Calu-3、SPC-A-1和A549细胞中OMA1 mRNA和蛋白表达水平显著低于BEAS-2B细胞(P<0.05)。与Blank组或Vector组比较,OMA1组细胞中OMA1 mRNA和蛋白表达水平、细胞凋亡率及cleaved caspase-3蛋白和胞浆中Cyt C蛋白表达水平均显著升高(P<0.05),而细胞增殖活性、线粒体膜电位及OPA1蛋白和线粒体中Cyt C蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论:OMA1在肺腺癌组织及其细胞系中低表达,过表达OMA1可通过下调OPA1蛋白表达、破坏线粒体膜电位、加速线粒体Cyt C释放而诱导肺腺癌A549细胞凋亡。

沉默SOCS1联合rAAV/PSA基因修饰的树突状细胞疫苗治疗前列腺癌的实验研究

目的研究沉默细胞因子信号抑制因子1(suppressor of cytokine signaling 1,SOCS1)基因联合rAAV/PSA基因修饰的树突状细胞(dendritic cell,DC)对前列腺癌LNCaP细胞的体外杀伤效应。方法应用重组腺相关病毒(rAAV)介导的RNA干扰技术沉默人DC的SOCS1基因的表达,行Western blot检测基因沉默效果。rAAV-shRNA-SOCS1和rAAV/PSA感染DC,将DC细胞分为Control-DC组、rAAV/PSA-DC组、SOCS1(-)+rAAV/PSA-DC组。采用系列细胞因子诱导DC成熟,诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。流式细胞术检测分析各组DC细胞表型及CTL细胞的免疫表型;ELISA法检测各组DC细胞培养上清中细胞因子白介素-10(IL-10)及IL-12 p70的分泌水平,各组CTL细胞释放γ-干扰素(IFN-γ)的水平;LDH法检测各组CTL细胞对前列腺癌LNCaP靶细胞的杀伤效率。结果rAAV-shRNA-SOCS1感染DC后,可有效下调DC的SOCS1表达水平。与对照组比较,沉默SOCS1联合rAAV/PSA基因修饰的DC细胞培养上清中细胞因子IL-12 p70的分泌水平显著增高,IL-10的分泌水平明显下降(P<0.05);该组DC表面分子CD80、CD83和CD86的表达明显上调(P<0.05)。该组DC诱导的CTL中CD8^(+)、CD8^(+)CD69^(+)T细胞的比例明显增高,而CD4^(+)T细胞、CD4^(+)CD25^(+)FoxP3^(+)Treg细胞的比例显著降低(P<0.05),IFN-γ的释放水平明显增高(P<0.05),对PSA阳性的前列腺癌靶细胞LNCaP具有更强的杀伤活性(P<0.05),且具有抗原特异性。结论沉默SOCS1联合rAAV/PSA基因修饰的DC疫苗可以产生高效而特异性的抗前列腺癌免疫效应。

补中益气汤中的有效成分槲皮素通过GSTP1-JAK-STAT途径增强肺腺癌耐药细胞株A549/DDP对顺铂的敏感性

【目的】探究补中益气汤的有效成分槲皮素联合顺铂治疗在增强肺腺癌对顺铂敏感性中的作用及其潜在分子机理。【方法】(1)网络药理学分析:从TCMSP数据库筛选补中益气汤的有效成分及其对应靶点,从TCGA数据库下载肺腺癌疾病的数据,并基于差异分析和网络药理学分析挖掘补中益气汤治疗肺腺癌的主要活性成分和潜在作用靶点,通过富集分析以判断相关信号通路,通过分子对接模拟技术分析关键基因与有效成分之间的对接关系。(2)细胞实验:槲皮素或顺铂单一处理以及两者联合处理肺腺癌细胞(A549、A549/DDP),通过细胞计数试剂盒(CCK)-8、Western Blot法、流式细胞术分别对应分析肺腺癌细胞的细胞活力、关键蛋白的表达和细胞凋亡情况。细胞热迁移分析(CETSA)验证活性成分槲皮素与靶蛋白谷胱甘肽S-转移酶π(GSTP1)的结合关系。【结果】补中益气汤中的有效成分槲皮素能与GSTP1紧密结合。通路富集分析显示槲皮素和顺铂可能通过铂类耐药以及Janus激酶(JAK)-信号传导与转录激活因子(STAT)通路影响肺腺癌的进展。此外,槲皮素联合顺铂可下调肺腺癌细胞中GSTP1和JAK-STAT信号通路相关蛋白的表达。在功能上,槲皮素能加强顺铂诱导的肺腺癌细胞的抗癌活性。【结论】槲皮素可减轻肺腺癌耐药细胞对顺铂的耐药性。

结直肠腺癌组织中tiRNA-1_33-Gly-GCC-1的表达及临床意义

目的:研究结直肠腺癌(colorectal adenocarcinoma,CAC)组织中tiRNA-1_33-Gly-GCC-1的表达及对细胞增殖的影响。方法:通过tRF&tiRNA芯片分析5对CAC组织中tRFs&tiRNAs差异性表达谱并用qRT-PCR实验在82对CAC组织中对tiRNA-1_33-Gly-GCC-1的表达水平进行验证。采用RNA原位杂交技术(RISH)检测CAC组织中tiRNA-1_33-Gly-GCC-1的阳性表达,并分析与患者临床特征和患者预后的关系。CCK-8实验检测tiRNA-1_33-Gly-GCC-1对细胞增殖活性的影响。生物信息学预测并应用双荧光素酶报告实验验证tiRNA-1_33-Gly-GCC-1如何调控TP53I11。回复实验验证tiRNA-1_33-Gly-GCC-1/TP53I11信号轴对CAC细胞增殖的影响。裸鼠荷瘤实验验证tiRNA-1_33-Gly-GCC-1对移植瘤生长和增殖的影响。结果:tiRNA-1_33-Gly-GCC-1在结直肠腺癌组织中表达水平升高并呈阳性表达,阳性例数54/82(65.85%)明显高于邻近正常组织11/82(13.41%),两组间有统计学差异(χ^(2)=5.475,P=0.019<0.05)。tiRNA-1_33-Gly-GCC-1的阳性表达与CAC患者肿瘤直径(χ^(2)=11.699)、分化程度(χ^(2)=13.081)和患者生存预后(χ^(2)=15.621)密切相关(均P<0.05)。CCK-8实验结果显示tiRNA-1_33-Gly-GCC-1促进CAC细胞的增殖活性(P<0.05)。生物信息学预测TP53I11是tiRNA-1_33-Gly-GCC-1的下游靶基因,双荧光素酶报告基因实验提示tiRNA-1_33-Gly-GCC-1与TP53I113'UTR结合从而抑制其蛋白质合成。Rescue回复实验进一步验证了tiRNA-1_33-Gly-GCC-1抑制TP53I11 mRNA和蛋白的表达及对大肠癌细胞增殖的促进作用。裸鼠皮下移植瘤实验也提示tiRNA-1_33-Gly-GCC-1促进了生长和增殖。结论:tiRNA-1_33-Gly-GCC-1在结直肠腺癌组织中表达水平上调,可能是一个新的促癌基因;机制上tiRNA-1_33-Gly-GCC-1能抑制TP53I11的表达而促进CAC细胞的增殖生长。本研究为今后结直肠腺癌诊治和预后判断提供新的理论基础。

黄芪-莪术协同作用调节SIRT3/HIF-1α通路对人肺腺癌A549细胞侵袭迁移的影响

目的观察黄芪-莪术药对通过调节SIRT3/HIF-1α信号通路对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡及侵袭和迁移能力的影响。方法复制C57BL/6小鼠Lewis肺癌移植瘤模型,观察黄芪-莪术不同配比(1:1、2:1、3:1)干预14 d后对移植瘤重和肺转移的影响,计算抑瘤率,以抑瘤率优选黄芪-莪术配比;体外培养人肺腺癌A549细胞,采用CCK-8法检测不同浓度黄芪-莪术提取物对A549细胞增殖的抑制作用,筛选其最佳给药浓度和作用时间,流式细胞仪检测A549细胞凋亡率,细胞划痕实验和Transwell实验检测A549细胞移动性及侵袭能力变化,Western-blot检测侵袭相关蛋白(COX-2、CD44v6、MMP-9)的表达水平,Western-blot及RT-PCR检测SIRT3/HIF-1α通路蛋白和mRNA表达。结果黄芪-莪术不同配比干预后,小鼠瘤重和肺转移灶数明显减少(P<0.05),其中3:1配比抑瘤作用最显著(P<0.05);黄芪-莪术提取物0.4~0.8 mg/mL干预48 h对A549细胞增殖的抑制作用明显,应用0.4、0.6、0.8 mg/mL浓度处理48 h后,A549细胞凋亡率较空白对照组明显提升,迁移能力减弱,创面愈合率明显降低,侵袭细胞数明显减少(P<0.05),细胞COX-2、CD44v6、MMP-9的蛋白表达显著降低(P<0.05),同时明显下调了HIF-1α的蛋白和m RNA表达,上调了SIRT3的蛋白和m RNA表达(P<0.05)。结论黄芪-莪术药对可有效抑制肺癌肿瘤的生长和转移,并能通过调节SIRT3/HIF-1α信号通路发挥对A549细胞的促凋亡和抗侵袭、迁移作用。

KRT6A调控胰腺导管腺癌细胞生物学行为的作用及作为诊断与预后判断靶标的研究

目的:通过生物信息学分析以及细胞生物学实验研究角蛋白6A(KRT6A)对胰腺导管腺癌(PDAC)诊断、预后判断、免疫微环境以及PDAC细胞PANC1增殖、凋亡等生物学行为的影响。方法:通过GEPIA平台整合TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库与GTEx(Genotype-Tissue)数据库中的数据,分析KTRT6A在PDAC组织中的表达情况,并通过CIBERSORT工具分析KRT6A表达与PDAC组织中免疫细胞浸润的关系,然后通过GSEA方法研究与KRT6A基因表达相关的肿瘤信号通路。选取长海医院病理科保存的60例PDAC组织与癌旁组织标本进行免疫组化分析,验证KRT6A在肿瘤组织中表达情况;通过干扰RNA敲减PANC1细胞中KRT6A的表达,采用CCK-8实验以及流式细胞术检测敲减KRT6A对细胞的增殖、凋亡的影响。结果:利用TCGA与GTEx数据库数据分析发现,KRT6A在人PDAC组织中呈高表达,且与患者较差的生存期存在关联(P=0.015)。利用CIBERSORT软件以及GSEA分析发现,KRT6A高表达的PDAC组织中M2型巨噬细胞浸润性升高(P=0.034),且与Wnt通路(NES:1.7359272,P<0.05)、磷酸戊糖途径(PPP)(NES:1.5613053,P<0.05)等信号通路上调有关联(P<0.05或P<0.01);免疫组化结果进一步验证了KRT6A在PDAC组织中呈高表达(P<0.001)。增殖和凋亡实验发现,干扰KRT6A能够显著抑制PANC1细胞的增殖(P<0.05)以及凋亡(P<0.001)。结论:KRT6A在人PDAC组织中呈高表达,敲减其表达能够抑制PANC1细胞的增殖和凋亡,具有作为PDAC诊断与预后判断新靶标的潜力。