镁钙合金浸提液对人结肠黏膜上皮细胞中基质金属蛋白酶9和基质金属蛋白酶抑制因子3表达的影响

目的研究不同浓度镁钙合金浸提液对人结肠黏膜上皮细胞NCM460中基质金属蛋白酶9(MMP9)和基质金属蛋白酶抑制因子3(TIMP3)表达的影响。方法用镁钙合金制成不同浓度(体积分数10%、50%和100%)的浸提液,并将NCM460细胞制成5×10~6L^(-1)的细胞悬液,分为空白对照组及实验1、2、3组,空白对照组每孔加入含体积分数10%胎牛血清的达尔伯克改良伊格尔高糖培养基2 000μL,实验1、2、3组每孔分别加入体积分数10%、50%及100%的镁钙合金浸提液2 000μL,分别培养1、3、5 d,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测NCM460细胞中MMP9和TIMP3 mRNA的表达,免疫印迹法检测NCM460细胞中MMP9和TIMP3蛋白表达。结果培养1 d后,实验1、2、3组NCM460细胞中MMP9 mRNA、TIMP3 mRNA表达水平均显著低于空白对照组(P<0.05);培养3、5 d后,实验1组NCM460细胞中MMP9 mRNA表达水平仍显著低于空白对照组(P<0.05),实验2、3组NCM460细胞中MMP9mRNA表达水平均显著高于空白对照组和实验1组(P<0.05);培养5 d后,实验3组NCM460细胞中MMP9 mRNA表达水平显著高于实验2组(P<0.05)。培养3、5 d后,实验1、2、3组NCM460细胞中MMP9 mRNA表达水平均显著高于培养1 d后;培养5 d后,实验1组NCM460细胞中MMP9 mRNA表达水平与培养3 d后比较差异无统计学意义(P>0.05),实验2、3组NCM460细胞中MMP9 mRNA表达水平均显著高于培养3 d后(P<0.05)。培养1 d后,实验2、3组NCM460细胞中TIMP3 mRNA表达水平均显著高于实验1组(P<0.05)。培养3 d后,实验1、2、3组NCM460细胞中TIMP3 mRNA表达水平显著低于对照组(P<0.05),实验2组NCM460细胞中TIMP3 mRNA表达水平均显著低于实验1、3组(P<0.05)。培养5 d后,实验1、2、3组NCM460细胞中TIMP3 mRNA表达水平均显著高于对照组(P<0.05)。实验1组NCM460细胞中培养3、5 d后的TIMP3 mRNA表达水平均显著高于培养1 d后(P<0.05),培养5 d后的TIMP3 mRNA表达水平显著高于培养3 d后(P<0.05)。实验2组NCM460细胞中培养3 d后的TIMP3mRNA表达水平显著低于培养1 d后(P<0.05),培养5 d后的TIMP3 mRNA表达水平显著高于培养1、3 d后(P<0.05)。实验3组NCM460细胞中培养5 d后的TIMP3 mRNA表达水平显著高于培养1、3 d后(P<0.05)。培养5 d后,实验1组NCM460细胞中MMP9蛋白表达水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);实验2、3组NCM460细胞中MMP9蛋白表达水平均显著高于空白对照组和实验1组(P<0.05);实验3组NCM460细胞中MMP9蛋白表达水平与实验2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。培养5 d后,实验1、2、3组NCM460细胞中TIMP3蛋白表达水平均显著高于对照组(P<0.05);实验1、2、3组NCM460细胞中TIMP3蛋白表达水平两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论高浓度的镁钙合金浸提液对NCM460细胞中的MMP9及TIMP3基因表达有一定的影响,容易导致早期炎症反应的发生,其机制可能与浸提液中的钙离子浓度有关。

黄芩苷抑制人结肠黏膜上皮细胞的凋亡机制

[目的]探讨黄芩苷抑制人结肠黏膜上皮细胞凋亡的机制。[方法]黄芩苷处理人结肠黏膜上皮细胞,检测其凋亡水平与miRNA水平的变化。敲低筛选出的miRNA后,检测其凋亡水平与潜在靶标mRNA水平的变化。荧光素酶报告系统检测miRNA与潜在靶标的结合。[结果]黄芩苷处理人结肠黏膜上皮细胞后,人结肠黏膜上皮细胞的凋亡水平显著下降(0.35±0.11 vs 0.06±0.02,P<0.05)。黄芩苷处理人结肠黏膜上皮细胞后,miR-642a-3p、miR-484的表达水平显著下降(2.35±0.75 vs 0.51±0.18,1.94±0.63 vs 0.60±0.20,P<0.05)。敲低miR-484后,人结肠黏膜上皮细胞的凋亡水平显著降低(0.35±0.11 vs 0.07±0.02,P<0.05),PEA15和UAP1L1的水平显著升高(1.23±0.41 vs 2.45±0.64,0.65±0.23 vs 1.95±0.61,P<0.05)。敲低PEA15后,人结肠黏膜上皮细胞的凋亡水平显著升高(0.35±0.11 vs 0.67±0.020,P<0.05)。过表达PEA15后,人结肠黏膜上皮细胞的凋亡水平显著下降(0.35±0.10 vs 0.06±0.01,P<0.05)。miR-484靶向PEA15的3'端非编码区。[结论]黄芩苷处理人结肠黏膜上皮细胞后降低miR-484的表达、提高PEA15的表达,最终抑制了人结肠黏膜上皮细胞凋亡。