槲皮素对P-糖蛋白转录调控机制的研究

目的:探讨槲皮素对P-糖蛋白的转录调节机制。方法:利用构建的双荧光素酶报告基因系统,将hVDR真核表达载体、P-糖蛋白报告基因载体和内对照载体共同瞬时转染COS-7细胞,以100nM的1,25(OH)2D3为阳性对照,用不同浓度(10、15、20μmol/L)的槲皮素处理细胞48h后,检测双荧光素酶活性。结果:荧光素酶活性检测显示,槲皮素孵育后可激活P-糖蛋白的表达,各浓度处理组的双荧光素酶活性值显著升高(P<0.01)。结论:槲皮素可诱导P-糖蛋白的表达,其可能机制是通过hVDR介导。

hVDR原核表达及其与重金属镉、铅的结合活性

人类维生素D受体(hVDR)是重金属影响骨骼代谢的潜在受体通道,但目前没有重金属影响hVDR通道的报道.通过构建含有hVDR的pGEX-4T-1表达质粒,建立了原核表达具生物学活性的hVDR的方法;然后根据核受体与其配体结合后可以与核受体转录激活因子2(Transcriptional intermediary factor 2,TIF2)-细菌碱性磷酸酶(bacterial alkaline phosphatase,BAP)融合蛋白(TIF2-BAP)结合,建立了研究化学物质影响hVDR与核受体转录激活因子结合活性的磷酸对硝基苯酚法.通过该方法研究发现,镉(CdCl2)或铅(PbAc2)均能提高hVDR与TIF2-BAP的非配体依赖性结合.当加入100μmol/L和1000μmol/L氯化镉(CdCl2)后,结合活力分别显著上升至对照组的3.95和4.39倍(p<0.05);加入100μmol/L和1000μmol/L醋酸铅(PbAc2)后,结合活力分别显著上升至对照组的2.29和3.52倍(p<0.05).这表明镉和铅可能通过干扰hVDR受体通道的正常功能导致骨代谢异常和骨质疏松症的发生.