人网膜脂肪干细胞与小鼠胚胎成纤维细胞3T3-L1体外增殖分化对比观察

目的比较人网膜脂肪干细胞与小鼠胚胎成纤维细胞(3T3-L1)体外增殖分化情况。方法使用胶原酶消化法提取人网膜脂肪干细胞,复苏冻存的3T3-L1,进行培养,显微镜观察细胞在培养瓶中的生长过程,拍照记录细胞密度、形态;将两种细胞接种入96孔板,定时加入CCK-8试剂,测定吸光值,绘制生长曲线;将两种细胞诱导为成熟脂肪细胞,油红O染色后,观察脂滴分布。结果人网膜脂肪干细胞1~3代细胞倍增时间6 d,随着传代次数增多,细胞贴壁后停止增殖,第4天出现老化凋亡;复苏后3T3-L1倍增时间48 h,每72 h传代1次。根据人网膜脂肪干细胞和3T3-L1的吸光值,二者的指数增长期分别为第2~5天、第2天,平台期分别为第6~8天、第3~10天,人网膜脂肪干细胞第9天进入衰亡期。人网膜脂肪干细胞和3T3-L1经过10天成脂诱导分化,油红染色后均可见红染的脂滴,两种细胞均可分化为成熟脂肪细胞,并且在诱导过程中出现漂浮裂解,贴壁细胞减少。结论与3T3-L1相比,人网膜脂肪干细胞也具有成脂分化的能力,但增殖能力有限。