聚乳酸/羟基磷灰石膜与人羊膜基质细胞联合构建骨组织工程细胞/支架复合体

背景:前期研究通过静电纺丝技术获得的聚乳酸/羟基磷灰石膜有利于细胞的贴附和生长。目的:分析电纺聚乳酸/羟基磷灰石膜和人羊膜基质细胞构建骨组织工程细胞/支架复合体的可行性。方法:利用MTT法检测聚乳酸和聚乳酸/羟基磷灰石膜浸提液对人羊膜基质细胞增殖的影响;将第3代人羊膜基质细胞培养于含聚乳酸和聚乳酸/羟基磷灰石膜的成骨诱导培养液中,进行组织学检查及免疫荧光细胞化学染色检测。结果与结论:聚乳酸和聚乳酸/羟基磷灰石膜浸提液对人羊膜基质细胞均无明显细胞毒性。与两种膜材料复合培养后,人羊膜基质细胞细胞增殖明显,可观察到钙化结节的形成,钙化结节处细胞Ⅰ型胶原和碱性磷酸酶表达阳性,且聚乳酸/羟基磷灰石膜组细胞钙化结节数量及成熟程度优于聚乳酸组。说明电纺聚乳酸/羟基磷灰石膜与人羊膜基质细胞可以共同构建成细胞/支架复合体,具有应用于骨组织工程的潜力。

去细胞人羊膜基质的制备及免疫原性

目的制备去细胞人羊膜基质(AHAM)并分析其移植至小鼠体内后的免疫反应,评价去细胞人羊膜基质作为细胞移植支架的免疫原性。方法利用胰蛋白酶-EDTA消化人羊膜(HAM),去除人羊膜上皮细胞,制备新鲜去细胞人羊膜基质;新鲜去细胞人羊膜基质置于含硫酸软骨素及甘油的冷冻保护液中,-80℃保存;使用前经PBS复水处理后即冷冻去细胞人羊膜基质;免疫细胞化学分析去细胞人羊膜基质中人类白细胞抗原的表达情况;将冷冻的去细胞人羊膜基质移植至BALB/c小鼠肝脏内4周后,分析脾脏组织中CD4^+、CD8^+T淋巴细胞比例的变化。结果新鲜及冷冻保存后的去细胞人羊膜基质均不表达人类白细胞抗原;冷冻的去细胞人羊膜基质移植至小鼠体内后,脾脏组织中CD4^+、CD8^+T淋巴细胞无明显变化。结论去细胞人羊膜基质的免疫原性较低,移植后不会引起由T细胞介导的特异性排斥反应,可以作为免疫安全性的生物支架用于疾病的细胞移植治疗。

人羊膜细胞外基质修复尿道下裂的实验研究

目的:研究人羊膜细胞外基质(HAECM)修复新西兰兔阴茎型尿道下裂的效果。方法:选择新鲜健康剖宫产胎盘分离出羊膜,制备HAECM;将36只雄性新西兰白兔切除1 cm前尿道黏膜,建立尿道下裂动物模型,并随机分为对照组、HAECM单层修复组及多层修复组,每组12只;对照组采用传统的加盖岛状皮瓣(Onlay式)对兔尿道下裂进行手术修复,HAECM单层和多层修复组分别采用单层和多层HAECM作为修复材料对兔尿道下裂进行手术修复,于术后第20和40天时行尿道造影和尿道镜检查,并于术后第10、20和40天时对术后尿道标本进行病理学观察,了解术后尿道情况。结果:成功制备出优质的HAECM;尿道病理组织学检查结果示:术后第10天时,实验组尿道管腔面有少量尿道上皮细胞生长;术后第20天时,实验组可见尿道管腔被覆上皮已基本覆盖HAECM修复区;术后第40天时,单层修复组、多层修复组脱细胞羊膜修复处尿道管腔被覆尿路上皮细胞完整,黏膜下层可见平滑肌生长,纤维组织、小血管增生,少量炎细胞浸润;对照组可见尿道管腔完整,平滑肌层连续性完好,可见少量炎细胞;尿道造影检查示术后第40天时,单层、复层修复组和对照组尿道通畅,未见狭窄、造影剂外渗、憩室形成;尿道镜检查示术后第40天时,单层、多层修复组和对照组尿道通畅,未见明显狭窄。结论:单层和复层HAECM对兔尿道下裂修复效果良好,HAECM是一种前景良好的修复材料。

骨组织工程中干细胞的研究与应用

背景:是否可以通过改进对已知的可以分化成骨的干细胞的培养方式或者寻找到新的干细胞,为骨组织工程找到更为合适的种子细胞。目的:从干细胞的分离培养、生物学特性及标志物等方面对各类干细胞的在骨组织工程中的应用进行综述。方法:以英文检索词为"bone tissue engineering,seed cells,stem cell,osteoblast differentiation"及中文检索词为"骨组织工程,种子细胞,干细胞,成骨分化",由第一作者检索1995年至2012年PubMed数据库及中国知网中文科技数据库,查阅近年种子细胞相关文献,最终保留50篇文献,从分离培养方法、基本特性及在骨组织工程中的应用3方面进行综述。结果与结论:文章分别对各类干细胞(包括:胚胎干细胞、骨髓间充质干细胞、滑膜间充质干细胞、脐带间充质干细胞和脐带血间充质干细胞、外周血来源的多潜能间充质干细胞、脂肪干细胞、子宫内膜基质干细胞、人羊膜基质细胞、牙髓干细胞)的分离方法、生物学特性、标志物等相关实验研究进行了探讨。目前用于分离纯化骨髓间充质干细胞的方法主要有4种:密度梯度离心法、全骨髓贴壁培养法、流式细胞仪分离法和免疫磁珠法。研究证实各类干细胞在特定条件下均有分化成骨的能力。

人羊膜细胞外基质与成纤维细胞体外培养的实验研究

目的 通过人羊膜细胞外基质 (HA ECM)与成纤维细胞体外培养 ,观察成纤维细胞在HA ECM上的生长特性 ,以及胶原原纤维产生情况 ,为使HA ECM成为皮肤组织工程化的载体打下基础。方法 将不同浓度的成纤维细胞种植于HA ECM上进行体外培养 ,通过倒置显微镜、光镜及透射电镜 ,观察细胞在HA ECM的生长、排列 ,以及细胞的粘附和胶原原纤维产生情况。结果 梭形的成纤维细胞在HA ECM上生长良好 ,呈放射状或平行排列 ;组织切片发现HA ECM上有较多梭形细胞附着 ,细胞排列紧密 ;电镜下见成纤维细胞胞膜基底部向HA ECM内伸出数个突起 ,细胞与羊膜基质粘附相当牢固 ,胞外有较多胶原原纤维堆积。结论 种植于HA ECM的成纤维细胞有一个最适宜的细胞浓度 (3 5× 10 6 个 /ml) ;HA ECM具有良好的支架和渗透作用 ,成纤维细胞在其上生长、粘附良好 ,胶原合成、分泌旺盛 ,HA

人羊膜脱细胞基质填充材料的生物相容性及动物有效性研究

目的探讨人羊膜脱细胞基质填充材料的生物相容性及动物有效性。方法通过生物学评价实验对羊膜脱细胞基质填充材料的刺激性、致敏性、细胞毒性等进行检测,并通过大鼠皮内植入实验检测材料的动物有效性(以上市产品双美胶原蛋白作为对照)。结果羊膜脱细胞基质填充材料无致敏性、无刺激性,且细胞毒性不大于1级;大鼠皮内植入有效性实验显示,羊膜脱细胞基质填充材料于植入后20周依然有肉眼可观察到的材料保留。双美胶原植入剂降解完全,肉眼和HE染色均未见材料。且两种材料在体内降解期间的炎症反应和免疫排斥反应均为轻度反应。结论人羊膜脱细胞基质填充材料具有良好的生物相容性,无明显炎症及免疫排斥反应。其在大鼠皮内耐降解性强,保留时间较长,可作为一种安全有效的填充注射产品应用于临床。