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过表达神经调节蛋白1的人羊膜间充质干细胞促进小鼠皮肤创面愈合
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作者 胡涛涛 刘兵 +7 位作者 陈诚 殷宗银 阚道洪 倪杰 叶凌霄 郑祥兵 严敏 邹勇 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第7期1343-1349,共7页
背景:神经调节蛋白1具有促进细胞增殖、分化以及血管生长等特性。人羊膜间充质干细胞是组织工程领域重要的种子细胞,已被证实参与组织修复及再生过程。目的:构建过表达神经调节蛋白1的人羊膜间充质干细胞,探究其增殖、迁移能力以及对创... 背景:神经调节蛋白1具有促进细胞增殖、分化以及血管生长等特性。人羊膜间充质干细胞是组织工程领域重要的种子细胞,已被证实参与组织修复及再生过程。目的:构建过表达神经调节蛋白1的人羊膜间充质干细胞,探究其增殖、迁移能力以及对创面愈合的影响。方法:(1)体外分离培养人羊膜间充质干细胞并对其进行鉴定;(2)构建神经调节蛋白1过表达慢病毒,将人羊膜间充质干细胞分为空载组、神经调节蛋白1组、对照组,分别转染空载慢病毒、过表达神经调节蛋白1慢病毒,对照组不进行转染;(3)EdU实验检测各组细胞增殖能力,Transwell实验检测各组细胞迁移能力;(4)构建C57BL/6小鼠创面损伤模型,随机分成对照组、空载组和神经调节蛋白1组,每组8只,分别在创面局部多点均匀注射1 mL转染空载慢病毒或转染过表达神经调节蛋白1慢病毒的人羊膜间充质干细胞,对照组注射等量的生理盐水;(5)造模后1,7,14 d观察创面愈合情况,苏木精-伊红染色观察创面愈合组织学变化,免疫组化观察创面CD31的表达。结果与结论:(1)成功构建过表达神经调节蛋白1的人羊膜间充质干细胞,细胞内神经调节蛋白1的mRNA、蛋白表达较空载组明显上调(P<0.05);(2)过表达神经调节蛋白1促进了人羊膜间充质干细胞的迁移(P<0.01)和增殖(P<0.05);(3)过表达神经调节蛋白1的人羊膜间充质干细胞促进了小鼠创面愈合(P<0.05)和创面的血管生成(P<0.05)。结果表明,过表达神经调节蛋白1提高了人羊膜间充质干细胞的增殖和迁移能力,以及增强了促进创面愈合和创面血管生成的能力。 展开更多
关键词 人羊膜充质干细胞 神经调节蛋白1 过表达 细胞增殖 细胞迁移 小鼠 创面 愈合
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Has_circ_0008717在羊膜间充质干细胞上清促血管生成中的作用研究
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作者 翟家彬 袁乙钦 +3 位作者 高洋 陆史俊 钱文慧 唐子春 《口腔生物医学》 2024年第2期91-96,共6页
目的:探究has_circ_0008717在人羊膜间充质干细胞上清(hAMSC-CM)促进人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管生成过程中的作用。方法:通过划痕实验、Transwell实验及成管实验检测hAMSC-CM对HUVECs迁移及成管能力的影响,实时荧光定量RT-PCR筛选上... 目的:探究has_circ_0008717在人羊膜间充质干细胞上清(hAMSC-CM)促进人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管生成过程中的作用。方法:通过划痕实验、Transwell实验及成管实验检测hAMSC-CM对HUVECs迁移及成管能力的影响,实时荧光定量RT-PCR筛选上调的circRNA(has_circ_0008717);小干扰RNA(siRNA)下调HUVECs内has_circ_0008717水平后,实时荧光定量RT-PCR检测血管内皮生长因子A(VEGFA)表达水平变化,划痕实验、Transwell实验及成管实验观察其对hAMSC-CM促进HUVECs迁移及成管的影响。结果:hAMSC-CM可明显促进HUVECs迁移及成管能力(P<0.05),HUVECs中has_circ_0008717升高最为明显(P<0.05),而敲低has_circ_0008717可明显抑制hAMSC-CM促进HUVECs迁移、成管和VEGFA的表达(P<0.05)。结论:hAMSC-CM可通过has_circ_0008717增强HUVECs的成管能力。 展开更多
关键词 has_circ_0008717 羊膜充质干细胞 血管生成 血管内皮生长因子A
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人羊膜间充质干细胞对大鼠子宫瘢痕的修复作用 被引量:1
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作者 宋佳 赵峰 +3 位作者 张婷 徐静 孙静莉 陈震宇 《基础医学与临床》 CAS 2024年第7期1002-1007,共6页
目的探究人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)对大鼠子宫瘢痕的修复作用。方法分离培养hAMSCs,选雌性SPF级SD大鼠行子宫壁全层切开术,术中注射hAMSCs,于术后第30天对子宫切开部位进行组织学检查。用ImageJ图像分析软件进行分析比较各组子宫肌层... 目的探究人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)对大鼠子宫瘢痕的修复作用。方法分离培养hAMSCs,选雌性SPF级SD大鼠行子宫壁全层切开术,术中注射hAMSCs,于术后第30天对子宫切开部位进行组织学检查。用ImageJ图像分析软件进行分析比较各组子宫肌层厚度、纤维化面积百分比。免疫组化法分别检测子宫肌层α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)、肿瘤增殖抗原Ki-67(Ki-67)阳性面积百分比。结果与磷酸缓冲盐溶液(PBS)组相比,hAMSCs组子宫肌层明显增厚、纤维化面积减少,α-SMA、Ki-67阳性表达明显增加(P<0.05),而TGF-β1阳性表达明显减少(P<0.05)。。结论人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)可能通过减少瘢痕纤维化的形成、促进子宫瘢痕处平滑肌细胞的增殖等作用机制促进子宫切口组织修复。 展开更多
关键词 人羊膜充质干细胞 剖宫产 子宫瘢痕
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VEGF基因修饰大鼠羊膜间充质干细胞对肾病综合征大鼠血液生化指标的影响
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作者 张莹 张晓宇 +2 位作者 胡海燕 高大维 汪丹 《蚌埠医学院学报》 CAS 2024年第6期706-710,716,共6页
目的:探究血管内皮生长因子(VEGF)基因修饰大鼠羊膜间充质干细胞对肾病综合征大鼠血液生化指标的影响。方法:选取60只雄性大鼠,随机分为4组,各15例,分别为对照组(健康)、模型组(肾病综合征)、治疗1组(羊膜间充质干细胞悬液)、治疗2组(V... 目的:探究血管内皮生长因子(VEGF)基因修饰大鼠羊膜间充质干细胞对肾病综合征大鼠血液生化指标的影响。方法:选取60只雄性大鼠,随机分为4组,各15例,分别为对照组(健康)、模型组(肾病综合征)、治疗1组(羊膜间充质干细胞悬液)、治疗2组(VEGF基因修饰羊膜间充质干细胞悬液)。观察4组肾组织病理形态学及羊膜间充质干细胞存活、分布情况,并比较尿肌酐(SCr)、血尿素(BU)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、24 h尿蛋白定量(24 h UTP)、阻力指数(RI)、舒张期末期流速(EDV)、收缩期峰值流速(PSV)及肾组织VEGF相关表达。结果:对照组大鼠肾组织具有完整清晰结构,模型组大鼠肾组肾小球表现为肿胀,肾小球内存在较多细胞,系膜区明显增宽,系膜细胞及基质中到重度增生;相较于模型组,各治疗组病理改变均较轻,各治疗组病理改变程度均较模型组轻,其中治疗1组病理改变较治疗2组病理改变明显;对照组及模型组大鼠肾组织均未见荧光细胞;治疗1组、治疗2组大鼠肾组织均可见红色荧光的阳性细胞,且仅可见于肾间质及小管内,在肾小球中未见其表达。与治疗1组比较,治疗2组阳性细胞较多;与对照组比较,模型组SCr、BU、24 h UTP、TC、TG、LDL、IL-1β、TNF-α水平均明显升高(P<0.05),治疗1组、治疗2组SCr、BU、24 h UTP、TC、TG、LDL、IL-1β、TNF-α水平均较模型组明显降低,且治疗2组最低(P<0.05);与对照组比较,模型组RI明显升高,PSV、EDV明显下降(P<0.05),治疗1组、治疗2组PSV、EDV均较模型组显著升高,RI水平较模型组显著降低,且治疗2组RI最低,PSV、EDV最高(P<0.05);与对照组比较,模型组肾组织中VEGF蛋白及mRNA表达均明显下降(P<0.05),治疗1组、治疗2组肾组织中VEGF蛋白及mRNA表达均较模型组显著升高,且治疗2组最高(P<0.05)。结论:经VEGF基因修饰的羊膜间充质干细胞移植治疗,可显著改善肾病综合征大鼠血脂水平、微炎症状态、肾功能及肾动脉血流,效果更为显著,可为肾病综合征细胞移植治疗提供有力依据。 展开更多
关键词 肾病综合征 羊膜充质干细胞 血管内皮生长因子 基因修饰 血脂 肾血流 肾功能 微炎症
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羊膜间充质干细胞经PGE2/EP2途径调节类风湿关节炎患者T细胞免疫 被引量:1
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作者 彭淋珅 刘娟 +6 位作者 李林艳 陈辉 王宇 于泓 吴雨曈 田梅 余丽梅 《遵义医科大学学报》 2024年第6期558-568,共11页
目的探讨人羊膜间充质干细胞(AMSCs)调节类风湿性关节炎(RA)患者T细胞免疫的作用与涉及PGE2/EP2途径的机制。方法含RA患者自体血浆的培养基非接触共培养AMSCs与RA患者外周血来源T细胞,实验分为T细胞组、AMSCs组、共培养组和EP2组,流式... 目的探讨人羊膜间充质干细胞(AMSCs)调节类风湿性关节炎(RA)患者T细胞免疫的作用与涉及PGE2/EP2途径的机制。方法含RA患者自体血浆的培养基非接触共培养AMSCs与RA患者外周血来源T细胞,实验分为T细胞组、AMSCs组、共培养组和EP2组,流式细胞术检测T细胞亚群和炎症因子,ELISA法检测PGE2和IL-6,Western blot检测PI3K、Akt及其磷酸化蛋白水平。结果AMSCs降低RA患者T细胞增殖数量和Th17细胞比例,增高Treg细胞比例和Treg/Th17比值,减少共培养上清液IL-17含量,这些效应可被40 nmol/L的EP2受体拮抗剂AH6809所阻断。与AMSC组相比,共培养组细胞培养上清液中IL-1β、IL-6和IL-8的含量明显降低,EP2受体拮抗剂组与共培养组比较无明显差异。AMSCs增加T细胞p-PI3K蛋白水平,降低p-AKT蛋白水平,EP2受体拮抗剂只逆转AMSCs对p-AKT蛋白的下调。结论AMSCs抑制RA患者T细胞增殖、上调Treg/Th17和下调IL-17分泌的作用机制涉及激活PGE2/EP2途径。 展开更多
关键词 羊膜充质干细胞 类风湿性关节炎 T细胞 炎症因子 前列腺素E2受体
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人羊膜间充质干细胞对松木屑烟雾溶液染毒大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞增殖、凋亡及炎症因子影响的研究
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作者 朱秀连 崔培 +6 位作者 詹球 李榕生 蒙凤姬 朱富军 杨福旺 童亚林 辛海明 《解放军医学院学报》 CAS 2024年第5期528-534,共7页
背景烟雾吸入性肺损伤在烧伤患者中较为常见,吸入的有毒气体、颗粒等易引起急性肺损伤(acute lung injury,ALI),目前无特异性治疗方法。目的研究人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)对松木屑烟雾溶液染... 背景烟雾吸入性肺损伤在烧伤患者中较为常见,吸入的有毒气体、颗粒等易引起急性肺损伤(acute lung injury,ALI),目前无特异性治疗方法。目的研究人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)对松木屑烟雾溶液染毒大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar typeⅡepithelial cells,AT-Ⅱ)增殖、凋亡及炎症因子的影响。方法采用酶消化法分离培养hAMSCs和AT-Ⅱ,采用流式细胞术和免疫荧光分别鉴定hAMSCs和AT-Ⅱ;松木屑烟雾溶液染毒AT-Ⅱ复制烟雾诱导的细胞损伤。实验细胞分为对照组(无血清DMEM/F12)、致伤组(0.75‰松木屑烟雾溶液染毒)和治疗组(0.75‰松木屑烟雾溶液染毒,hAMSCs与AT-Ⅱ共培养)。采用CCK-8检测细胞的增殖活性;Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡;Elisa检测炎症因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-6和IL-10的表达。结果与对照组比较,致伤组AT-Ⅱ的活性降低(P<0.01),经hAMSCs治疗后,与致伤组比较,AT-Ⅱ细胞活性增加(P<0.01);致伤组细胞的凋亡率在12 h和24 h均增加(P<0.01),hAMSCs治疗后细胞凋亡率降低(P<0.01);细胞致伤后炎症因子TNF-α、IL-6和IL-10的含量增加(P<0.05),经hAMSCs共培养12 h和24 h后,促炎因子TNF-α和IL-6的表达均下调(P<0.05),IL-10含量增加(P<0.05)。结论hAMSCs可以促进松木屑烟雾溶液诱导的AT-Ⅱ增殖和抑制细胞凋亡,可能与调节炎症因子的表达有关,为探究hAMSCs治疗烟雾引起的急性肺损伤提供理论依据。 展开更多
关键词 人羊膜充质干细胞 肺泡Ⅱ型上皮细胞 增殖 凋亡 炎症因子
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人羊膜间充质干细胞与骨髓间充质干细胞的生物学特性及免疫抑制作用的比较 被引量:22
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作者 洪佳琼 高雅 +3 位作者 宋洁 卓伟彬 孙海涛 平宝红 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期858-864,共7页
目的:比较人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSC)与骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,h BMM SC)的生物学特性及对异体外周血淋巴细胞的免疫抑制功能。方法:通过形态学观察、生... 目的:比较人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSC)与骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,h BMM SC)的生物学特性及对异体外周血淋巴细胞的免疫抑制功能。方法:通过形态学观察、生长曲线绘制、细胞周期检测、细胞表型鉴定、免疫荧光检测波形蛋白(vimentin)等方法对h AMSC和h BMM SC的生物学特性进行鉴定与比较。建立M SC与外周血单个核细胞(PBM C)共培养体系,采用CCK-8法比较两种不同共培养体系中淋巴细胞的增殖水平,采用ELISA法比较两种MSC共培养体系中细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)的分泌水平。结果:h AMSC与h BMMSC细胞形态相似,h AMSC可传至15代以上,h BMMSC传至第6-7代则开始老化、增殖能力明显减弱。两种细胞G2/M期细胞比例差异无统计学意义(P>0.05)。免疫表型鉴定为:h AM SC和h BMM SC细胞表面均表达CD105、CD90和CD73,均不表达CD34、CD45、CD11b、CD19和HLA-DR,h AM SC表达Oct-3/4,而h BMM SC不表达;两者均表达波形蛋白(vimentin)。h AM SC和h BMM SC均对PHA刺激的PBM NC增殖具有抑制作用,且随着h AM SC和h BMM SC细胞比例的增高,抑制能力增强,二者无统计学差异(P>0.05)。ELISA结果提示,h AM SC+PBM C+PHA共培养组上清中IFN-γ水平较h BMM SC+PHA+PBM C组低(P>0.05),两者分别与PBM C+PHA组上清比较,IFN-γ水平明显降低(P<0.05)。结论:h AM SC比h BMM SC具有更强的增殖能力和干细胞特性,二者均有免疫抑制功能,h AMSC与h BMMSC在体外均能抑制PHA刺激的异体淋巴细胞增殖并减少其IFN-γ的分泌。 展开更多
关键词 人羊膜充质干细胞 人骨髓充质干细胞 生物学特性 淋巴细胞 干扰素-Γ 免疫抑制
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羊膜负载骨髓间充质干细胞与表皮细胞对放创性皮肤损伤促愈合研究 被引量:22
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作者 闫国和 粟永萍 +5 位作者 艾国平 屈纪富 冉新泽 程天民 庞学利 肖红 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 2004年第6期497-501,共5页
目的 探讨治疗放创性全厚皮肤缺损创面的方法及效果。 方法 贵州小香猪 8只 ,每只背部脊柱两侧均有放创性全层皮肤缺损圆形创面 (Ф 3.6 7cm)各 3个 ,共 4 8个创面。将经处理的人羊膜 (human amniotic mambrane,HAM)分别负载自体骨... 目的 探讨治疗放创性全厚皮肤缺损创面的方法及效果。 方法 贵州小香猪 8只 ,每只背部脊柱两侧均有放创性全层皮肤缺损圆形创面 (Ф 3.6 7cm)各 3个 ,共 4 8个创面。将经处理的人羊膜 (human amniotic mambrane,HAM)分别负载自体骨髓间充质干细胞 (mesenchymal stem cells,MSCs)和表皮细胞 ,移植到其左侧 2 4个创面作为实验组 (A组 ) ;以单纯无种植细胞的 HAM敷盖其右侧前 16个创面 (B组 ) ;以单纯油纱布敷盖其右侧后 8个创面 (C组 )。B、C作为对照组。观察移植后 1~ 3周内各组创面愈合、肉芽组织生长及上皮化等情况 ,并进行创面组织 HE染色及 v WF免疫组织化学检测。用图像分析法测算各组各时间点创面平均面积 (cm2 ) ,并计算其愈合百分率。 结果  C组于伤后2 2~ 2 3天愈合 ,B组于伤后 19~ 2 1天愈合 ;A组于伤后 15~ 17天愈合 ,较 B、C组分别提前 6~ 7天和 5~ 6天 ,愈合质量好。移植 15~ 17天 ,A组与 B、C组创面平均残留面积及愈合面积百分率比较 ,差异有统计学意义 (P<0 .0 1)。 A组创面的新生上皮已完全覆盖整个创面 ,肉芽组织生长旺盛 ,肉芽组织中 v WF、成纤维细胞和毛细血管含量丰富 ,可见胶原沉积 ;B、C组创面仍见许多炎性细胞浸润 ,肉芽组织中 v WF、成纤维细胞和毛细血管含量少 ,? 展开更多
关键词 骨髓充质干细胞 表皮细胞 人羊膜 放创性皮肤损伤 创面愈合
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人羊膜负载猪骨髓间充质干细胞生长的形态学研究 被引量:16
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作者 闫国和 粟永萍 +2 位作者 艾国平 屈纪富 程天民 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第7期775-777,共3页
目的 建立人羊膜 (HAM)负载培养骨髓间充质干细胞 (MSCs)生长的组织工程方法 ,观察MSCs生长增殖的形态特点。方法 将贵州小香猪的MSCs原代培养 ,传代扩增后 ,以不同密度多次接种于HAM基质面 ,逐日于倒置显微镜下观察MSCs的生长增殖变... 目的 建立人羊膜 (HAM)负载培养骨髓间充质干细胞 (MSCs)生长的组织工程方法 ,观察MSCs生长增殖的形态特点。方法 将贵州小香猪的MSCs原代培养 ,传代扩增后 ,以不同密度多次接种于HAM基质面 ,逐日于倒置显微镜下观察MSCs的生长增殖变化情况 ,并于培养 8、1 8d后进行光镜、电镜观察。结果 接种后 30min内明显见到MSCs在HAM上贴附生长 ,MSCs能以合适的接种密度在羊膜上良好生长。结论 HAM对MSCs有明显的促增殖作用 ,MSCs可以HAM为载体在体外进行培养 。 展开更多
关键词 羊膜 骨髓充质干细胞 形态学 皮肤组织工程学 皮肤损伤 真皮替代物
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无缝线骨髓间充质干细胞羊膜移植预防角膜缘干细胞缺乏的实验研究 被引量:21
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作者 邵毅 余静 +5 位作者 余瑶 高桂平 杨继玲 裴重刚 涂萍 李亨辉 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2013年第11期1011-1015,共5页
目的探讨无缝线骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSC)羊膜移植在兔角膜缘干细胞缺损模型的应用效果。方法选择新西兰白兔36只(36眼,均为右眼),制作兔角膜缘干细胞缺损模型,模型制作后第2天随机分为三组:实验组(A... 目的探讨无缝线骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSC)羊膜移植在兔角膜缘干细胞缺损模型的应用效果。方法选择新西兰白兔36只(36眼,均为右眼),制作兔角膜缘干细胞缺损模型,模型制作后第2天随机分为三组:实验组(A组)行无缝线BMMSC羊膜移植术,阳性对照组(B组)行单纯羊膜移植术,阴性对照组(C组)不做手术处理。分别于术前和术后1 d、2 d、3 d、7 d、14 d、28 d观察眼压、角膜新生血管、角膜透明度、前房反应、泪液分泌及房水中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)浓度情况;术后7 d和28 d每组各处死3只兔子,摘除右眼作病理切片检查,HE染色观察比较炎症细胞和角膜上皮细胞形态并进行细胞计数。结果 A、B两组兔术前眼压、角膜新生血管、角膜透明度、前房反应及泪液分泌情况比较差异均无统计学意义(均为P>0.05),术后眼压、前房反应和并发症在组间各时间点比较差异均无统计学意义(均为P>0.05)。A、B两组兔术后28 d,泪液分泌、角膜新生血管和角膜透明度组间比较差异均有统计学意义(t CNV=6.746,t CT=9.262,t SIT=9.157,均为P<0.05),角膜上皮数差异有统计学意义(t=7.726,P<0.05),炎症细胞数差异也有统计学意义(t=8.126,P<0.05)。A、B两组术后各时间点房水中VEGF浓度差异均无统计学意义(均为P>0.05),与C组比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论无缝线BMMSC羊膜移植能有效预防兔角膜缘干细胞缺乏,且炎症反应小,角膜透明度高。 展开更多
关键词 骨髓充质干细胞 无缝线羊膜移植 角膜缘干细胞缺损 炎症
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角膜基质细胞诱导分化的脂肪间充质干细胞羊膜片移植治疗兔角膜碱烧伤的疗效及其机制 被引量:13
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作者 李颖 杨磊 +3 位作者 宋艳萍 丁琴 陈中山 陈晓 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期500-506,共7页
背景角膜化学烧伤是致盲眼病之一,先前的各种疗法在临床上的应用均受到一定的限制,而脂肪间充质干细胞(ADSCs)移植疗法受到密切关注。目的观察诱导分化的ADSCs羊膜片移植治疗兔角膜碱烧伤的疗效及其机制。方法无菌条件下剪取兔角膜... 背景角膜化学烧伤是致盲眼病之一,先前的各种疗法在临床上的应用均受到一定的限制,而脂肪间充质干细胞(ADSCs)移植疗法受到密切关注。目的观察诱导分化的ADSCs羊膜片移植治疗兔角膜碱烧伤的疗效及其机制。方法无菌条件下剪取兔角膜,用悬浮基质片法分离并培养兔角膜基质细胞(CSCs)。取兔腹股沟脂肪组织,以酶消化法(质量分数0.25%胰蛋白酶)分离及培养兔ADSCs,并用流式细胞术鉴定ADSCs表面抗原的表达。将CSCs与ADSCs共培养,采用免疫荧光技术和逆转录PCR(RT-PCR)鉴定CSCs诱导后ADSCs向角膜基质样细胞分化的表达,分别将诱导或未诱导的ADSCs种植于羊膜上制备成细胞羊膜片。选择60只新西兰白兔,右眼用浸有质量分数1%NaOH的滤纸贴敷于角膜中央50S制备兔角膜碱烧伤模型,按随机数字表法将模型眼随机分为诱导ADSCs+羊膜移植组、未诱导ADSCs+羊膜移植组、单纯羊膜移植组及模型组。分别于术后1周、2周和1个月在裂隙灯显微镜下观察各组兔模型眼角膜的混浊程度和新生血管形成情况,并对角膜炎症进行评分,采用ELISA法检测术后1个月角膜组织匀浆中CD45、叮干扰素(IFN-γ)、白细胞介素.10(IL-10)蛋白及房水中血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的质量浓度。结果从脂肪组织分离培养的ADSCs表面抗原CDl05、CD29、CD44的阳性表达率分别为90.23%、88.56%、98.88%;分离培养的CSCs波形蛋白呈阳性表达;CSCs与ADSCs共培养后多数细胞双标记染色阳性。苏木精一伊红染色显示,ADSCs种植于羊膜后生长良好。术后1个月,模型组角膜混浊呈瓷白色,新生血管面积最大,而诱导ADSCs+羊膜移植组角膜透明,新生血管最少。术后1个月,诱导ADSCs+羊膜移植组、未诱导ADSCs+羊膜移植组、单纯羊膜移植组和模型组兔角膜混浊程度评分分别为1.65±0.18、2.05±0.17、2.68±0.25和2.904-0.18,新生血管面积分别为(10.59±1.78)、(22.58±1.63)、(37.98±1.90)和(45.37±1.65)mm^2,术后1周、2周及1个月4个组间角膜混浊程度评分和角膜新生血管(CNV)面积的差异均有统计学意义(F=280.826、330.172、465.707,均P=0.000;F=60.020、670.811、1510.231,均P=0.000),其中诱导ADSCs+羊膜移植组角膜炎症评分睨显低于其他3个组,CNV面积小于其他3个组,差异均有统计学意义(均P〈0.01)。术后1个月,4个组间角膜组织匀浆中CD45、IL-10、IFN-γ质量浓度的差异均有统计学意义(F=916.545、1739.358、462.134,均P=0.000),其中与未诱导ADSCs+羊膜移植组、单纯羊膜移植组和模型组比较,诱导ADSCs+羊膜移植组CD45、IFN-γ质量浓度明显降低,而IL-10质量浓度明显升高,差异均有统计学意义(均P〈0.01)。4个组兔房水中VEGF质量浓度的总体比较差异有统计学意义(F=129.126,P=0.000),其中诱导ADSCs+羊膜移植组兔房水中VEGF质量浓度明显低于未诱导ADSCs+羊膜移植组、单纯羊膜移植组和模型组,差异均有统计学意义(均P〈0.01)。结论CSCs诱导的ADSCs羊膜片移植法治疗兔角膜碱烧伤有较好的疗效,其作用机制可能是ADSCs在CECs诱导下分化为具有角膜上皮细胞特征的细胞,同时羊膜可减轻免疫炎症反应,抑制新生血管形成。 展开更多
关键词 脂肪充质干细胞 移植 羊膜 眼碱烧伤 分化 角膜基质细胞
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人羊膜间充质干细胞在大鼠受损肝组织中分化为肝细胞 被引量:9
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作者 宫黎明 方宁 +5 位作者 陈代雄 万卫红 章涛 刘祖林 余丽梅 赵春华 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2011年第36期6709-6713,共5页
背景:羊膜间充质干细胞在体外适当的诱导条件下可分化为肝细胞样细胞,而在受损肝脏原位是否可分化为肝细胞值得探讨。目的:观察人羊膜间充质干细胞在大鼠肝损伤原位植活及分化情况。方法:采用胰酶-胶原酶二酶消化法从羊膜组织中分离人... 背景:羊膜间充质干细胞在体外适当的诱导条件下可分化为肝细胞样细胞,而在受损肝脏原位是否可分化为肝细胞值得探讨。目的:观察人羊膜间充质干细胞在大鼠肝损伤原位植活及分化情况。方法:采用胰酶-胶原酶二酶消化法从羊膜组织中分离人羊膜间充质干细胞。采用腹腔注射D-氨基半乳糖建立大鼠肝损伤模型,随机分为2组,人羊膜间充质干细胞移植组造模后注射L-DMEM悬浮的人羊膜间充质干细胞悬液,对照组注射等量L-DMEM。结果与结论:①FCM分析结果显示,所分离的人羊膜间充质干细胞表达CD29、CD44和CD166;免疫荧光染色显示人羊膜间充质干细胞表达波形蛋白,不表达CK19。②与对照组比较,人羊膜间充质干细胞移植后肝病理无明显差异,均呈急性肝坏死病理改变。③免疫荧光双染色结果显示,人羊膜间充质干细胞移植后1周主要定植于肝小叶且表达CK19,至2周表达CK18,至3周表达Alb。结果表明,人羊膜间充质干细胞在大鼠受损肝组织中能被植活,且可分化为肝细胞,提示人羊膜间充质干细胞移植在临床肝病的治疗方面可能具有潜在应用价值。 展开更多
关键词 人羊膜充质干细胞 移植 分化 细胞 肝损伤
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人羊膜间充质干细胞的分离及分化潜能的研究 被引量:13
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作者 朴正福 丁淑芹 +4 位作者 张海燕 小林护 加茂功 樱川宣男 李宁 《生物医学工程与临床》 CAS 2010年第1期15-19,F0002,共6页
目的建立人羊膜间充质干细胞(hAMC)的分离培养方法及探讨其在再生医学中的潜在应用性。方法取38~40周孕妇剖宫产术后人羊膜,用多种酶消化法制备hAMC悬浮液,并用免疫细胞化学方法探讨其多分化潜能如hAMC的神经及肝脏发生相关蛋白的表达... 目的建立人羊膜间充质干细胞(hAMC)的分离培养方法及探讨其在再生医学中的潜在应用性。方法取38~40周孕妇剖宫产术后人羊膜,用多种酶消化法制备hAMC悬浮液,并用免疫细胞化学方法探讨其多分化潜能如hAMC的神经及肝脏发生相关蛋白的表达;荧光激活细胞仪分离法(FACS)检测主要组织相容性复合体(MHC)家族分子,同时探讨其致瘤性。结果从人羊膜中分离出高纯度hAMC,并摸索出其最适合的培养条件;细胞成细长梭形或星形,胞质丰富,细胞核呈圆形,1~3个核仁,易贴壁,生长繁殖快,在体外可连续培养20代以上。免疫细胞化学结果显示:神经发生相关蛋白(Musashi-1、Nestin、Vimentin)阳性及肝脏发生相关蛋白[Flt-1、Integrinβ1、HNF(3β、4α、1α)、C/EBPα、Albumin、AAT]等阳性;人MHC ClassⅡ阴性,人MHC ClassⅠ弱阳性;癌化实验显示hAMC无致瘤性。结论人羊膜中分离提纯的hAMC中至少包含向神经及肝脏细胞分化的干细胞样的细胞群,具有低免疫原性、无致瘤性等特点。这些结果支持hAMC作为新的、安全的细胞来源可用于再生医学研究。 展开更多
关键词 羊膜 羊膜充质干细胞 生物学特性 再生医学
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不同消化分离方法分离人羊膜间充质干细胞效果比较 被引量:10
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作者 肖盼 陈剑 +4 位作者 王彦平 吴静 郭娴吟 杨筱曦 刘小勇 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期1033-1037,共5页
目的:比较不同消化分离方法提取人羊膜间充质干细胞(HAMSCs)的分离效果,以供选择一种更有效的分离方法。方法:将新鲜羊膜组织分成4片6cm×6cm大小的组织块,采用4种不同方法进行消化分离:第1组:先刮除+胶原酶Ⅱ组;第2组:先刮除+胶原... 目的:比较不同消化分离方法提取人羊膜间充质干细胞(HAMSCs)的分离效果,以供选择一种更有效的分离方法。方法:将新鲜羊膜组织分成4片6cm×6cm大小的组织块,采用4种不同方法进行消化分离:第1组:先刮除+胶原酶Ⅱ组;第2组:先刮除+胶原酶Ⅳ组;第3组:先剪碎+胶原酶Ⅱ组;第4组:先剪碎+胶原酶Ⅳ组。对这4组原代培养HAMSCs进行存活数、形态学观察比较,第3代HAMSCs抗原检测及成脂成骨诱导分化实验。结果:第1组和第2组的HAMSCs存活数高于第3组和第4组(P<0.05)。第1组和第2组的HAMSCs成份较第3组和第4组纯净,后2组夹杂着一些团状的人羊膜上皮细胞(HAECs)。抗原结果显示CD29、CD44、CD73、CD90、CD105表达阳性,CD31、CD34、CD45、HLA-DR表达阴性,Vimentin、SSEA-3、SSEA-4、OCT-4、telom-erase结果阳性。成脂成骨诱导分化实验成功。结论:通过先将人羊膜用胰蛋白酶+EDTA消化液消化后,再将HAECs刮除干净,然后剪碎再用胶原酶消化的改进方法对HAMSCs保护较好,较易提取,获取细胞量和纯度均较传统方法高。胶原酶Ⅱ和胶原酶Ⅳ2种消化酶对HAMSCs的提取影响不大。 展开更多
关键词 羊膜 充质干细胞 细胞分离
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人羊膜间充质干细胞与骨髓间充质干细胞对外周血淋巴细胞的免疫调节作用比较 被引量:6
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作者 宋洁 高雅 +4 位作者 卓伟彬 杨春燕 许影 平宝红 孙海涛 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期780-785,共6页
目的比较人羊膜间充质干细胞(h AMSC)与骨髓间充质干细胞(h BMSC)对异体外周血淋巴细胞的免疫调节功能,为临床应用h AMSC治疗移植物抗宿主病提供实验依据。方法通过酶消化法和Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分别分离出人羊膜间充质干细... 目的比较人羊膜间充质干细胞(h AMSC)与骨髓间充质干细胞(h BMSC)对异体外周血淋巴细胞的免疫调节功能,为临床应用h AMSC治疗移植物抗宿主病提供实验依据。方法通过酶消化法和Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分别分离出人羊膜间充质干细胞和骨髓间充质干细胞,体外扩增培养间充质干细胞(MSC),获取第4代细胞,建立MSC与经植物血凝素(PHA)刺激的异体人外周血单个核细胞(PBMC)共培养体系,采用流式细胞术分析比较两种不同共培养体系中T淋巴细胞亚群的变化情况,采用ELISA法比较两种MSC共培养体系中细胞因子白介素2(IL-2)及白介素10(IL-10)的分泌水平。结果 (1)h AMSC+PBMC+PHA、h BMSC+PBMC+PHA共培养组Treg、Th2、Tc2细胞亚群的比例均较PBMC+PHA组明显上升(P<0.05),Th1、Tc1细胞亚群的比例均较PBMC+PHA组明显下降(P<0.05),且h AMSC+PBMC+PHA、h BMSC+PBMC+PHA共培养组T细胞亚群的变化差异无统计学意义(P>0.05);(2)ELISA结果提示,与PBMC+PHA组相比,h AMSC+PBMC+PHA、h BMSC+PHA+PBMC共培养组上清液中IL-2的水平均明显下降(P<0.05),h AMSC+PBMC+PHA、h BMSC+PHA+PBMC共培养组上清液中IL-10水平均明显上升(P<0.05),h AMSC+PBMC+PHA、h BMSC+PBMC+PHA共培养组上清液中IL-2、IL-10含量的变化无统计学差异(P>0.05)。结论 h AMSC、h BMSC对外周血淋巴细胞具有相似的免疫调节功能,提示h AMSC可能为移植物抗宿主病的预防和治疗提供一种新的选择。 展开更多
关键词 人羊膜充质干细胞 人骨髓充质干细胞 淋巴细胞 白介素2 白介素10 免疫调节
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体外定向诱导人羊膜间充质干细胞向骨、软骨及脂肪细胞的分化 被引量:8
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作者 李豫皖 朱喜忠 +5 位作者 金瑛 王胜民 杨继滨 熊华章 邹刚 刘毅 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2017年第1期122-127,共6页
背景:人羊膜间充质干细胞属于成体干细胞,在体外不同条件下诱导分化为骨、软骨及其他结缔组织,较其他类型间充质干细胞,因其来源广泛,分离无创伤,较低的免疫原性、生长周期短等特点,是组织工程种子细胞的重要来源。目的:探讨人羊膜间充... 背景:人羊膜间充质干细胞属于成体干细胞,在体外不同条件下诱导分化为骨、软骨及其他结缔组织,较其他类型间充质干细胞,因其来源广泛,分离无创伤,较低的免疫原性、生长周期短等特点,是组织工程种子细胞的重要来源。目的:探讨人羊膜间充质干细胞是否具有间充质干细胞特性及诱导成骨、软骨及脂肪细胞诱导分化的能力。方法:取足月产胎盘羊膜组织,酶消化法分离人羊膜间充质干细胞,取第3代细胞分别加入成骨、成软骨及成脂诱导液的培养基进行诱导。结果与结论:(1)茜素红染色显示,成骨诱导后细胞存在多个矿化结节,细胞中碱性磷酸酶活性明显增加;(2)甲苯胺蓝染色显示,成软骨诱导后细胞基质中分泌大量的糖胺聚糖;(3)油红O染色显示,成脂诱导后,细胞浆内可见脂滴;(4)实时荧光PCR结果显示,成骨、成软骨及成脂诱导21 d后,相关基因表达较7 d时明显增高;(5)结果人羊膜间充质干细胞具有向成骨细胞,软骨细胞及脂肪细胞的潜能,可选作为组织工程学的种子细胞。 展开更多
关键词 干细胞 分化 人羊膜充质干细胞 成骨细胞 成软骨细胞 成脂细胞 体外诱导
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人羊膜间充质干细胞对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的疗效及免疫调节作用 被引量:9
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作者 方宁 李丹 +3 位作者 余丽梅 章涛 赵春华 陈代雄 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期6-12,共7页
目的探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型的治疗效应和免疫调节作用。方法分离、培养hAMSCs,流式细胞术(FCM)检测其免疫表型;用豚鼠脊髓匀浆+完全弗氏佐剂+百日咳毒素复制大鼠EAE模型;模型动物随机... 目的探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型的治疗效应和免疫调节作用。方法分离、培养hAMSCs,流式细胞术(FCM)检测其免疫表型;用豚鼠脊髓匀浆+完全弗氏佐剂+百日咳毒素复制大鼠EAE模型;模型动物随机分为正常对照组、模型组、培养基组、hAMSCs治疗组和泼尼松治疗组,每组6只。hAMSCs治疗组经双侧侧脑室移植5×105个hAMSCs;采用Kono评分法动态观察行为学变化;采用HE染色、免疫荧光染色观察脑和脊髓病理改变以及hAMSCs在脑和脊髓内的分布;采用FCM检测外周血淋巴细胞亚群,采用流式微球阵列法(CBA)检测血浆细胞因子的含量。结果 hAMSCs治疗后EAE大鼠行为学评分逐渐减低(P<0.01),脑和脊髓炎性细胞浸润减轻。hAMSCs移植第3周,大鼠脑和脊髓组织可见较多人细胞核抗原阳性细胞即hAMSCs存活;与模型组和培养基组相比,hAMSCs治疗组外周血Treg、Th2、Tc1、Tc2淋巴细胞百分比明显升高(P<0.01或P<0.05),而Th17细胞显著减少(P<0.01);血浆Th2型细胞因子IL-4和IL-10含量升高(P<0.05或P<0.01),而Th1型细胞因子IL-2和IFN-γ含量降低(P<0.05或P<0.01)。结论 hAMSCs能改善大鼠EAE的神经功能,减轻神经组织的免疫损伤,其机制可能主要与上调FoxP3+Treg细胞和下调Th17细胞有关。 展开更多
关键词 人羊膜充质干细胞 实验性自身免疫性脑脊髓炎 免疫调节 大鼠
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体外羊膜间充质干细胞分离培养及向神经元样细胞的分化 被引量:7
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作者 金钧 黄坚 +1 位作者 王俊 付建红 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第32期5939-5943,共5页
背景:胎盘组织作为寻找人类间充质干细胞的新来源,已成为备受人们关注的研究热点。从胎盘组织中羊膜层分离、培养细胞,因其来源广泛、不受伦理限制等优越性而具有广阔的应用前景。目的:观察人羊膜间充质干细胞体外分离培养的方法,及向... 背景:胎盘组织作为寻找人类间充质干细胞的新来源,已成为备受人们关注的研究热点。从胎盘组织中羊膜层分离、培养细胞,因其来源广泛、不受伦理限制等优越性而具有广阔的应用前景。目的:观察人羊膜间充质干细胞体外分离培养的方法,及向神经元样细胞分化的能力。方法:用酶消化法从羊膜中分离和培养间充质干细胞,并通过形态的均一性及流式细胞术检测其表面标志以鉴定纯度。应用DMEM-LG+20g/LDMSO+100μmol/LBHA+10μg/L碱性成纤维细胞生长因子诱导分化,通过免疫荧光染色鉴定诱导后的细胞。结果与结论:可从羊膜组织成功分离培养出间充质干细胞,细胞贴壁生长,在体外短期内可以稳定增殖和传代。具有与骨髓间充质干细胞相似的表面标志,体外可以诱导分化为神经元样细胞,胶质纤维酸性蛋白与神经元特异性烯醇化酶免疫荧光染色均为阳性。提示羊膜间充质干细胞可以在体外分离培养并诱导分化为神经元样细胞,羊膜组织可以作为干细胞研究以及神经组织疾病细胞治疗的一个全新的细胞来源。 展开更多
关键词 羊膜 充质干细胞 细胞培养 诱导分化 神经元
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羊膜促进间充质干细胞表皮细胞生长的形态学特征 被引量:11
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作者 闫国和 粟永萍 +5 位作者 艾国平 林远 程天民 肖桃元 可金星 屈纪富 《中国临床康复》 CSCD 2002年第6期814-815,共2页
目的将人羊膜(humanamnioticmembrane,HAM)负载培养猪骨髓间充质干细胞(MSCs)重建皮肤真皮替代物,负载培养猪表皮细胞重建皮肤表皮替代物,并观察猪MSCs、表皮细胞在HAM上生长增殖的形态特点。方法将贵州小香猪的MSCs、表皮细胞原代培养... 目的将人羊膜(humanamnioticmembrane,HAM)负载培养猪骨髓间充质干细胞(MSCs)重建皮肤真皮替代物,负载培养猪表皮细胞重建皮肤表皮替代物,并观察猪MSCs、表皮细胞在HAM上生长增殖的形态特点。方法将贵州小香猪的MSCs、表皮细胞原代培养,传代扩增后,分别以不同的密度接种于HAM的基质面,逐日于倒置显微镜下观察MSCs、表皮细胞的生长增殖变化情况,并于培养3~18d进行光镜、电镜观察,检测MSCs、表皮细胞在HAM上生长的形态特点。结果接种后30min内就明显见到MSCs、表皮细胞在HAM上贴附,24h内大部分贴附生长,3d形成单层完全覆盖HAM,超微结构形态良好。结论HAM是MSCs、表皮细胞在体外培养的良好载体,对MSCs、表皮细胞有明显的促增殖作用。 展开更多
关键词 人羊膜 骨髓充质干细胞 表皮细胞 形态特点 皮肤修复 皮肤真皮替代物
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人羊膜间充质干细胞静脉移植治疗阿尔茨海默病APP^+转基因鼠的有效性及安全性评估 被引量:7
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作者 郭亚男 关方霞 +7 位作者 李国栋 李祥生 杨波 杜英 胡祥 胡炜 焦红亮 李远 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1811-1818,共8页
背景:目前阿尔茨海默病的病因不明,课题组前期实验发现人羊膜间充质干细胞静脉移植可促进阿尔茨海默病APP+转基因鼠的学习、记忆能力改善。目的:进一步评估人羊膜间充质干细胞静脉移植治疗阿尔茨海默病APP+转基因鼠的有效性和安全性。... 背景:目前阿尔茨海默病的病因不明,课题组前期实验发现人羊膜间充质干细胞静脉移植可促进阿尔茨海默病APP+转基因鼠的学习、记忆能力改善。目的:进一步评估人羊膜间充质干细胞静脉移植治疗阿尔茨海默病APP+转基因鼠的有效性和安全性。设计、时间及地点:细胞学体内实验与动物对照观察,于2008-05/12在郑州大学生物工程系、郑州大学基础医学院及河南省中医药研究院完成。材料:清洁级C57BL/6系APP+转基因胎鼠10只,合笼繁育后得到子代小鼠200只,按其繁殖情况和PCR检测结果,取29只11月龄小鼠,分为APP+对照组10只、APP+细胞移植组10只、APP-正常组9只。羊膜标本由郑州大学第一附属医院产科提供。方法:体外分离培养人羊膜间充质干细胞,传至第3代后调整浓度为1×109L-1的单细胞悬液。APP+细胞移植组每只小鼠尾静脉注射人羊膜间充质干细胞悬液0.5mL,APP+对照组注射等量生理盐水,APP-正常组不作任何处理。主要观察指标:采用Morris水迷宫测定移植前后小鼠学习和记忆功能。移植当天开始称小鼠体质量,持续3周。移植后解剖小鼠,收集全血并分离血清,进行12项肿瘤标记物检测及心、肝、肾功能的血液生化指标检测,对人羊膜间充质干细胞移植的安全性作综合评价。结果:移植后15d各组逃避潜伏期比较,APP-正常组<APP+细胞移植组<APP+对照组,APP+细胞移植组小鼠逃避潜伏期明显短于APP+对照组(P<0.05);与移植前比较,移植后15d各组小鼠穿越平台象限的次数均有所增加,且APP+细胞移植组小鼠在平台象限停留时间明显延长。移植后3周内,3组小鼠体质量增长趋势差异无显著性意义(P>0.05),12项肿瘤标记物、9项血清肝肾功能生化指标及10项血液学指标的表达均无明显差异(P>0.05)。结论:人羊膜间充质干细胞经尾静脉移植后,可明显改善阿尔茨海默病小鼠的学习、记忆能力,未见致死致瘤现象发生,心、肝、肾功能未受影响,安全可行。 展开更多
关键词 人羊膜充质干细胞 移植 阿尔茨海默病 APP转基因鼠 安全性
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