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培养间充质干细胞的上清液对食管癌细胞ECA109生物学行为的影响
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作者 许彭 张亚杰 +1 位作者 马莉莉 李秀梅 《现代肿瘤医学》 CAS 2024年第11期1967-1972,共6页
目的:探讨脐带间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)培养的上清液对食管癌细胞ECA109增殖、迁移、凋亡等生物学行为的影响。方法:培养人脐带MSCs,提取过滤脐带MSCs培养的上清液与食管癌细胞ECA109共培养,通过细胞划痕实验和CCK-8... 目的:探讨脐带间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)培养的上清液对食管癌细胞ECA109增殖、迁移、凋亡等生物学行为的影响。方法:培养人脐带MSCs,提取过滤脐带MSCs培养的上清液与食管癌细胞ECA109共培养,通过细胞划痕实验和CCK-8实验检测ECA109细胞迁移、增殖能力;采用流式细胞测定技术检测ECA109细胞凋亡情况;利用RT-PCR和Western blot检测相关通路中ERK、AKT、PI3K的表达水平。结果:划痕实验48 h,MSCs上清液共培养组ECA109细胞划痕面积为(17.157±1.425)μm^(2),明显高于对照组划痕面积(14.500±0.563)μm^(2)(P=0.04);CCK-8结果显示,48 h后MSCs上清液培养组ECA109细胞OD值(1.069±0.254)显著低于对照组(1.718±0.520)(P=0.037);流式细胞术检测结果显示MSCs上清液共培养组细胞早期凋亡率(12.36±2.47)%高于对照组(7.23±0.86)%;G2+S期MSCs上清液共培养组细胞比例(39.82±1.01)%相比对照组(55.17±9.60)%显著减少。RT-PCR结果显示,MSCs上清液共培养组AKT mRNA表达量(0.35±0.01)明显低于对照组(1.00±0.05)(P=0.004);Western blot可以看出,MSCs上清液共培养组ERK、AKT蛋白表达均低于对照组,差异有统计学意义。结论:MSCs上清液抑制食管癌细胞ECA109的增殖和迁移能力,促进ECA109细胞的凋亡,且ERK和AKT的蛋白质表达水平均下降。 展开更多
关键词 充质干细胞上清 食管癌 增殖迁移能力
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人羊膜间充质干细胞培养上清液对痤疮丙酸杆菌体外抑菌实验初探 被引量:1
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作者 犹忠萍 曾霓 +3 位作者 张红 曾文心 代敏 曹碧兰 《中国皮肤性病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1124-1128,共5页
目的初步探究人羊膜间充质干细胞培养上清液在体外是否具有抑制痤疮丙酸杆菌生长的作用。方法采用机械分离联合二酶消化法分离获取人羊膜间充质干细胞并进行传代培养,同时收集原代至5代细胞培养上清液体外作用于痤疮丙酸杆菌。通过抹药... 目的初步探究人羊膜间充质干细胞培养上清液在体外是否具有抑制痤疮丙酸杆菌生长的作用。方法采用机械分离联合二酶消化法分离获取人羊膜间充质干细胞并进行传代培养,同时收集原代至5代细胞培养上清液体外作用于痤疮丙酸杆菌。通过抹药法观察细菌生长情况、打孔法测量抑菌圈大小,根据美国临床和实验室标准协会抗菌药物体外药敏实验进行判断。结果原代至2代培养上清液直接抹药组有细菌生长,且无抑菌圈产生,但3~5代上清液抹药组无细菌生长,且抑菌圈大小均值分别为29. 50mm、30. 65mm、30. 00mm,组间比较差异无统计学意义(P> 0. 05);克痤隐酮组抑菌圈均值为54. 58mm,3~5代上清液与克痤隐酮打孔组相比差异有显著统计学意义(P <0. 001)。结论人羊膜间充质干细胞培养上清液从第3代开始具有抑制痤疮丙酸杆菌生长的作用,抑菌效果稳定,但抑菌能力弱于克痤隐酮。 展开更多
关键词 痤疮 痤疮丙酸杆菌 人羊膜间充质干细胞培养上清液 药敏实验
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骨髓间充质干细胞培养上清液抑制异体淋巴细胞增殖 被引量:4
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作者 吴涛 白海 +2 位作者 王存邦 路继红 欧剑锋 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期469-469,共1页
关键词 骨髓充质干细胞 细胞培养上 淋巴细胞增殖 异体 免疫调节作用 MSCs 多向分化潜能 临床应用前景 免疫调控机制 cells
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骨髓间充质干细胞培养上清液治疗支气管哮喘及对肺部炎症的影响 被引量:2
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作者 雷琰 刘长卿 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2015年第36期5764-5768,共5页
背景:医学界普遍认为支气管哮喘是一种与Th2相关的免疫反应疾病,目前尚缺乏理想的治疗方法。骨髓间充质干细胞作为一种成体干细胞,不仅具有增殖和多向分化能力,还具有低免疫原性和免疫调节能力。目的:探讨骨髓间充质干细胞培养上清液对... 背景:医学界普遍认为支气管哮喘是一种与Th2相关的免疫反应疾病,目前尚缺乏理想的治疗方法。骨髓间充质干细胞作为一种成体干细胞,不仅具有增殖和多向分化能力,还具有低免疫原性和免疫调节能力。目的:探讨骨髓间充质干细胞培养上清液对支气管哮喘小鼠肺部炎症的影响。方法:将20只实验小鼠随机分为对照组和实验组,每组10只,在第0天及第14天小鼠腹腔注射卵清蛋白溶液致敏,并在第24-26天雾化吸入卵清蛋白溶液激发。实验组从第24天开始,在每次激发前2 h,腹腔注射制备好的骨髓间充质干细胞培养上清液2 m L,对照组腹腔注射生理盐水。末次激发后麻醉致小鼠安乐死亡,采取血清、肺泡灌洗液及肺脏组织进行研究。结果与结论:1对照组小鼠肺组织结构发生异常,黏膜下层和肌层内能够看见大量嗜酸性粒细胞及单核细胞浸润,经骨髓间充质干细胞培养液治疗后,实验组小鼠肺部炎症较轻。2实验组白细胞总数、嗜酸性粒细胞数、嗜酸性粒细胞百分比显著低于对照组(P<0.01)。3实验组肺泡灌洗液以及血清中白细胞介素17水平显著低于对照组(P<0.05);肺泡灌洗液以及血清中白细胞介素4水平与对照组比较差异无显著性意义(P>0.05)。上述结果提示支气管哮喘小鼠腹腔注入骨髓间充质干细胞培养上清液能够减轻肺部炎性病理反应严重程度,降低肺泡灌洗液以及血清中相关的炎症指标水平。 展开更多
关键词 干细胞 骨髓干细胞 骨髓充质干细胞培养上 支气管哮喘 肺部炎症 嗜酸性粒细胞
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人羊膜间充质干细胞无血清培养方法的建立 被引量:1
5
作者 刘晓玉 施萍 +1 位作者 潘伯臣 庞希宁 《基础医学与临床》 2021年第8期1181-1185,共5页
目的建立一种人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)的无血清培养方法。方法用胰蛋白酶-胶原蛋白酶两步消化法分离人羊膜间充质干细胞,用含1×ITS、0.5%人血清白蛋白、10 ng/mL bFGF、100μg/mL L-ascorbic acid、100 U/mL青链霉素及2.5μg/m... 目的建立一种人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)的无血清培养方法。方法用胰蛋白酶-胶原蛋白酶两步消化法分离人羊膜间充质干细胞,用含1×ITS、0.5%人血清白蛋白、10 ng/mL bFGF、100μg/mL L-ascorbic acid、100 U/mL青链霉素及2.5μg/mL两性霉素B的DMEM/F12无血清培养基进行培养,倒置相差显微镜下观察细胞形态及增殖状态,免疫荧光技术检测细胞表型,WST法测定细胞增殖曲线,细胞划痕伤口闭合试验检测无血清培养的细胞迁移能力,实时定量PCR检测生长因子VEGF、KGF、PDGF和IGF-1的表达。结果无血清培养并纯化扩增的人羊膜间充质干细胞呈梭形,表达细胞表面标志物CD73和CD90,不表达CD45和CD34。细胞增殖曲线为S形,对数增殖期的平均倍增时间为72 h,与胎牛血清培养的人羊膜间充质干细胞相比,迁移能力增强,生长因子VEGF、KGF、PDGF和IGF-1表达上调(P<0.05)。结论建立了一种人羊膜间充质干细胞的无血清培养方法,为临床应用提供实验依据。 展开更多
关键词 人羊膜充质干细胞(hAMSCs) 无血培养 增殖 迁移
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视网膜干细胞培养上清液诱导骨髓间充质干细胞的分化
6
作者 汪卓 王丹 +1 位作者 郝冬海 李博 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第40期7021-7027,共7页
背景:骨髓间充质干细胞向神经细胞诱导分化可为神经系统受损伤后的修复和再生带来了新的希望。目的:探讨骨髓间充质干细胞在视网膜干细胞培养上清液诱导条件下向神经元细胞分化。方法:采用全骨髓培养方法,用视网膜干细胞培养上清液诱导... 背景:骨髓间充质干细胞向神经细胞诱导分化可为神经系统受损伤后的修复和再生带来了新的希望。目的:探讨骨髓间充质干细胞在视网膜干细胞培养上清液诱导条件下向神经元细胞分化。方法:采用全骨髓培养方法,用视网膜干细胞培养上清液诱导骨髓间充质干细胞,通过免疫荧光染色鉴定其分化的结果。结果与结论:诱导72 h,骨髓间充质干细胞表达神经干细胞的特异性抗体巢蛋白和神经元中的标志性微管相关蛋白微管相关蛋白2。视网膜干细胞培养上清液能够促进骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化,提示视网膜干细胞可能分泌神经生长因子。 展开更多
关键词 干细胞 骨髓干细胞 骨髓充质干细胞 诱导分化 神经元样细胞 视网膜干细培养上 巢蛋白 微管相关蛋白2 干细胞图片文章
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体外羊膜间充质干细胞分离培养及向神经元样细胞的分化 被引量:7
7
作者 金钧 黄坚 +1 位作者 王俊 付建红 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第32期5939-5943,共5页
背景:胎盘组织作为寻找人类间充质干细胞的新来源,已成为备受人们关注的研究热点。从胎盘组织中羊膜层分离、培养细胞,因其来源广泛、不受伦理限制等优越性而具有广阔的应用前景。目的:观察人羊膜间充质干细胞体外分离培养的方法,及向... 背景:胎盘组织作为寻找人类间充质干细胞的新来源,已成为备受人们关注的研究热点。从胎盘组织中羊膜层分离、培养细胞,因其来源广泛、不受伦理限制等优越性而具有广阔的应用前景。目的:观察人羊膜间充质干细胞体外分离培养的方法,及向神经元样细胞分化的能力。方法:用酶消化法从羊膜中分离和培养间充质干细胞,并通过形态的均一性及流式细胞术检测其表面标志以鉴定纯度。应用DMEM-LG+20g/LDMSO+100μmol/LBHA+10μg/L碱性成纤维细胞生长因子诱导分化,通过免疫荧光染色鉴定诱导后的细胞。结果与结论:可从羊膜组织成功分离培养出间充质干细胞,细胞贴壁生长,在体外短期内可以稳定增殖和传代。具有与骨髓间充质干细胞相似的表面标志,体外可以诱导分化为神经元样细胞,胶质纤维酸性蛋白与神经元特异性烯醇化酶免疫荧光染色均为阳性。提示羊膜间充质干细胞可以在体外分离培养并诱导分化为神经元样细胞,羊膜组织可以作为干细胞研究以及神经组织疾病细胞治疗的一个全新的细胞来源。 展开更多
关键词 羊膜 充质干细胞 细胞培养 诱导分化 神经元
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不同冻存液对人羊膜间充质干细胞-80℃冻存与复苏效果的影响 被引量:5
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作者 李远 杨波 +6 位作者 关方霞 宋来君 杜英 赵中甫 常克亮 王卿峰 胡祥 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2008年第2期278-281,共4页
目的:观察不同冻存液对人羊膜间充质干细胞冻存复苏后的存活率及再培养情况的影响,并探索简单有效的冻存与复苏方法。方法:将含有血清培养基短期体外培养的人羊膜间充质干细胞分为4组,分别加入不同冻存液(体积分数):A组10%二甲基亚砜+40... 目的:观察不同冻存液对人羊膜间充质干细胞冻存复苏后的存活率及再培养情况的影响,并探索简单有效的冻存与复苏方法。方法:将含有血清培养基短期体外培养的人羊膜间充质干细胞分为4组,分别加入不同冻存液(体积分数):A组10%二甲基亚砜+40%胎牛血清+50%DMEM/F12,B组10%二甲基亚砜+90%胎牛血清,C组5%二甲基亚砜+4.5%羟乙基淀粉+20%胎牛血清+70.5%DMEM/F12,D组10%胎牛血清+90%DMEM/F12。以相同方法冻存并复苏细胞,比较4组细胞回收率及再培养情况。结果:A、C2组细胞复苏后回收率高于另外2组(P均<0.05),且于复苏后再培养24h内出现较多贴壁细胞。结论:以5%二甲基亚砜+4.5%羟乙基淀粉+20%胎牛血清+70.5%DMEM/F12作冻存液冻存羊膜间充质干细胞效果好。 展开更多
关键词 羊膜充质干细胞 冻存 复苏 冻存
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骨髓间质干细胞培养液上清对肝星状细胞增殖及纤维化的影响 被引量:6
9
作者 姚志成 钟跃思 +4 位作者 胡昆鹏 陈思 李明亮 方和平 邓美海 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2011年第23期4181-4184,共4页
背景:利用骨髓间质干细胞治疗肝纤维化的研究取得了一定的效果,但研究其培养液上清治疗肝纤维化的并不多。目的:观察大鼠骨髓间质干细胞培养液上清抑制肝星状细胞增殖及活化的可能性。方法:实验组1,2将骨髓间质干细胞培养液上清加入6孔... 背景:利用骨髓间质干细胞治疗肝纤维化的研究取得了一定的效果,但研究其培养液上清治疗肝纤维化的并不多。目的:观察大鼠骨髓间质干细胞培养液上清抑制肝星状细胞增殖及活化的可能性。方法:实验组1,2将骨髓间质干细胞培养液上清加入6孔板内处理肝星状细胞,分别为2mL培养液上清/孔,1mL培养液上清+1mL完全培养基/孔;对照组为肝星状细胞单独培养(2mL完全培养基/孔)。流式细胞仪分析细胞周期并观察抑制效果,RT-PCR检测肝星状细胞内转化生长因子β、金属蛋白酶抑制因子2、胶原蛋白ⅠmRNA的表达情况。结果与结论:加入骨髓间质干细胞培养液上清后,实验组1中的肝星状细胞增殖与对照组相比受到抑制,且抑制率随处理时间的延长而增多(处理72h>处理48h>处理24h,P<0.05);实验组的肝星状细胞内转化生长因子β、金属蛋白酶抑制因子2、胶原蛋白ⅠmRNA的表达较对照组均下调,且下调程度随培养液上清增多而增大(实验组1>实验组2>对照组)。 展开更多
关键词 肝星状细胞 骨髓充质干细胞 培养上清 细胞周期 RT-PCR
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大鼠脊髓匀浆上清液对骨髓间充质干细胞的诱导分化作用 被引量:5
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作者 杨景全 路来金 +3 位作者 闫峻 范东艳 崔建礼 邬伟 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期245-246,共2页
目的探讨大鼠脊髓匀浆上清液对骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为神经样细胞的作用。方法分离得到的MSCs在体外扩增、传代。用碱性成纤维生长因子(bFGF)预诱导后加入不同时间的臂丛神经损伤大鼠脊髓匀浆上清液诱导。免疫细胞化学染色检测神... 目的探讨大鼠脊髓匀浆上清液对骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为神经样细胞的作用。方法分离得到的MSCs在体外扩增、传代。用碱性成纤维生长因子(bFGF)预诱导后加入不同时间的臂丛神经损伤大鼠脊髓匀浆上清液诱导。免疫细胞化学染色检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,以鉴定分化细胞的表型特征。结果细胞诱导后具有神经元或胶质细胞样细胞的形态,相应细胞表面标志NSE或GFAP阳性,以损伤后7d脊髓匀浆上清液诱导组NSE阳性和GFAP阳性率最高(P<0.05)。结论臂丛根性撕脱伤大鼠脊髓匀浆上清液在体外能够有效地诱导骨髓MSCs分化为神经样细胞,伤后1w可以作为MSCs移植的最佳时间。 展开更多
关键词 骨髓充质干细胞 脊髓匀浆上清 分化
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人类心肌匀浆上清液对骨髓间充质干细胞诱导分化及相关基因时序表达的影响 被引量:4
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作者 曾俊义 魏云峰 +3 位作者 汪泱 谢安 娄远蕾 张梅 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第23期4181-4185,共5页
背景:大量有关动物的体内外研究表明,骨髓间充质干细胞在心肌微环境或模拟心肌微环境的作用下可分化为心肌细胞。然而,类似的人类研究报道较少,同时相关的分化机制也不甚清楚。目的:探讨人类心肌匀浆上清液对骨髓间充质干细胞诱导分化... 背景:大量有关动物的体内外研究表明,骨髓间充质干细胞在心肌微环境或模拟心肌微环境的作用下可分化为心肌细胞。然而,类似的人类研究报道较少,同时相关的分化机制也不甚清楚。目的:探讨人类心肌匀浆上清液对骨髓间充质干细胞诱导分化的影响及相关基因的时序表达。方法:体外分离培养人类骨髓间充质干细胞,传至第4代加入自体心肌匀浆上清液诱导骨髓间充质干细胞,持续作用2周。相差显微镜下观察骨髓间充质干细胞形态变化,免疫荧光方法鉴定心肌特征性肌动蛋白α和肌钙蛋白的表达,应用半定量RT-PCR技术分析Nkx-2.5、GATA-4、MEF-2C、α-MHC、肌钙蛋白等相关基因在分化过程中的动态时序表达。结果与结论:经心肌匀浆上清液诱导后,骨髓间充质干细胞体积变大,立体感增强,形态近似棒状。诱导2周时肌动蛋白α及肌钙蛋白阳性细胞比例分别为25.53%和23.48%。Nkx-2.5、GATA-4、MEF-2C基因在诱导后3d表达开始增强,其中GATA-4、MEF-2C诱导后5d达高峰,以后维持在较高水平,Nkx-2.5则随诱导时间逐渐增强;α-MHC、肌钙蛋白基因诱导前无表达,于诱导第3天出现表达,以后维持在高水平。结果提示,心肌匀浆上清液对骨髓间充质干细胞具有定向诱导作用,在此过程中,伴随着Nkx-2.5、GATA-4、MEF-2C、α-MHC和肌钙蛋白基因的时序表达变化。 展开更多
关键词 心肌匀浆 骨髓充质干细胞 细胞分化 基因 上清
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人羊膜间充质干细胞分离培养:胰蛋白酶及胶原酶消化时间及浓度的选择 被引量:3
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作者 张惠娟 丛姗 +4 位作者 梁美萍 刘俊平 黄利刚 宋瑾 曹贵方 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第6期944-949,共6页
背景:文献报道人羊膜间充质干细胞提取方法各不一致,得到的细胞数量各不相同。目的:探索人羊膜间充质干细胞在体外分离培养的最适方法。方法:无菌条件下取正常足月剖腹产胎儿的羊膜剪成碎片,分别通过4个实验7种方法体外培养人羊膜间充... 背景:文献报道人羊膜间充质干细胞提取方法各不一致,得到的细胞数量各不相同。目的:探索人羊膜间充质干细胞在体外分离培养的最适方法。方法:无菌条件下取正常足月剖腹产胎儿的羊膜剪成碎片,分别通过4个实验7种方法体外培养人羊膜间充质干细胞。①实验一:分别采用3种方法:0.05 g/L胰蛋白酶消化10 min后,再加0.75 g/L胶原酶Ⅰ消化60 min;0.75 g/L胶原酶Ⅰ直接消化120 min;0.05 g/L胰蛋白酶与0.75 g/L胶原酶Ⅰ同时消化60 min。②实验二:采用0.05 g/L的胰蛋白酶消化30 min后,再加0.75 g/L胶原酶Ⅰ消化30 min。③实验三:分别采用2种方法:0.05 g/L的胰蛋白酶连续2次消化30 min后,再加入0.75 g/L的Ⅰ型胶原酶消化60 min;0.05 g/L的胰蛋白酶连续2次消化40 min后,再加0.75 g/L胶原酶Ⅰ消化60 min。④实验四:采用0.05 g/L的胰蛋白酶连续2次消化30 min后,再加1 g/L的Ⅰ型胶原酶消化60 min。显微镜下观察其形态,研究人羊膜间充质干细胞在体外分离培养的最适方法。结果与结论:用0.05 g/L的胰蛋白酶连续消化2次每次消化30 min,然后用1 g/L的胶原酶消化60 min是最合适的体外分离培养条件。细胞成细长梭形或星形,胞质丰富,细胞核呈圆形,1-3个核仁。说明实验四采用的胰酶和胶原酶消化的时间合适,而且胶原酶的浓度合适,得到的细胞数量最多。 展开更多
关键词 干细胞 培养 充质干细胞 羊膜充质干细胞 细胞培养 胰蛋白酶 胶原酶 863项目
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两种肝组织匀浆上清液诱导人脐带间充质干细胞向肝细胞分化的比较 被引量:5
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作者 闫成 薛改 +2 位作者 吴丽颖 刘建芳 侯艳宁 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2015年第19期2993-2998,共6页
背景:前期研究证明正常大鼠肝组织匀浆上清液可诱导人脐带间充质干细胞定向分化为具有部分肝细胞功能的肝样细胞,而肝纤维化大鼠肝组织匀浆上清液的诱导可行性及与前者诱导效果的比较尚不明确。目的:比较正常肝组织及纤维化肝组织微环... 背景:前期研究证明正常大鼠肝组织匀浆上清液可诱导人脐带间充质干细胞定向分化为具有部分肝细胞功能的肝样细胞,而肝纤维化大鼠肝组织匀浆上清液的诱导可行性及与前者诱导效果的比较尚不明确。目的:比较正常肝组织及纤维化肝组织微环境诱导人脐带间充质干细胞向肝细胞分化的能力。方法:采用腹腔注射3%硫代乙酰胺生理盐水溶液(200 mg/kg,2次/周,共4周)的方法制备SD大鼠肝纤维化模型,取肝纤维化大鼠及正常大鼠肝脏制备肝组织匀浆上清。将第3代人脐带间充质干细胞进行分组诱导培养:1标准对照组:加入含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基。2纤维化肝组织匀浆组:加入含体积分数为10%胎牛血清及50 g/L纤维化肝组织匀浆的DMEM/F12培养基。3正常肝组织匀浆组:加入含体积分数为10%胎牛血清及100 g/L正常肝组织匀浆的DMEM/F12培养基。诱导开始后于倒置显微镜下观察各组细胞形态学变化;取标准对照组及诱导7 d的匀浆组细胞采用Western Blot法检测CK18、AFP、CYP3A4、CYP2E1、CYP2D6、TPH2的表达情况,采用ELISA法测定各组细胞培养液中白蛋白水平。结果与结论:与标准对照组长梭形成纤维样细胞相比,诱导7 d时,肝纤维化匀浆组及正常匀浆组细胞形态变化明显,呈类圆形,胞体丰满。与标准对照组相比,两匀浆组细胞均可表达肝细胞标志物CK18和AFP。标准对照组细胞可表达少量CYP2E1,两匀浆组细胞表达CYP3A4、CYP2E1、CYP2D6、TPH2等肝细胞功能蛋白,且CYP2E1的表达量较标准对照组明显增加(P<0.01),而两匀浆组间上述蛋白的相对表达量差异无显著性意义(P>0.05)。同时,两匀浆组细胞分泌白蛋白的能力较标准对照组亦明显增强(P<0.01),两匀浆组相比差异无显著性意义(P>0.05)。实验结果显示正常肝组织和纤维化肝组织微环境均可诱导人脐带间充质干细胞向肝细胞分化,在达到相同诱导效果时,纤维化肝组织所需组织液浓度更低,提示纤维化肝组织微环境可能更有利于人脐带间充质干细胞向肝细胞分化。 展开更多
关键词 肝硬化 脐带 干细胞 细胞 细胞分化 干细胞 脐带脐血干细胞 肝纤维化 肝组织匀浆上清 微环境 人脐带充质干细胞 诱导分化 细胞色素P450酶 白蛋白
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不同人羊膜间充质干细胞冻存液冻存细胞效果比较 被引量:4
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作者 杨东斌 宋来君 +1 位作者 杨波 李祥生 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2009年第3期568-572,共5页
目的:筛选冻存人羊膜间充质干细胞效果较好的冻存液。方法:①不同配方的细胞冻存液对细胞冻存效果的影响。人羊膜间充质干细胞培养至第三代后分为10组,分别加入以下10种不同组成的冻存液。A组:70%DMEM/F12+20%胎牛血清+10%DMSO;B组:60%D... 目的:筛选冻存人羊膜间充质干细胞效果较好的冻存液。方法:①不同配方的细胞冻存液对细胞冻存效果的影响。人羊膜间充质干细胞培养至第三代后分为10组,分别加入以下10种不同组成的冻存液。A组:70%DMEM/F12+20%胎牛血清+10%DMSO;B组:60%DMEM/F12+30%胎牛血清+10%DMSO;C组:40%DMEM/F12+50%胎牛血清+10%DMSO;D组:90%胎牛血清+10%DMSO;E组:70%DMEM/F12+20%胎牛血清+10%甘油;F组:60%DMEM/F12+30%胎牛血清+10%甘油;G组:40%DMEM/F12+50%胎牛血清+10%甘油;H:90%胎牛血清+10%甘油;I组:90%DMEM/F12+10%DMSO;J组:90%DMEM/F12+10%甘油。调整细胞密度为5×106mL-1,放入程序降温盒中,入-80℃低温冰箱保存。1个月后复苏,MTT法筛选出吸光光度值较高的一种冻存液。②相同血清含量细胞冻存液对细胞冻存效果的影响。含体积分数为50%胎牛血清的细胞冻存液分3组保存细胞。K组:45%DMEM/F12+50%胎牛血清+5%DMSO;L组:40%DMEM/F12+50%胎牛血清+10%DMSO;M组:35%DMEM/F12+50%胎牛血清+15%DMSO;复苏冻存的细胞后,将细胞按冻存前的数量调整至5×105mL-1,台盼蓝染色后,计算细胞的成活率。在倒置相差显微镜下观察细胞的生长状况。结果及结论:配方为45%DMEM/F12+50%胎牛血清+5%DMSO的冻存液冻存复苏人羊膜间充质干细胞后细胞的成活率最高(P<0.05);冻存复苏后细胞的生长状况较好。 展开更多
关键词 人羊膜 充质干细胞 冻存 复苏 冻存
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人胎盘胎儿侧间充质干细胞无血清培养上清的抗氧化活性分析 被引量:6
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作者 付雪 张玉洁 +3 位作者 严秀蕊 马晓娜 刘晓明 魏军 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2017年第5期773-779,共7页
背景:目前关于间充质干细胞的研究大多集中于其免疫调节功能,而关于细胞和培养上清的其抗氧化能力的研究较为少见。目的:观察人胎盘胎儿侧间充质干细胞在无血清培养条件下,其上清的抗氧化能力。方法:采用无血清培养基培养胎儿侧胎盘间... 背景:目前关于间充质干细胞的研究大多集中于其免疫调节功能,而关于细胞和培养上清的其抗氧化能力的研究较为少见。目的:观察人胎盘胎儿侧间充质干细胞在无血清培养条件下,其上清的抗氧化能力。方法:采用无血清培养基培养胎儿侧胎盘间充质干细胞,分别于48 h收集P2-P6代细胞培养上清。在空白培养基中添加维生素C 100μmol/L作为阳性对照。检测P2-P6代人胎盘胎儿侧间充质干细胞培养上清的总抗氧化能力、清除活性氧自由基的能力和抗氧化酶活性。结果与结论:(1)抗氧化能力:各代次人胎盘胎儿侧间充质干细胞培养上清具有一定的抗氧化能力,且不同代次间的上清具有一定的差异,其中总抗氧化能力与40-80μmol/L的维生素C相当,各代次上清均具有一定的清除二苯基苦基苯肼自由基、羟自由基、超氧阴离子自由基等自由基清除能力;(2)抗氧化酶活性分析:各代次间的人胎盘胎儿侧间充质干细胞培养上清中均可以检测到一定水平的超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性;(3)结果提示,在无血清条件下培养胎儿侧胎盘间充质干细胞的上清具有一定的抗氧化能力和抗氧化酶的活性。人胎盘胎儿侧间充质干细胞的抗氧化能力与其旁分泌机制有关,但其中的抗氧化成分及分子机制有待进一步的研究。 展开更多
关键词 干细胞 组织工程 胎盘 分化 胎儿侧 充质干细胞 无血培养 培养上 抗氧化 自由基 抗氧化酶 旁分泌 细胞治疗 国家自然科学基金
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人脐静脉间充质干细胞原代培养换液频度与细胞增殖生长的关系 被引量:3
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作者 李德华 单伟 +2 位作者 张海峰 赵宝东 秦书俭 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2007年第20期3864-3867,共4页
目的:体外分离培养人脐静脉内皮及内皮下间充质干细胞,观察采用不同的换液频度与细胞增殖和生长的关系。方法:实验于2006-03/11在辽宁医学院解剖学实验室完成。①选取正常健康产妇顺产或剖宫产的新生儿脐带,由辽宁医学院附属第一医院提... 目的:体外分离培养人脐静脉内皮及内皮下间充质干细胞,观察采用不同的换液频度与细胞增殖和生长的关系。方法:实验于2006-03/11在辽宁医学院解剖学实验室完成。①选取正常健康产妇顺产或剖宫产的新生儿脐带,由辽宁医学院附属第一医院提供,产妇及其家属均知情同意。②根据更换细胞培养液时间的不同,分为接种后每24h,48h,72h更换培养液组。③无菌条件下将脐带用预热的磷酸盐缓冲液充分洗涤去血渍,从脐静脉一端插入留置针,用预热的磷酸盐缓冲液冲净静脉腔血,止血钳夹闭另一端,采用胶原酶消化法分离人脐静脉内皮及内皮下细胞,取消化30min的细胞悬液进行贴壁培养,以1×108L-1密度接种于24孔培养板中,每孔的细胞数和培养液量相同,按实验设计分组的时间方法更换培养液。④各组自培养24h开始,每天分别取各组细胞4孔,以噻唑蓝比色法测定生长曲线。并采用免疫细胞化学方法对分离的细胞进行表面抗原鉴定。结果:①间充质干细胞的形态学观察:原代培养1周,细胞以梭形细胞为主。传代培养2h细胞开始贴壁变形,24h基本完成贴壁,48h可见部分已贴壁的细胞开始分裂增殖,细胞形态多样,呈椭圆形、梭形、三角形等。5~7d贴壁细胞可见多核的成纤维细胞样。在细胞生长增生过程中,接种后每24h更换培养液组细胞增殖明显,生长状态均最好;接种后每48h更换培养液组次之;接种后每72h更换培养液组细胞增殖较慢,细胞生长状态也较差。②生长曲线:接种后每24h更换培养液组的细胞生长增殖较快,比接种后每48h及72h更换培养液组达到的同样细胞数平均提前2~3d(P<0.05);接种后每48h及72h更换培养液组之间差异无显著性意义(P>0.05)。③间充质干细胞表面抗原特性:免疫细胞化学分析显示CD166呈阳性,vWF呈阴性。结论:胶原酶消化法体外分离获得的人脐静脉内皮及内皮下细胞数量高、活性佳。更换培养液的频度不同,细胞的增殖生长过程和形态变化时间不同,接种后每24h更换培养液更有利于间充质干细胞的增殖生长和纯化。 展开更多
关键词 人脐静脉 原代培养 频度 充质干细胞
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骨髓间充质干细胞上清液治疗大鼠脑缺血的作用机制 被引量:10
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作者 冯鹏 李光来 王飞 《中西医结合心脑血管病杂志》 2008年第3期292-294,共3页
目的观察骨髓间充质干细胞上清液经尾静脉注射治疗大鼠脑缺血的干预效果,探讨骨髓间充质干细胞移植体内作用机制。方法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。16只健康Wistar大鼠分为假手术组、缺血对照组、上清液低浓度组、上清液高浓度... 目的观察骨髓间充质干细胞上清液经尾静脉注射治疗大鼠脑缺血的干预效果,探讨骨髓间充质干细胞移植体内作用机制。方法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。16只健康Wistar大鼠分为假手术组、缺血对照组、上清液低浓度组、上清液高浓度组。模型制作24h后各组腹腔注射5-溴脱氧尿核苷(bromodeoxyuridine,BrdU)标记处于增殖状态的神经前体细胞,应用免疫组织化学染色检测缺血后7d脑组织BrdU、BrdU+NSE、BrdU+GFAP阳性细胞数。结果脑梗死后7d侧脑室室管膜下区、海马齿状回区BrdU、BrdU+NSE、BrdU+GFAP阳性细胞数开始增多,上清液高浓度组的上述阳性细胞数明显多于对照组(P<0.01)和低浓度组(P<0.05)。结论骨髓间充质干细胞上清液可以促进脑梗死大鼠损伤原位内源性神经前体细胞的增殖、分化。 展开更多
关键词 脑缺血 骨髓充质干细胞 上清 神经前钵细胞 增殖 分化
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脑脊液体外培养骨髓间充质干细胞 被引量:4
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作者 沈忆新 王鹏 石恩东 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2011年第36期6802-6806,共5页
背景:细胞移植是脊髓损伤的一种有效治疗手段,但目前尚缺乏脑脊液对细胞影响的实验依据。目的:动态观察体外脑脊液培养骨髓间充质干细胞的变化。方法:采用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,并传代扩增。选择生... 背景:细胞移植是脊髓损伤的一种有效治疗手段,但目前尚缺乏脑脊液对细胞影响的实验依据。目的:动态观察体外脑脊液培养骨髓间充质干细胞的变化。方法:采用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,并传代扩增。选择生长良好的第3,4代细胞接种于脑脊液中,通过细胞免疫化学染色法鉴定脑脊液对细胞表型的影响。取生长良好的第5代细胞,分别用含小牛血清的L-DMEM和脑脊液培养。结果与结论:运用密度梯度离心结合贴壁培养法能成功有效地分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,表型鉴定结果为CD90、CD106、CD71、CD29阳性,CD45阴性。脑脊液培养后细胞仍为骨髓间充质干细胞形态,并可见少量小圆细胞,表现为神经样细胞,表形鉴定结果为CD90、CD106、CD71、CD29阳性,CD45阴性,神经元特异性烯醇化酶呈弱阳性(<1%)。细胞具有相似的S形生长曲线,生长曲线基本相似。提示骨髓间充质干细胞在脑脊液培养基中可继续生长和增殖,无诱导分化作用,且细胞对生长环境有高度的适应性。 展开更多
关键词 骨髓充质干细胞 脑脊 分离培养 表型 细胞鉴定
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骨髓间充质干细胞上清液对大鼠佐剂性关节炎防治作用的实验研究 被引量:2
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作者 许键炜 舒莉萍 +4 位作者 申长清 赵芳芳 杨燕 崔冬冰 何志旭 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第14期5-10,共6页
目的探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)上清液对大鼠佐剂性关节炎(adjuvantarthritis,AA)的治疗、干预作用。方法收集培养48 h的SD大鼠骨髓MSCs上清液,健康雄性SD大鼠右后足跖皮内一次性注射弗氏完全佐剂0.1 mL/只造模... 目的探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)上清液对大鼠佐剂性关节炎(adjuvantarthritis,AA)的治疗、干预作用。方法收集培养48 h的SD大鼠骨髓MSCs上清液,健康雄性SD大鼠右后足跖皮内一次性注射弗氏完全佐剂0.1 mL/只造模,造模成功后行MSCs上清液治疗及干预。造模后第1、7、14、21和28天测量大鼠体质量、踝关节周长和后足爪体积,同时观察大鼠生存状况。治疗后第21天,行四肢关节X线检查及病理检查。结果模型大鼠经MSCs上清液治疗后关节肿胀明显减轻,X线示骨质破坏明显修复。病理HE染色见关节滑膜病变和炎症细胞浸润明显减少,组织水肿减轻。干预组经MSCs上清液治疗,原发性炎症和继发病变均不明显,关节X线和病理检查均未见明显异常,与模型组大鼠相比,体质量、足爪体积以及踝关节周长差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MSCs上清液治疗可有效减轻并逆转弗氏完全佐剂诱导的大鼠AA的进展。其作用机制可能为MSCs分泌了可溶性细胞因子到达患部修复受损组织,具体成分还有待进一步研究。 展开更多
关键词 骨髓充质干细胞 上清 佐剂性关节炎
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间充质干细胞及其培养上清与融冻产物对脐血CD34^+细胞扩增及分化的作用 被引量:2
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作者 周敦华 黄科 +2 位作者 吴燕峰 沈婷 黄绍良 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期39-44,共6页
【目的】探讨人骨髓间充质干细胞(MSC)及其培养上清、融冻产物对脐血CD34+细胞扩增及分化的作用。【方法】分离纯化人骨髓MSC,收集纯化三代的MSC培养上清,采用反复冻融法获得MSC融冻产物,采用免疫磁珠分选系统纯化脐血CD34+细胞。实验分... 【目的】探讨人骨髓间充质干细胞(MSC)及其培养上清、融冻产物对脐血CD34+细胞扩增及分化的作用。【方法】分离纯化人骨髓MSC,收集纯化三代的MSC培养上清,采用反复冻融法获得MSC融冻产物,采用免疫磁珠分选系统纯化脐血CD34+细胞。实验分为4组,分别为含MSC滋养层组、MSC上清组、MSC融冻产物组及单纯造血生长因子(HGFs)对照组。流式细胞仪检测人脐血CD34+细胞在这四种培养体系中第6天和第12天有核细胞数及CD34+、CD34+CD38-、CD41+、CD19+、CD3+细胞含量。【结果】①MSC滋养层组对脐血有核细胞和对脐血CD34+、CD34+CD38-的扩增能力最强,MSC培养上清组和MSC滋养层相比具有类似的作用,但其作用强度减弱(P<0.05)。②MSC培养上清和MSC均具有抑制脐血CD34+细胞分化为CD3+和CD19+细胞的作用,差异无显著性(P>0.05)。③MSC培养上清和MSC均具有促进脐血CD34+细胞向CD41+细胞分化的作用,MSC滋养层的作用强于MSC培养上清(P<0.05)。④MSC融冻产物已完全丧失对脐血CD34+细胞扩增和分化作用,与单纯因子对照组相似(P>0.05)。【结论】MSC培养上清对脐血CD34+、CD34+CD38-细胞均具有扩增作用,而且可促进脐血CD34+细胞向CD41+细胞分化。 展开更多
关键词 充质干细胞 脐血CD34+细胞 MSC培养上 MSC融冻产物
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