肿瘤靶向治疗活性人羧肽酶A1最适片段的分析和克隆

目的:获得肿瘤靶向治疗用活性人羧肽酶A1(hCPA1)的最适片段。方法:计算机分析hCPA1活性相关氨基酸,PCR扩增选择最适基因片段,克隆入PQE-80载体,转化Rosetta gami2(DE3)进行表达,与hCPA1活性中心片段比较酶活性。结果:PCR成功扩增了hCPA1活性中心和hCPA1活性短片段基因,酶切鉴定和测序均证实重组表达载体构建成功,表达的蛋白以SDS-PAGE分析,分别在约25×103和20×103处出现新生蛋白条带,蛋白质印迹法实验证实了新生蛋白为目的蛋白。Hippuryl-L-Phenylalanin(H-L-P)实验显示两者均具有羧肽酶活性,且hCPA1活性短片段的活性与活性中心相当。MTT和细胞凋亡实验结果表明两者均能有效地水解前体药物MTX-α-Phe,抑制前列腺癌细胞株PC-3增殖,促进PC-3细胞凋亡。结论:成功克隆和表达了人hCPA1活性短片段基因和hCPA1活性中心,获得相对分子质量小而具有相似活性的hCPA1蛋白,为进一步将其应用于前列腺癌的ADEPT导向治疗创造了条件。