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抗人羧酸酯酶-Ⅱ单克隆抗体的制备与鉴定
被引量:
3
1
作者
武正华
唐晓波
+4 位作者
王志刚
纪宏宇
于磊
刘慧文
朱大岭
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第2期148-151,共4页
目的制备鼠抗人羧酸酯酶-Ⅱ(humancarboxyles-terases-Ⅱ,hCE-Ⅱ)单克隆抗体(mAb)并对其特性进行鉴定。方法以含hCE-Ⅱ的人肝脏微粒体蛋白混合抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备鼠抗hCE-Ⅱ的mAb,并用Protein-G亲和层析法纯化mAb。...
目的制备鼠抗人羧酸酯酶-Ⅱ(humancarboxyles-terases-Ⅱ,hCE-Ⅱ)单克隆抗体(mAb)并对其特性进行鉴定。方法以含hCE-Ⅱ的人肝脏微粒体蛋白混合抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备鼠抗hCE-Ⅱ的mAb,并用Protein-G亲和层析法纯化mAb。用间接ELISA法测定mAb的效价,以Westernblot鉴定mAb的特异性、免疫组化染色法对mAb相应的抗原进行组织定位。用免疫沉淀和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assistedlaserdesorption/ionizationtime-of-flightmassspectrometry,MALDI-TOF-MS)得到相应的肽质量指纹谱(peptidemassfingerprint,PMF),再通过Mascot在人类蛋白质数据库中分析比对鉴定mAb对应的抗原。结果获得1株可持续、稳定分泌抗hCE-Ⅱ的mAb的杂交瘤细胞系。杂交瘤细胞分泌的mAbIg的亚类(型)为IgG1(κ),腹水mAb的效价达1×10-7。Westernblot分析显示,在Mr为62000处有1条清晰的带。免疫组化染色显示,该mAb可与肝细胞的浆蛋白结合(hCE-Ⅱ存在于肝细胞浆内微粒体),而不与血管平滑肌细胞内的蛋白结合。该mAb免疫沉淀物的Mr为62000,与hCE-Ⅱ的Mr相符。对免疫沉淀的蛋白质进行质谱鉴定证实,该mAb对应的抗原为hCE-Ⅱ。结论制备出的鼠抗hCE-Ⅱ的mAb效价高、特异性良好,为进一步研究hCE-Ⅱ的功能及其在肝癌等癌症的诊断和治疗中的作用提供了工具。
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关键词
人羧酸酯酶-ⅱ
单克隆抗体
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
下载PDF
职称材料
题名
抗人羧酸酯酶-Ⅱ单克隆抗体的制备与鉴定
被引量:
3
1
作者
武正华
唐晓波
王志刚
纪宏宇
于磊
刘慧文
朱大岭
机构
哈尔滨医科大学药学院生物制药学教研室
哈尔滨医科大学附属二院药学部
哈尔滨医科大学基础医学院组织与胚胎学教研室
哈尔滨医科大学黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第2期148-151,共4页
基金
中国人类肝脏蛋白质组计划(2004BA711A20)
黑龙江省科技厅科技攻关项目(230103550116131)
黑龙江省教育厅科学技术研究项目(10551158)
文摘
目的制备鼠抗人羧酸酯酶-Ⅱ(humancarboxyles-terases-Ⅱ,hCE-Ⅱ)单克隆抗体(mAb)并对其特性进行鉴定。方法以含hCE-Ⅱ的人肝脏微粒体蛋白混合抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备鼠抗hCE-Ⅱ的mAb,并用Protein-G亲和层析法纯化mAb。用间接ELISA法测定mAb的效价,以Westernblot鉴定mAb的特异性、免疫组化染色法对mAb相应的抗原进行组织定位。用免疫沉淀和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assistedlaserdesorption/ionizationtime-of-flightmassspectrometry,MALDI-TOF-MS)得到相应的肽质量指纹谱(peptidemassfingerprint,PMF),再通过Mascot在人类蛋白质数据库中分析比对鉴定mAb对应的抗原。结果获得1株可持续、稳定分泌抗hCE-Ⅱ的mAb的杂交瘤细胞系。杂交瘤细胞分泌的mAbIg的亚类(型)为IgG1(κ),腹水mAb的效价达1×10-7。Westernblot分析显示,在Mr为62000处有1条清晰的带。免疫组化染色显示,该mAb可与肝细胞的浆蛋白结合(hCE-Ⅱ存在于肝细胞浆内微粒体),而不与血管平滑肌细胞内的蛋白结合。该mAb免疫沉淀物的Mr为62000,与hCE-Ⅱ的Mr相符。对免疫沉淀的蛋白质进行质谱鉴定证实,该mAb对应的抗原为hCE-Ⅱ。结论制备出的鼠抗hCE-Ⅱ的mAb效价高、特异性良好,为进一步研究hCE-Ⅱ的功能及其在肝癌等癌症的诊断和治疗中的作用提供了工具。
关键词
人羧酸酯酶-ⅱ
单克隆抗体
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
Keywords
human carboxylesterases
-
ⅱ
monoclonal antibody
matrix
-
assisted laser desorption/ionization time
-
of
-
flight mass spectrometry
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
抗人羧酸酯酶-Ⅱ单克隆抗体的制备与鉴定
武正华
唐晓波
王志刚
纪宏宇
于磊
刘慧文
朱大岭
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007
3
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