人肌腱胶原蛋白的提取及凝胶制备

目的探索人肌腱胶原蛋白在组织工程皮肤及整形外科中的应用。方法从人肌腱提取酸溶性胶原,制备人肌腱胶原蛋白。结果所提取的胶原在pH5.8左右迅速形成凝胶。光镜下可见酸溶性胶原纤维呈长细丝状,交织成网状。纯度以羟脯氨酸质量分数为基准,分光光度法测定为95%。氨基酸成分主要为甘氨酸占35%,脯氨酸占10%。结论氨基酸分析表明,所提取的胶原为典型的Ⅰ型胶原蛋白,热稳定性测定Td为39～41℃。

白藜芦醇通过抑制β-catenin表达诱导并促进人肌腱干细胞的成骨分化

[目的]观察白藜芦醇对人肌腱干细胞成骨分化的作用及其细胞信号通路。[方法]低密度接种法和胶原酶消化法分离培养人肌腱干细胞,结晶紫染色观察分离出的细胞形成的单克隆,体外诱导检测分离细胞的多向分化能力;在/无成骨诱导因子下,不同浓度白藜芦醇刺激人肌腱干细胞荧光定量PCR检测骨相关基因(Run x2和OCN)表达,免疫印迹检测Run x2蛋白表达,茜素红S染色观察钙盐沉积,免疫印迹检测β-catenin和NK-KB表达以检测相关细胞信号通路。[结果]成功从人髌腱组织中分离培养出肌腱干细胞,体外可被诱导成骨细胞和脂肪细胞;在/无成骨诱导因子影响下,白藜芦醇均促进骨相关因子Run x2和其下游因子OCN表达,且随着白藜芦醇的浓度升高而上调;无成骨诱导因子影响下,Run x2蛋白表达随着白藜芦醇浓度升高而增多,而在成骨诱导因子存在下,其蛋白表达变化不明显。在/无成骨诱导因子影响下,茜素红S染色显示白藜芦醇促进人肌腱干细胞的钙盐沉积。随着白藜芦醇浓度的提高,β-catenin表达减少,而NF-KB表达无明显变化。[结论]白藜芦醇可以体外诱导并促进人肌腱干细胞的成骨分化,可能通过调节β-catenin信号通路来调控。

γ射线照射对人肌腱组织形态学及羟脯氨酸含量的影响

[目的]研究2.87 Mrad剂量γ射线照射后,肌腱组织形态学及羟脯氨酸含量的变化。[方法]选取40根人新鲜上肢掌深屈肌腱,-80℃深低温冷冻6周,等分为二:实验组(A组),对照组(B组)。A组肌腱在干冰低温保存条件下行γ射线照射,检测肌腱最终吸收剂量为2.87 Mrad。分别行HE、VG染色,在普通光镜和透射电镜下观察其组织形态学变化。用柱前衍生高效液相色谱分析法检测肌腱胶原蛋白水解液中羟脯氨酸含量。[结果]①形态学观察发现,同非照射组肌腱相比,照射组肌腱胶原纤维束间隙较大,纤维排列卷曲紊乱,并可见部分纤维发生断裂。电镜下胶原纤维横纹模糊消失,腱细胞膜溶解消失,核崩解,细胞器减少。②在同等水解条件下,胶原蛋白水解液中照射组羟脯氨酸含量与非照射组相比,有显著差异(P<0.05)。[结论]2.87 Mrad剂量γ射线照射可引起肌腱组织形态结构发生显著改变。在同等水解条件处理下,照射组肌腱胶原蛋白水解液中羟脯氨酸含量显著高于非照射组。

γ射线照射对人肌腱组织形态学及羟脯氨酸含量的影响(英文)

目的:研究2.87Mrad剂量γ射线照射后,肌腱组织形态学及羟脯氨酸含量的变化。方法:选取40根人新鲜上肢掌深屈肌腱,-80℃深低温冷冻6周,等分为二:实验组(A组),对照组(B组)。A组肌腱在干冰低温保存条件下行γ射线照射,检测肌腱最终吸收剂量为2.87Mrad。分别行HE、VG染色,在普通光镜和透射电镜下观察其组织形态学变化。用柱前衍生高效液相色谱检测肌腱胶原蛋白水解液中羟脯氨酸含量。结果:①形态学观察发现,同非照射组肌腱相比,照射组肌腱胶原纤维束间隙较大,纤维排列卷曲紊乱,并可见部分断裂。电镜下胶原纤维横纹模糊消失,腱细胞膜溶解消失,核崩解,细胞器减少。②在同等水解条件下,胶原蛋白水解液中照射组羟脯氨酸含量与非照射组相比,有显著差异(P<0.05)。结论:2.87Mrad剂量γ射线照射可引起肌腱组织形态结构发生显著改变。在同等水解条件处理下,照射组肌腱胶原蛋白水解液中羟脯氨酸含量显著高于非照射组。