载脂蛋白C1表达对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的:探讨载脂蛋白C1 (APOC1)表达对肝癌细胞增殖和凋亡的影响,并初步阐明其相关分子机制。方法:通过癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析肝癌患者癌组织中APOC1 mRNA表达水平及其与患者预后的关系。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测不同肝癌细胞中APOC1mRNA表达水平,筛选APOC1低表达的人肝癌HepG2细胞作为研究对象。将pcDNA3.1-APOC1质粒转染至HepG2细胞过表达APOC1 (APOC1过表达组),以转染空载体pcDNA3.1的HepG2细胞为对照组,采用MTS法和5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色法检测2组细胞增殖活性和增殖率,Transwell小室实验检测2组细胞中迁移细胞数,流式细胞术和TUNEL法检测2组不同细胞周期细胞百分率和细胞凋亡率,Western blotting法检测2组细胞中细胞外调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)、蛋白激酶B (AKT)、磷酸化AKT (p-AKT)、B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)和活化型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (cleaved caspase-3)蛋白表达水平。结果:TCGA数据库分析,肝癌患者癌组织中APOC1 mRNA表达水平低于正常肝组织(P<0.05),并且APOC1 mRNA低表达组肝癌患者预后较差。RT-qPCR法检测,HepG2细胞中APOC1 mRNA表达水平最低,选取该细胞作为后续研究对象。与对照组比较,APOC1过表达组细胞增殖活性和增殖率明显降低(P<0.05或P<0.01),迁移细胞数明显减少(P<0.01), S期细胞百分率和细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。与对照组比较,APOC1过表达组细胞中p-ERK、 p-AKT和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:APOC1高表达能够抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,其机制可能与其抑制p-ERK、p-AKT、Bcl-2蛋白表达和促进cleaved caspase-3蛋白表达有关。

和枢消积方对人肝癌细胞系HepG2增殖凋亡的影响

目的探讨和枢消积方对人肝癌细胞系HepG2增殖凋亡的影响,揭示可能的分子机制。方法使用和枢消积方作用于人肝癌细胞系HepG2,采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)、平板克隆实验检测细胞增殖能力。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2基因(BCL-2)、BCL-2相关X蛋白(BAX)、丙型肝炎病毒(HCV)非结构5A蛋白(NS5A)反式激活基因13(NS5ATP13)及蛋白激酶B(AKT)/糖原合酶激酶(GSK)/雷帕霉素靶蛋白(MTOR)相关通路蛋白的表达水平。结果和对照组相比,和枢消积方各组可使HepG2细胞活性、增殖率显著降低(P<0.05);同时可上调BAX的蛋白表达,下调BCL-2及磷酸(p)-AKT、p-GSK、p-MTOR及NS5ATP13的表达(P<0.05),呈浓度依赖性。结论和枢消积方可以抑制HepG2细胞的增殖并诱导凋亡,这可能与和枢消积方抑制NS5ATP13的表达,继而抑制AKT/GSK/MTOR信号转导通路的活化有关。

茶黄素(TF_(1))对人肝癌Bel-7402细胞的抑制作用及机制研究

探究茶黄素(TF_(1))对人肝癌Bel-7402细胞的影响,并阐明其作用机制。通过CCK-8检测细胞活力,用平板克隆形成试验检测细胞增殖能力,细胞划痕愈合试验和Transwell小室法检测细胞迁移,用流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、PARP)、迁移相关蛋白(E-cad、N-cad、Vimentin、MMP9)和信号通路相关蛋白(TGF-β、smad3、p-smad3)表达水平。结果表明,不同剂量TF_(1)均可抑制Bel-7402细胞的增殖和迁移,促进其凋亡,并且存在剂量依赖性,剂量越大,抑制作用越强(P<0.05)。与对照组相比,试验组Bax、E-cad蛋白表达水平较高,Bcl-2、PARP,N-cad、Vimentin、MMP9、TGF-β、smad3、p-smad3表达水平较低(P<0.05)。茶黄素可能通过TGF-β信号通路抑制肝癌Bel-7402细胞的增殖、迁移,且促进其凋亡。

siRNA沉默水通道蛋白5基因抑制人肝癌细胞的生长作用

目的通过采用小干扰RNA(siRNA)靶向作用人肝癌细胞Bel-7402中的水通道蛋白5(AQP5)基因,观察其对Bel-7402的增殖及凋亡的作用。方法体外孵育Bel-7402,采用阴性对照siRNA(siRNA-NC)、siRNA-AQP5#1、siRNA-AQP5#2转染细胞。实验设置细胞为对照组、siRNA-NC组、sliRNA-AQP5#1组、siRNA-AQP5#2组。噻唑蓝染色检测细胞的增殖能力;流式细胞技术测定细胞的凋亡情况;蛋白免疫印迹技术和Real time-PCR测量细胞中AQP5蛋白和mRNA的含量。结果siRNA-NC组与对照组相比,细胞的增殖、凋亡及AQP5蛋白和mRNA的含量无明显差异(P>0.05)。与对照组相比,siRNA-AQP5#1组、siRNA-AQP5#2组的细胞的增殖力降低、凋亡率升高、AQP5蛋白和mRNA的含量均降低(均P<0.05)。结论siRNA靶向作用人肝癌细胞AQP5基因通过降低其增殖和升高其凋亡率达到抑制癌细胞的生长作用。

当归、红芪提取物对人肝癌SMMC-7721细胞辐射增敏作用

目的:探讨当归、红芪提取物对直线加速器(X射线)辐射后人肝癌细胞SMMC-7721的增敏作用。方法:96孔板培养人肝癌细胞SMMC-7721,设9个组,对照组(N)即正常对照组,纯辐射组(F)给以源皮距100cm 4Gy的X射线,另设3个纯药物组(DH),设高(H:8mg/mL)、中(M:6mg/mL)、低(L:4mg/mL)三个药物浓度梯度,3个辐射加药组(F+DH)和1个空白组(只有培养液无细胞)。每组设6个复孔。采用MTT法计算当归、红芪提取物对人肝癌SMMC-7721细胞辐射前后增殖活性的影响。流式细胞术检测不同组细胞的周期情况,透射电镜及倒置显微镜分别观察各组细胞结构变化,用蛋白印记法检测不同组细胞中p21蛋白表达情况。结果:MTT法证明当归、红芪提取物具有抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖作用,对于辐射后的肝癌细胞具有很好的周期抑制作用。不同剂量当归、红芪提取物作用于细胞24h后,抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖呈剂量依赖关系,药物浓度越高,抑制作用越显著。SMMC-7721细胞经辐射后,细胞的抑制率为37.58%,辐射后加不同浓度当归、红芪提取物(4mg/mL、6mg/mL、8mg/mL),联合作用对细胞的抑制率升高,分别为45.27%、51.86%、59.34%,且呈药物浓度依赖关系,差异具有统计学意义(P<0.01)。辐射组肝癌细胞较正常组细胞G0/G1期细胞数明显增多,由44.70%升至71.60%(P<0.01),S期细胞减少,高浓度药物也可以使G0/G1期细胞比例有所升高(P<0.01)。辐射加药组细胞G0/G1期阻滞最为明显,并呈药物浓度梯度关系。高浓度药物组、辐射组细胞p21蛋白表达较正常组升高,辐射组+高浓度药物组细胞p21蛋白表达较辐射组明显升高。结论:当归、红芪提取物对于人肝癌SMMC-7721细胞具有很好的抑制作用,对经X线辐射后的细胞具有很好的增敏作用。

人肝癌组织血管内皮生长因子及微血管密度分析的临床价值

目的:探究分析人肝癌组织血管内皮生长因子及微血管密度分析的临床价值。方法:抽选2022年01月~2022年12月我院收治的50例肝癌患者,均接受人肝癌组织血管内皮生长因子检测,分析微血管密度。结果:人肝癌组织血管内皮生长因子表达阳性率为64.00%,阴性率为36.00%;其中,肝癌组织直径>5厘米的患者人肝癌组织血管内皮生长因子表达阳性率(70.59%)明显高于≤5厘米的患者(39.39%);肝癌组织有包膜的患者人肝癌组织血管内皮生长因子表达阳性率(27.78%)明显低于无包膜患者(75.00%);肝癌组织有转移的患者人肝癌组织血管内皮生长因子表达阳性率(93.75%)明显高于无转移患者(50.00%);肝癌组织高分化的患者人肝癌组织血管内皮生长因子表达阳性率(48.00%)明显低于低分化患者(80.00%),差异均存在统计学意义(P<0.05)。肝癌组织直径>5厘米的患者微血管密度为(36.15±6.33)个,明显多于≤5厘米患者的(32.63±4.77)个;肝癌组织有包膜的患者微血管密度为(24.22±4.05)个,明显少于无包膜患者的(36.26±8.81)个;肝癌组织有转移的患者微血管密度为(43.77±9.11)个,明显多于无转移患者的(25.83±5.79)个,差异存在统计学意义(P<0.05)。结论:人肝癌组织血管内皮生长因子及微血管密度均与肝癌的发生、进展、转移等有明显关联性,临床上可以通过分析人肝癌组织血管内皮生长因子及微血管密度来了解肝癌患者的情况,从而更好地制定治疗方案。

甲基莲心碱体外抑制人肝癌细胞增殖和侵袭的作用机制研究

目的探讨甲基莲心碱(neferine,Nef)对人肝癌HepG2和Bel-7402细胞侵袭的影响和作用机制。方法人肝癌HepG2和Bel-7402细胞体外培养,经不同浓度的甲基莲心碱处理后,CCK-8法检测细胞的增殖,Transwell细胞体外侵袭实验观察Nef对细胞侵袭能力的影响;免疫印迹检测Rho相关蛋白的表达。结果 CCK-8结果显示,与对照组比较,甲基莲心碱干预组抑制人肝癌HepG2和Bel-7402细胞增殖,并呈剂量-效应关系(P<0.05);Transwell细胞体外侵袭实验显示,3μmol·L^(-1)甲基莲心碱明显抑制HepG2和Bel-7402细胞的侵袭;免疫印迹结果显示,3μmol·L^(-1)甲基莲心碱作用HepG2和Bel-7402细胞12 h后,RhoA、RhoC和ROCK表达明显降低。结论甲基莲心碱可体外抑制HepG2和Bel-7402细胞的增殖和侵袭,其抑制肝癌细胞的侵袭可能与抑制RhoA、RhoC和ROCK蛋白的表达有关。

四种蛛毒抑制人肝癌BEL-7402细胞增殖作用的实验研究

近年来,在动物毒素的抗肿瘤作用研究中,以蛇毒[1]、蜂毒[2]居多,未见蜘蛛蛛毒对肿瘤细胞作用的报道.本研究目的是从海南捕鸟蛛、虎纹捕鸟蛛、敬钊缨毛蛛、雷氏大疣蛛四种蜘蛛毒素中筛选出抗人肝癌细胞株BEL-7402作用强的一种,并探讨其量效及时效关系,以便进行更深入的研究.

红藤脂酸钠对人肝癌细胞系SMMC-7721体外抑瘤作用的实验研究

目的研究中药制剂红藤脂酸钠在体外对人肝癌细胞系SMMC-7721的生长抑制作用并初步探讨其作用机制。方法MTT法测定SMMC-7721细胞生长的抑制百分率,并运用AnnexinV法和TUNEL法检测凋亡发生率。结果MTT法测得对照组与红藤脂酸钠处理组吸光值(A值)分别为:对照组(0.385±0.03),红藤脂酸钠处理组中的250μg/ml组(0.31±0.019)、500μg/ml组(0.199±0.022)、1mg/ml组(0.15±0.033)和2mg/ml组(0.048±0.026);各组间比较有显著性差异(P<0.01)。AnnexinV法测定红藤脂酸钠(1mg/ml作用1h)处理后细胞凋亡90%,对照组细胞凋亡17.36%。TUNEL法测定红藤脂酸钠(1mg/ml作用1h)处理后细胞凋亡(60.3±6.0)%,与对照组细胞凋亡(6.6±3.5)%相比,差异有显著性(P<0.01)。结论红藤脂酸钠在体外对7721细胞生长有明显的抑制作用,其作用机制可能主要是诱导肿瘤细胞发生凋亡。

不同扶正药物及其配伍对SMMC-7721人肝癌细胞P53、N-ras基因的调控作用(摘要)

目的:探讨不同扶正药物及其配伍对SMMC-7721人肝癌细胞P53、N-ras基因的调控作用。方法:选取临床上治疗肝癌常用的益气,温阳、补肾、养阴类扶正药物,并根据阴阳治则理论将其分别配伍为益气养阴、温阳养阴及补肾(阳)养阴等复合方药,煎为汤剂,采取大鼠灌胃给药后分离药物血清的方法制备药物血清,作用于体外培养的SMMC-7721人肝癌细胞,以正常大鼠血清和维甲酸作对照。流式细胞仪分析P53、

剔毒护肝颗粒含药血清对人肝癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨中药剔毒护肝颗粒剂(TDHGG)含药血清对人肝癌bel7402细胞生长及凋亡的影响。方法:应用MTT比色法检测TDHGG对肝癌细胞的抑制作用;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:肿瘤细胞抑制率与药物剂量呈直线相关;流式细胞仪检测结果显示含药血清大、中、小剂量处理组,肝癌细胞的凋亡率分别为23.9%、18.1%、5.8%,明显高于对照组(P<0.05),其中G0/G1期细胞数增加,G2/M期细胞数明显减少,与对照组相比差异有显著性意义(P<0.01)。结论:TDHGG含药血清可抑制人肝癌bel7402细胞的生长,并可干扰肝癌细胞增殖周期,诱导肝癌细胞凋亡。

野西瓜皂苷诱导人肝癌细胞HepG-2凋亡的初步研究

目的：探讨从维吾尔族民间常用药野西瓜提取的总皂苷（Capparis spinosa L．saponin，CSS）对人肝癌HepG-2细胞的杀伤作用和诱导凋亡的作用。方法：MTT比色法研究CSS对HepG-2细胞的毒性杀伤作用，用MK3型酶标仪在参考波长490nm，检测波长570nm条件下测定光密度值（OD），以溶剂对照处理的肿瘤细胞为对照组计算CSS对肿瘤细胞的抑制率；

丹皮酚增强顺铂对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制作用及其机制研究

目的：探讨丹皮酚增强顺铂对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制作用及其可能机制。方法用不同浓度的丹皮酚、顺铂和两药联用处理人肝癌细胞SMMC-7721，采用MTF比色法测定药物在体外对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制作用，应用两药相互作用指数（coefficient of drug interaction，CDI）进行联合用药分析，吖啶橙荧光染色观察细胞的形态学改变，流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：丹皮酚与顺铂单独应用对人肝癌细胞SMMC-7721有增殖抑制作用，且呈剂量效应关系。

阿霉素对热处理的人肝癌细胞-7721/Adm耐药株细胞毒性的影响

目的： 探讨比较阿霉素（ ADM）与 43℃加热单独或合并处理人肝癌细胞 7721敏感株（简称 7721细胞）和人肝癌细胞 7721/Adm耐药株（简称 7721/Adm细胞）的细胞毒作用。方法：以体外培养的人肝癌细胞 7721敏感株和已经建立的人肝癌细胞 7721/Adm耐药株为研究对象，采用水浴加温法 ,体外细胞毒试验（ MTT法） ,观察 ADM与加热处理对细胞生长抑制的影响；采用流式细胞技术检测热处理对 7721细胞和 7721/Adm细胞胞内阿霉素浓度的影响。结果： (1)热处理可以明显提高两种细胞对阿霉素的敏感性： 7721细胞、 7721/Adm细胞经阿霉素及 43.5℃热处理，其细胞存活率分别下降 35.2％（ 30 min）、 24.8％（ 60 min）和 29.4％（ 30 min）、 22.8％（ 60 min）； (2)流式细胞仪检测显示，热处理可明显提高这两种细胞尤其是 7721/Adm细胞内的阿霉素浓度： 7721细胞组提高 30.8％， HCC 7721/Adm组提高 51％。结论：热处理可以显著提高人肝癌细胞 7721敏感株和人肝癌细胞 7721/Adm耐药株对阿霉素的敏感性。

β-谷甾醇、豆甾醇诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡

目的研究β-谷甾醇、豆甾醇诱导人肝癌细胞SMMC-7721的凋亡作用。方法 MTT法观察β-谷甾醇、豆甾醇对细胞增殖的抑制作用;激光共聚焦显微镜观察细胞形态变化;用流式细胞仪检测细胞周期、凋亡率、细胞内活性氧ROS、钙离子Ca2+含量、线粒体膜电位ΔΨm变化。结果β-谷甾醇、豆甾醇均明显抑制SMMC-7721细胞增殖,使细胞形态发生典型凋亡变化,凋亡率和细胞内Ca2+、ROS的含量均显著增加,线粒体膜电位降低。β-谷甾醇使细胞周期阻滞在G2/M期,而豆甾醇则同时阻滞在S期和G2/M期。结论β-谷甾醇、豆甾醇具有抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和诱导细胞凋亡的作用。

虫草素对人肝癌Bel-7402细胞抑制及作用机制的研究

虫草素是虫草的主要活性成分,具有抗肿瘤、抑菌、抑制病毒、抑制蛋白质激酶活性等作用[1-2]。研究证明虫草素能抑制mRNA的合成,诱导细胞凋亡,促进细胞分化,对多种肿瘤细胞的生长具有抑制作用[1-2]。诱导肿瘤细胞凋亡以及作用靶点已成研究的焦点。为探讨虫草素诱导肿瘤细胞凋亡的新靶点。

三氧化二砷诱导人肝癌细胞株凋亡的初步研究

细胞凋亡在肿瘤治疗学上的意义日益得到人们的重视。我们观察了中药砒霜的主要成分——三氧化二砷(As2O3)对肝癌细胞株的诱导凋亡作用，以探索药物治疗肝癌的新途径。

应用基因芯片技术研究白花蛇舌草豆甾醇抑制人肝癌细胞体外生长的靶基因调控

目的:应用基因芯片技术研究白花蛇舌草豆甾醇(Stigmasterol from Hedyotis diffusa willd.,SHD)抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长的靶基因调控。方法:MTT法评价SHD在0、5、10、50、100mg/L浓度下,于24、48、72h对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制率变化。分别提取人正常肝细胞、人肝癌SMMC-7721细胞和SHD作用后的SMMC-7721细胞的总RNA,逆转录合成单链、双链cDNA后,体外转录合成生物素标记的cRNA与人HO4基因表达谱芯片杂交,扫描杂交芯片图像,利用软件获得SHD抑制人肝癌的靶基因,对其进行生物信息学分析。结果:SHD对SMMC-7721具有体外抑制作用,且呈剂量依赖性和时间依赖性;SHD使癌基因fos、myc、ras、pim-1、met、rel下调至正常水平,使抑癌基因NF-2和磷酸激酶MAP2K6的表达上调至正常水平。结论:SHD对人肝癌细胞SMMC-7721具有显著的体外抑制作用;SHD抑制SMMC-7721细胞的作用由多条靶基因协同,并通过胞内外信号转导途径协调完成。

刺梨三萜对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响

目的:观察刺梨三萜(Rosa roxburghii Tratt triterpene,RRTT)对人肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的影响,研究其可能的作用机制。方法:采用形态学观察和MTT法分析RRTT对SMMC-7721细胞增殖的影响;通过NBT还原实验和细胞培养上清液中甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)含量的测定分析RRTT对SMMC-7721分化的影响;采用AO/EB染色法和FCM检测RRTT对肿瘤细胞周期和细胞凋亡的影响;RT-PCR检测Bad mRNA的表达。结果:RRTT对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用呈时间和剂量依赖性。与阴性对照组比,随RRTT剂量的增加,NBT阳性细胞比率增加,AFP含量逐渐降低。RRTT对SMMC-7721细胞凋亡和增殖周期均无明显影响。RRTT作用后,Bad mRNA的表达下调。结论:RRTT具有体外抗SMMC-7721作用,其机制可能通过下调Bad mRNA的表达而诱导细胞分化,而与抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡无关。

葡萄籽原花青素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及自噬性死亡

目的:探讨原花青素对肝癌HepG2细胞的抑制作用及其可能的作用机制。方法:改良MTT法(WST-8法)及克隆形成抑制实验观察原花青素对肝癌HepG2细胞的生长抑制作用,碘化丙锭(PI)单染色检测细胞周期改变,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡水平,激光共聚焦显微镜观察和Western blotting检测细胞自噬发生。结果:原花青素作用HepG2细胞后,不同质量浓度的原花青素对肝癌细胞的生长均有抑制作用,且呈剂量-效应关系(P<0.01),原花青素作用于人肝癌HepG2细胞48 h的IC50为1.304×10-1g/L;与对照组相比随着原花青素作用于HepG2细胞的浓度增加,细胞克隆逐渐减少;随着原花青素浓度的增加,人肝癌HepG2细胞出现明显G1期阻滞,且高浓度原花青素组出现明显的亚二倍体峰,当原花青质量素浓度达到1.6×10-1g/L时,亚二倍体百分率为81%;不同质量浓度原花青素作用后,出现明显的凋亡细胞及坏死细胞、自噬性死亡和非特异性死亡细胞群;经原花青素处理转染GFP-LC3质粒的HepG2细胞胞浆内,LC3呈现明显的点状聚集;细胞自噬标志蛋白LC3-II的蛋白表达水平随着原花青素浓度增加逐渐增多。结论:原花青素通过诱导细胞凋亡及自噬性死亡的方式抑制人肝癌细胞的生长。