水红花子黄酮类成分对人肝癌细胞株SMMC-7721的影响

目的:研究水红花子黄酮类成分对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响。方法:采用MTT法研究水红花子黄酮类成分对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用及时效量效关系;并通过PI染色法和Annexin V-EGFP/PI双染法观察水红花子黄酮类成分作用于人肝癌细胞株SMMC-7721后细胞周期DNA含量变化及细胞凋亡率。结果:水红花子黄酮类成分能调节SMMC-7721人肝癌细胞株G1/S转换,使肿瘤细胞发生S期阻滞,造成S期细胞堆积,阻断细胞的DNA合成和复制,阻滞肿瘤细胞进入G2/M期,从而抑制肿瘤细胞的增殖,诱导SMMC-7721细胞凋亡,且具有明显的时效及量效关系。结论:水红花子黄酮类成分对人肝癌细胞株SMMC-7721具有明显的抑制作用,且抑制作用和时间剂量成线性关系,其作用机制为抑制肿瘤细胞的增殖和诱导该细胞的凋亡。

白茅根水提物对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞周期及细胞凋亡的影响

目的研究白茅根水提物对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖抑制率、细胞周期及细胞凋亡的影响。方法采用MTT法研究白茅根水提物对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制率及抑制率与时间剂量关系;并通过PI染色法和Annexin V-EGFP/PI双染法研究白茅根水提物作用于人肝癌细胞株SMMC-7721后细胞周期DNA含量变化及对细胞凋亡率的影响。结果不同浓度的白茅根水提物处理肝癌SMMC-7721细胞24,48,72,96 h后,均呈现出显著的细胞增殖抑制作用,抑制作用具有明显的时间-剂量-效应关系,差异有统计学意义(P<0.05);细胞周期与细胞凋亡实验结果显示不同浓度的白茅根水提物处理肝癌SMMC-7721细胞46 h后可显著增加肝癌细胞凋亡率,差异有统计学意义(P<0.001),作用36 h后,可增加S期比例同时降低G2/M期细胞比例,差异有统计学意义(P<0.001)。结论白茅根水提物对人肝癌细胞株SMMC-7721具有明显的增殖抑制作用并可诱导其凋亡,该作用是通过抑制G2/M期细胞比例,将细胞周期阻滞在S期实现的。

薏苡仁脂肪酸类成分对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞周期及细胞凋亡的影响

目的研究薏苡仁脂肪酸类成分对人肝癌细胞株SMMC-7721增值的影响及作用机制初探。方法采用MTT法考察不同给药剂量,不同给药时间下薏苡仁脂肪酸类成分对SMMC-7721细胞的增值抑制作用及其与时间、剂量的关系;碘化丙啶PI单染色法检测薏苡仁脂肪酸作用后,SMMC-7721细胞周期DNA水平变化;Annexin V-EGFP/PI双染法研究薏苡仁脂肪酸对SMMC-7721细胞凋亡率的影响。结果不同质量浓度的薏苡仁脂肪酸作用SMMC-7721细胞24、48、72 h后,均呈现出较好的细胞增殖抑制作用,且具有明显的时间-剂量-效应关系,差异有统计学意义(P<0.05);不同质量浓度的薏苡仁脂肪酸处理SMMC-7721细胞22 h后可显著增加肝癌细胞凋亡率,(P<0.001);作用36 h后,可显著降低G2/M期细胞比例,(P<0.001)。结论薏苡仁脂肪酸对人肝癌SMMC-7721细胞具有明显的抑制作用并可诱导其凋亡,其作用是通过抑制G2/M细胞周期实现的。

黄芩苷对肝癌细胞株SMMC-7721裸鼠移植瘤生长抑制作用及其机制

目的:以裸鼠人肝癌细胞株SMMC-7721移植瘤动物模型为研究对象,观察黄芩苷对移植瘤生长能力的影响,初步探讨黄芩苷对Cyclin D1和Caspase-3表达的影响。方法:BALB/c裸鼠右前腋部皮下接种人肝癌SMMC-7721细胞5×106个,建立人肝癌实体瘤模型。将20只成瘤裸小鼠随机分为空白对照组与黄芩苷组,每组10只。对照组腹腔注射生理盐水10ml/kg,黄芩苷组腹腔注射黄芩苷注射液100mg/kg,每2d给药1次,间断给药8次后称体重、处死,瘤块离体称重,计算抑瘤率;用免疫组织化学方法检测实验组和对照组移植瘤中CyclinD1和Caspase-3的表达水平。结果:黄芩苷组100mg/kg对裸鼠肝癌SMMC-7721实体瘤的抑制率为30.8%,两组间肝脏与肾脏指数比较,P均大于0.05。黄芩苷处理组凋亡指数为(13.6±1.1)%,高于对照组的(2.2±1.9)%,(P<0.01)。黄芩苷能够抑制CyclinD1表达及上调Caspase-3表达,(均P<0.05)。结论:黄芩苷对人肝癌SMMC-7721的裸鼠皮下移植瘤具有生长抑制作用,其抑瘤作用可能通过下调CyclinD1表达和上调Caspase-3表达来达到抑制瘤体增殖并有促进其凋亡的作用。在保护免疫器官功能方面,黄芩苷无明显优势。黄芩苷可能成为治疗原发性肝癌的有效手段之一,但是其在保护免疫器官方面还需要进一步研究。

乳香挥发油抑制人肝癌SMMC-7721细胞株增殖及诱导凋亡的作用

目的探讨乳香挥发油体外抑制人肝癌SMMC-7721细胞株增殖及诱导凋亡的作用。方法使用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察乳香挥发油对SMMC-7721的增殖抑制作用;通过吖啶橙染色,观察SMMC-7721的形态学变化;使用琼脂糖凝胶电泳法检测乳香挥发油对细胞DNA降解的影响;利用流式细胞术分析乳香挥发油诱导SMMC-7721凋亡的凋亡率及对细胞周期的影响;应用间接免疫荧光法观察凋亡调控基因bax和bcl-2蛋白的表达变化。结果乳香挥发油浓度为0.7、0.07、0.007、0.0007、0.00007mg.mL-1作用24h时,能抑制SMMC-7721的生长,并呈浓度依赖性。在浓度为0.07mg.mL-1时,作用48h或72h,电泳结果显示了DNA梯状条带,流式细胞仪检测到凋亡峰,且细胞被阻滞于G1期。间接免疫荧光法的结果表明,促凋亡蛋白bax的表达增强,抗凋亡蛋白bcl-2的表达无明显变化。结论乳香挥发油能抑制肝癌细胞株SMMC-7721的增殖,并可能通过上调线粒体内bax/bcl-2的表达比例诱导SMMC-7721细胞的凋亡,而且其诱导的凋亡具有细胞周期依赖性。

熊果酸诱导人肝癌SMMC-7721细胞株凋亡机制的研究

目的:研究熊果酸(ursolic acid,UA)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖抑制作用及诱导凋亡的相关机制。方法:MTT法测定UA对SMMC-7721细胞的生长抑制作用;Wright-Giemasa染色和Hoechst33258荧光染色法观察细胞的形态学变化;流式细胞仪检测细胞的凋亡率;RT-PCR检测细胞凋亡相关基因p53和Fas的表达。结果:UA对SMMC-7721细胞生长有明显的生长抑制作用,呈明显的时间-效应关系和浓度-效应关系,24 h的半数抑制浓度(IC50)为45.72μmol/L。Wright-Giemasa染色、Hoechst荧光染色证实了UA可以通过凋亡途径诱导SMMC-7721细胞发生死亡。流式细胞仪结果进一步证实了UA可以诱导SMMC-7721细胞凋亡,而且凋亡率增加呈一定的量效和时效关系。RT-PCR结果显示UA能够上调p53和Fas基因的表达。结论:UA在体外对SMMC-7721细胞具有抗增殖和诱导凋亡的作用。其机制可能与p53和Fas基因的变化有关。

小柴胡汤含药血清诱导SSMC-7721人肝癌细胞株分化研究

目的:观察小柴胡汤含药血清对SMMC-7721人肝癌细胞是否具有分化诱导作用,并探讨其分化诱导的作用机制。方法:经药物作用后,观察细胞形态、MTT抑制率、乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、细胞周期的情况。结果:小柴胡汤含药血清使SSMC-7721细胞株有向成熟细胞形态分化的趋势;MTT抑制作用增强;细胞内LDH活性降低、SDH活性上升;流式测定S期细胞数减少,细胞周期阻滞于G0/G1期。其中以低剂量组效果最为显著(P<0.05)。结论:小柴胡汤含药血清可诱导SSMC-7721细胞株向成熟细胞分化,其作用机制可能与降低细胞内LDH活性、升高SDH活性,并且将细胞阻滞于G0/G1期有关。

生存素反义核酸诱导肝癌细胞株SMMC-7721凋亡和增加其对抗肿瘤药物敏感性的研究

背景:生存素是凋亡抑制蛋白家族的重要成员,生存素基因有可能成为肿瘤反义基因治疗的理想靶基因。目的:研究生存素反义核酸诱导肝癌细胞株SMMC-7721凋亡和增加其对常用抗肿瘤药物敏感性的作用,探讨生存素反义核酸用于肿瘤基因治疗的可能性。方法:应用基因重组技术构建pEGFP-C1-生存素反义核酸重组质粒,以脂质体转染法转染SMMC-7721细胞,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测生存素mRNA的表达,用流式细胞仪检测细胞凋亡。将生存素反义核酸分别与7种常用抗肿瘤药物共同作用于SMMC-7721细胞,用四唑蓝(MTT)比色法测定细胞杀伤率。结果:生存素反义核酸可抑制SMMC-7721细胞中生存素mRNA的表达,从而导致细胞凋亡增加,其作用呈剂量依赖性。生存素反义核酸可增加SMMC-7721细胞对7种常用抗肿瘤药物的敏感性,明显增强药物的杀伤作用。结论:生存素反义核酸能靶向抑制野生型生存素基因的表达,提高肝癌细胞对常用抗肿瘤药物的敏感性,有可能成为肿瘤基因治疗的新方法。

莪术挥发油抑制人肝癌细胞株SMMC-7721生长的实验研究

[目的]探讨莪术挥发油对肝癌细胞生长抑制的作用机制。[方法]用荧光显微镜观察药物作用前后细胞形态学的变化 ,采用噻唑氮蓝 (MTT)法检测莪术油对细胞生长的抑制作用 ,并用流式细胞仪检测细胞周期的阻滞及凋亡率。[结果]MTT结果表明莪术油浓度与细胞生长抑制率成正比。荧光显微镜观察结果显示 ,1.0mg/mL的莪术挥发油作用24h后可有效诱导肝癌细胞凋亡 ,细胞形态产生明显的凋亡特征 ,细胞核凹陷或固缩成均一的致密物。流式细胞仪检测结果表明 ,莪术油作用后细胞凋亡率可达28.15 % ,细胞周期被阻滞在S期。[结论]莪术挥发油可抑制肝癌细胞SMMC_7721的生长 ,诱导凋亡及阻滞细胞周期是其抑制生长的重要机制。

黄芩素对人肝癌细胞株SMMC-7721体外迁移及侵袭的影响

目的:通过观察黄芩素对人肝癌细胞株SMMC-7721体外迁移侵袭能力及Ezrin、MMP-9、VEGF表达的影响,探讨黄芩素对人肝癌细胞株SMMC-7721体外迁移侵袭的作用及其可能机制。方法:体外培养SMMC-7721,经黄芩素干预后用划痕愈合实验和侵袭小室实验分别检测黄芩素对SMMC-7721细胞迁移运动能力和侵袭能力的影响;RT-PCR和免疫细胞化学法检测黄芩素作用于SMMC-7721细胞48h后对Ezrin、MMP-9、VEGF mRNA和蛋白表达的影响。结果:划痕愈合实验显示各浓度实验组划痕愈合宽度占原宽度的比例比对照组明显下降(P<0.05);体外侵袭实验显示实验组穿过人工基底膜胶的细胞数明显减少(P<0.05);实验组Ezrin、MMP-9、VEGF mRNA和蛋白表达均明显下调(P<0.05)。结论:黄芩素可能通过直接或间接下调Ezrin、MMP-9、VEGF mRNA和蛋白的表达而抑制人肝癌细胞株SMMC-7721体外迁移侵袭,传统中药黄芩可望为肝癌临床治疗提供新的安全、有效、价廉的治疗方法。

连香树精油对植物病原真菌抑菌作用及对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞毒性研究

首次以连香树精油作为天然抑菌剂及抑癌剂,检测连香树精油对6种植物病原真菌的抑菌作用及对人肝癌细胞株SMMC-7721的细胞毒性,旨在探究连香树精油在抑菌和抑癌方面的功能,为天然抗菌剂和抗癌药物的开发打下基础.采用改良琼脂稀释法测定连香树精油对6种植物病原真菌的抑制率、最低抑菌体积分数(MIC)和最小杀菌体积分数(MBC),并采用MTT法检测其对人体肝癌细胞SMMC-7721的细胞毒性.结果表明,连香树精油具有较好的抗菌性和抗癌性.在抗菌方面,对玉米大斑、黑曲霉以及根霉的抑菌效果较好,抑制率分别达到97.8%、99.7%、99.4%;对禾谷镰孢菌的抑菌效果较差(最高抑制率仅为29.1%).在MIC和MBC测定实验中,同样表明连香树精油对黑曲霉的抑菌效果较好(MIC为6.25μL/m L,MBC为50μL/m L).在抑癌方面,连香树精油对SMMC-7721肝癌细胞具有较好的抑制效果,当精油体积分数为8μL/m L时,对SMMC-7721肝癌细胞的抑制率可以达到67.9%,与阳性对照5-氟尿嘧啶(抑制率68.9%)没有显著差异,且对正常肝细胞L02的杀伤作用(抑制率18.7%)要远远低于5-氟尿嘧啶对其伤害(抑制率59%).连香树精油对植物病原真菌和SMMC-7721肝癌细胞具有良好的抑制作用,在农药及医药应用中有较好的应用潜力.

NF-kB在肝癌细胞株SMMC-7721中的表达及意义

目的 了解NF -kB和ⅠkB在肝癌细胞中的表达情况及意义。方法 通过RT -PCR和Westernblot方法研究NF -kB和ⅠkB在肝癌细胞和正常肝细胞中的mRNA和蛋白表达的变化情况。结果 在肝癌细胞株SMMC -772 1中P65、P5 0mRNA表达增强而ⅠkBmRNA表达下降 (P <0 0 1) ;Westernblot结果显示肝癌细胞株SMMC -772 1细胞的胞核中P5 0、P65蛋白高水平表达 ,而正常肝细胞仅检测出极低水平的P5 0、P65蛋白 ,但是在SMMC -772 1细胞的胞质中ⅠkB蛋白低水平表达 ,正常肝细胞高水平表达。结论 肝癌细胞株SMMC -772 1中NF -kB的P5 0、P65亚基表达升高、ⅠkB表达下降与肿瘤细胞的生长密切相关。

STAT3在人肝癌细胞株SMMC-7721细胞内的表达

目的研究信号传导及转录活化因子STAT3在人肝癌细胞内的表达及其表达产物STAT3酪氨酸磷酸化活化情况。方法分别采用western blotting、流式细胞术检测人肝癌细胞株SMMC-7721细胞内STAT3蛋白和磷酸化STAT3(P-STAT3)蛋白的表达。结果人肝癌细胞株SMMC-7721细胞内有STAT3的表达和酪氨酸(Y705)磷酸化。结论STAT3的异常表达和活化可能在肝癌的发生发展中起重要作用。

陈皮多甲氧基黄酮类成分对人肝癌SMMC-7721、HepG_2细胞株增殖的影响

目的:研究陈皮多甲氧基黄酮类成分(CM)对人肝癌株增殖的影响。方法:采用MTT法观察CM对人肝癌株SMMC-7721、HepG2的生长抑制作用;采用Wright-Giemsa染色观察CM作用于SMMC-7721、HepG2细胞株的形态变化。结果:CM20 mg/L、40 mg/L作用于SMMC-7721细胞株48 h,细胞抑制率分别为21.84%、44.83%,72 h细胞抑制率分别为40.00%、60.00%;CM20 mg/L、40 mg/LHepG2细胞株48 h,细胞抑制率分别为38.54%、51.04%,72 h细胞抑制率分别为43.40%、55.67%;CM与SMMC-7721、HepG2细胞株共同作用48 h,大部分细胞出现明显凋亡特征。结论:CM可以抑制人肝癌细胞株SMMC-7721、HepG2的生长并对两株细胞的增殖呈现时间、浓度依赖性。

LINE-1 ORF-1p过表达对肝癌细胞株SMMC7721增殖和锚定非依赖性生长的影响

目的研究逆转座子L1编码蛋白ORF-1p的表达对肝癌细胞株SMMC7721细胞增殖的影响。方法利用带Flag标签的L1 ORF1表达载体,转染SMMC7721细胞;采用Western blot法检测反转座子L1 ORF1编码蛋白ORF-1p的表达;采用软琼脂成集落实验和相关报告基因检测ORF-1p表达对肝癌细胞p53、p15和p21活性的影响。结果在SMMC7721细胞中,Flag-ORF-1p表达能够显著促进该细胞的增殖(P<0.05),增强该细胞的锚定非依赖性生长(P<0.05),降低p53、p15和p21报告基因的活性。结论 L1基因编码蛋白ORF-1p能够促进肝癌细胞的生长、浸润以及肿瘤的形成。

肝癌组织和肝癌HepG2、SMCC-7721细胞株β-catenin的表达

目的研究肝癌组织和肝癌HepG2、SMCC-7721细胞株β-catenin表达及分布情况。方法收集20例肝癌组织和3例正常肝组织标本,利用免疫组织化学、免疫细胞化学和Western blot法检测肝癌组织和肝癌HepG2、SMCC-7721细胞株β-catenin的表达及分布特征。结果免疫组化结果显示,β-catenin在肝癌细胞膜的分布不均匀、不连续,甚至缺如,在低分化肝癌细胞膜的表达较高分化癌少,而在细胞质呈高表达。有18例(90%)肝癌细胞膜β-catenin表达量明显减少,10例(50%)在胞膜的分布不连续或缺如;17例(85%)细胞质有明显的β-catenin积聚,而且分布不均匀。随肝癌分化程度不同,β-catenin表达也有明显差异,7例(77.8%)高分化肝癌细胞膜β-catenin分布较为清楚连续,细胞质表达量较多。分布均匀;4例(80%)低分化肝癌细胞膜β-catenin表达较少,细胞质β-catenin分布不均匀,呈点状积聚;中度分化的肝癌细胞膜和细胞质内β-catenin分布界于高低分化之间,5例(83.3%)细胞质β-cate- nin表达阳性。免疫细胞化学检测显示HepG2、SMCC-7721细胞株胞膜β-catenin表达不明显,胞质及胞核则有大量β-catenin积聚。Western blot检测显示肝癌组织和HepG2、SMCC-7721细胞株的胞质和胞核均有β-catenin表达,且在胞核内积聚。结论肝癌组织和肝癌细胞株胞膜β-catenin表达较少,而胞质β-catenin分布较多,胞核β-catenin积聚明显,其分布与肝癌分化程度相关。

姜黄素对肝癌细胞株SMMC7721凋亡的研究

[目的]探讨姜黄素对人肝癌SMMC7721细胞株的生长凋亡作用及机制。[方法]用MTT法检测姜黄素对肝癌细胞系SMMC7721增殖的影响;应用流式细胞术检测不同浓度姜黄素对SMMC7721细胞凋亡及线粒体膜电位的影响。[结果]姜黄素对SMMC7721细胞具有明显的增殖抑制作用,在6.25～50μmol/L范围内成剂量依赖性,与对照组相比差异具有显著性意义,P〈0.01。姜黄素6.25、12.5、25、50μmol/L诱导SMMC7721细胞24 h的凋亡率为6.3%、7.2%、37.3%、72.3%,线粒体膜电位下降为6.3%、13.8%、47.8%和87.9%。[结论]姜黄素可通过诱导细胞凋亡而有效抑制肝癌细胞SMMC7721增殖,并与线粒体膜电位降低相关。

消癌平与奥沙利铂及恩度联合对人肝癌细胞株SMMC-7721的体外增殖抑制实验

目的:通过体外实验研究消癌平(Xiaoaiping,XAP)注射液、奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)、恩度(Endostar,重组人血管内皮抑制素)单药及其与XAP的两药及三药联合应用对人肝癌SMMC-7721增殖的影响,探讨其联合用药的理论依据.方法:采用MTT法观察XAP、L-OHP、恩度单药及其XAP的两药及三药联合应用对人肝癌SMMC-7721细胞增殖抑制作用,并观察细胞形态的变化.结果:10-40μL/mL XAP和1-4μg/mL L-OHP对SMMC-7721均有明显的抑制作用,并呈时间和浓度依赖性(P<0.01和P<0.05).1-12μg/mL恩度对该细胞无增殖抑制作用.20μL/mL XAP和1μg/mL L-OHP联合对SMMC-7721细胞增殖抑制率分别为82.08%,优于对照组(P<0.01),联合具有相加作用.20μL/mL XAP与6μg/mL恩度联合则具有明显的协同作用.三药联合抑制作用更明显.结论:XAP、L-OHP单药能抑制肝癌细胞增殖;恩度无抑制作用;与XAP两药联合对肝癌细胞增殖有协同增效作用,三药联合作用更明显.

STAT5在人肝癌细胞株SMMC-7721细胞内的表达

目的研究信号传导及转录活化因子STAT5在人肝癌细胞内的表达及其酪氨酸磷酸化活化情况。方法分别采用western b lot、流式细胞术(FCM)方法检测人肝癌细胞株SMMC-7721细胞内STAT 5蛋白和磷酸化STAT 5(P-STAT5)蛋白的表达。结果人肝癌细胞株SMMC-7721细胞内有STAT 5的表达和酪氨酸(Tyr 694)磷酸化活化。结论STAT 5的异常表达和活化可能在肝癌的发生发展中起重要的作用。

肿瘤坏死因子α对人肝癌细胞株SMMC-7721体外侵袭能力的影响

目的探讨肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)对人肝癌细胞株SMMC-7721体外侵袭能力的影响及其相关机制。方法不同浓度TNF-α作用于人肝癌细胞株SMMC-7721后,采用Transwell试验检测细胞侵袭能力的改变,采用划痕标记荧光传输试验显示缝隙连接细胞通讯功能的变化,采用Western blot法检测连接蛋白32(Cx32)在细胞膜的表达。结果不同浓度TNF-α作用于人肝癌细胞株SMMC-7721后,Transwell试验显示细胞侵袭能力较对照组提高,且随TNF-α浓度增加而升高。同时,缝隙连接细胞通讯功能减弱,细胞膜上Cx32的表达减少。结论 TNF-α可能通过影响Cx32在细胞膜的表达及细胞通讯促进人肝癌细胞株SMMC-7721的侵袭能力。