放疗对人肝癌细胞株Hep-G2中Bax和Bcl-2表达的影响

目的:探讨放疗对人肝癌细胞株Hep-G2中Bax和Bcl-2蛋白表达水平的影响。方法:6MV-X射线照射细胞,采用免疫组织化学染色观察人肝癌细胞株中Bax和Bcl-2的表达。结果:Bax和Bcl-2的表达在照射时间和照射剂量之间存在交互作用(F=1．733,P=0．042;F=1．700,P=0．048)。4Gy照射剂量作用细胞48h后,Hep-G2细胞中Bax的表达达高峰、Bcl-2的表达至低谷。结论:放射线可能通过促进Bax表达和抑制Bcl-2表达诱导肝癌细胞凋亡。

植物同源域指蛋白6对肝癌Hep-G2细胞迁移能力的影响

目的探讨植物同源域指蛋白6(PHF6)对肝癌Hep-G2细胞迁移能力的影响,为临床诊疗提供参考。方法根据癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析PHF6在人正常肝脏和肝癌组织的表达情况,以及其表达对300余例肝癌患者近十年生存率的影响。比较siNC组(转染PHF6无义序列)和siPHF6组(转染siRNA-PHF6)细胞PHF6 RNA表达水平,利用划痕和Transwell实验检测两组细胞迁移能力,通过实时荧光定量聚合酶链式反应检测两组细胞上皮间质转化(EMT)相关基因表达情况。结果PHF6在肝癌患者中存在明显过表达现象,高表达PHF6患者存活率降低。转染48 h后,siPHF6组细胞中PHF6 RNA表达水平低于siNC组(P=0.0016)。划痕后12、24、48、72h,siPHF6组细胞划痕距离均大于siNC组,siPHF6组细胞迁移数量小于siNC组。与siNC组相比,siPHF6组细胞神经钙黏蛋白(CDH2)、纤连蛋白(FN1)的表达水平均降低,CDH1的表达水平升高(P<0.0001、P<0.0001、P=0.0018)。结论沉默PHF6可显著抑制肝癌细胞的迁移和EMT进程,靶向PHF6治疗肝癌具有应用前途。

γ-干扰素对肝癌细胞株Hep-G2 Fas,Bcl-2表达的影响

目的 观察γ 干扰素 (γ IFN)对肝癌细胞株Hep G2细胞 (Hep G2 )表达Fas ,Bcl 2的影响。方法 应用γ IFN预处理Hep G2 ,用阿霉素诱导凋亡 ,MTT法分析细胞死亡率 ,电镜观察凋亡 ,免疫组织化学法研究γ IFN作用于Hepp G2细胞过程中Fas ,Bcl 2的表达情况。结果 γ IFN预处理的Hep G2表达Fas增强 ,表达Bcl 2减弱 (P <0 .0 5 ) ;γ IFN预处理后Hep G2细胞对阿霉素的敏感性提高 (P <0 .0 5 )。结论 γ IFN对肝癌细胞株Hep G2Fas ,Bcl 2表达有影响 ,并可提高肝癌细胞对阿霉素的敏感性。

阿托伐他汀对人肝癌细胞株HepG2生物钟基因震荡性的影响

目的探讨阿托伐他汀(AT)对人肝癌细胞株HepG2(简称HepG2)生物钟基因与蛋白表达节律的影响。方法基于MOE软件设计AT与生物钟蛋白的分子对接虚拟实验;在HepG2与人骨肉瘤细胞BMAL1::LUC-U2OS(简称U2OS)中分别设置实验组(加入101,102,103,104 nmol/L AT),对照组(加入0 nmol/L AT),空白组(加入0.1%二甲基亚砜),给药24 h后采用CCK-8法检测细胞在不同浓度AT处理后的活力;在不影响正常细胞活力的浓度下,采用免疫印迹(Western blot)法检测脑和肌肉芳香烃受体核转运样蛋白1(BMAL1)、昼夜节律蛋白2(PER2)、视黄酸受体相关孤儿受体γ(RORγ)、核受体亚家族1组D成员(NR1D1)的蛋白表达水平;采用LumiCycle实验检测细胞生物节律基因BMAL1的震荡情况;通过血清休克实验确定生物钟基因BMAL1,PER2,NR1D1及隐花色素2(CRY2)的节律表达。结果高于100 nmol/L的AT会对HepG2产生细胞毒性。在避免AT对正常细胞活性影响的背景下,选择AT 100 nmol/L浓度进行后续实验。给予AT刺激后,BMAL1和PER2蛋白表达量减少(P<0.05);LumiCycle实验结果显示,实验组(AT 100 nmol/L)的相位较对照组(0 nmol/L)滞后2.696 h(P<0.01)。血清休克实验结果显示,实验组PER2基因的表达较对照组显著下调(P<0.05)。结论AT能调节外周生物钟蛋白与基因的表达,使生物钟核心基因BMAL1表达滞后,PER2基因与蛋白表达均显著下调,具有治疗生物钟紊乱相关疾病、睡眠障碍等的应用前景。

柳树叶提取物诱导肝癌细胞株hep-G2凋亡的实验研究

目的:研究柳树叶水提物抗肿瘤作用,为最终提取一种有效抗肿瘤药物及临床前实验提供依据。方法:柳树叶水提物制备药物血清作用于培养的肝癌细胞株hep-G2,检测其凋亡。采用端粒重复序列扩增(TRAP)法结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测端粒酶活性。结果:柳树叶水提物制备药物血清对靶细胞有明显的抑制生长现象。孵育一段时间后,能使肝癌细胞发生凋亡,并呈现对浓度的依懒性和伴随端粒酶活性下降。结论:柳树叶提取物能诱导肝癌细胞株hep-G2凋亡。

四嗪二甲酰胺抑制肝癌细胞株HepG2增殖并诱导细胞凋亡的研究

目的观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)体外抑制肝癌细胞株HepG2增殖并诱导细胞凋亡作用。方法将不同浓度的ZGDHu-1与HepG2细胞在体外培养,用台盼蓝染色、MTT法、5′-溴-2′脱氧尿苷(B rdu)-ELISA法观察ZGDHu-1对HepG2细胞增殖的抑制作用;用细胞形态学、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析、Annexin-V/PI双标记、Ho-echst33258荧光染色和ELISA法测定DNA片段等技术检测细胞凋亡。结果ZGDHu-1能抑制HepG2细胞增殖和活力,呈现作用时间和剂量的量效关系。HepG2细胞与ZG-DHu-1作用后,大部分细胞阻滞于G2-M期;出现典型的细胞形态改变,DNA片断化,亚G1峰检出并增加,Annexin V+/PI-表达升高,细胞内DNA片段含量增加,Hoechst33258荧光染色后出现凋亡细胞的特征性改变等均证实ZGDHu-1能诱导HepG2细胞凋亡。结论ZGDHu-1能抑制HepG2细胞增殖,并可诱导其细胞凋亡。

拓扑替康诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的初步研究

背景与目的:拓扑替康(topotecan,TPT)是新一代水溶性、半合成喜树碱类衍生物,系拓扑异构酶I抑制剂、细胞周期特异性抗肿瘤药物;肝癌为我国发病率居第三位的恶性肿瘤,现有治疗方法的临床疗效均不理想。本文研究TPT诱导肝癌细胞株HepG2凋亡的作用,及其细胞毒作用。方法:运用MTT、HE染色、透射电镜、流式细胞仪、免疫组化技术等实验方法,对TPT杀伤HepG2细胞的程度进行了测定并观察了其诱导凋亡的过程。结果:TPT能通过诱导HepG2细胞凋亡的方式,杀伤HepG2细胞,TPT对HepG2细胞具有较强的体外杀伤作用,并存在明显的剂量、时间依赖关系,IC50约为95μg/L。TPT将HepG2细胞阻断在S期,并进一步诱导其凋亡。凋亡形态特征表现为典型的间期凋亡:细胞核染色质固缩,呈新月形聚集于核膜周缘,胞质浓缩,出现空泡。在TPT诱导HepG2细胞凋亡的过程中,不影响bcl-2基因蛋白正常表达(P>0.05)。结论:TPT能诱导HepG2细胞凋亡,细胞毒性较强。

siRNA抑制肝癌细胞株HepG2 Survivin基因表达的研究

目的 研究siRNA对肝癌细胞株HepG2中Survivin基因表达的抑制作用。方法 设计、合成一对Survivin编码基因的反向重复序列 ,中间间隔 9个核苷酸序列 ,通过定向克隆至载体Psilencer2 1,构建siRNA真核表达载体 ,经稳定转染HepG2细胞后应用RT PCR及流式细胞术检测肝癌细胞中Survivin基因mRNA及蛋白质表达的抑制情况。结果 测序证实siRNA真核表达载体构建成功。通过RT PCR及流式细胞术检测 ,siRNA在mRNA及蛋白质水平抑制Sur vivin基因表达分别达 73%和 75 %。结论 构建的Psilencer (+) Survivin重组质粒能有效抑制Survivin基因在肝癌细胞株HepG2中的表达。为肿瘤的生物学治疗提供了新的方法和材料。

Nrf2在不同肝癌细胞株中的表达及定位

目的:观察红系衍生的核因子2相关因子2(Nrf2)在肝癌细胞株(HepG2、Hep3B、SMMC-7721)中的表达及分布情况。方法:应用流式细胞术测定Nrf2阳性细胞的比例,激光共聚焦观察Nrf2在3种细胞株中的定位情况,通过Westernblot测定Nrf2在不同细胞胞质及胞核中的表达差异。结果:流式细胞术测定Nrf2在HepG2、Hep3B和SMMC-77213种细胞中表达率分别为99.39%、99.94%和99.98%,激光共聚焦观察到Nrf2在3种肝癌细胞株胞质胞核中均有分布,但不同细胞的分布规律各不相同,Western blot结果显示:Nrf2在HepG2中以胞质分布为主,在Hep3B中胞质、胞核分布相当,在SMMC-7721中以胞核分布为主。结论:Nrf2在3种肝癌细胞株(HepG2、Hep3B、SMMC-7721)中均有表达,且在胞质胞核中均有分布,但在不同细胞中的分布规律各不相同,为下一步探讨肝癌细胞耐药机制的相关研究奠定了基础。

塞来昔布对人肝癌细胞株HepG2细胞核转录因子-κB活性及蛋白表达的抑制

目的:探讨环氧合酶-2选择性抑制剂塞来昔布(celecoxib)对人肝癌细胞株HepG2细胞核转录因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)活性和蛋白表达的影响.方法:不同浓度的塞来昔布作用于HepG2细胞后,应用凝胶电泳迁移率改变分析技术检测HepG2细胞中NF-κBDNA结合活性;用Western blotting法检测HepG2细胞NF-κBp65蛋白表达.结果:25、50μmol/L塞来昔布作用于HepG2细胞后,药物处理组HepG2细胞NF-κBDNA结合活性明显降低,与空白对照组相比有显著性差异(t=12.58,P=0.000;t=17.97,P=0.000);塞来昔布可明显抑制HepG2细胞NF-κBp65蛋白表达水平,与空白对照组相比,差异均有统计学意义(t=4.24,P=0.013;t=6.38,P=0.003).结论:塞来昔布能有效抑制HepG2细胞NF-κB活性及NF-κBp65蛋白表达.

番荔枝内酯化合物对人肝癌细胞株HepG2的作用

目的研究番荔枝内酯AS-4在体外对人肝癌细胞株HepG2生长的抑制作用。方法设AS-4不同浓度组(6.25、12.5、25、50μg/mL)、顺铂阳性对照组(25μg/mL)和空白对照组,常规培养24、48h,进行MTT比色试验和倒置相差显微镜观察。结果AS-4可明显抑制HepG2细胞的生长,最高抑制效应达到91.68%,且有细胞毒性的时间和剂量依赖关系,48hIC50为6.67μg/mL。结论番荔枝内酯AS-4在体外对人肝癌细胞株HepG2有杀伤作用,显示出较强的细胞毒活性。

淫羊藿素对人肝癌Hep-G2细胞增殖、凋亡的影响及作用机制

目的探讨淫羊藿素对人肝癌Hep-G2细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法体外培养人肝癌Hep-G2细胞;采用MTT比色法检测淫羊藿素对人肝癌Hep-G2细胞增殖的影响;将Hep-G2细胞分为:空白对照(Control)组、低剂量(2.5μM/L)组、中剂量(5μM/L)组和高剂量(10μM/L)组;蛋白质印记检测增殖、凋亡相关蛋白Ki-67、Bcl-2、Bax、caspase-3蛋白表达情况;克隆形成实验检测各组肝癌细胞增殖情况;流式细胞仪检测Hep-G2细胞凋亡情况。结果MTT结果显示淫羊藿素对肝癌Hep-G2细胞的IC_(50)为5.38μM/L;与空白对照组相比,低剂量组肝癌Hep-G2细胞Ki-67蛋白相对表达量、细胞克隆形成率、Bcl-2蛋白相对表达水平显著降低,细胞凋亡率、Bax蛋白相对表达量、Caspase-3蛋白相对表达量显著升高(均P<0.05);与低剂量组相比,中剂量组肝癌Hep-G2细胞Ki-67蛋白相对表达量、细胞克隆形成率、Bcl-2蛋白相对表达水平显著降低,细胞凋亡率、Bax蛋白相对表达量、Caspase-3蛋白相对表达量显著升高(均P<0.05);与中剂量组相比,高剂量组肝癌Hep-G2细胞Ki-67蛋白相对表达量、细胞克隆形成率、Bcl-2蛋白相对表达水平显著降低,细胞凋亡率、Bax蛋白相对表达量、Caspase-3蛋白相对表达量显著升高(均P<0.05)。结论淫羊藿素可以抑制肝癌Hep-G2细胞增殖并促进其凋亡,其作用机制可能与下调Bcl-2蛋白和上调Bax蛋白的表达以及增强caspase-3的活性相关。

肝癌HepG2细胞株胰岛素样生长因子1和表皮生长因子受体基因沉默后放疗增敏及机制

目的：探讨同时沉默胰岛素样生长因子1（IGFl）和表皮生长因子（EGF）二受体基因的抗瘤放疗增敏及机制。方法：分别构建靶向EGFR、IGFlR及两受体的小分子干扰RNA（siRNA-EGFR、siRNA-IGFIR、siRNA-EGFR＆IGFlR），构建与任何基因无同源的阴性对照质粒（siRNA-HK），分别转染48照射肝癌HepG2细胞株。成克隆实验测定细胞存活分数，采用单击多靶模型和线性二次函数模型拟合细胞存活曲线，求出放射生物学参数D0、Dq、N和cc、口、SFa值。流式细胞仪检测细胞周期和凋亡变化，细胞周期及相关蛋白、细胞凋亡及相关蛋白采用蛋白印迹。结果：同时沉默EGFR和IGFlR组与对照组及单基因干扰组相比抑制了细胞增殖、诱导细胞凋亡，阻滞细胞周期G1／S期的进程，bcl-2和cdk2表达明显下调，而p21和bax表达增加。且同时沉默EGFR和IGFlR组和对照组细胞的D。值分别为0．588、2．0704Gy；Dq值分别为0．5625、2．0307Gy；a值分别为0．515、0．0216Gy^-1。；SF2值分别为0．22、0．619。同时沉默EGFR和IGFIR组Do、Dq和SF2值均减小，a值增大。结论：同时沉默EGFR和IGFlR基因具有更有效地干扰肝癌HepG2细胞株增殖、诱导细胞凋亡，其机制可能与bcl-2和cdk2表达下调和p21与bax表达增加有关，结合干扰多个受体分子可能是一种十分有前途的新的肝癌治疗途经。

过氧化氢对人肝癌细胞株HepG_2增殖的促进作用

目的 :探讨低剂量过氧化氢 (H2 O2 )对人肝癌细胞株HepG2 的促增殖作用及该作用与NF κB和细胞周期的关系 .方法 :不同剂量H2 O2 直接作用于培养的HepG2 细胞 ;2 0 μmol/LNF κB抑制剂 (PDTC)预处理细胞 2h ,5 0 μmol/L的H2 O2 作用HepG2 细胞 ;5 0 μmol/LH2 O2 分别作用于G1,G2 /M ,S期细胞 ,MTT法测定细胞增殖活性 .结果 :5 0 μmol/L的H2 O2 具有明显的促进HepG2 细胞生长的作用 ,此作用可以被PDTC抑制 ;5 0 μmol/L的H2 O2 可以明显的促进G1期HepG2 细胞生长 .结论 :低剂量H2 O2 可诱导HepG2 细胞增殖 ,该过程可能包含依赖NF κB的信号途径的参与 ;H2 O2 诱导HepG2 细胞增殖在细胞周期的不同时相效应敏感性不同 ,主要诱导G1期细胞增殖 .

汉黄芩素与氟尿嘧啶联用抗人肝癌细胞Hep-G2作用的拮抗效应研究

目的探讨汉黄芩素(wogonin)联合氟尿嘧啶(5-FU)对人肝癌细胞Hep-G2生长活性的影响。方法实验分汉黄芩素组、5-FU组、汉黄芩素+5-FU组和空白对照组,采用MTT法观察药物对肿瘤细胞体外生长活性的影响,采用流式细胞仪分析肿瘤细胞凋亡率的变化。结果 MTT实验结果显示汉黄芩素(5、10、20、40μmol/L)作用24、48h后对肿瘤细胞具有一定的增殖抑制作用(P<0.05);5-FU(5、10、20、40 mg/L)作用24、48h后对肿瘤细胞增殖有明显的抑制作用(P<0.05);与单用组对肿瘤细胞的抑制作用相比,汉黄芩素联合5-FU组的抗肿瘤作用呈相互拮抗作用(P<0.05);汉黄芩素联合5-FU给药48h后,联合指数CI值呈现剂量依赖性,CI值随汉黄芩素浓度的加大而增大,说明随汉黄芩素浓度的加大,其拮抗5-FU抗肿瘤效应的作用也越来越明显(P<0.05)。结论汉黄芩素具有一定的抗肿瘤作用,但可拮抗5-FU的抗肿瘤作用,具体机制有待进一步研究。

蛋白激酶C活性与电离辐射诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的关系(英文)

目的探讨蛋白激酶C(PKC)活性与X线电离辐射诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的关系。方法PKC调节剂PMA和SP预处理HepG2细胞,分辐射组、PMA0.5h组、PMA24h组、SP组;32P掺入法检测细胞的PKC活性,Varian2100直线加速器辐射细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果6GyX线辐射诱导HepG2细胞凋亡率是21.9%,辐射后细胞PKC活性是辐射前的2.79倍。辐射组、PMA0.5h组、PMA24h组、SP组的PKC活性分别为1.07、3.86、0.51、0.48pmol/(min·μg),细胞凋亡率分别为21.9%、5.73%、31.70%和32.83%。结论辐射可以引起HepG2细胞凋亡,PKC活性增加/降低对辐射诱导的凋亡起抑制/促进作用,提示PKC可能参与了细胞凋亡保护机制。

热休克蛋白70联合白介素--2对小鼠肝癌细胞株移植瘤的影响

目的:研究肿瘤热休克蛋白70联合应用IL-2对小鼠肝癌的治疗作用,为两种免疫制剂联合应用治疗人类恶性肿瘤提供参考依据。方法:应用细胞培养、蛋白提纯、电泳、Western-blot、毛细管电泳、动物实验等方法。小鼠分别用HSP70 10μg、5μg和IL-2 50kU、100kU、2kU(维持量)按设计的方案进行治疗试验。结果:单纯应用或联合应用HSP70和IL-2均能明显地延缓小鼠移植肝癌的生长并能不同程度地延长生存期,与对照组相比(除IL-250kU组外)差异显著(P<0.025-0.05)。但获长期存活(>90d)者仅见于接受HSP70 10μg治疗组,40％(2/5)的HSP70 10μg组及HSP70 10μg联合应用IL-2 50kU组小鼠,和60％(3/5)的HSP70 10μg联合应用IL-2 100kU组小鼠,获长期生存的小鼠其肿瘤最终全部消退。与无长期生存小鼠的其他组相比差异十分显著(P<0.025-0.05)。IL-2 100kU与HSP70 5μg的作用相当。结论:肿瘤来源的HSP70较IL-2具有更强的治疗作用,在联合应用实验的治疗组中HSP70对延缓和消除肿瘤起主要作用。更重要的是,合适剂量的HSP70与IL-2联合应用(本研究中HSP70 10μg与IL-2 100kU)能明显地提高对荷瘤小鼠的治疗作用。

采用HepG_2细胞株建立裸鼠肝癌模型的方法

目的 :探讨采用HepG2 细胞株建立裸鼠肝癌模型的方法。方法 :采用皮下注射HepG2 细胞 (1 2× 1 0 6)建立裸鼠肝癌模型 ,观察种植细胞后 1 4天内裸鼠的死亡率 ,并在 1 4天时活杀动物测定瘤体重量、直径及血清AFP浓度。结果 :该法造模成功率达 1 0 0 %。结论 :该方法操作简便 ,周期短 。