益气活血软坚解毒含药血清诱导人肝癌细胞系Bel-7402细胞的凋亡

目的:研究益气活血软坚解毒(YHRJ)含药血清对人肝癌细胞系Bel-7402生长抑制及诱导凋亡作用.方法:将YHRJ含药血清作用于人肝癌细胞系Bel-7402细胞,应用MTT检测对肝癌细胞生长抑制作用,倒置显微镜、荧光显微镜、激光共聚焦扫描显微镜等影像学方法观察细胞形态学变化,以及PI染色单染、AnnexinV-PI双染后,流式细胞术检测对细胞周期影响及诱导细胞凋亡程度.结果:MTT法检测结果显示:YHRJ含药血清具有抑制Bel-7402肿瘤细胞生长作用(其中20%YHRJ等效剂量抑制率49.1%,与NS比,P<0.01);荧光显微镜及激光共聚焦显微镜可观察到典型的凋亡形态学变化.流式细胞术检测结果,细胞周期出现G0/G1期阻滞,并出现典型的凋亡峰,AnnexinV-PI双染法检测到早期及中晚期细胞凋亡.结论:YHRJ含药血清有抑制人肝癌细胞系Bel-7402细胞生长并有诱导细胞凋亡作用.

人肝癌细胞系BEL-7402的放射敏感性

目的 评估人肝癌细胞系ＢＥＬ－７４０２的放射敏感性。方法 体外培养人肝癌细胞系ＢＥＬ－７４０２，应用集落形成法测 定经０～１０Ｇｙ ６ ＭＶ Ｘ线照射后细胞的存活率并计算细胞放射敏感性参数。结果 ＢＥＬ－７４０２的Ｄ０为 １．６ Ｇｙ，Ｄｑ为 １．３ Ｇｙ，ｎ为２．４，ＳＦ２为（０．６３±０．０５）Ｇｙ。结论ＢＥＬ－７４０２具有较高的放射敏感性。

Artemis对人肝癌细胞系BEL-7402/5FU DNA损伤的影响

目的探讨转染sh Artemis干扰质粒对人肝癌细胞BEL-7402/5FU DNA损伤的影响。方法将人肝癌细胞分为正常对照组、脂质体对照组、空质粒对照组和转染sh Artemis干扰质粒实验组(sh Artemis实验组);建立DNA损伤模型,分别用0.625、1.25、2.5、5.0和10.0μg/m L的丝裂霉素C作用BEL-7402/5FU细胞24和48 h,MTT法检测细胞活性,Western blot观察磷酸化组蛋白H_2AX(γ-H_2AX)的表达;转染Artemis干扰质粒,检测Artemis、γ-H_2AX表达;彗星实验检测DNA的损伤。结果 0.625、1.25、2.5、5.0和10.0μg/m L的丝裂霉素C作用48h后肝癌细胞活力明显下降(P<0.05);丝裂霉素C刺激细胞48 h后,γ-H_2AX的表达量随着药物浓度的增加而增加;转染sh Artemis干扰质粒后,γ-H_2AX的表达量较正常对照组增加(P<0.05);sh Artemis实验组较正常对照组拖尾DNA量增加(P<0.05)。结论丝裂霉素C能够诱导肝癌细胞损伤;转染sh Artemis干扰质粒促进丝裂霉素C诱导的人肝癌细胞BEL-7402/5FU DNA损伤。

STAT3抑制剂S3I-201对人肝癌BEL-7402细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的 研究STAT3小分子抑制剂S3I-201对人肝癌细胞系BEL-7402增殖、凋亡与细胞周期的影响和初步的作用机制。方法 分别采用细胞活性检测试剂盒cell couting kit-8(CCK-8)和EdU细胞增殖法检测S3I-201对人肝癌细胞BEL-7402细胞增殖的影响,应用流式细胞术分析S3I-201对BEL-7402的细胞凋亡和周期的影响,通过Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果 CCK-8及EdU结果显示,S3I-201能抑制BEL-7402细胞的生长和增殖(P<0.05),使BEL-7402细胞阻滞于S期,具有诱导细胞凋亡的作用,上调Bax的表达,下调Bcl-2的表达(P<0.05)。结论 STAT3小分子抑制剂S3I-201通过促进BEL-7402凋亡、上调促凋亡蛋白Bax、下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,并将BEL-7402阻滞于S期而发挥抗肿瘤效应。

蜂毒素对肝癌细胞系BEL-7402细胞凋亡的影响

目的 :了解蜂毒素诱导肝癌细胞凋亡的作用。方法 :肝癌细胞BEL 74 0 2经不同浓度的蜂毒素处理后 ,采用台盼蓝排染法测定细胞增殖的抑制率 ,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡及Fas蛋白的表达。结果 :16 μg/ml蜂毒素作用肝癌细胞系BEL 74 0 2 ,12h抑制率为 (78.13±6 .15 ) % ,2 4h抑制率为 10 0 % ;4 ,8μg/ml蜂毒素对细胞的生长也有抑制作用 ,并且可诱导细胞凋亡的产生 ,能够增加细胞Fas蛋白的表达。结论 :蜂毒素高剂量有杀伤肿瘤细胞作用 。

黄芩甙对人肝癌BEL-7402细胞系侵袭和转移的影响

目的探讨黄芩甙对人肝癌BEL-7402细胞系侵袭和转移的影响及其机制。方法应用细胞培养技术培养BEL-7402细胞,不同浓度黄芩甙处理肝癌细胞,通过Boyden小室模型测定其侵袭力、粘附力,细胞迁移实验测定细胞运动能力,同时观察细胞形态,流式细胞术测定肝癌细胞MMP2、TIMP2、integrinβ1、E-cd表达的改变。结果黄芩甙能明显抑制肝癌细胞侵袭力、粘附力及运动能力(P<0.05),随浓度提高作用增强。形态学观察发现,黄芩甙处理组细胞形态较圆,伪足数目较少。黄芩甙处理组MMP2阳性表达细胞减少,TIMP2阳性表达细胞增多,MMP2/TIMP2比值下降;integrinβ1表达增加,E-cd的表达则减低(P<0.05)。结论黄芩甙能抑制肝癌BEL-7402细胞侵袭与转移,其机制可能与直接抑制细胞迁移运动,抑制细胞基质溶解相关基因蛋白MMP2表达,促进TIMP2表达及抑制粘附分子E-cd的表达,促进integrinβ1表达有关。

过氧物酶体增殖因子活化受体γ配体对人肝癌细胞系BEL-7402细胞周期的影响

目的 探讨过氧物酶体增殖因子活化受体 (PPAR)γ配体对人肝癌细胞系生长的影响。方法 用细胞计数、[3 H ] 胸苷摄入和流式细胞术分别检测 15 脱氧 △12 ,14 前列腺素J2(15d PGJ2 )和曲列格酮 (TGZ)对人肝癌细胞系BEL 740 2细胞增殖及细胞周期的影响。结果 15d PGJ2和TGZ均以剂量依赖方式抑制细胞生长 ,减少S期细胞比值和增加G0 /G1期细胞比值 ,但对G2 /M期细胞比值无明显影响。结论 15d PGJ2和TGZ均可抑制BEL 740 2细胞增殖 ,这种抑制作用可能部分与PPARγ介导的G1细胞周期停滞有关。

肝癌细胞系BEL-7402中siRNA表达载体介导靶向c-myc基因

目的:探索经载体介导的RNA干涉对肝癌细胞cmyc基因表达抑制的可行性。方法:设计并合成2条靶向癌基因cmyc的RNA干涉模板片段,分别将其连接至pSilencer1.0U6载体上构建siRNA真核表达载体;脂质体转染法将上述重组质粒转入BEL7402肝癌细胞株。半定量RTPCR分析cmyc基因的表达抑制效率,以及cmyc基因表达下调细胞中CDK4、hTERT和Gadd45β基因表达的改变。结果:获得2个能在细胞内有效转录生成靶向cmyc基因siRNA的重组载体pSicmyc1和pSicmyc2;其中pSicmyc2可有效介导肝癌细胞BEL7402cmyc基因的表达抑制,抑制率高达90%以上;在cmyc基因经RNAi抑制的细胞中,CDK4和hTERT基因的表达分别下调至85%和57%;而Gadd45β的表达上调约110%。结论:肝癌细胞BEL7402中cmyc基因的表达可被载体介导诱发的RNA干涉有效抑制,进而导致细胞中与增殖和凋亡相关基因的表达改变。

肿瘤患者血小板对肝癌细胞系Bel-7402增殖和多药耐药蛋白ABCC4的影响

血小板与炎性反应的发展,肿瘤的血管生成、肿瘤的转移等密切相关。多药耐药相关蛋白4（multidrug resistanceasscociated protein 4,ABCC4,MRP4）,是一种ABC（ATPbinding cassette trasporter）转运蛋白。ABCC4的高表达与肿瘤细胞的增长和恶性程度密切相关,但肿瘤患者血小板与ABCC4的相关性尚不清楚,本文拟探讨肿瘤患者的血小板对肿瘤细胞增殖和ABCC4表达的影响。

17-羟-岩大戟内酯B对肝癌BEL-7402细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的研究17-羟-岩大戟内酯B(HJB)对人肝癌BEL-7402细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法将BEL-7402细胞分为空白对照组、HJB 10μg/mL组、20μg/mL组和40μg/mL组。采用MTT实验检测各组细胞存活率。采用流式细胞术检测HJB对BEL-7402细胞周期和凋亡的影响;AO/EB双染色法检测细胞凋亡形态的变化;Western blot法检测Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase-9和Cleaved-Caspase-3蛋白表达的变化。结果HJB可呈浓度-时间依赖趋势抑制BEL-7402细胞增殖。不同浓度HJB作用24小时后,各HJB处理组主要表现出S期和G2/M期阻滞;早、晚期细胞凋亡率均明显增加(P<0.05或P<0.01)。随着HJB浓度的增加,晚期凋亡细胞数量逐渐增加,呈固缩或圆珠状。各HJB处理组Bcl-2的蛋白表达均明显下调,40μg/mL组细胞Bax的蛋白表达明显上调,此外,各组细胞Cleaved-Caspase-9和Cleaved-Caspase-3蛋白的表达均显著上调(P<0.05)。结论17-羟-岩大戟内酯B可以抑制肝癌BEL-7402细胞增殖,调控细胞周期并诱导其凋亡,其分子机制可能与下调Bcl-2蛋白表达、上调Bax、Cleaved-Caspase-9和Cleaved-Caspase-3蛋白表达有关。

半夏类药材不同提取物对人肝癌细胞Bel-7402生长抑制作用的研究

目的:观察并比较半夏类药材的不同提取物对体外培养的人肝癌细胞Bel-7402的生长抑制作用。方法:应用MTT技术,检测半夏类药材不同提取物对人肝癌细胞Bel-7402的抑制作用。并观察了不同提取物抑制作用的量效关系。结果:所有乙酸乙酯提取的部位都有比较好地抑制Bel-7402细胞增殖的作用(P<0.01);乙醇提取部位有一定抑制作用(P<0.05);而所有石油醚提取部位都无明显作用。此外,乙酸乙酯和乙醇提取部分对肝癌Bel-7402细胞生长抑制作用,存在着显著的量效关系,其中以亳州掌叶半夏最为明显。结论:半夏乙酸乙酯和乙醇提取物有抑制体外培养肝癌细胞增殖的作用,呈现出显著的量效关系。

雄黄抗人肝癌BEL-7402细胞作用

目的:观察雄黄体外抗人肝癌BEL-7402细胞作用和作用机制。方法:采用MTS法和细胞克隆实验法观察雄黄对BEL-7402细胞增殖的影响,应用PI/Hoechest33258双染法和流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光分光光度计检测细胞内钙和线粒体膜电位。结果:与阴性对照组比,雄黄能剂量依赖性地抑制BEL-7402细胞的生长和克隆形成。雄黄作用后,BEL-7402细胞出现了凋亡形态学改变如染色质浓缩等;流式细胞仪检测显示,雄黄能剂量依赖性地诱导细胞凋亡,其中,225μg/ml雄黄引起BEL-7402细胞凋亡的百分率为(28.6±4.6)%。与阴性对照组比,雄黄作用后,BEL-7402细胞的细胞内钙升高和线粒体膜电位降低。结论:雄黄具有一定的抗肿瘤作用,其作用机制与升高细胞内钙、降低细胞线粒体膜电位并诱导细胞凋亡有关。

半夏蛋白对人肝癌细胞Bel-7402生长抑制作用的研究

目的:观察并比较半夏蛋白对体外培养人肝癌细胞Bel-7402生长的抑制作用。方法:应用MTT技术检测半夏蛋白对人肝癌细胞Bel-7402的抑制作用,并观察其量效关系。结果:30%沉淀、60%沉淀及Tris-HCl洗脱峰的量效关系不明显,0.05M和0.1M NaCl的洗脱峰呈现较好的量效关系,且对Bel-7402细胞的抑制作用与空白对照组有显著性差异(P<0.05)。结论:层析后的半夏蛋白对体外培养肝癌细胞增殖有较好的抑制作用,呈现显著的量效关系。

双丁酰环磷腺苷及氨茶硷抑制人体肝癌细胞系BEL-7402的生长及超微结构的观察

自Sutherland等于五十年代末发现环化腺苷酸(cAMP)为激素的第二信使以来,大量研究证明,cAMP具有广泛的细胞生物学功能,其中包括调节细胞生长、分裂、促进细胞分化等重要生命现象。七十年代初,不少研究者[1,2]观察到cAMP及其衍生物双丁酰环磷腺苷(dbcAMP)能有效地抑制恶性转化的动物成纤维细胞的生长,并使细胞的形态、行为、生化等方面发生逆转性改变。

大蒜素诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡

目的 探讨大蒜素诱导人肝癌BEL 740 2细胞凋亡作用。 方法 MTT法检测大蒜素对BEL 740 2细胞的生长抑制作用 ,光镜、电镜、流式细胞术观察大蒜素诱导BLE 740 2细胞凋亡作用。 结果 10、2 0、40ml L大蒜素皆能抑制BEL 740 2细胞生长 ,其抑制作用与剂量、作用时间呈正相关。 6 0mg L大蒜素作用 3h ,BEL 740 2细胞出现典型凋亡形态学变化 :细胞体积缩小 ,微绒毛消失 ,染色质浓聚、边集、裂解 ,细胞表面凸起多个小泡或小球状小体 ,凋亡细胞拒染台盼蓝等。台盼蓝染色计数对照组凋亡率 2 0 2± 0 37% ,诱导组凋亡率 78 48± 3 15 % ;流式细胞分析对照组凋亡率 1 78± 0 48% ,诱导组凋亡率 74 0 7± 3 94% ,对照组诱导前时G0 /G1 、S、G2 /M期细胞分别为47 6 6± 2 72 % ,2 2 0 6± 2 0 4% ,30 2 5± 3 78% ,皆低于 74 0 7± 3 94%。 结论 大蒜素诱导人肝癌BEL 740 2细胞凋亡 ,其诱导凋亡效果明显 ,并推测大蒜素诱导BEL 740

虫草素对人肝癌Bel-7402细胞抑制及作用机制的研究

虫草素是虫草的主要活性成分,具有抗肿瘤、抑菌、抑制病毒、抑制蛋白质激酶活性等作用[1-2]。研究证明虫草素能抑制mRNA的合成,诱导细胞凋亡,促进细胞分化,对多种肿瘤细胞的生长具有抑制作用[1-2]。诱导肿瘤细胞凋亡以及作用靶点已成研究的焦点。为探讨虫草素诱导肿瘤细胞凋亡的新靶点。

苦参碱诱导人肝癌细胞BEL-7402自吞噬性死亡

目的研究苦参碱诱导人肝癌BEL-7402细胞自吞噬和自吞噬性死亡作用。方法体外培养人肝癌BEL-7402细胞,应用MTT法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术测定细胞凋亡,自噬体标记物LC3免疫荧光定量检测自吞噬,透射电镜分析细胞自吞噬死亡超微结构改变。结果苦参碱抑制细胞增殖呈质量浓度依赖性,作用48h的IC50值为1.1mg/mL;0.6～1.6mg/mL苦参碱作用12h可诱导BEL-7402细胞凋亡逐渐增多,1.2mg/mL作用12h时细胞凋亡率达(44.88±0.78)%;1.2mg/mL苦参碱持续作用可以诱导自吞噬阳性细胞逐渐增多,作用12h时自吞噬阳性细胞达(63.16±0.29)%;超微结构显示细胞凋亡呈现自噬性细胞死亡特点。结论苦参碱体外能诱导BEL-7402细胞自吞噬和自噬性死亡。

脂蟾毒配基通过线粒体途径诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡的研究

目的:探讨中药蟾酥主要成份之一脂蟾毒配基(Resibufogenin,RG)诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡的作用机制。方法:体外培养Bel-7402细胞,采用酸性磷酸酶法检测RG对细胞增殖抑制作用;吖啶橙荧光染色观察细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率及线粒体膜电位(△ψm)变化;WesternBlot检测与细胞凋亡相关蛋白表达的变化。结果:RG显著抑制细胞增殖,其作用24、48、72h的IC50分别为3.8、1.8、1.2"mol/L;经10"mol/LRG处理24h后,癌细胞出现凋亡的形态变化,其凋亡率明显高于对照组细胞;RG引起△ψm下降,释放入胞质中的细胞色素c(cytochromec,CytC)增多,促进Caspase-3蛋白活化,抑制Bcl-2蛋白表达,诱导细胞凋亡。结论:RG诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡,其诱导凋亡作用可能通过线粒体通路实现。

白藜芦醇对肝癌细胞Bel-7402的抑制作用及其效应机制分析

目的通过体内体外实验,观察白藜芦醇(resveratrol,Res)对肝癌细胞Bel-7402的增殖抑制作用,并对其抑癌的可能效应机制进行分析。方法实验中设4个Res药物组,终浓度分别为12.5、25、50、100μmol/L,同时设置不含Res药物的对照组,采用MTT法测试Res对体外培养肝癌Bel-7402细胞的增殖抑制作用,反转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)检测Bcl-2 mRNA的表达,Western Blot检测Bcl-2蛋白的表达,ELISA测定Res对荷瘤小鼠细胞因子水平的影响。结果与对照组相比,Res可以呈剂量和时间依赖性方式抑制肝癌Bel-7402细胞的增殖和Bcl-2 mRNA及其蛋白的表达(P<0.05)。同时Res能明显抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,并能明显升高荷瘤小鼠体内细胞因子IL-2、IL-6、IL-12和TNF-α的水平(P<0.05)。结论 Res体内与体外对肝癌细胞Bel-7402均有明显的增殖抑制活性,其抗肿瘤的效应机制可能与其下调Bcl-2的表达和提高细胞因子IL-2、IL-6、IL-12及TNF-α的水平有关。